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丹参酮ⅡA增强HSV-tk/GCV旁观者效应及其与Cx43 mRNA表达的关系 被引量：23
1
作者 黄光琦 宋毅 +4 位作者 张洁 陆燕蓉 肖林 杨元 郭元彪 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期146-149,共4页
目的　研究丹参酮ⅡA(TanshinoneⅡA ,Tan)对HSV tk/GCV旁观者效应的增强作用及其与间隙连接蛋白Cx4 3转录表达的关系。方法　应用polybrene转染、荧光定量RT PCR等技术 ,观察Tan对宫颈癌细胞ME180 (ME)、ME/TK转化细胞旁观者效应及诱导... 目的　研究丹参酮ⅡA(TanshinoneⅡA ,Tan)对HSV tk/GCV旁观者效应的增强作用及其与间隙连接蛋白Cx4 3转录表达的关系。方法　应用polybrene转染、荧光定量RT PCR等技术 ,观察Tan对宫颈癌细胞ME180 (ME)、ME/TK转化细胞旁观者效应及诱导Cx4 3mRNA表达的作用。结果　在HSV tk/GCV系统中 ,Tan显著地提高了ME/TK细胞对GCV的敏感性。在 2 μg/mlGCV作用下 ,以1.3× 10 9mol/LTan与不加Tan的作用相比较 ,在ME与ME/TK不同比例混合细胞的各组中 ,细胞的存活率明显降低 ,差异均有显著性 (P <0 .0 5 )。并观察到Tan对GCV旁观者效应的增强作用 ,在一定范围内为 1.3× 10 -8mol/L和 1.3× 10 -9mol/L。RT PCR结果表明 ,经 1.3× 10 -8mol/L和 1.3× 10 -9mol/LTan处理的ME细胞 ,其Cx4 3mRNA的相对拷贝数比值增高约 8.83倍及 8.4 7倍。结论　在宫颈癌ME180细胞中 ,Tan在 1.3× 10 -8mol/L和 1.3× 10 -9mol/L范围内具有明显增强HSV tk/GCV旁观者效应的作用。Tan在转录水平诱导Cx4 3mRNA表达上调 ,与旁观者效应的增强作用密切相关。 展开更多
关键词 丹参酮ⅡA 旁观者效应 CX43 靼纯疱疹病毒-胸苷激酶基因 丙氧基鸟苷 自杀基因 基因治疗
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含HSV-TK基因的真核表达载体的构建及其在HepG2细胞中的表达(英文) 被引量：7
2
作者 张阳德 孙颖 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 2003年第22期6-11,21,共7页
目的　构建AFP增强子CMV启动子调控下的HSV -TK真核表达质粒用于肝细胞癌的靶向基因治疗。方法　采用PCR方法从HepG2细胞基因组DNA中扩增AFP基因增强子最小的功能片断 ,插入pcDNA3.1-LUC质粒的BglII位点 ,从而构建重组表达质粒 pAFP -LU... 目的　构建AFP增强子CMV启动子调控下的HSV -TK真核表达质粒用于肝细胞癌的靶向基因治疗。方法　采用PCR方法从HepG2细胞基因组DNA中扩增AFP基因增强子最小的功能片断 ,插入pcDNA3.1-LUC质粒的BglII位点 ,从而构建重组表达质粒 pAFP -LUC。HSV -TKcDNA全长序列替换pAFP -LUC质粒中EcoRI位点的LuciferasecDNA全序列构建重组表达质粒 pAFP -TK。质粒 pAFP -LUC采用脂质体法转染AFP阳性的肝癌细胞系HepG2及AFP阴性的非肝癌细胞系HeLa ,用Luciferase分析试剂盒分析Luciferase的表达情况。