猪链球菌的分离鉴定及毒力分析 被引量：9

1

作者 王彩先 刘华栋 +5 位作者 詹丽娥 陆冰洋 唐娟 詹海杰 景娅丽 李婷婷 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期936-941,共6页

通过对山西某猪场发病猪组织器官分离的病原菌鉴定以确定病原微生物以及其毒力强弱。主要从发病猪的关节液、肝脏、心脏、脾脏等器官内采集病原菌经过培养、镜检、生化试验初步鉴定后,用PCR方法通过扩增gdh基因和16SrDNA基因,16SrDNA测... 通过对山西某猪场发病猪组织器官分离的病原菌鉴定以确定病原微生物以及其毒力强弱。主要从发病猪的关节液、肝脏、心脏、脾脏等器官内采集病原菌经过培养、镜检、生化试验初步鉴定后,用PCR方法通过扩增gdh基因和16SrDNA基因,16SrDNA测序后与国内外一些地区分离株的同源性比对,MLST(aroA、cpn60、dpr、gki、mutS、recA、thrA)分型研究、血清学分型以及mrp,ef,sly 3对毒力基因的扩增分析,结果鉴定为猪链球菌2型(SXZ-1株),16SrDNA序列与国内外部分地区菌株序列的同源性达到99%~100%。MLST型为ST7型,具有强致病性(mrp+ef+sly+),表明山西存在ST7型强毒2型猪链球菌。 展开更多

关键词 猪链球菌 鉴定 gdh MLST 毒力基因

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gdh基因在猪链球菌中的分布及重组GDH的抗原性研究 被引量：3

2

作者 潘秀珍 赵华梅 +4 位作者 葛俊超 王长军 李先富 郑峰 唐家琪 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期522-525,共4页

目的了解谷氨酸脱氢酶基因(gdh)在不同血清型猪链球菌(S.suis)中的分布情况,分析重组谷氨酸脱氢酶(GDH)的抗原性,为其应用于S.suis感染诊断和疫苗研究提供实验数据。方法应用PCR方法检测不同血清型S.suis中的gdh;利用45 kD重组GDH制备... 目的了解谷氨酸脱氢酶基因(gdh)在不同血清型猪链球菌(S.suis)中的分布情况,分析重组谷氨酸脱氢酶(GDH)的抗原性,为其应用于S.suis感染诊断和疫苗研究提供实验数据。方法应用PCR方法检测不同血清型S.suis中的gdh;利用45 kD重组GDH制备多克隆抗体,Western blot方法分析S.suis各血清型菌株与多克隆抗体的反应以及实验感染S.suis2型的猪血清与重组GDH的反应情况。结果在S.suis35个血清型标准株中,除了22、26、27、29、32及34型以外,其余包括1、2、1/2、7、9和14型在内的29个血清型、61株国内外S.suis2型分离株全部扩增出目的条带。用重组GDH免疫小鼠,在小鼠血清中均检测到抗GDH的抗体;Western blot结果显示,全部被检菌株与抗GDH血清反应均有单一特异性反应条带,6份实验感染猪血清均能与重组GDH产生反应条带。结论重组GDH具有免疫原性和反应原性,该蛋白有可能作为建立诊断试验的候选抗原,为进一步开展相关的血清学诊断方法和疫苗研究奠定基础。 展开更多

关键词 猪链球菌 谷氨酸脱氢酶 gdh基因 抗原

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斑节对虾谷氨酸脱氢酶基因克隆及氨氮胁迫对其时空表达的影响 被引量：7

3

作者 周发林 陈劲松 +4 位作者 黄建华 杨其彬 邱丽华 马振华 江世贵 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期1236-1246,共11页

