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水稻rbcS启动子控制的外源基因在转基因水稻中的特异性表达 被引量：23
1
作者 刘巧泉 于恒秀 +2 位作者 张文娟 王红梅 顾铭洪 《植物生理与分子生物学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期247-253,共7页
为将不同启动子用于转基因水稻的研究,从武运粳8号水稻中克隆了Rubisco小亚基基因(rbcS)的5'上游调控区,构建了由rbcS启动子引导的GUS融合基因,并经农杆菌介导导入到水稻中。对转基因水稻植株中GUS活性的定性与定量测定结果表明,rbc... 为将不同启动子用于转基因水稻的研究,从武运粳8号水稻中克隆了Rubisco小亚基基因(rbcS)的5'上游调控区,构建了由rbcS启动子引导的GUS融合基因,并经农杆菌介导导入到水稻中。对转基因水稻植株中GUS活性的定性与定量测定结果表明,rbcS启动子可驱动GUS报告基因在转基因水稻植株叶片和叶鞘内的叶肉细胞中特异性高效表达,而在茎、根和种子等器官中不表达或表达活性极弱,表现出明显的组织与细胞特异性。结果还表明,光诱导处理可明显提高rbcS启动子启动的外源基因的表达量。 展开更多
关键词 水稻rbcS启动子 转基因水稻 基因表达 gus活性 光诱导
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带内含子卡那霉素抗性基因双元载体构建及烟草转化 被引量：15
2
作者 彭友良 彭日荷 +3 位作者 黄晓敏 李贤 孙爱君 姚泉洪 《植物生理学报（0257-4829)》 CSCD 2001年第1期55-60,共6页
农杆菌介导法是植物基因转化的常用方法 ,然而由于筛选培养基中常用的抗生素头孢霉素和羧苄青霉素具有类植物激素活性 ,影响外植体的再生和转化频率。将一个植物的内含子插入卡那霉素抗性基因编码区的N端 ,合成了一个带内含子的卡那霉... 农杆菌介导法是植物基因转化的常用方法 ,然而由于筛选培养基中常用的抗生素头孢霉素和羧苄青霉素具有类植物激素活性 ,影响外植体的再生和转化频率。将一个植物的内含子插入卡那霉素抗性基因编码区的N端 ,合成了一个带内含子的卡那霉素抗性基因。构建带该基因的植物双元表达载体 pYP12 0 2并转化烟草 ,受侵外植体在含卡那霉素 5 0～ 2 0 0mg/L的选择培养基中抗性芽分化频率不受卡那霉素浓度影响 ,然而具有GUS活性的转化子占分化芽的比例却随着卡那霉素浓度的增加而升高。当培养基中加入 5 0 0mg/L羧苄青霉素后受侵外植体产生的抗性芽频率比单一的卡那霉素筛选提高近 1倍 ,高达 91.4% ,然而具GUS活性的转化子占抗性芽的比例仅有 2 6 .7% ,在 2 0 0mg/L的卡那霉素筛选下 ,比例升至 93 .3 %。 展开更多
关键词 带内含子卡那霉素抗性基因 gus活性 烟草转化 植物 外源基因
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pib基因启动子及其诱导启动性初探 被引量：13
3
作者 李婵娟 杨世湖 +1 位作者 武亮 万建民 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期689-694,共6页
将pib基因上游5.7 kb区段取代pCAMBIA1301中gus基因上游的35S启动子,构建了pib拟启动区-GUS+35S-hpt植物表达载体pNAR604。经农杆菌介导转化水稻成熟胚愈伤,获得了转基因抗潮霉素愈伤和36株转基因水稻植株。转基因抗性愈伤和转基因植株... 将pib基因上游5.7 kb区段取代pCAMBIA1301中gus基因上游的35S启动子,构建了pib拟启动区-GUS+35S-hpt植物表达载体pNAR604。经农杆菌介导转化水稻成熟胚愈伤,获得了转基因抗潮霉素愈伤和36株转基因水稻植株。转基因抗性愈伤和转基因植株根的组织化学GUS活性检测表明,光照培养下的抗性愈伤和转基因植株根不能使X-gluc显色,而暗处理24 h后的抗性愈伤和定植后转基因植株的根能使X-gluc显色。转基因植株GUS荧光定量分析结果表明,GUS表达具有器官特异性,黑暗处理前根的GUS活性最高、茎次之,分别是叶片的7倍和3倍,叶片中仅有痕量本底。24 h黑暗处理后根、茎、叶中GUS活性都有增加,且叶片中的增加比例最大,其活性仅次于根。5 mmol/L水杨酸和0.3 mol/L NaCl叶面喷施转基因植株24 h后叶片中GUS活性分别为处理前的2.7和3.6倍。初步确定pib拟启动区是一个诱导型启动子。黑暗、水杨酸和NaCl能诱导该启动子启动活性。 展开更多