结果　PCR扩增所得AFP增强子片段的长度和序列通过琼脂糖凝胶电泳、DNA测序得到证实。采用限制性内切酶酶切及PCR方法证实质粒pAFP -LUC中插入的AFP增强子大小、位置及方向均正确。酶切后凝胶电泳分析证实HSV -TK已成功地定向克隆入真核表达载体中。Luciferase报道基因的表达受AFP增强子的调控 ,在AFP阳性肝癌细胞HepG2中高效表达 ,而在AFP阴性的HeLa细胞中表达很低 ,这种差异具有显著性 ,P <0 .0 5。结论　AFP增强子CMV启动子调控的HSV -TK真核表达质粒的构建及其在HepG2细胞中的特异性表达为肝细胞癌的靶向基因治疗提供了实验基础。 展开更多
关键词 肝细胞癌 HCC 单纯疱疹病毒胸苷激酶 HSV-TK 基因治疗 丙氧鸟苷 gcv
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HSV-tk/GCV系统杀伤ACC-M细胞的机理研究 被引量：3
3
作者 孙春晓 何荣根 +3 位作者 张志愿 刘兴坤 周晓健 陈诗书 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2000年第1期16-18,共3页
目的　为探索HSV-tk/GCV(单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶基因/羟甲基无环鸟苷)基因治疗系统杀伤人高转移性腺样囊性癌细胞ACC-M 的机理。方法　采用荧光染色荧光显微镜观察、细胞DNA 电泳、流式细胞仪检测等方法。结果　研究发现,荧光染... 目的　为探索HSV-tk/GCV(单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶基因/羟甲基无环鸟苷)基因治疗系统杀伤人高转移性腺样囊性癌细胞ACC-M 的机理。方法　采用荧光染色荧光显微镜观察、细胞DNA 电泳、流式细胞仪检测等方法。结果　研究发现,荧光染色有明显的细胞凋亡小体和染色质边聚现象;在GCV浓度较大(400 μm ol/L)作用时间较长(4 天)时有较明显的DNA 梯状现象;而FCM 发现在400 μm ol/LGCV 作用下有极明显的亚G1 峰。结论　HSV-tk/GCV基因治疗系统杀伤ACC-M 展开更多
关键词 HSV-TK/gcv 腺样囊性癌 基因治疗
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可调控自杀基因的SCID小鼠乳腺癌基因治疗的研究 被引量：1
4
作者 曾赵军 胡维新 +2 位作者 陈迁 易伟峰 罗赛群 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2003年第1期30-33,共4页
目的 :探讨经强力霉素 (Dox)诱导后 ,丙氧鸟苷 (GCV)对SCID小鼠乳腺癌的调控性治疗作用。方法 :重组逆转录病毒载体 pRevTRE/HSVtk与pRevTet On共转染乳腺癌细胞MCF 7,接种SCID小鼠成瘤后 ,腹腔内分别注射生理盐水(NS)、GCV及Dox +GCV治... 目的 :探讨经强力霉素 (Dox)诱导后 ,丙氧鸟苷 (GCV)对SCID小鼠乳腺癌的调控性治疗作用。方法 :重组逆转录病毒载体 pRevTRE/HSVtk与pRevTet On共转染乳腺癌细胞MCF 7,接种SCID小鼠成瘤后 ,腹腔内分别注射生理盐水(NS)、GCV及Dox +GCV治疗 15d。观测肿瘤体积和组织病理改变及用RT PCR分析肿瘤组织有无HSVtk的表达。结果 :乳腺癌SCID小鼠经Dox +GCV治疗 15d后 ,肿瘤体积明显减小 ,生长受抑 ,组间比较有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;HE染色发现治疗组肿瘤有局部坏死 ,炎性细胞浸润。RT PCR结果显示Dox诱导后肿瘤组织HSVtk表达较明显。结论 :在Dox的诱导作用下 。 展开更多
