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pBIFC-VN173-CXCR4和pBIFC-VC155-NT21MP真核表达质粒的构建及其在活细胞内的作用 被引量：2
1
作者 高艳军 杨清玲 +1 位作者 陈昌杰 丁勇兴 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期519-526,共8页
目的:构建pBIFC-VN173-CXCR4和pBIFC-VC155-NT21MP真核表达质粒,利用双分子荧光互补(BiFC)技术,在活细胞内直接观察趋化因子受体4(chemokine receptor 4、CXCR4和CD184)与CXCR4抑制性多肽的相互作用。方法:应用化学合成法获得巨噬细胞... 目的:构建pBIFC-VN173-CXCR4和pBIFC-VC155-NT21MP真核表达质粒,利用双分子荧光互补(BiFC)技术,在活细胞内直接观察趋化因子受体4(chemokine receptor 4、CXCR4和CD184)与CXCR4抑制性多肽的相互作用。方法:应用化学合成法获得巨噬细胞炎症蛋白Ⅱ(viralmacrophage inflammatory protein-Ⅱ,vMIP-Ⅱ)N端21肽(N-terminal 21-mer peptide,NT21MP)编码的基因序列,克隆至经Kpn I和EcoRⅠ酶切的pBiFC-VC155中,筛选含有目标基因的正确克隆。利用RT-PCR扩增人乳腺癌细胞株SKBR3的CXCR4全长基因后,T-A亚克隆至经Kpn I和EcoRⅠ酶切的pBiFC-VN173载体中。然后,经酶切鉴定及DNA测序分析2个基因是否正确连接至真核表达载体中。应用脂质体转染的方法共转染pBiFC-VC155-NT21MP和pBiFC-VC155-CXCR4至细胞株COS-7中,在荧光显微镜下观察NT21MP与CXCR4在胞内的相互作用。结果:经DNA测序及同源性对比,证实pBiFC-VC155-NT21MP和pBiFC-VN173-CXCR4重组载体构建成功;基因片段与NCBI基因库vMIP-Ⅱ和CXCR4基因CDS序列同源性达99.9%。BiFC法观察NT21MP与CXCR4在细胞内结合出现的荧光信号,该信号分布细胞内。结论:本实验成功构建了应用BiFC技术的真核表达载体,并且在活细胞内检测到NT21MP与CXCR4的互相结合。 展开更多
关键词 受体 趋化因子/遗传学 趋化因子CXCL2 质粒 重组蛋白质类/遗传学 遗传载体 转染 遗传互补测验
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人DNA修复基因hR24L参与细胞周期检定点调控 被引量：12
2
作者 朱应葆 韩云 《北京医科大学学报》 CSCD 1999年第3期269-273,共5页
目的：研究酵母ＲＡＤ２４Ｌ基因功能，克隆人类同源物。方法：分离ＲＡＤ２４基因区域ｒａｄ２４Ｌ突变株，以人的ｃＤＮＡ表达文库转化突变株，筛选回复表型；大剂量Ｘ线照射观察细胞周期。结果：ｒａｄ２４Ｌ对紫外线敏感，从转化文... 目的：研究酵母ＲＡＤ２４Ｌ基因功能，克隆人类同源物。方法：分离ＲＡＤ２４基因区域ｒａｄ２４Ｌ突变株，以人的ｃＤＮＡ表达文库转化突变株，筛选回复表型；大剂量Ｘ线照射观察细胞周期。结果：ｒａｄ２４Ｌ对紫外线敏感，从转化文库后的回复表型中克隆出人类ｈＲ２４Ｌ全长ｃＤＮＡ。结论：克隆的人类ＤＮＡ修复基因ｈＲ２４Ｌ，它能校正ｒａｄ２４Ｌ的突变表型，参与细胞周期检定点调控。 展开更多
关键词 酵母菌 调控 DNA修复基因 突变分析 细胞周期
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