采用cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA ends,RACE)获得了斑节对虾(Penaeus monodon)谷氨酸脱氢酶基因(PmGDH)的cDNA序列。该序列全长2386 bp,开放阅读框(ORF)为1677 bp,3'非编码区(UTR)为688 bp,包括含有27个碱基... 采用cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA ends,RACE)获得了斑节对虾(Penaeus monodon)谷氨酸脱氢酶基因(PmGDH)的cDNA序列。该序列全长2386 bp,开放阅读框(ORF)为1677 bp,3'非编码区(UTR)为688 bp,包括含有27个碱基的poly(A)尾,5'非编码区(UTR)为21 bp。ORF可编码558个氨基酸,预测分子量为61.837 k D,理论等电点为6.57。序列含有ELFV dehydrog N与NAD bind 1 Glu DH两个保守结构域,37个磷酸化位点,3个糖基化位点。通过同源性、相似性以及系统进化树分析,斑节对虾的GDH基因与凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)GDH基因的同源性和相似性最高,并与其聚为一支。采用荧光定量的方法研究了PmGDH基因在斑节对虾不同组织、氨氮胁迫过程中差异表达情况。结果表明,PmGDH的m RNA在各组织中都有表达,其中,在肌肉组织中表达量最高,其次为眼柄神经,在血淋巴与肠组织中表达量最低。96 h氨氮胁迫后,荧光定量PCR分析结果表明PmGDH在肝胰腺和鳃组织中的表达与对照组相比都具有显著差异(P<0.05),都具有不同程度的表达上调。表明PmGDH在氨氮代谢方面具有重要的作用,参与了斑节对虾机体的急性氨氮胁迫应答反应。 展开更多

关键词 斑节对虾 谷氨酸脱氢酶 氨氮胁迫 基因克隆 组织表达

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基于gdh基因分析云南牛源十二指肠贾第虫感染情况

4

作者 汪文雅 谢昕言 +6 位作者 闫大龙 魏鹏浩 杨建岭 毕润 李清 马君 邹丰才 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期2644-2652,共9页

【目的】了解云南省牛感染十二指肠贾第虫(Giardia duodenalis)的情况和基因型分布,评估贾第虫病的传播风险。【方法】采用巢式PCR方法基于十二指肠贾第虫的谷氨酸脱氢酶(gdh)基因对云南省3个地区采集的258份牛新鲜粪便样品进行检测,计... 【目的】了解云南省牛感染十二指肠贾第虫(Giardia duodenalis)的情况和基因型分布,评估贾第虫病的传播风险。【方法】采用巢式PCR方法基于十二指肠贾第虫的谷氨酸脱氢酶(gdh)基因对云南省3个地区采集的258份牛新鲜粪便样品进行检测,计算不同地区、不同年龄、不同品种牛的十二指肠贾第虫阳性率;对阳性样品进行测序,将测序结果提交至NCBI比对进行基因型鉴定;使用MrBayes 3.1程序进行贝叶斯推理法分析,采用普通时间可逆(general time reversible, GTR)替换模型,构建系统进化树。【结果】258份牛粪便样品中有23份呈十二指肠贾第虫阳性,总阳性率为8.91%(23/258)。其中,不同地区牛十二指肠贾第虫阳性率差异极显著(P<0.01),大理鹤庆县阳性率最高,为20.75%(11/53,95%CI=9.47~32.04);西双版纳勐海县和昭通永善县阳性率分别为8.82%(6/68,95%CI=1.91~15.74)、4.38%(6/137,95%CI=0.91~7.85);不同年龄牛十二指肠贾第虫阳性率差异极显著(P<0.01),犊牛(<5月龄)阳性率(26.19%,11/42,95%CI=12.32~40.06)极显著高于成年牛(>24月龄)(5.56%,12/216,95%CI=2.48~8.64);不同品种牛十二指肠贾第虫阳性率差异极显著(P<0.01),荷斯坦奶牛十二指肠贾第虫阳性率最高,为20.75%(11/53,95%CI=12.00~39.17),黄牛、西杂牛(西门塔尔牛和本地黄牛的杂交品种)、西门塔尔牛阳性率较低,分别为17.86%(5/28,95%CI=2.73~32.98)、4.38%(6/137,95%CI=0.91~7.85)和2.50%(1/40,95%CI=0~7.56)。基于gdh基因序列分析23份十二指肠贾第虫阳性样品集聚体类型均是E型,但为7种不同基因亚型,其中6种亚型(E1、E12、E20、E30、E36和E38)与已知参考序列相似性为99.8%~100%,另一种亚型与未命名亚型参考序列相似性为99.8%。【结论】云南省牛存在十二指肠贾第虫感染,不同地区、不同年龄、不同品种牛的十二指肠贾第虫阳性率存在一定差异;集聚体主要为E型,且此类型在云南地区遗传多样性较高。 展开更多