关键词 TET-ON 基因治疗 丙氧鸟苷 gcv 乳腺癌 SCID鼠
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抗石斑鱼虹彩病毒药物的体外筛选
5
作者 潘赞彬 郑家颖 +4 位作者 郭茜茜 潘国俊 秦启伟 黄晓红 黄友华 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期2702-2710,共9页
【目的】体外筛选抗石斑鱼虹彩病毒(Singapore grouper iridovirus,SGIV)的药物,为石斑鱼虹彩病毒病防控提供理论依据。【方法】应用石斑鱼脾脏组织细胞系(Grouper spleen,GS)-SGIV感染模型,从4种药物[盐酸金刚烷胺(AMA)、更昔洛韦(GCV... 【目的】体外筛选抗石斑鱼虹彩病毒(Singapore grouper iridovirus,SGIV)的药物,为石斑鱼虹彩病毒病防控提供理论依据。【方法】应用石斑鱼脾脏组织细胞系(Grouper spleen,GS)-SGIV感染模型,从4种药物[盐酸金刚烷胺(AMA)、更昔洛韦(GCV)、绿原酸(CGA)和黄芩苷(BI)]中筛选有效的体外抗SGIV药物。通过显微镜观察和细胞活力检测不同药物对GS细胞的毒性,确定不同药物对GS细胞的安全工作浓度后,通过实时荧光定量PCR、蛋白印迹分析等探究药物对SGIV感染复制的调节作用。【结果】细胞活力检测结果显示,4种药物AMA、GCV、CGA和BI处理GS细胞的最高安全工作浓度分别为200、200、1600和40μg/mL。显微镜下观察发现,AMA和GCV处理GS细胞后对SGIV感染的细胞病变效应(Cytopathic effect,CPE)进程有明显的抑制作用,而CGA和BI没有明显抑制效果。实时荧光定量PCR检测结果显示,AMA和GCV处理可显著降低SGIV主要衣壳蛋白(Major capsid protein,MCP)和病毒囊膜蛋白(Viral protein VP088)的基因转录(P<0.05,下同)。蛋白印迹分析表明AMA和GCV对SGIV的MCP蛋白合成具有明显抑制效果。倒置荧光显微镜观察发现AMA和GCV处理明显减少感染过程中病毒加工厂的形成,提示AMA和GCV可能影响病毒装配。病毒滴度测定结果显示,AMA和GCV处理可显著降低SGIV感染过程中子代病毒的产量。【结论】应用SGIV体外感染模型筛选到的2种药物AMA和GCV具有一定的抗SGIV活性,且这种抗病毒能力主要通过抑制病毒的基因转录和蛋白合成,从而影响病毒的装配和产量。 展开更多
关键词 石斑鱼虹彩病毒 抗病毒药物 盐酸金刚烷胺(AMA) 更昔洛韦(gcv)
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TK/GCV系统联合顺铂对骨肉瘤MG-63细胞生长的抑制作用研究
6
作者 马卓 吕智 《中国骨与关节杂志》 CAS 2013年第2期95-99,共5页