关键词 水稻 pib启动子 gus活性 诱导表达
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大麦β-1,3-葡聚糖酶基因(GIII)启动子在转基因水稻中的诱导表达 被引量：14
4
作者 李云锋 朱蕊 +1 位作者 谢龙旭 徐培林 《植物生理与分子生物学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期143-148,共6页
将大麦β-1,3-葡聚糖酶同功酶基因(GIII)启动子(PGIII)与其报告基因gus(β-葡聚糖酸醛苷酶基因)耦联,构建植物表达载体,通过农杆菌介导法转化水稻。PCR、DNA印迹法结果显示,构建的pGIII-gus表达载体已整合到水稻基因组DNA中。GUS组织化... 将大麦β-1,3-葡聚糖酶同功酶基因(GIII)启动子(PGIII)与其报告基因gus(β-葡聚糖酸醛苷酶基因)耦联,构建植物表达载体,通过农杆菌介导法转化水稻。PCR、DNA印迹法结果显示,构建的pGIII-gus表达载体已整合到水稻基因组DNA中。GUS组织化学染色、RNA印迹法及荧光法结果显示,该启动子驱动的gus在水稻叶片中为低水平表达;而用水扬酸(SA)与稻瘟菌来源的激发子处理,可诱导gus的高水平表达。T1代种子的GUS组织化学染色结果也表明,SA与激发子可以诱导高水平的PGIII活性。这些结果表明PGIII是一种强诱导型启动子,并可能是一种病原菌诱导型的启动子。 展开更多
关键词 水稻 启动子 转基因 诱导表达 gus活性
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小麦原生质体的电激介导基因转移 被引量：7
5
作者 李宏潮 胡道芬 +2 位作者 尾高志 町井博明 平林利郎 《华北农学报》 CSCD 北大核心 1996年第3期25-30,共6页
从小麦品种“Ｂｏｄａｌｉｎ”胚性悬浮细胞分离出原生质体，通过电激将质粒ＰＢＣ１ＤＮＡ（携带β－葡萄糖苷酸酶（ＧＵＳ）标记基因和潮霉素抗性基因ｈｐｈ）导入原生质体。采用ＢＴＸ电激系统和ＡＳＰ电激缓冲液，最佳电激条件为３... 从小麦品种“Ｂｏｄａｌｉｎ”胚性悬浮细胞分离出原生质体，通过电激将质粒ＰＢＣ１ＤＮＡ（携带β－葡萄糖苷酸酶（ＧＵＳ）标记基因和潮霉素抗性基因ｈｐｈ）导入原生质体。采用ＢＴＸ电激系统和ＡＳＰ电激缓冲液，最佳电激条件为３００Ｖ（７５０Ｖ／ｃｍ）和５０ｍｓ（约１０００μＦ），转化的原生质体内ＧＵＳ的活性最高；质粒ＤＮＡ的有效使用浓度为２５μｇ／ｍｌ。电激处理后，原生质体培养２～３天，ＧＵＳ基因表达最强，宜于检测其瞬时表达；牛胸腺ＤＮＡ可协助提高ＧＵＳ基因的导入效果。质粒ＰＢＣ１ＤＮＡ处理的原生质体培养于添加潮霉素的ＫＭＰ培养基。经４个月抗性筛选。 展开更多
关键词 小麦 原生质体 电激 基因导入 潮霉素 抗性克隆
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大豆硫转运蛋白基因GmSULTR1;2b启动子的克隆及活性分析 被引量：12
6
作者 周小琼 丁一琼 +1 位作者 左丽 喻德跃 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1650-1659,共10页
【目的】硫转运蛋白(sulfate transporter,SULTR)参与根系对外界环境中硫酸根(SO42-)的吸收与转运。大豆硫转运蛋白基因Gm SULTR1;2b在根中特异表达,其功能是将外界的SO42-吸收转运到植物根系中。文章克隆大豆硫转运蛋白Gm SULTR1;2b的... 【目的】硫转运蛋白(sulfate transporter,SULTR)参与根系对外界环境中硫酸根(SO42-)的吸收与转运。大豆硫转运蛋白基因Gm SULTR1;2b在根中特异表达,其功能是将外界的SO42-吸收转运到植物根系中。文章克隆大豆硫转运蛋白Gm SULTR1;2b的启动子,研究该启动子的驱动活性和组织表达情况,从而了解Gm SULTR1;2b的调控机制,为提高大豆含硫氨基酸含量提供分子依据。