关键词 牛 十二指肠贾第虫 gdh基因 基因型

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人源与猪源猪链球菌2型gdh基因序列比较 被引量：3

5

作者 胡玉山 刘俊华 +3 位作者 庞杏林 林云万 邓志爱 陈守义 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期204-205,共2页

目的研究人源与猪源猪链球菌2型gdh基因序列同参考序列的差异,为猪链球菌2型的诊断方法研究提供基础依据。方法选取猪链球菌2型患者分离株和病猪分离株各1株,根据文献和基因库中的gdh基因序列设计PCR引物,进行PCR扩增;将扩增产物纯化回... 目的研究人源与猪源猪链球菌2型gdh基因序列同参考序列的差异,为猪链球菌2型的诊断方法研究提供基础依据。方法选取猪链球菌2型患者分离株和病猪分离株各1株,根据文献和基因库中的gdh基因序列设计PCR引物,进行PCR扩增;将扩增产物纯化回收,克隆至pMD 19-T载体后进行测序,获得gdh基因序列。结果2株猪链球菌2型菌株的PCR扩增产物经电泳后,均得到1 300 bp左右的目的条带,大小与预测一致;序列分析结果显示,人源猪链球菌2型gdh基因序列GC含量为45.73%,猪源猪链球菌2型gdh基因序列GC含量为45.88%,猪链球菌2型gdh参考序列GC含量为45.81%;人源与猪源猪链球菌2型gdh序列同参考序列相比,一致性均为99.9%;人源与猪源猪链球菌2型gdh序列仅相差2个碱基。结论人源与猪源的猪链球菌2型gdh基因序列高度保守。 展开更多

关键词 猪链球菌2型 基因克隆 gdh基因

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猪链球菌谷氨酸脱氢酶基因的克隆和序列分析 被引量：1

6

作者 谭世君 汤明 +4 位作者 聂奎 王楷宬 杨泽林 黄保续 范伟兴 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2007年第4期29-31,共3页

对猪链球菌2型、7型、9型的标准菌株和7株猪链球菌2型分离菌的谷氨酸脱氢酶(GDH)基因进行PCR扩增,经回收纯化后克隆到PMD18-T载体,筛选阳性克隆菌后测序并对其进行序列分析。结果,PCR扩增出1300bp左右的片段,包括GDH基因的整个开放阅读... 对猪链球菌2型、7型、9型的标准菌株和7株猪链球菌2型分离菌的谷氨酸脱氢酶(GDH)基因进行PCR扩增,经回收纯化后克隆到PMD18-T载体,筛选阳性克隆菌后测序并对其进行序列分析。结果,PCR扩增出1300bp左右的片段,包括GDH基因的整个开放阅读框,而测序结果表明,其序列与GenBank中的猪链球菌GDH基因序列一致,进一步序列分析表明,GDH的核苷酸序列在相同血清型之间同源性高达99%以上,而在不同血清型之间的同源型也达到了96%以上,而其氨基酸序列同源性则都在99%以上,且都具有GDH1型家族的功能区域。说明猪链球菌GDH基因及其蛋白具有高度的保守性,为进一步研究与应用提供了重要依据。 展开更多

关键词 猪链球菌 gdh基因 序列分析

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广东省猪十二指肠贾第虫感染现状和分子特征分析 被引量：3

7

作者 钟梦龙 张浩吉 +6 位作者 陈祥杰 李复坤 邱茜茜 李易 黄福强 王妮娜 余新刚 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第4期1592-1598,共7页