目的研究脂质体介导的包含TK基因的质粒pIRES-EGFP-tk在GCV作用下(TK/GCV系统)联合化疗药物顺铂对人骨肉瘤MG-63细胞生长的抑制作用。方法构建重组质粒pIRES-EGFP-tk,制备和转化感受态大肠杆菌BL21及鉴定测序,培养和转染人骨肉瘤MG-63... 目的研究脂质体介导的包含TK基因的质粒pIRES-EGFP-tk在GCV作用下(TK/GCV系统)联合化疗药物顺铂对人骨肉瘤MG-63细胞生长的抑制作用。方法构建重组质粒pIRES-EGFP-tk,制备和转化感受态大肠杆菌BL21及鉴定测序,培养和转染人骨肉瘤MG-63细胞株,流式细胞仪分析和荧光倒置显微镜下观察细胞生长状态,筛选稳定细胞系,MTT法检测GCV与不同浓度顺铂联合应用对骨肉瘤MG-63细胞株生长的抑制作用。结果成功构建含TK基因cDNA片段的重组质粒pIRES-EGFP-tk,通过PCR、酶切电泳等方法鉴定质粒位点和大小均符合实验设计。将重组质粒pIRES-EGFP-tk转染入人骨肉瘤MG-63细胞株,获得稳定表达。荧光显微镜下观察MG-63(tk+)呈现绿色荧光。流式细胞仪检测转染率为67.7%。通过MTT法检测,当GCV浓度为10μg/ml时,骨肉瘤MG-63(tk+)细胞株的生长受到抑制,同时测得顺铂的最低有效浓度为1μg/ml。当顺铂与GCV(5μg/m1)联合应用时,顺铂的有效浓度可降为0.25μg/ml,并对MG-63(tk+)细胞株有明显的抑制作用。结论 TK/GCV系统联合顺铂可对人骨肉瘤MG-63细胞的生长产生抑制作用,并提高MG-63细胞对顺铂的敏感性,降低其有效剂量。可望为骨肉瘤的辅助治疗提供实验依据。 展开更多
关键词 TK 基因转染 骨肉瘤 丙氧鸟苷(gcv) 顺铂(cDDP)
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秦巴山区HCMV先天性感染更昔洛韦治疗效果探讨 被引量：1
7
作者 李琦 李芬 《中国妇幼健康研究》 2012年第3期352-354,共3页
目的探讨秦巴山区人巨细胞病毒（HCMV）先天性感染对婴儿的影响及更昔洛韦对症状性患儿干预性治疗的效果。方法采用ELISA法检测孕妇和其所生子女血清中HCMV—IgM，PCR法检测新生儿生后2周内血清中HCMV—DNA。收集病例组中婴儿临床及实... 目的探讨秦巴山区人巨细胞病毒（HCMV）先天性感染对婴儿的影响及更昔洛韦对症状性患儿干预性治疗的效果。方法采用ELISA法检测孕妇和其所生子女血清中HCMV—IgM，PCR法检测新生儿生后2周内血清中HCMV—DNA。收集病例组中婴儿临床及实验室资料，患儿给予更昔洛韦治疗2周，追踪其疾病变化及转归。结果秦巴山区孕期HCMV宫内传播率为36．49％（27／74）；孕期HCMV活动性感染与婴儿先天性感染之间关系密切（Х^2=17．58，P〈0．001）。HCMV先天性感染可对新生儿各系统器官造成损害。有症状患儿经更昔洛韦治疗2周后HCMV转阴率为64．29％（9／14），患儿总胆红素、直接胆红素、谷氨酰转移酶、谷丙转氨酶等肝功指标明显降低。结论HCMV先天性感染对婴儿损害严重，更昔洛韦对有症状患儿有一定的治疗作用。 展开更多
关键词 人巨细胞病毒 先天性感染 活动性感染 更昔洛韦
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HSV-tk/GCV系统对鼠膀胱癌的自杀基因治疗研究
8
作者 张荣贵 叶钢 刘为池 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2005年第4期513-515,共3页
