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同时鉴别6种鸡病毒性呼吸道病GeXP检测方法的建立 被引量：7
1
作者 罗思思 谢芝勋 +5 位作者 谢丽基 庞耀珊 范晴 邓显文 刘加波 谢志勤 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期250-257,共8页
为了建立一种能够同时鉴别H5、H7、H9亚型禽流感、新城疫、传染性支气管炎和传染性喉气管炎6种鸡病毒性呼吸道传染病病原体的GeXP检测方法,本研究根据这些病原体各自的基因保守序列,设计合成了7对特异性引物,优化反应条件,用单一病毒、... 为了建立一种能够同时鉴别H5、H7、H9亚型禽流感、新城疫、传染性支气管炎和传染性喉气管炎6种鸡病毒性呼吸道传染病病原体的GeXP检测方法,本研究根据这些病原体各自的基因保守序列,设计合成了7对特异性引物,优化反应条件,用单一病毒、混合病毒样品来验证所建立的GeXP方法的特异性和准确性,以不同拷贝数的克隆质粒来检测GeXP方法的灵敏度。检测34份临床阳性样品,进一步验证该法的可靠性。结果显示,在7对引物同时存在的GeXP反应体系中,可特异性地扩增出相关6种病毒目的片段,并可在102拷贝/μL水平同时特异地检测出鸡6种病毒性呼吸道传染病,GeXP方法检测34份临床阳性样品结果与病毒分离一致。本研究建立的GeXP方法不仅可高通量检测6种病原体,而且具有特异性强和灵敏度高的特点,适用于临床样品混合感染的快速鉴别诊断,对这6种发病特征及临床症状相似的鸡病毒性呼吸道病的有效防控有很高的实际应用价值。 展开更多
关键词 gexp检测 鸡呼吸道病 多重PCR
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同时监测8种牛常见病原体的GeXP高通量快速检测技术 被引量：3
2
作者 范晴 谢芝勋 +10 位作者 谢志勤 谢丽基 黄莉 黄娇玲 张艳芳 曾婷婷 王盛 罗思思 邓显文 刘加波 庞耀珊 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期1920-1931,共12页
本研究旨在建立一种可同时检测8种常见牛传染病病原体(口蹄疫病毒、蓝舌病病毒、水疱性口炎病毒、牛病毒性腹泻病毒、牛轮状病毒、产肠毒大肠杆菌、牛传染性鼻气管炎病毒和小反刍兽疫病毒)的GeXP高通量快速检测方法。将多重PCR技术和毛... 本研究旨在建立一种可同时检测8种常见牛传染病病原体(口蹄疫病毒、蓝舌病病毒、水疱性口炎病毒、牛病毒性腹泻病毒、牛轮状病毒、产肠毒大肠杆菌、牛传染性鼻气管炎病毒和小反刍兽疫病毒)的GeXP高通量快速检测方法。将多重PCR技术和毛细管电泳技术有效地结合,根据上述8种病原体的基因保守序列,设计并合成了8对特异性引物,在每对特异性引物的5′端加上一段通用引物,形成特异性嵌合引物。优化反应体系和反应条件,用单一病毒和混合病毒样品来验证所建立的GeXP方法的特异性,用克隆质粒稀释液来测试GeXP方法的灵敏度,检测305份临床样品,进一步验证该方法的可靠性。结果:优化后的GeXP检测体系,可扩增出各病原体对应的特异片段,能在100拷贝·μL^(-1)水平同时并特异地检测出8种牛病病原体核酸。305份临床样品的检测结果与荧光PCR检测结果一致,阳性样品测序结果表明无非特异性扩增的假阳性。结果显示,所建立的GeXP方法具有高通量、特异性好、灵敏度高、方便快速等优点,可用于临床鉴别诊断和流行病学调查,具有较高的临床应用价值。 展开更多
关键词 牛传染病 gexp 高通量检测
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GeXP多重PCR法同时检测5种致泻性大肠埃希菌 被引量：1
3
作者 陈建才 陈鸿鹄 +4 位作者 张云怡 张俊彦 张政 潘军航 占利 《预防医学》 2022年第10期1075-1080,共6页
目的基于GeXP多重基因表达遗传分析系统,建立快速、同时检测5种致泻性大肠埃希菌的方法。方法根据肠产毒性大肠埃希菌(ETEC)、肠侵袭性大肠埃希菌(EIEC)、肠致病性大肠埃希菌(EPEC)、肠集聚性大肠埃希菌(EAEC)和肠出血性大肠埃希菌(EHEC... 目的基于GeXP多重基因表达遗传分析系统,建立快速、同时检测5种致泻性大肠埃希菌的方法。方法根据肠产毒性大肠埃希菌(ETEC)、肠侵袭性大肠埃希菌(EIEC)、肠致病性大肠埃希菌(EPEC)、肠集聚性大肠埃希菌(EAEC)和肠出血性大肠埃希菌(EHEC)的12种毒力基因的保守序列设计特异性引物,用单组引物分别进行PCR扩增,验证单模板单引物PCR的特异性。分别以5种致泻性大肠埃希菌基因组DNA为模板,每个体系中混合12种引物进行PCR扩增,验证单模板多重PCR的特异性。采用GeXP多重PCR分别扩增10~6、10~5、10~4、10~3CFU/mL的5种致泻性大肠埃希菌混合菌悬液DNA模板,分析该方法的灵敏度。用购自超市和农贸市场的食品制作34份加标样品,采用GeXP多重PCR鉴定5种致泻性大肠埃希菌,并与多重实时荧光PCR检测试剂盒检测结果比较。结果单模板单引物PCR产物中,12种毒力基因sth、pic、bfpB、astA、lt、escV、aggR、stx1、uidA、invE、stx2、stp扩增片段大小与设计相符,荧光信号值良好,均在25000 A.U.以上。GeXP单模板多重PCR体系中,5种致泻性大肠埃希菌的12种毒力基因PCR产物片段大小与设计相符,特异性良好。菌液浓度为10~3CFU/mL时,GeXP多重PCR可同时检测出12种毒力基因,荧光信号强度良好,重复检测结果相同,变异系数<10%。采用GeXP多重PCR检测34份加标样品,检出ETEC 3株,EAEC 12株,EIEC、EPEC和EHEC各1株,与商品化的5种致泻性大肠埃希菌多重实时荧光PCR检测结果一致。结论本研究建立了一种同时检测5种致泻性大肠埃希菌12种毒力基因的GeXP多重PCR方法,可用于致泻性大肠埃希菌的临床鉴别诊断及流行病学调查研究。 展开更多
关键词 gexp系统 致泻性大肠埃希菌 毒力基因 多重PCR
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