【目的】了解广东省不同地区猪源十二指肠贾第虫(Giardia duodenalis,简称贾第虫)的流行现状和分子特征,并评估其人兽共患风险。【方法】从广东省10个地区采集新鲜猪粪样品,采用显微镜镜检,并应用巢式PCR对贾第虫谷氨酸脱氢酶(glutamate... 【目的】了解广东省不同地区猪源十二指肠贾第虫(Giardia duodenalis,简称贾第虫)的流行现状和分子特征,并评估其人兽共患风险。【方法】从广东省10个地区采集新鲜猪粪样品,采用显微镜镜检,并应用巢式PCR对贾第虫谷氨酸脱氢酶(glutamate dehydrogenase,gdh)基因进行扩增,根据扩增结果计算不同地区和生长阶段猪贾第虫的阳性率。对所有的PCR阳性产物进行测序,将获得的贾第虫gdh基因序列进行BLAST比对,确定贾第虫的基因型;运用Mega 7.0软件的最大似然法构建进化树。【结果】贾第虫包囊呈椭圆形,囊壁较厚,大小为(10~14)μm×(7~10)μm,具有明显纵向轴柱,细胞核分布于轴柱两侧。521份受检样品中共检测出94份PCR阳性样品,阳性率为18.04%(94/521),其中茂名和清远的阳性率较高,分别达40.00%(10/25)和35.06%(27/77);肇庆和韶关的阳性率较低,分别为3.90%(3/77)和8.57%(3/35);佛山、江门、阳江、河源、广州和惠州的阳性率分别为11.11%(2/18)、15.31%(15/98)、11.43%(4/35)、13.33%(4/30)、9.38%(3/32)和24.47%(23/94)。不同饲养阶段的猪群的阳性率调查发现,母猪的贾第虫阳性率(24.55%)显著高于断奶仔猪(13.30%)(P<0.05),与育肥猪的贾第虫阳性率(19.23%)差异不显著(P>0.05)。基于gdh基因序列的基因分型和系统进化分析共发现5种贾第虫亚集聚体,即集聚体AⅠ和集聚体E的4种不同亚型,包括集聚体E1、E2、E10和E13,其中61.70%(58/94)测序阳性样品属于集聚体AⅠ,38.30%(36/94)属于集聚体E的不同亚型。【结论】广东猪源贾第虫的感染较普遍,不同地区和不同生长阶段的猪感染率存在一定差异。其中,人兽共患性集聚体AⅠ为优势亚集聚体,表明广东省猪源贾第虫存在人兽跨物种传播的风险,应重视该病可能引起的公共卫生问题。 展开更多

关键词 猪 十二指肠贾第虫 gdh基因 感染率 人兽共患风险

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3株人源猪链球菌2型湖南株cps2J、gdh、ef基因进化分析 被引量：1

8

作者 欧新华 张如胜 +5 位作者 苏良 杨柳青 肖姗 姚栋 宋克云 孙边成 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期369-374,共6页

目的对3株人源猪链球菌2型(S.suis 2)湖南株(HNCS201001、HNCS201101、HNCS201102)cps2J、gdh、ef基因进行序列测定和进化分析,了解其变异和进化状况,为人感染S.suis疫情的防控提供数据。方法设计S.suis 2 cps2J、gdh、ef基因PCR引物,对... 目的对3株人源猪链球菌2型(S.suis 2)湖南株(HNCS201001、HNCS201101、HNCS201102)cps2J、gdh、ef基因进行序列测定和进化分析,了解其变异和进化状况,为人感染S.suis疫情的防控提供数据。方法设计S.suis 2 cps2J、gdh、ef基因PCR引物,对HNCS201001、HNCS201101、HNCS201102株进行PCR扩增和序列测定,测序结果利用Lasergene和Mega5软件进行分析。结果 cps2J、gdh、ef基因包含的完整开放阅读框(ORF)分别为999bp、1 347bp、2 532bp,分别编码333、448、843个氨基酸。在线BLAST同源性分析表明,HNCS201001、HNCS201101、HNCS201102株属于S.suis 2,3菌株cps2J、gdh、ef基因组序列之间的核苷酸同源性均为100%;进化树显示,HNCS201001、HNCS201101、HNCS201102株与国内外猪源和人源S.suis 2菌株属于同一分支,同源性比较显示3株S.suis 2湖南分离株cps2J、gdh、ef基因与其他国内外S.suis株核苷酸序列同源性分别为99.8%～100%、96.4%～100%和99.7%～100%,氨基酸同源性分别为98.5%～100%、98.7%～100%和99.5%～100%。结论 3株人源S.suis 2湖南株cps2J、gdh、ef基因序列与国内外S.suis 2菌株相应基因序列同源性高,变异程度小。 展开更多

