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MUC1/Y基因修饰的树突状细胞体外抗卵巢癌效应的研究 被引量：4
1
作者 祁澜 孔北华 +1 位作者 杨美香 曲迅 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期471-475,共5页
目的研究人MUC1/Y基因转染人外周血树突状细胞(DC)后在体外诱导的特异性抗MUC1/Y+卵巢癌效应。方法通过人外周血单核细胞诱导DC,采用脂质体法将已构建好的含人MUC1/Y全长cDNA的真核表达载体pEGFPN1/MUC1/Y转染到DC中,荧光显微镜下观察... 目的研究人MUC1/Y基因转染人外周血树突状细胞(DC)后在体外诱导的特异性抗MUC1/Y+卵巢癌效应。方法通过人外周血单核细胞诱导DC,采用脂质体法将已构建好的含人MUC1/Y全长cDNA的真核表达载体pEGFPN1/MUC1/Y转染到DC中,荧光显微镜下观察其表达的蛋白定位;与自体T细胞共培养,观察其致敏的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对MUC1/Y+的卵巢癌细胞A2780的杀伤活性,并与转染空载体的DC诱导的CTL进行比较。结果pEGFPN1/MUC1/Y转染DC后,其绿色荧光蛋白主要表达于DC细胞膜上,可诱导出对卵巢癌细胞系A2780特异性的细胞毒性T细胞。结论MUC1/Y基因修饰的DC可诱导特异的抗MUC1/Y+卵巢癌效应。 展开更多
关键词 MUC1/Y 基因修饰 抗卵巢癌效应 人外周血树突状细胞 细胞毒性T淋巴细胞 MUC1/Y 细胞毒性T细胞 A2780 真核表达载体 全长cDNA 显微镜下观察 卵巢癌细胞系 细胞共培养 体外诱导 基因转染 细胞诱导 脂质体法 蛋白定位 杀伤活性
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纳米材料介导TNF基因转染CIK细胞对鼻咽癌细胞生长抑制研究 被引量：3
2
作者 任艳鑫 冀叶 +5 位作者 杨洁 乔昆 赵留芳 孙瑞梅 李晓江 黄云超 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 北大核心 2013年第23期1783-1787,共5页
目的:探讨纳米材料PAMAM介导TNFα基因转染CIK细胞的可能性以及对人鼻咽癌细胞株CNE-2生长的抑制作用。方法:纳米材料PAMAM介导pEGFP-N1-TNFα转染CIK细胞,检测其转染效率,ELISA法检测转染后CIK细胞培养上清液TNF-α浓度,流式细胞术分析... 目的:探讨纳米材料PAMAM介导TNFα基因转染CIK细胞的可能性以及对人鼻咽癌细胞株CNE-2生长的抑制作用。方法:纳米材料PAMAM介导pEGFP-N1-TNFα转染CIK细胞,检测其转染效率,ELISA法检测转染后CIK细胞培养上清液TNF-α浓度,流式细胞术分析CIK细胞表型,MTT法检测转染后CIK细胞对鼻咽癌细胞株CNE-2的生长抑制。结果:转染后CIK细胞生长曲线与未转染CIK细胞生长曲线一致;PAMAM介导pEGFP-N1-TNFα转染CIK细胞阳性率为(71.5±2.13)%,脂质体转染效率为(78.9±1.55)%,两组比较差异无统计学意义,P>0.05;转染PAMAM/pEGFP-N1-TNFα后CIK细胞第1、3、5和7天培养上清液中TNF-α逐步升高,转染第1天TNF-α表达量为(8.24±0.65)ρg/mL,明显高于未转染PAMAM/DNA组的(6.53±0.52)ρg/mL及单纯转染PAMAM组的(6.24±0.57)ρg/mL;转染第3天TNF-α表达量为(23.41±2.82)ρg/mL,明显高于未转染PAMAM/DNA组的(6.89±0.61)ρg/mL及单纯转染PAMAM组的(7.05±0.58)ρg/mL;转染第5天TNF-α表达量为(61.59±3.47)ρg/mL,明显高于未转染PAMAM/DNA组的(7.29±0.75)ρg/mL及单纯转染PAMAM组的(7.15±1.21)ρg/mL;转染第7天TNF-α表达量为(89.21±4.24)ρg/mL,明显高于未转染PAMAM/DNA组的(8.13±1.04)ρg/mL及单纯转染PAMAM组的(8.78±1.25)ρg/mL;经组间效应检验方差分析,不同时间不同组间TNF-α表达量差异有统计学意义,P<0.05。