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黑花生再生体系和遗传转化的初步研究 被引量：5
1
作者 余云芳 姚伟 +5 位作者 李红梅 段真珍 何正权 乐超银 张昌菊 梁宏伟 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2006年第3期38-42,62,共6页
以黑花生品种黑霸920成熟种胚、幼叶和胚轴为外植体,对黑花生植株再生和遗传转化进行了研究。通过设置一系列不同浓度激素配比的培养基来优化各阶段培养条件,初步建立了高效的黑花生再生体系,即花生种子经75%乙醇表面消毒15 min,MS+6-BA... 以黑花生品种黑霸920成熟种胚、幼叶和胚轴为外植体,对黑花生植株再生和遗传转化进行了研究。通过设置一系列不同浓度激素配比的培养基来优化各阶段培养条件,初步建立了高效的黑花生再生体系,即花生种子经75%乙醇表面消毒15 min,MS+6-BA 2.0 mg/L为最优化的种子萌发培养基,MS+2,4-D 2.0 mg/L为最佳诱导愈伤培养基,幼叶为最佳诱导愈伤组织的外植体,MS+6-BA 8 mg/L+NAA 0.5 mg/L+AgNO31 mg/L为最佳分化培养基,MS+NAA 2.0mg/L+6-BA 0.2 mg/L+活性炭200 mg/L为最佳生根培养基。同时确定了愈伤组织和幼苗的卡那霉素筛选压分别为30 mg/L和300 mg/L。利用农杆菌介导法将含有G US基因和NPTⅡ基因的植物表达载体pBI121导入花生组织,在对愈伤组织、幼叶和胚轴的GUS表达检测中均有蓝色斑块出现,证明G US基因已成功转入到花生细胞中。 展开更多
关键词 花生 组织培养 农杆菌介导法 gus检测
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高羊茅和黑麦草农杆菌介导转化体系的研究 被引量：10
2
作者 王艳丽 叶兴国 +4 位作者 董芳 乔卫华 陶丽莉 李晓璐 许兴 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期22-27,共6页
利用C58C1农杆菌菌系(携带的表达载体上含GUS基因和nptII基因)感染4个草坪草品种追寻者、爱神特、腾跃和守门员成熟胚来源的愈伤组织,共培养后部分愈伤组织进行X-Gluc组织化学染色检测,其余愈伤组织在含G41810～25mg/L的MS改良培养上先... 利用C58C1农杆菌菌系(携带的表达载体上含GUS基因和nptII基因)感染4个草坪草品种追寻者、爱神特、腾跃和守门员成熟胚来源的愈伤组织,共培养后部分愈伤组织进行X-Gluc组织化学染色检测,其余愈伤组织在含G41810～25mg/L的MS改良培养上先后筛选抗性愈伤组织和分化抗性再生植株,对移栽成活的144棵抗性再生植株分别进行了ELISA检测、PCR检测和组织化学染色检测。愈伤组织阶段X-Gluc染色检测结果表明,4个草坪草品种GUS基因瞬间表达率8.6%～46.9%,爱神特愈伤组织对农杆菌侵染最为敏感,其次是腾跃和守门员,追寻者最不敏感;ELISA检测结果表明,45株呈现阳性,证明nptII基因已转入草坪草并已表达;PCR检测结果与ELISA检测结果一致,表明nptII基因确实已经整合到了草坪草基因组中,且没有发生沉默现象;转基因植株X-Gluc染色检测结果表明,GUS基因在43株中得到了稳定表达,在2株中发生了沉默现象。4个草坪草品种抗性再生植株分化率0%～43.5%,转化率0%～21.5%。结果还表明,GUS基因瞬间表达率与稳定转化率在草坪草上很不一致,不能作为衡量基因型转化效果的指标。 展开更多
关键词 草坪草 农杆菌转化法 gus基因瞬时表达 分子检测
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烟草发状根的诱导和植株再生 被引量：7
3
作者 崔红 宋志红 +1 位作者 史向东 刘国顺 《中国烟草学报》 EI CAS CSCD 2003年第4期26-29,共4页