关键词 猪链球菌2型 cps2J基因 gdh基因 ef基因 进化分析

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猫源贾第虫EF1α和GDH基因的扩增与分析 被引量：1

9

作者 郑国超 刘远佳 +6 位作者 李雅文 胡伟 路鹏云 林丽琴 谭立娉 罗琴 李国清 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1023-1025,共3页

为研究猫源蓝氏贾第虫EF1α和GDH基因的分子特性,本研究采用两组引物EF1-F、EF1-R和GDHeF、GDHiF、GDHiR通过普通PCR及套式PCR方法对两基因片段进行特异性扩增,用MegAlign软件对扩增片段进行同源性比对及进化树分析。结果显示,获得了200... 为研究猫源蓝氏贾第虫EF1α和GDH基因的分子特性,本研究采用两组引物EF1-F、EF1-R和GDHeF、GDHiF、GDHiR通过普通PCR及套式PCR方法对两基因片段进行特异性扩增,用MegAlign软件对扩增片段进行同源性比对及进化树分析。结果显示,获得了200 bp及432 bp的EF1α和GDH序列,其基因登录号分别为KC510661和KC510662,EF1α基因位点分析表明该蓝氏贾第虫分离株为基因型F,GDH基因位点分析表明其可能是一个新亚型(FIII)。该研究首次对猫源蓝氏贾第虫EF1α和GHD基因双位点进行分子特性研究,为贾第虫分子分类学及分子遗传学研究奠定了基础。 展开更多

关键词 贾第虫 猫 EF1α基因 gdh基因

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达氏鳇谷氨酸脱氢酶基因的克隆及双低菜粕添加对其表达的影响 被引量：2

10

作者 岳华梅 吴金平 +2 位作者 陈细华 阮瑞 李创举 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2019年第4期35-41,共7页

谷氨酸脱氢酶(glutamate dehydrogenase,GDH)可通过逆催化谷氨酸脱氨参与氨基酸代谢,也可生产合成氨,参与氮代谢。实验克隆得到达氏鳇(Huso dauricus)谷氨酸脱氢酶基因(gdh)的开放阅读框序列。该序列全长为1 635 bp,编码544个氨基酸。... 谷氨酸脱氢酶(glutamate dehydrogenase,GDH)可通过逆催化谷氨酸脱氨参与氨基酸代谢,也可生产合成氨,参与氮代谢。实验克隆得到达氏鳇(Huso dauricus)谷氨酸脱氢酶基因(gdh)的开放阅读框序列。该序列全长为1 635 bp,编码544个氨基酸。氨基酸序列多重比对结果显示达氏鳇GDH与其它脊椎动物的序列一致性较高。进一步的系统进化树分析发现,达氏鳇GDH与两栖类、爬行类及哺乳类聚为一支。组织表达分析结果表明,达氏鳇gdh的mRNA在各组织中都有分布,并且在肠中转录水平最高。随后,采用荧光定量PCR分析了饲料中添加双低菜粕对达氏鳇蛋白质代谢相关基因(gdh、氨肽酶N apN、小肽转运载体pepT1)及应激反应相关的热休克蛋白(hsp 90)基因表达的影响。在肝脏中,不同饲料投喂组gdh和hsp90的转录水平没有显著差异。在肠中,菜粕组gdh及apN基因的转录水平显著高于基础饲料组;菜粕组pepT1基因的转录水平也高于基础饲料组,但是没有显著性差异。以上结果表明,植物蛋白原料菜粕添加可引起达氏鳇肠道中蛋白质代谢水平上升,而不引起鱼体的应激反应。 展开更多

