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甘丙肽2型受体在HEK293细胞中的表达及内化过程
被引量:
3
1
作者
吕琼
金艳燕
+4 位作者
吴波
路雅静
李晓晓
赵春礼
徐志卿
《生物物理学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第5期373-379,共7页
构建了在甘丙肽2型受体(GalR2)N端带myc表位标签的真核表达载体,并将其转染到HEK293细胞,进而应用免疫荧光细胞化学方法结合激光扫描共聚焦显微技术观察GalR2蛋白的亚细胞分布和膜转运过程。Western blot结果发现转染组myc-GalR2蛋白水...
构建了在甘丙肽2型受体(GalR2)N端带myc表位标签的真核表达载体,并将其转染到HEK293细胞,进而应用免疫荧光细胞化学方法结合激光扫描共聚焦显微技术观察GalR2蛋白的亚细胞分布和膜转运过程。Western blot结果发现转染组myc-GalR2蛋白水平呈高表达。myc-GalR2主要分布在细胞膜上,少量分布于胞浆中。当给予甘丙肽(10-7mol/L)刺激后,5min时可见细胞膜上myc-GalR2明显减少,胞浆内myc-GalR2增多,15min时膜上myc-GalR2几乎全部消失。表明GalR2受体与配体结合后发生内化,且受体蛋白内化为时间依赖性的转运过程,证实在HEK293细胞GalR2会出现配体依赖性内化。同时,以已知膜蛋白5-HT1AR的内化作为对照,可见在给予甘丙肽刺激以后,5-HT1AR没有发生内化,受体蛋白仍然表达在膜上。此外,通过测定胞内钙水平激活情况来检测其信号通路激活情况,表明myc对GalR2功能没有明显影响。
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关键词
表位标签
甘丙肽
2
型受体(
galr
2
)
G蛋白耦联受体(GPC
r
s)
HEK
2
93细胞
膜转运
原文传递
甘丙肽2型受体在HEK293A细胞中的同源二聚化研究
被引量:
2
2
作者
闫竹青
吕琼
+5 位作者
金艳燕
李杰
马克乾
杨予涛
徐志卿
张进禄
《生物物理学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第5期410-416,共7页
G蛋白偶联受体二聚化在受体的转运和信号转导中起着重要的调节作用。为了验证甘丙肽2型受体(GalR2)是否形成同源二聚体,本实验分别构建了N端带FLAG和HA标签的GalR2融合蛋白,并转染到HEK293A细胞中。Western blot发现,除了相当于GalR2分...
G蛋白偶联受体二聚化在受体的转运和信号转导中起着重要的调节作用。为了验证甘丙肽2型受体(GalR2)是否形成同源二聚体,本实验分别构建了N端带FLAG和HA标签的GalR2融合蛋白,并转染到HEK293A细胞中。Western blot发现,除了相当于GalR2分子量的位置有条带之外,在大约2倍于GalR2分子量的位置也有条带,提示GalR2可能是以二聚体的形式存在的。共转染HA-GalR2和FLAG-GalR2,通过免疫共沉淀方法,在抗HA的免疫片段中检测到了FLAG的免疫活性,且在相当于单倍分子量和二倍分子量上均有条带;反过来,在FLAG的免疫片段中检测HA的免疫活性,条带同样出现在单倍分子量和二倍分子量上。以上结果表明甘丙肽2型受体之间形成了同源二聚体。
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关键词
甘丙肽
2
型受体
G蛋白偶联受体
同源二聚体
免疫共沉淀
原文传递
题名
甘丙肽2型受体在HEK293细胞中的表达及内化过程
被引量:
3
1
作者
吕琼
金艳燕
吴波
路雅静
李晓晓
赵春礼
徐志卿
机构
首都医科大学神经生物学系
首都医科大学组胚教研室
Departments of Neuroscience
出处
《生物物理学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第5期373-379,共7页
基金
国家自然科学基金(30870815)
北京市自然科学基金重点项目(09G0013)
+2 种基金
人事部留学人员科技活动择优资助项目
Swedish Research Council(3106)
