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肾癌G250抗原基因真核表达载体的构建和序列测定 被引量：7
1
作者 李晓飞 曹开源 +4 位作者 徐霖 袁广卿 张亚东 肖娜 刘晓华 《中华泌尿外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期5-8,共4页
目的构建肾癌G250抗原基因编码区序列的真核表达载体并进行序列测定。方法从肾癌组织中提取总RNA,采用RT-PCR技术扩增肾癌G250抗原的基因编码区序列,将PCR片段定向克隆至真核表达载体pcDNA3.0,并进行序列测定。结果肾癌组织RT-PCR扩增后... 目的构建肾癌G250抗原基因编码区序列的真核表达载体并进行序列测定。方法从肾癌组织中提取总RNA,采用RT-PCR技术扩增肾癌G250抗原的基因编码区序列,将PCR片段定向克隆至真核表达载体pcDNA3.0,并进行序列测定。结果肾癌组织RT-PCR扩增后,均产生特异性条带,位置在1000 bp和1600 bp之间,与预定相符。pcDNA3.0-G250分别用H indⅢ、XhoⅠ双酶切后产生2条带,均与预定位置相符;抗原基因编码区序列与Genbank登录号BC014950文献报道的序列同源性为100%,目的基因与载体正确连接。结论成功克隆了肾癌G250抗原的基因编码区序列,并构建了其真核表达载体pcDNA3.0-G250,为核素标记的G250单克隆抗体在诊断和治疗的应用及G250基因修饰的树突状细胞疫苗的肾癌生物治疗提供了依据。 展开更多
关键词 肾肿瘤 癌 g250/mn/caix抗原 逆转录-聚合酶链式反应 克隆 序列分析
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肾癌G250抗原基因在sp2/0细胞中的表达及其意义 被引量：1
2
作者 张亚东 吴荣佩 +3 位作者 刘雷 李乐 曹开源 李晓飞 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期16-19,共4页
【目的】将G250抗原cDNA片段转染入sp2/0细胞中并获得稳定表达,为G250基因疫苗研究提供实验工具。【方法】用脂质体转染法将鉴定好的重组质粒转染入sp2/0细胞中,经G418筛选得到稳定表达,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、间接免疫荧光... 【目的】将G250抗原cDNA片段转染入sp2/0细胞中并获得稳定表达,为G250基因疫苗研究提供实验工具。【方法】用脂质体转染法将鉴定好的重组质粒转染入sp2/0细胞中,经G418筛选得到稳定表达,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、间接免疫荧光、Western blot检测G250基因在sp2/0细胞中的表达。【结果】转染2周后,筛选出阳性sp2/0细胞克隆,通过RT-PCR证实有G250mRNA转录,间接免疫荧光可以见到阳性细胞,Western blot证实有G250抗原表达。【结论】建立了稳定表达G250抗原的肿瘤细胞模型,为研究基于肾癌G250基因的肿瘤基因疫苗治疗奠定了基础。 展开更多
关键词 肾细胞癌(RCC) g250/mn/caix(g250)抗原 基因表达
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肾癌G250/MN/CAIX抗原基因在酿酒酵母中的诱导表达及意义 被引量：2
3
作者 刘雷 李晓飞 +3 位作者 曹开源 吴荣佩 李乐军 张亚东 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期30-34,共5页
【目的】观察G250抗原基因编码区cDNA全长基因片段在酿酒酵母中诱导表达情况,并初步探讨其作为肿瘤治疗中的意义。【方法】应用基因重组技术将人G250cDNA序列克隆入酿酒酵母穿梭诱导表达载体pYES2/NTC,构建重组酵母真核表达质粒pYES2/NT... 【目的】观察G250抗原基因编码区cDNA全长基因片段在酿酒酵母中诱导表达情况,并初步探讨其作为肿瘤治疗中的意义。【方法】应用基因重组技术将人G250cDNA序列克隆入酿酒酵母穿梭诱导表达载体pYES2/NTC,构建重组酵母真核表达质粒pYES2/NTC-G250并转化酿酒酵母菌株INVSc1,筛选阳性克隆转化子,经半乳糖诱导表达后进行菌体全蛋白的Westernblot检测。【结果】成功构建pYES2/NTC-G250重组酿酒酵母诱导表达质粒,证实其能够在酿酒酵母中诱导表达,表达量随诱导时间而变化,8～12h达高峰。【结论】人G250基因片段能够在酿酒酵母中表达,为进一步探讨基因重组酿酒酵母G250疫苗抗肿瘤效应及其安全性打下基础。 展开更多
关键词 肾细胞癌(RCC) g250/mn/caix(g250)抗原 酿酒酵母 基因表达
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