关键词 达氏鳇(Huso dauricus) 鱼粉 菜粕 谷氨酸脱氢酶 基因表达

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海洛因对大鼠谷氨酸脱氢酶基因表达的影响 被引量：1

11

作者 付海英 张纪周 +4 位作者 杨宇丹 孙聪 遇红梅 李奇 洪敏 《中国药物依赖性杂志》 CAS CSCD 2006年第6期440-444,共5页

目的:研究海洛因对大鼠谷氨酸脱氢酶(GDH)基因表达的影响。方法:40只成年♂Wistar大鼠随机分为4组:对照组腹腔注射(ip)生理盐水9d;给药3d组ip海洛因3d;给药9d组ip海洛因9d;停药组ip海洛因9d后停药8d。采用生化自动分析系统检测血浆及组... 目的:研究海洛因对大鼠谷氨酸脱氢酶(GDH)基因表达的影响。方法:40只成年♂Wistar大鼠随机分为4组:对照组腹腔注射(ip)生理盐水9d;给药3d组ip海洛因3d;给药9d组ip海洛因9d;停药组ip海洛因9d后停药8d。采用生化自动分析系统检测血浆及组织中GDH活性,逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)检测组织中GDHmRNA的含量。结果:血浆中GDH活性在海洛因给药期间逐渐增高,停药8d后仍无明显降低;大脑组织GDH活性在海洛因给药3d、海洛因给药9d及停药8d后均显著低于对照组(P<0·01);肝脏GDH活性在海洛因给药过程中降低(P<0·01),停药8d后恢复到对照组水平;小肠GDH活性在海洛因给药9d后显著高于对照组(P<0·05),停药8d后小肠GDH活性继续升高并明显高于对照组(P<0·01)和海洛因给药9d组(P<0·05)。大脑、肝脏和小肠GDHmRNA含量分别与其GDH活性变化趋势一致。结论:海洛因对大鼠不同组织GDH基因表达影响不同。 展开更多

关键词 谷氨酸脱氢酶 海洛因 基因表达 gdh活性

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动物组织中GLUD1基因表达与GDH蛋白结构分析

12

作者 徐鸿洋 徐晶 +2 位作者 房君 德宝军 周欢敏 《畜牧与饲料科学》 2021年第4期7-12,24,共7页

[目的]研究动物不同组织中GLUD1基因的表达情况,比较不同物种中GDH蛋白的结构差异,明晰GLUD1基因的表达模式与GDH蛋白的功能。[方法]分别采集大鼠、绵羊、梅花鹿的肝脏、肾脏、皮肤、脂肪和肌肉5种新鲜组织样品。以β-actin为内参基因,... [目的]研究动物不同组织中GLUD1基因的表达情况,比较不同物种中GDH蛋白的结构差异,明晰GLUD1基因的表达模式与GDH蛋白的功能。[方法]分别采集大鼠、绵羊、梅花鹿的肝脏、肾脏、皮肤、脂肪和肌肉5种新鲜组织样品。以β-actin为内参基因,采用荧光定量PCR法(qRT-PCR)分析3种动物不同组织中GLUD1基因的表达情况;利用无重复双因素分析方法表征GLUD1基因在不同组织中的表达量差异。比较人、小鼠、大鼠、山羊、绵羊、牛和猪7个物种GDH蛋白氨基酸序列,模拟这7个物种的GDH蛋白三维空间结构。[结果]GLUD1基因在大鼠、绵羊和梅花鹿的5个组织中均有表达,在肝脏中的表达量均高于其他组织;该基因在大鼠和梅花鹿肝脏组织中的表达量极显著(P<0.01)高于绵羊肝脏组织中的表达量,在大鼠肾脏组织中的表达量极显著(P<0.01)高于梅花鹿肾脏组织中的表达量。人GDH蛋白的氨基酸序列与猪、牛、山羊和绵羊的序列相似度较高,而大鼠与小鼠GDH蛋白的氨基酸序列相似度达到99.10%。大鼠、人、猪的GDH蛋白氨基酸序列中分别存在2个(第8位丙氨酸→缬氨酸、第40位丙氨酸→缬氨酸)、1个(第23位丙氨酸→丝氨酸)、2个(第33位丙氨酸→苏氨酸、第39位丙氨酸→苏氨酸)物种特异性突变位点。小鼠、大鼠、人的GDH蛋白预测为三聚体结构,山羊、绵羊、牛和猪的GDH蛋白预测为同源六聚体结构。[结论]GLUD1基因在大鼠、绵羊、梅花鹿不同组织中的表达量存在差异,在肝脏中都有较高水平的表达。不同物种GDH蛋白的氨基酸序列相似度较高,但依旧存在一定的序列差异性,并且存在数个对应物种特异性的氨基酸突变位点。 展开更多

关键词 GLUD1基因 QRT-PCR 差异表达 肝脏 gdh蛋白

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艰难梭状芽孢杆菌谷氨酸脱氢酶的原核表达、纯化及其酶活性 被引量：1