【方法】根据NCBI中Gm SULTR1;2b的序列,分析预测该基因上游2 259 bp为启动子,并利用在线数据库PLACE和Plant-CARE预测该启动子序列的调控元件。以大豆品种南农N2899的DNA为模板,进行普通PCR扩增,将克隆的启动子序列与GUS连接构建植物重组表达载体p SULTR1;2b∷GUS。利用冻融法将重组质粒转入农杆菌EHA105中,通过农杆菌介导的遗传转化法转化大豆进行瞬时表达,以GUS为报告基因对启动子的活性进行分析。另外,将重组质粒转入发根农杆菌K599中进行大豆毛状根转化试验,借助于GUS报告基因,通过体视镜观察毛状根的横切面,分析启动子在根中的表达情况。最后以转化的阳性毛状根为材料,通过GUS酶活试验(GUS activity)分析启动子的活性。【结果】克隆大豆品种南农N2899的Gm SULTR1;2b启动子与NCBI序列基本一致。通过在线预测分析启动子的调控元件发现该启动子具有真核生物启动子必须的核心元件TATA-box外,还含有激素应答元件ERE(乙烯响应元件)、ABRE(脱落酸响应元件)等,胁迫应答元件TC-rich repeats(干旱胁迫以及病虫害胁迫)、AT-rich element(AT-rich的DNA与蛋白结合位点)和MYB等。重组载体p SULTR1;2b∷GUS经PCR和测序鉴定,证实已构建成功。大豆瞬时表达后进行X-gluc染色显示,重组载体侵染的大豆显蓝色,说明Gm SULTR1;2b启动子能够驱动下游GUS的表达。对转化的毛状根染色之后,体视镜下观察阳性根的横切面,发现GUS主要在根毛、根表皮和中柱内表� 展开更多
关键词 大豆 GmSULTR1 2b 启动子 瞬时表达 gus活性
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水稻sbe1启动子驱动的反义sbe-GUS融合基因在转基因水稻中的表达 被引量：5
7
作者 刘巧泉 陈秀花 +3 位作者 陆美芳 于恒秀 王宗阳 顾铭洪 《植物生理与分子生物学学报》 CAS CSCD 2003年第4期332-336,共5页
为研究水稻基因启动子对外源基因在转基因水稻中表达的影响 ,构建了由sbe1启动子引导的反义sbe GUS融合基因。经农杆菌介导 ,将不同的融合基因导入水稻中 ,定量测定转基因水稻植株不同组织中的GUS酶活力。结果表明 ,sbe1启动子可驱动反... 为研究水稻基因启动子对外源基因在转基因水稻中表达的影响 ,构建了由sbe1启动子引导的反义sbe GUS融合基因。经农杆菌介导 ,将不同的融合基因导入水稻中 ,定量测定转基因水稻植株不同组织中的GUS酶活力。结果表明 ,sbe1启动子可驱动反义sbe GUS融合基因在转基因水稻植株的胚乳中高效表达 ,而在颖壳、胚和茎叶等组织中的表达活性较弱。证实sbe1启动子在驱动外源基因的表达上表现有明显的组织特异性。 展开更多
关键词 水稻 淀粉分支酶 基因表达 gus活性
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橡胶树白粉菌(HO-73)启动子WY172不同长度片段的克隆及表达活性分析 被引量：7
8
作者 殷金瑶 王义 +4 位作者 徐良向 朱利 王晨 刘文波 缪卫国 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期29-36,共8页
旨在克隆橡胶树白粉菌启动子WY172及其上游2K序列上4个不同长度缺失片段,以分析启动子各片段的表达活性。基于实验室前期研究基础,以WY172上游2K序列作为研究对象进行渐变缺失突变,得到4个不同长度的可能具有启动子活性的片段,结合WY172... 旨在克隆橡胶树白粉菌启动子WY172及其上游2K序列上4个不同长度缺失片段,以分析启动子各片段的表达活性。基于实验室前期研究基础,以WY172上游2K序列作为研究对象进行渐变缺失突变,得到4个不同长度的可能具有启动子活性的片段,结合WY172,选用pBI121载体作为骨架,分别替换GUS基因前的CaMV35S启动子,并分别构建重组表达载体,通过ATMT法转化农杆菌;利用GUS染色法和酶活性检测,分析WY172启动子及不同长度片段的酶活性。分别构建了pBI121-WY172、pBI121-WY172Q、pBI121-WY172Q1、pBI121-WY172Q2、pBI121-WY172Q3共5个重组的植物表达载体,所有植物表达载体烟草瞬时表达GUS染色均有蓝色出现,且蓝色程度均强于阳性对照CaMV35S启动子,其中pBI121-WY172Q3的GUS染色相对最深;GUS酶活性测定结果显示所有缺失突变片段都具有调控基因表达的启动子活性,且启动活性均强于CaMV35S启动子,WY172Q3调控GUS基因表达的活性最高。因此我们判断WY172及其上游2K序列上4个不同长度缺失片段均具有启动子活性,其中以WY172Q3启动子片段的表达活性最强。 展开更多