转染pEGFP-N1-TNFα后CIK细胞可明显抑制CNE-2细胞生长,P<0.05。结论:纳米材料PAMAM介导pEGFP-N1-TNFα转染CIK细胞未改变CIK细胞生长特性及表型特征,转染后CIK细胞可分泌较多TNF-α,可更加有效的抑制鼻咽癌细胞生长。 展开更多
关键词 纳米材料 肿瘤坏死因子 基因转染 CIK细胞 鼻咽肿瘤
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hBMP-2转染自体兔骨髓基质细胞附和异体兔脱钙骨基质的成骨实验研究 被引量：1
3
作者 李军 范德刚 +2 位作者 范清宇 俞兰 张殿忠 《骨与关节损伤杂志》 2004年第7期462-464,共3页
目的　探讨人骨发生蛋白 2 (hBMP - 2 )转染兔自体骨髓基质细胞 (rMSCs)的骨生成诱导作用以及附和异体兔脱钙骨基质 (DBM )后的成骨效能。方法　取兔自体骨髓基质细胞培养扩增 ,用脂质体介导的方法转染人骨发生蛋白 2基因 ,将转染和未... 目的　探讨人骨发生蛋白 2 (hBMP - 2 )转染兔自体骨髓基质细胞 (rMSCs)的骨生成诱导作用以及附和异体兔脱钙骨基质 (DBM )后的成骨效能。方法　取兔自体骨髓基质细胞培养扩增 ,用脂质体介导的方法转染人骨发生蛋白 2基因 ,将转染和未转染人骨发生蛋白 2基因的自体骨髓基质细胞附和于异体兔脱钙骨基质形成新的生物植骨材料 ,连同空白及单纯脱钙骨基质对照组植入兔前肢肌袋和桡骨缺损。 2、 4、 6、 8周分别取材进行大体、放射线和病理观察。结果　肌袋试验 6周后 ,转染人骨发生蛋白 2基因的自体骨髓基质细胞附和异体兔脱钙骨基质材料中出现骨组织细胞 ,未转染组和单纯异体兔脱钙骨基质组为纤维组织。骨缺损试验中 ,三组均能产生骨的形成和缺损的修复 ,但仍然是转染复合材料组的骨修复再生能力最大。结论　局部应用hBMP - 展开更多
关键词 hBMP-2转染 兔 骨髓基质细胞 脱钙骨 成骨实验 HBMP-2 rMSCs 骨组织细胞
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纳米粒子PLGA介导HIF-1α基因转染的实验研究 被引量：1
4
作者 高文昌 张波 于如同 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2010年第22期2669-2672,共4页
目的研究纳米粒子PLGA携带特异性HIF-1α基因转染的可行性及其效率。方法构建HIF-1α基因的真核表达质粒pcDNA3.1(+)的重组体。应用复乳溶剂挥发法制备pcDNA3.1(+)-HIF-1α的PLGA纳米粒,用正交设计法对纳米粒子的制备工艺进行优化,检测... 目的研究纳米粒子PLGA携带特异性HIF-1α基因转染的可行性及其效率。方法构建HIF-1α基因的真核表达质粒pcDNA3.1(+)的重组体。应用复乳溶剂挥发法制备pcDNA3.1(+)-HIF-1α的PLGA纳米粒,用正交设计法对纳米粒子的制备工艺进行优化,检测其包埋率、体外释放情况及粒度。观察纳米粒的形态、大小和粒度,研究体外释药特性、抗核酸酶降解性能。用PLGA-pcDNA3.1(+)-HIF-1α纳米粒转染U251细胞,Western blot检测PLGA纳米粒子中HIF-1α蛋白表达。结果用正交设计法优化制备工艺成功构建pcDNA3.1(+)-HIF-1α的PLGA纳米粒,形态圆整,大小均匀,平均粒径102 nm,含药量0.83%,包封率可达72%,有对抗核酸酶降解能力,体外释药缓慢。PLGA-pcDNA3.1(+)-HIF-1α纳米粒可持续高效表达HIF-1α蛋白。结论 PLGA-pcDNA3.1(+)-HIF-1α纳米粒可用于特异性基因的转染。 展开更多