发根农杆菌Ar1334工程菌株与烟草叶片共培养,诱导的根在MS无激素培养基上呈现旺盛的生长态势和典型的发状根结构特点,并在附加0.5mg/mL KT的MS培养基上实现了植株再生。发状根经PCR检测扩增出了500bp的rolC目的片断,组织化学检测也证实... 发根农杆菌Ar1334工程菌株与烟草叶片共培养,诱导的根在MS无激素培养基上呈现旺盛的生长态势和典型的发状根结构特点,并在附加0.5mg/mL KT的MS培养基上实现了植株再生。发状根经PCR检测扩增出了500bp的rolC目的片断,组织化学检测也证实了GUS基因在发状根及再生植株叶片中的表达。该体系为利用发状根进行外源基因表达,并通过大量培养进行物质生产奠定了基础。 展开更多
关键词 烟草 发根农杆菌 植株再生 PCR检测 gus基因 组织化学检测 基因表达
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粉红粘帚菌的ATMT体系构建及定殖甘草条件优化 被引量：1
4
作者 史启今 王潇晗 +2 位作者 任广喜 姜丹 刘春生 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期126-133,共8页
目的:建立并优化根癌农杆菌介导的甘草内生真菌粉红粘帚菌的遗传转化体系,优选粉红粘帚菌定殖甘草的条件,为生物菌肥的开发及优质甘草的育种奠定基础。方法:分别从乙酰丁香酮浓度、共培养时间和受体真菌分生孢子浓度3个方面对根癌农杆... 目的:建立并优化根癌农杆菌介导的甘草内生真菌粉红粘帚菌的遗传转化体系,优选粉红粘帚菌定殖甘草的条件,为生物菌肥的开发及优质甘草的育种奠定基础。方法:分别从乙酰丁香酮浓度、共培养时间和受体真菌分生孢子浓度3个方面对根癌农杆菌介导的遗传转化(ATMT)条件进行优化并优选转化子。采用正交试验,以共培养温度、共培养时间和孢子浓度为考察因素,定殖率为指标,优化粉红粘帚菌定殖甘草的条件。结果:粉红粘帚菌最适转化条件为共培养时间60 h、孢子浓度1×10^(7) cfu·mL^(-1)、乙酰丁香酮浓度150μmol·L^(-1),此条件下的转化效率为每1×10^(7)个受体真菌孢子可获得135个转化子。通过标记基因绿色荧光蛋白(GFP)的克隆和β-葡萄糖苷酸酶(GUS)染色结果检测转化的准确性与稳定性。粉红粘帚菌通过浸种法定殖甘草的最佳条件为共培养温度25℃、共培养时间36 h、孢子浓度1×10^(6) cfu·mL^(-1),此条件下定殖率71.11%。结论:本研究成功建立了稳定高效的粉红粘帚菌ATMT体系及其定殖甘草的技术体系,可为甘草生物菌肥的开发奠定基础。 展开更多
关键词 粉红粘帚菌 根癌农杆菌介导的遗传转化(ATMT) 绿色荧光蛋白 β-葡萄糖苷酸酶(gus)染色 甘草 转化子 正交试验
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天然气管道阀门内漏声场特征分析及应用探讨 被引量：2
5
作者 倪凯 陈青华 +1 位作者 吴振宙 邓立 《石化技术》 CAS 2016年第2期50-50,共1页
天然气管道阀门通常具有高压力、大口径的特点,因此,在检测的过程中,选择检验方法至关重要。声学检测法具有无损害检测物的优点,且可以通过反射出的声学信息探究出阀门内漏的情况,通过计算得出内漏流量。对天然气管道阀门内漏声学特征... 天然气管道阀门通常具有高压力、大口径的特点,因此,在检测的过程中,选择检验方法至关重要。声学检测法具有无损害检测物的优点,且可以通过反射出的声学信息探究出阀门内漏的情况,通过计算得出内漏流量。对天然气管道阀门内漏声学特征以及相关性问题的研究,有助于提高内阀门内漏检测效果,这也是本文开展此项研究的主要目的,并为天然气管道阀门内漏无损检测提供理论依据。 展开更多
关键词 天然气管道 阀门内漏 声学特征 实验研究
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