关键词 橡胶树白粉菌内源启动子WY172 gus染色 缺失突变 gus酶活性
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拟南芥FRUITFULL(FUL)基因的表达调控模式 被引量：8
9
作者 褚婷婷 谢华 +1 位作者 徐勇 马荣才 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1546-1554,共9页
FRUITFULL(FUL)基因是一类MADS box基因,在控制开花时间、花分生组织分化、茎生叶形态以及心皮和果实的发育中发挥重要作用。为了阐明FUL的表达调控模式,克隆了拟南芥Arabidopsis thaliana FUL启动子区(-2148bp^+96bp)及其第一内含子,... FRUITFULL(FUL)基因是一类MADS box基因,在控制开花时间、花分生组织分化、茎生叶形态以及心皮和果实的发育中发挥重要作用。为了阐明FUL的表达调控模式,克隆了拟南芥Arabidopsis thaliana FUL启动子区(-2148bp^+96bp)及其第一内含子,并构建一系列启动子分段缺失表达载体及含FUL第一内含子的融合载体。并进一步构建了各顺式作用元件融合拟南芥TUBULIN和ACTIN启动子的表达载体。转基因拟南芥分析结果表明,FUL启动子的上游存在2个抑制其表达的顺式作用元件,其中一个很可能与转录因子AP1的结合有关;2个存在于上游调控区的CArG-box对FUL基因表达起到重要的调控作用;FUL基因第一内含子参与拟南芥心皮和雄蕊的发育调控,而且有增强基因表达的作用。 展开更多
关键词 拟南芥 FUL基因 启动子 第一内含子 缺失分析 gus活性
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水稻基因启动子OsBTF3p的克隆和启动活性分析 被引量：9
10
作者 柏亚男 吴茂森 何晨阳 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期862-868,共7页
【目的】分子克隆水稻基因OsBTF3启动子片段,明确其对靶基因表达的启动作用,为抗病转基因水稻研究提供理论依据和启动子元件材料。【方法】对OsBTF3编码区上游1387bp的启动子(OsBTF3p)序列进行了克隆和序列分析,构建了OsBTF3p∷GUS融合... 【目的】分子克隆水稻基因OsBTF3启动子片段,明确其对靶基因表达的启动作用,为抗病转基因水稻研究提供理论依据和启动子元件材料。【方法】对OsBTF3编码区上游1387bp的启动子(OsBTF3p)序列进行了克隆和序列分析,构建了OsBTF3p∷GUS融合基因植物表达载体pCAM-OsBTF3p,利用农杆菌介导的水稻遗传转化,获得了39株OsBTF3p∷GUS转基因植株,对OsBTF3p进行了启动活性、组织特异性及病原菌诱导性分析。【结果】分子克隆了OsBTF3p片段,其序列与GenBank中的已知序列一致。在转基因水稻愈伤组织中能够检测到GUS活性,表明该启动子具有启动活性。在转基因水稻叶片维管束组织和根部组织能检测到GUS活性。水稻白叶枯病菌(Xoo)侵染后OsBTF3p驱动的GUS活性明显地上调表达。【结论】OsBTF3p具有驱动GUS基因表达的启动活性、组织表达特异性和病原菌诱导性。 展开更多
关键词 OsBTF3p gus活性 组织特异性 病原菌诱导性 水稻
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水稻rbcS启动子的克隆及其在转基因水稻中的特异性表达 被引量：7
11
作者 卢碧霞 张改生 +1 位作者 夏勉 马守才 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2007年第1期96-100,105,共6页