目的:在体外和体内水平建立膀胱癌的单纯疱疹病毒-胸苷激酶/丙氧鸟苷(herpes simplex virus type thymidine Kinase/ganciclovir,HSV-tk/GCV)自杀基因系统,并验证该系统的有效性.方法:用逆转录病毒载体HSV-TK转染鼠膀胱癌细胞株T739,体... 目的:在体外和体内水平建立膀胱癌的单纯疱疹病毒-胸苷激酶/丙氧鸟苷(herpes simplex virus type thymidine Kinase/ganciclovir,HSV-tk/GCV)自杀基因系统,并验证该系统的有效性.方法:用逆转录病毒载体HSV-TK转染鼠膀胱癌细胞株T739,体外检测其对GCV的敏感性,在同基因鼠,分别建立T739和T739-TK膀胱癌腹腔肿瘤模型.当B超显示肿瘤直径约0.5～0.8cm时,腹腔GCV给药6天,然后观察肿瘤大小变化及动物存活时间.结果:GCV对T739-TK细胞有显著杀伤作用,而对T739细胞的生长无影响,成功的建立了T739同基因鼠膀胱癌腹腔肿瘤模型,体内实验得到相应结果,转染了TK基因的T739鼠肿瘤明显变小,甚至消失,而未转染TK基因的T739鼠肿瘤继续增大,GCV对其无明显治疗作用,转染了TK基因的T739鼠存活时间显著延长.结论:在体外和体内水平,表达TK基因的肿瘤细胞均被GCV有效杀伤,这表明HSV-tk/GCV系统有可能成为基因治疗膀胱癌的有效方法. 展开更多
关键词 HSV-TK基因 膀胱癌 基因治疗 丙氧鸟苷
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更昔洛韦对转染TK基因的人骨髓瘤细胞的生长抑制作用及旁观者效应
9
作者 傅卫军 侯健 +2 位作者 王东星 丁思奇 陈秋生 《白血病．淋巴瘤》 CAS 2002年第6期331-333,共3页
目的 :探讨更昔洛韦对转染 TK基因的骨髓瘤细胞生长的抑制作用。方法 :应用缺陷型反转录病毒介导的 TK基因系统 (RV- HSV- TK)转染骨髓瘤细胞 ,采用细胞增生实验 (MTT法 ) ,研究更昔洛韦对转染 TK基因的骨髓瘤细胞株的抑制作用。结果 :... 目的 :探讨更昔洛韦对转染 TK基因的骨髓瘤细胞生长的抑制作用。方法 :应用缺陷型反转录病毒介导的 TK基因系统 (RV- HSV- TK)转染骨髓瘤细胞 ,采用细胞增生实验 (MTT法 ) ,研究更昔洛韦对转染 TK基因的骨髓瘤细胞株的抑制作用。结果 :转染了 TK基因的骨髓瘤细胞的生长曲线与未转染 TK基因的细胞无差异。 0 .1μg/ m L～ 5 0 μg/ m L 的更昔洛韦对转染 TK基因的骨髓瘤细胞有明显的抑制作用 ,且与更昔洛韦的作用时间成正比。将转染阳性细胞与未转染细胞共孵育 ,加入 10 μg/ m L 的更昔洛韦作用 96 h,可见旁观者效应。结论 :采用 RV- HSV- TK系统转染骨髓瘤细胞 ,有较高的转染率 ,转染了 展开更多
关键词 更昔洛韦 转染TK基因 骨髓瘤 生长抑制作用 基因治疗
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单纯疱疹病毒胸苷激酶基因对人膀胱癌的杀伤效应
10
作者 陈友琴 何杰 +4 位作者 石明 卢一平 李虹 杨宇如 唐孝达 《中国医学物理学杂志》 CSCD 2000年第3期160-161,共2页
目的：探讨单纯疱疹病毒胸苷激酶（ＨＳＶ－ＴＫ）基因在人膀胱癌基因治疗中的作用。材料与方法：利用电击基因导入法，将逆转录病毒载体ＰＬＮＸＳＴＫ导入包装细胞ＰＡ３１７，经Ｇ４１８筛选，获得稳定产病毒的ＰＡ３１７／ＰＬＮＸ... 目的：探讨单纯疱疹病毒胸苷激酶（ＨＳＶ－ＴＫ）基因在人膀胱癌基因治疗中的作用。材料与方法：利用电击基因导入法，将逆转录病毒载体ＰＬＮＸＳＴＫ导入包装细胞ＰＡ３１７，经Ｇ４１８筛选，获得稳定产病毒的ＰＡ３１７／ＰＬＮＸＳＴＫ（ＰＡ３１７／ＴＫ）细胞株。采用制备的病毒转染体外培养的人膀胱癌Ｔ２４细胞，并联合丙氧鸟苷（ＧＣＶ）作用，研究其对膀胱癌细胞的生长抑制作用。 展开更多
关键词 HSV-TK基因 基因治疗 逆转录病毒 膀胱癌 gcv
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