13

作者 杜茜 吴志鹃 +3 位作者 蔡雪飞 袁作为 张君 郑建 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2013年第7期927-930,934,共5页

目的原核表达艰难梭状芽孢杆菌(Clostridium difficile,CD)谷氨酸脱氢酶(Glutamate dehydrogenase,GDH),纯化重组蛋白,并检测其酶活性。方法采用PCR法从标准株ATCC BAA-1805中扩增GDH基因,克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组表达... 目的原核表达艰难梭状芽孢杆菌(Clostridium difficile,CD)谷氨酸脱氢酶(Glutamate dehydrogenase,GDH),纯化重组蛋白,并检测其酶活性。方法采用PCR法从标准株ATCC BAA-1805中扩增GDH基因,克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pET-28-GDH,转化感受态大肠杆菌Rosetta(DE3),IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经SDS-PAGE和Western blot分析,并通过Ni-NAT层析柱分离纯化后,根据脱氢酶酶活测定方法,测定纯化蛋白的酶活性。结果重组表达质粒pET-28-GDH经双酶切及测序,证实构建正确,重组蛋白的相对分子质量约46 000,可与抗His单抗特异性结合,主要以可溶性形式表达。纯化的目的蛋白纯度可达90%,浓度为1.7 mg/ml。纯化蛋白GDH以NADPH和NADP为辅酶,酶活性分别为42.6和63.3 U/L。结论已成功在大肠杆菌中表达了重组CD GDH,纯化的目的蛋白纯度高,具有GDH酶活性,为制备GDH单克隆抗体奠定了基础。 展开更多

关键词 艰难梭状芽孢杆菌 谷氨酸脱氢酶 基因表达 纯化 酶活性

原文传递

盐度对天津厚蟹Na^(+)/K^(+)-ATPase、GDH酶活性及GDH基因表达的影响

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作者 左迪 马长安 +1 位作者 吴东蕾 张云飞 《水产学杂志》 CAS 北大核心 2022年第5期34-42,共9页

将体质量(9.91±2.01)g的经暂养的天津厚蟹(Helice tientsinensis Rathbun)暴露于6个盐度梯度:低盐组(0、2、4)、高盐组(16、32)和对照组(8),每组设三个平行,分别于0 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h和96 h时,冰浴麻醉30 min后取肌... 将体质量(9.91±2.01)g的经暂养的天津厚蟹(Helice tientsinensis Rathbun)暴露于6个盐度梯度:低盐组(0、2、4)、高盐组(16、32)和对照组(8),每组设三个平行,分别于0 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h和96 h时,冰浴麻醉30 min后取肌肉和鳃组织,测定鳃和肌肉组织中Na^(+)/K^(+)-ATPase和谷氨酸脱氢酶(GDH)活性的变化,并从肌肉中克隆获得了GDH基因全长(GenBank登录号:KJ649743),以研究湿地围垦导致的盐度变化对天津厚蟹渗透压相关酶及基因表达的影响。结果表明,低盐胁迫48 h内,天津厚蟹Na^(+)/K^(+)-ATPase和GDH活性随水体盐度的降低呈上升趋势,96 h后,0和2盐度组酶活性随盐度降低而显著下降(P<0.05);高盐胁迫组,24 h内天津厚蟹组织中两酶活性升高,随盐度胁迫时间延长,16盐度组天津厚蟹鳃和肌肉组织中Na^(+)/K^(+)-ATPase活性低于对照组,GDH活性高于对照组,差异显著(P<0.05);32盐度组Na^(+)/K^(+)-ATPase和GDH活性低于对照组,显著高于0、2盐度组(P<0.05)。这表明低盐胁迫对两酶活性的影响更强。RACE技术获得天津厚蟹GDH基因cDNA全长为2078 bp,包含编码546个氨基酸的1641 bp的开放阅读框(ORF),预测分子量为60.54 kDa;Realtime-PCR实验结果表明:GDH基因在肌肉组织中表达量最高,且盐度胁迫后表达量变化明显,其中低盐胁迫组GDH基因表达量极显著低于对照组,表明GDH基因可能参与天津厚蟹的渗透压调节。 展开更多

关键词 天津厚蟹 盐度 渗透压调节 Na^(+)/K^(+)-ATPase 谷氨酸脱氢酶(gdh)基因

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