为将高效特异的启动子用于转基因水稻研究,利用PCR技术从水稻‘中花11’基因组DNA中克隆了rbcS启动子,序列分析表明,扩增片段(2 746 bp)与已报道的该基因序列相应区域的同源性达99.2%。将rbcS启动子与GUS报告基因融合构建了由rbcS启动... 为将高效特异的启动子用于转基因水稻研究,利用PCR技术从水稻‘中花11’基因组DNA中克隆了rbcS启动子,序列分析表明,扩增片段(2 746 bp)与已报道的该基因序列相应区域的同源性达99.2%。将rbcS启动子与GUS报告基因融合构建了由rbcS启动子引导GUS基因的植物表达载体,经农杆菌介导法导入到水稻中。对转基因水稻植株中GU S活性的定性与定量测定结果表明,rbcS启动子可驱动GUS报告基因在转基因水稻植株叶片中的特异性表达,其表达水平高于C aMV 35S组成型启动子,而在转基因水稻植株根和种子等器官中不表达或表达活性极弱,表现出明显的组织特异性。 展开更多
关键词 水稻rbcS启动子 转基因水稻 基因表达 gus活性
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番茄rbcS3A启动子控制的GUS融合基因在转基因水稻中的表达 被引量：6
12
作者 刘巧泉 于恒秀 +2 位作者 张文娟 龚志云 顾铭洪 《植物生理与分子生物学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期251-257,共7页
为研究不同启动子用于转基因水稻,克隆了番茄Rubisco小亚基rbcS3A基因的5′上游调控区,构建了由rbcS3A启动子引导的GUS嵌合基因,并经农杆菌介导导入到水稻中。对转基因水稻植株中GUS活性的定性与定量测定结果表明,rbcS3A启动子可驱动GU... 为研究不同启动子用于转基因水稻,克隆了番茄Rubisco小亚基rbcS3A基因的5′上游调控区,构建了由rbcS3A启动子引导的GUS嵌合基因,并经农杆菌介导导入到水稻中。对转基因水稻植株中GUS活性的定性与定量测定结果表明,rbcS3A启动子可驱动GUS报告基因在转基因水稻植株茎和叶组织中高效表达,而在根和种子等器官中不表达或表达活性极弱,表现出一定的组织特异性。在转基因水稻中,番茄rbcS3A启动子驱动外源基因的表达不受光诱导。 展开更多
关键词 番茄rbcS3A启动子 转基因水稻 基因表达 gus活性
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南瓜韧皮部特异性启动子在转基因棉花中的表达 被引量：4
13
作者 罗晓丽 陈晓英 +4 位作者 肖娟丽 张安红 王志安 田颖川 吴家和 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2007年第6期431-435,共5页
以自行构建的重组南瓜韧皮部特异启动子dENP构建了植物表达载体pBII2。利用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)LBA44O4介导转化棉花(Gossypium hirsutum L.)品种珂字312,共获得转pBII2和对照pBI121的抗卡那霉素棉花再生植株243株,... 以自行构建的重组南瓜韧皮部特异启动子dENP构建了植物表达载体pBII2。利用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)LBA44O4介导转化棉花(Gossypium hirsutum L.)品种珂字312,共获得转pBII2和对照pBI121的抗卡那霉素棉花再生植株243株,筛选出172株为转基因阳性植株。Southern blot分析确证外源Gus基因插入拷贝数在1个或2个以上。对这些转基因棉花植株进行Gus染色结果表明dENP和CaMV35S启动子一样均能驱动Gus基因的表达,前者仅在棉花的韧皮部内特异表达,而CaMV35S启动子驱动的Gus基因为组成性表达。Gus酶活力测定结果进一步表明dENP和CaMV35S启动子驱动Gus基因表达水平相当,但是转pBII2棉花植株的Gus富集在韧皮部组织。证明了dENP启动子驱动的外源基因在棉花中具有韧皮部特异而高效表达的特征,从而可用于棉花抗病、抗蚜虫转基因研究。 展开更多
关键词 特异启动子 棉花 gus酶活力
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麻疯树JcGAST1基因启动子克隆及其功能初步分析 被引量：8