北京市人才强教深化高层次人才计划(PHR20100510)~~
文摘
构建了在甘丙肽2型受体(GalR2)N端带myc表位标签的真核表达载体,并将其转染到HEK293细胞,进而应用免疫荧光细胞化学方法结合激光扫描共聚焦显微技术观察GalR2蛋白的亚细胞分布和膜转运过程。Western blot结果发现转染组myc-GalR2蛋白水平呈高表达。myc-GalR2主要分布在细胞膜上,少量分布于胞浆中。当给予甘丙肽(10-7mol/L)刺激后,5min时可见细胞膜上myc-GalR2明显减少,胞浆内myc-GalR2增多,15min时膜上myc-GalR2几乎全部消失。表明GalR2受体与配体结合后发生内化,且受体蛋白内化为时间依赖性的转运过程,证实在HEK293细胞GalR2会出现配体依赖性内化。同时,以已知膜蛋白5-HT1AR的内化作为对照,可见在给予甘丙肽刺激以后,5-HT1AR没有发生内化,受体蛋白仍然表达在膜上。此外,通过测定胞内钙水平激活情况来检测其信号通路激活情况,表明myc对GalR2功能没有明显影响。
关键词
表位标签
甘丙肽
2
型受体(
galr
2
)
G蛋白耦联受体(GPC
r
s)
HEK
2
93细胞
膜转运
Keywords
Epitope
tag
galanin
r
2
receptor
(
galr
2
)
G
p
r
otein-coupled
receptor
s(GPC
r
s)
HEK
2
93
cell
T
r
afficking
分类号
Q753 [生物学—分子生物学]
原文传递
题名
甘丙肽2型受体在HEK293A细胞中的同源二聚化研究
被引量:
2
2
作者
闫竹青
吕琼
金艳燕
李杰
马克乾
杨予涛
徐志卿
张进禄
机构
首都医科大学神经生物学系北京神经科学研究所北京神经再生修复研究重点实验室
Departments of Neuroscience
出处
《生物物理学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第5期410-416,共7页
基金
"973"计划项目(2010CB912003)
国家自然科学基金项目(30870815)
+3 种基金
北京市自然科学基金重点项目(09G0013)
人事部留学人员科技活动择优资助项目
Swedish Research Council(3106)
北京市人才强教深化高层次人才计划(PHR20100510)~~
文摘
G蛋白偶联受体二聚化在受体的转运和信号转导中起着重要的调节作用。为了验证甘丙肽2型受体(GalR2)是否形成同源二聚体,本实验分别构建了N端带FLAG和HA标签的GalR2融合蛋白,并转染到HEK293A细胞中。Western blot发现,除了相当于GalR2分子量的位置有条带之外,在大约2倍于GalR2分子量的位置也有条带,提示GalR2可能是以二聚体的形式存在的。共转染HA-GalR2和FLAG-GalR2,通过免疫共沉淀方法,在抗HA的免疫片段中检测到了FLAG的免疫活性,且在相当于单倍分子量和二倍分子量上均有条带;反过来,在FLAG的免疫片段中检测HA的免疫活性,条带同样出现在单倍分子量和二倍分子量上。以上结果表明甘丙肽2型受体之间形成了同源二聚体。
关键词
甘丙肽
2
型受体
G蛋白偶联受体
同源二聚体
免疫共沉淀
Keywords
galanin
receptor
2(
galr
2)
G
p
r
otein-coupled
receptor
s(GPC
r
s)
Homodime
r
s
Co-immunop
r
ecipitation
分类号
Q291 [生物学—细胞生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
甘丙肽2型受体在HEK293细胞中的表达及内化过程
吕琼
金艳燕
吴波
路雅静
李晓晓
赵春礼
徐志卿
《生物物理学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010
3
原文传递
2
甘丙肽2型受体在HEK293A细胞中的同源二聚化研究
闫竹青
吕琼
金艳燕
李杰
马克乾
杨予涛
徐志卿
张进禄
《生物物理学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011
2
原文传递
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