关键词 PLGA 纳米粒子 HIF-1Α 基因转染
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细胞因子诱导杀伤细胞转MDR1基因诱导耐药研究
5
作者 孙敏 王玉平 张岩 《中国优生与遗传杂志》 2004年第4期44-45,60,共3页
目的　细胞因子诱导杀伤细胞 (cytokine -induced -killer,CIK)进行临床免疫治疗能够杀伤肿瘤细胞 ,将MDR1基因转入CIK细胞 ,观察其是否产生耐药性并且保持其肿瘤杀伤活性。方法　用Ficoll密度梯度离心法获得外周血单个核细胞 ,分别加入... 目的　细胞因子诱导杀伤细胞 (cytokine -induced -killer,CIK)进行临床免疫治疗能够杀伤肿瘤细胞 ,将MDR1基因转入CIK细胞 ,观察其是否产生耐药性并且保持其肿瘤杀伤活性。方法　用Ficoll密度梯度离心法获得外周血单个核细胞 ,分别加入IFN -γ ,CD3 Mab ,IL - 2 ,IL - 1等细胞因子体外培养获得CIK细胞。在细胞呈对数生长期时 ,采用电穿孔方法将多药耐药基因PHAMDR质粒转入细胞。转染后 72h提取细胞总RNA ,RT -PCR鉴定耐药基因表达 ;流式细胞仪方法检测细胞膜泵蛋白P - gp。四唑蓝比色法 (MTTAssay)检测转基因CIK细胞对阿霉素和秋水仙碱的耐药性 ,同时检测转染前后CIK细胞对人类乳腺癌细胞系 (MCF7)的杀伤活性变化。结果　转染后CIK细胞出现MDR1基因的转录产物mR NA ;流式细胞仪检测 ,转染后的CIK细胞表达耐药蛋白P - gp ,阳性细胞约为 2 1%。阿霉素对转染后CIK细胞的IC5 0为 0 .11mg/ml,转染后CIK细胞对阿霉素的耐受性较转染前CIK细胞 (IC5 0为 0 .0 0 2 4mg/ml)增强了 4 5 .8倍 ;秋水仙碱对转染后CIK细胞的IC5 0为 1.34ng/ml,转染后耐受性较转染前CIK细胞增强了 11.35倍 (IC5 0为 0 .118ng/ml)。比较转染前后CIK细胞对MCF7肿瘤细胞的杀伤活性无显著性差异 (P >0 .0 5 )。 展开更多
关键词 细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer CIK) 基因转染 MTT 多药耐药
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大鼠SOCS3腺病毒的构建及鉴定
6
作者 梁潇 贺明 +2 位作者 陈涛 惠智艳 袁祖贻 《陕西医学杂志》 CAS 2011年第11期1443-1446,共4页
目的:构建大鼠细胞因子信号途径抑制物3(SOCS3)腺病毒载体,并对腺病毒感染后的HEK293细胞的SOCS3表达情况进行观察。方法:提取大鼠腹腔巨噬细胞中总RNA,克隆出SOCS3基因,亚克隆于含有GFP报告基因的穿梭质粒pAdtrack-CMV,通过pAdeasy-1... 目的:构建大鼠细胞因子信号途径抑制物3(SOCS3)腺病毒载体,并对腺病毒感染后的HEK293细胞的SOCS3表达情况进行观察。方法:提取大鼠腹腔巨噬细胞中总RNA,克隆出SOCS3基因,亚克隆于含有GFP报告基因的穿梭质粒pAdtrack-CMV,通过pAdeasy-1腺病毒系统将含有目的基因的穿梭质粒和骨架质粒共转入BJ5183感受态细胞。线性化重组的病毒转染入HEK293细胞,并在其中对重组的腺病毒进行包装及扩增。结果:构建的大鼠SOCS3腺病毒能够高效率的感染HEK293细胞,mRNA和蛋白水平均证实SOCS3表达显著增加。结论:大鼠SOCS3腺病毒载体构建成功,可用于体内转染或细胞试验的进一步研究。 展开更多
关键词 @SOCS3 @腺病毒 @基因转染 大鼠
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