14
作者 陈雨倩 徐刚 令狐前前 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期2145-2154,共10页
JcGAST1是赤霉素信号途径下游的一个靶基因,参与了麻疯树花发育。为了探究JcGAST1基因的调控模式,克隆了JcGAST1基因上游2249 bp启动子序列。通过PlantCARE和PLACE预测发现该区域有多个激素响应元件、逆境响应元件及组织特异性元件。根... JcGAST1是赤霉素信号途径下游的一个靶基因,参与了麻疯树花发育。为了探究JcGAST1基因的调控模式,克隆了JcGAST1基因上游2249 bp启动子序列。通过PlantCARE和PLACE预测发现该区域有多个激素响应元件、逆境响应元件及组织特异性元件。根据顺式作用元件的分布,分别扩增得到长度为1799、1215、713、359 bp的4个启动子5′端缺失片段。用克隆的启动子全长和缺失片段分别构建融合GUS基因的表达载体,瞬时转化烟草叶片。通过GUS染色发现JcGAST1启动子的核心区域位于-713~-359bp之间。对启动子进行激素响应分析,结果表明水杨酸(SA)、生长素(IAA)和茉莉酸甲酯(MeJA)抑制启动子的活性,而赤霉素(GA)增强启动子的活性,初步确定在启动子的-1215~-359 bp存在SA负调控元件,-713~-359 bp存在IAA和MeJA负调控元件,-1215~-713 bp存在GA应答增强元件。 展开更多
关键词 麻疯树 JcGAST1启动子 瞬时表达 gus活性
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受多逆境诱导表达的GhWRKY64基因启动子克隆与功能分析 被引量：8
15
作者 杜皓 丁林云 +2 位作者 何曼林 蔡彩平 郭旺珍 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期593-600,共8页
WRKY蛋白属于锌指型转录调控因子,参与植物生长发育及耐逆响应。以陆地棉遗传标准系TM-1为材料,克隆Gh WRKY64(KF031101)基因上游1064 bp的启动子序列,并对其调控元件及功能进行分析。生物信息学分析表明,该区域含18个组织器官表达及诱... WRKY蛋白属于锌指型转录调控因子,参与植物生长发育及耐逆响应。以陆地棉遗传标准系TM-1为材料,克隆Gh WRKY64(KF031101)基因上游1064 bp的启动子序列,并对其调控元件及功能进行分析。生物信息学分析表明,该区域含18个组织器官表达及诱导表达关键元件,分别为6个ROOTMOTIFTAPOX1根特异调控元件,4个CACTFTPPCA1叶肉特异性调控元件、4个OSE2ROOTNODULE病菌诱导元件、2个GTIGMSCAM4盐调控元件和2个W-box胁迫应答响应元件。将该启动子与GUS基因融合,构建p BIW64:GUS植物表达载体,通过农杆菌介导叶盘转化法获得12个转基因烟草株系。选择GUS表达量最高的p BIW64-5进行转基因不同组织器官表达及诱导表达分析。GUS组织化学染色显示,苗期的转基因烟草植株在叶和根部均具有GUS活性,开花期在转基因烟草植株根、叶及叶柄均检测到GUS活性,特别在转基因烟草的根及根尖部分染色更深,在茎和花组织上未检测到GUS活性。对该转基因烟草幼苗进行黄萎病菌诱导处理,诱导48 h后,转基因烟草幼苗根和叶片的GUS染色比未诱导处理的对照明显加深。结果表明,Gh WRKY64上游1064 bp长度的DNA序列,具有启动子的相关顺式作用元件,且为病原菌诱导型启动子。该启动子可为开展棉花抗黄萎病转基因研究提供调控元件。 展开更多
关键词 GhWRKY64启动子 逆境胁迫 转基因烟草 调控元件 gus活性
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烟草rbcS启动子的克隆与活性鉴定 被引量：5
16
作者 孙家利 闫晓红 +2 位作者 王力军 时向东 魏文辉 《中国烟草学报》 EI CAS CSCD 2010年第3期80-85,共6页
为了有效启动外源基因在烟草叶部特异性表达并改良烟叶品质,采用PCR技术从烟草栽培种NC89基因组中分离了rbcS启动子序列,扩增片段长度979bp。PlantCARE序列分析表明,该序列中含有启动子特征的保守序列及十几种光应答元件,与已报道序列... 为了有效启动外源基因在烟草叶部特异性表达并改良烟叶品质,采用PCR技术从烟草栽培种NC89基因组中分离了rbcS启动子序列,扩增片段长度979bp。PlantCARE序列分析表明,该序列中含有启动子特征的保守序列及十几种光应答元件,与已报道序列的相应区域同源性达99%。将其与GUS融合蛋白基因串连,构建了植物表达载体prbcS-121,通过根癌农杆菌介导的烟草叶盘转化法,将pBI121及prbcS-121转化烟草。对转基因烟草植株中GUS活性测定结果表明,烟草rbcS启动子具有叶部组织特异性,且在叶部启动基因表达能力较CaMV35S启动能力强,从而为外源基因在转基因烟草叶片中的高效表达提供了新的工具,为后续目的基因能在烟草叶部发生组织特异性和光诱导性表达奠定了基础。 展开更多
关键词 烟草 rbcS启动子 rbcS-gus融合基因 gus活性 转基因烟草
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一个烟草葡糖基转移酶基因启动子的克隆与诱导表达 被引量：5
17
作者 李静 刘学群 王春台 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期277-282,共6页
利用笔者所在的实验室从烟草中克隆的一个葡糖基转移酶基因（GT-like）,通过PCR扩增得到该基因开放阅读框5′端-1150～0上游调控区。序列分析表明该启动子序列含有多个基因表达调控元件。将GT-like基因启动子与gus报告基因连接,构建植... 利用笔者所在的实验室从烟草中克隆的一个葡糖基转移酶基因（GT-like）,通过PCR扩增得到该基因开放阅读框5′端-1150～0上游调控区。序列分析表明该启动子序列含有多个基因表达调控元件。将GT-like基因启动子与gus报告基因连接,构建植物表达载体pGT-gus,经根癌农杆菌介导法转化W38型烟草。转基因烟草植株GUS组织化学染色结果表明：该基因上游-1150～0序列具有启动子活性,能启动gus基因在烟草叶片中表达,而在根中的表达受时间和环境影响。GUS诱导活性的定量分析结果表明,该启动子的表达不但受甲基茉莉酸的强烈诱导,而且也受水杨酸的强烈诱导。对这一启动子的诱导表达机理的分析将有助于进一步研究甲基茉莉酸和水杨酸之间拮抗作用的相互关系。 展开更多
关键词 启动子 烟草 葡糖基转移酶基因 gus活性 诱导表达
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葡萄VvAGL12基因启动子克隆及表达活性分析
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作者 姜宁 王雪婷 +4 位作者 王春楠 曲日涛 郭俊娇 张娟 于春燕 《陕西师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期31-41,共11页
MADS-box家族是植物最大的转录因子家族之一,在参与逆境胁迫与调控开花应答中具有重要作用,其AGL12-like亚组在葡萄中的功能尚不清楚。从黑比诺葡萄基因组克隆获得VvAGL12启动子(proVvAGL12),对启动子序列元件进行分析,发现该启动子区... MADS-box家族是植物最大的转录因子家族之一,在参与逆境胁迫与调控开花应答中具有重要作用,其AGL12-like亚组在葡萄中的功能尚不清楚。从黑比诺葡萄基因组克隆获得VvAGL12启动子(proVvAGL12),对启动子序列元件进行分析,发现该启动子区域存在多种与逆境胁迫相关的顺式作用元件。构建proVvAGL12驱动的GUS表达载体,并在拟南芥和烟草中进行转化,发现proVvAGL12启动子片段在拟南芥中具有启动活性,其驱动GUS在转基因拟南芥植株的叶片、茎段、花器官、根、果荚部位表达,表达活性可持续整个生长周期。转基因拟南芥和烟草胁迫处理实验表明,proVvAGL12驱动的GUS活性受赤霉素、脱落酸、聚乙二醇和低温调控。 展开更多
关键词 葡萄 VvAGL12基因 启动子克隆 gus活性 非生物胁迫
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花生干旱诱导型启动子Ah MYB44-11-Pro的克隆与功能分析
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作者 刘永惠 沈一 +4 位作者 沈悦 梁满 沙琴 张旭尧 陈志德 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期2157-2166,共10页
干旱是严重威胁我国花生产量与品质的主要环境因素之一。为阐明干旱胁迫响应基因AhMYB44-11的调控机制,揭示其启动子的功能,本研究从花生基因组中扩增获得该基因的启动子序列AhMYB44-11-Pro,分别构建全长及5'端部分缺失启动子的GUS... 干旱是严重威胁我国花生产量与品质的主要环境因素之一。为阐明干旱胁迫响应基因AhMYB44-11的调控机制,揭示其启动子的功能,本研究从花生基因组中扩增获得该基因的启动子序列AhMYB44-11-Pro,分别构建全长及5'端部分缺失启动子的GUS融合表达载体,利用农杆菌介导的遗传转化体系,分析启动子的活性和表达模式。结果显示,相比于同源基因AhMYB44-01的启动子,AhMYB44-11-Pro具有更多的MBS、Myb-bindingsit等响应干旱胁迫的顺式作用元件;同时其拟南芥转基因阳性植株经脱水处理后GUS染色加深,GUS酶活性显著增加;表明启动子的活性受干旱胁迫诱导表达,证实AhMYB44-11-Pro是一个干旱诱导型启动子。此外, AhMYB44-11-Pro含有种子胚乳特异表达元件和赤霉素响应元件, GUS染色显示在角果发育过程中其活性呈上调趋势,由此推测AhMYB44-11可能在种子发育尤其是干物质积累过程中发挥重要作用。本研究结果将为全面解析AhMYB44的生物学功能奠定基础,也为作物抗旱遗传改良提供参考依据。 展开更多
关键词 花生 AhMYB44 启动子 干旱胁迫 gus活性
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香蕉束顶病毒中国漳州分离物DNA4非编码区启动子活性的研究 被引量：1
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作者 魏红艳 孙德俊 +2 位作者 李云 孙卉 蔡文启 《北京林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期34-37,共4页
应用PCR方法亚克隆了香蕉束顶病毒中国漳州分离物 (BananabunchytopvirusChineseZhangzhouisolate ,BBTV ZZ)DNA 4非编码区 (Po1)、主要共同区缺失片段 (Po2 )和主要共同区及茎环共同区都缺失片段 (Po3) ,分别插入到植物表达载体pCAMBI... 应用PCR方法亚克隆了香蕉束顶病毒中国漳州分离物 (BananabunchytopvirusChineseZhangzhouisolate ,BBTV ZZ)DNA 4非编码区 (Po1)、主要共同区缺失片段 (Po2 )和主要共同区及茎环共同区都缺失片段 (Po3) ,分别插入到植物表达载体pCAMBIA 130 4的gfp::gus基因上游 ,替代椰菜花叶病毒启动子 (CaMV 35S) ,得到重组质粒pTA2、pC2 6和pC45 .通过Agroinfiltration法 ,将含pTA2、pC2 6、pC45和pCAMBIA 130 4的根癌土壤杆菌 (Agrobacteriumtu mefaciens)注射进烟草 (NicotianatabacumL .cv .XanthiNC)叶片 ,进行 β 葡糖苷酸酶 (GUS)和绿荧光蛋白 (GFP)含量的瞬间表达分析 .含有pTA2、pC2 6、pC45、pCAMBIA 130 4和未注射的烟草叶片其GUS活性分别为 1 0 0 7、0 85 2、0 939、2 0 6 9和 0 0 2 1pmol·MU (μg·min) ;间接酶连免疫试验 (ELISA)结果表明每毫克总蛋白中的GFP于 490处的吸收值 (A490 )分别为 89 5 77、6 5 184、72 0 96、10 0 4 40和 3 2 87.以上表明Po1、Po2和Po3具有较强的启动子活性 .此外 ,转基因烟草的GUS组织化学定位检测试验进一步表明Po1、Po2和Po3具有维管组织特异性 . 展开更多
关键词 香蕉束顶病毒中国漳州分离物 DNA 4 启动子活性 gus GFP
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