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庚型肝炎病毒基因组全长cDNA的拼接及克隆 被引量:13
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作者 朱分禄 戚中田 +2 位作者 任浩 宋燕斌 邵力 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第4期301-306,共6页
目的:构建GB病毒C/庚型肝炎病毒(GBV-C/HGV)基因组全长cDNA克隆。方法:以覆盖GBV-C/HGV分离株HGV-Iw全长基因组且互相重叠的5个基因片段Iw5,Iwq2,Iwh6,Iw3和Iw3为起始材料... 目的:构建GB病毒C/庚型肝炎病毒(GBV-C/HGV)基因组全长cDNA克隆。方法:以覆盖GBV-C/HGV分离株HGV-Iw全长基因组且互相重叠的5个基因片段Iw5,Iwq2,Iwh6,Iw3和Iw3为起始材料,采用重叠延伸PCR拼接和连接酶连接的方法,构建GBV-C/HGV基因组全长cDNA克隆。结果:GBV-C/HGV基因组全长cDNA克隆的酶切图谱与预期一致;核苷酸序列分析显示,克隆的GBV-C/HGV基因组全长cDNA的核苷酸及推测的氨基酸序列与原HGV-Iw序列一致。结论:GBV-C/HGV基因组全长cDNA的克隆已经构建成功。该克隆的构建,为深入研究GBV-C/HGV的致病性及致病机制、复制及转录和翻译机制。 展开更多
关键词 全长CDNA 拼接 克隆 庚型肝炎病毒 基因组
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山药PAL基因全长cDNA序列的克隆、表达与分析 被引量:12
2
作者 周生茂 王玲平 +5 位作者 向珣 韦本辉 李杨瑞 方锋学 韦威旭 曹家树 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期781-788,859,共9页
为了阐明苯丙氨酸解氨酶(PAL,EC4.3.1.5)基因在山药地下块茎酚类物质积累过程中的分子机理,本研究运用普通PCR、RACE和TAIL-PCR技术从大薯(Dioscorea alataL.)’Zixiao’地下块茎中克隆到同一个PAL基因的3个片段,即长度分别为1 145b... 为了阐明苯丙氨酸解氨酶(PAL,EC4.3.1.5)基因在山药地下块茎酚类物质积累过程中的分子机理,本研究运用普通PCR、RACE和TAIL-PCR技术从大薯(Dioscorea alataL.)’Zixiao’地下块茎中克隆到同一个PAL基因的3个片段,即长度分别为1 145bp、1 151bp和424bp的中间片段、3’端和5’端的cDNA序列;将3段cDNA序列拼接后获得大小为2 376bp的PAL基因全长cDNA序列,该序列含有一个1986bp的最大开放阅读框(ORF),一个28bp的5’端非翻译区,一个362bp含25 nt的Poly(A+)尾的3’端非翻译区,最大ORF可推测编码一个包括PAL酶活性中心的特征序列(GTITASGDLVPLSYIA)在内的661个氨基酸的多肽,分子量为71.974kDa,等电点6.310;大薯地下块茎的PAL基因分别在核苷酸与氨基酸水平上和GenBank中所选已知其他物种的同源性为73%~77%和76%~82%,说明PAL基因在系统进化上相对保守;RT-PCR分析表明该基因仅在地下块茎中表达,而且表达丰度在收获前逐渐降低。 展开更多
关键词 大薯 苯丙氨酸解氨酶 全长CDNA 基因克隆 序列分析 时空表达
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中国猪瘟C-株(脾淋毒)全长cDNA的分子克隆 被引量:8
3
作者 胡建和 刘湘涛 +4 位作者 张彦明 韩雪清 刘在新 张永国 谢庆阁 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期490-493,共4页
应用RT PCR、NestedPCR和Half nestedPCR技术从实验感染兔脾组织的总RNA中得到了覆盖猪瘟病毒(CSFV)C 株全基因组的7个cDNA重叠片段,分别克隆于pMD18 T或pGEM TEasy载体后进行测序。运用T A克隆和多片段一步连接法,将cDNA重叠片段F1、F2... 应用RT PCR、NestedPCR和Half nestedPCR技术从实验感染兔脾组织的总RNA中得到了覆盖猪瘟病毒(CSFV)C 株全基因组的7个cDNA重叠片段,分别克隆于pMD18 T或pGEM TEasy载体后进行测序。运用T A克隆和多片段一步连接法,将cDNA重叠片段F1、F2、F3、F4与F5、F6、F7分别克隆到pGEM 5Zf(+)载体后,得到两个半长cDNA亚克隆重组质粒pGEM 5Zf(+)/F1 4和pGEM 5Zf(+)/F5 7,再将两个半长cDNA重叠片段连接并克隆到pGEM 5Zf(+)载体,构建出了CSFVC 株全长cDNA重组质粒pGEM 5Zf(+)/F1 7。全长cDNA的成功构建为进一步研究CSFV分子生物学提供了良好的工具。 展开更多
关键词 中国 猪瘟 C-株 脾淋毒 CDNA 分子克隆 兔脾组织 RNA 克隆 多片段一步连接法
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HLA-Cw基因全长序列分子克隆及测序方法的建立 被引量:11
4
作者 邓志辉 徐筠娉 +5 位作者 高素青 李大成 喻琼 苏宇清 曾健强 杨宝成 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期258-262,共5页
目的建立可靠的HLA-Cw基因全长序列的分子克隆和测序技术。方法设计合成HLA-Cw基因全长序列PCR引物和探索PCR反应体系,采用长距离PCR技术,扩增HLA-Cw基因非翻译区(untranslatedregion,5′-UTR)区、8个外显子、7个内含子和3′-UTR... 目的建立可靠的HLA-Cw基因全长序列的分子克隆和测序技术。方法设计合成HLA-Cw基因全长序列PCR引物和探索PCR反应体系,采用长距离PCR技术,扩增HLA-Cw基因非翻译区(untranslatedregion,5′-UTR)区、8个外显子、7个内含子和3′-UTR区,全长约4.5kb。PCR产物纯化后进行分子克隆,筛选阳性克隆,提取质粒DNA,采用自行设计的测序引物进行全长双向测序。12份已经AlleleSEQRHI。A-Cw测序分型试剂盒进行PCR产物直接测序、基因型已知的样本,分别用TaKaRaLATaq酶和StratagenePfuTaqDNA聚合酶进行HI,A-Cw基因全长扩增,以及PCR产物分子克隆和序列测定,克隆测序结果分别与PCR产物直接测序结果进行对比分析。结果PCR扩增获得了特异性目的片段,测序获得了HLA-Cw基因-962~3576位碱基全长序列。克隆测序结果的对比表明,Pfu酶保真性高于LATaq酶。比较本文测定的Cw*010201与Cw*07020101等位基因序列,在5′上游-962~-284位碱基区域存在11个单核苷酸多态(single nucleotide polymorphisms,SNPs)和2个插入(或)缺失多态性位点;3′-UTR下游3067~3576位碱基区域存在11个SNPs和1个插入(或)缺失。结论建立了HLA—Cw基因全长序列分子克隆及测序方法,在HLA—Cw基因全长序列分子多态性及表达调控等研究领域,具有广泛应用前景。 展开更多
关键词 人类白细胞抗原 HLA-Cw基因 全长序列 克隆 测序
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猪瘟病毒兔化弱毒(HCLV)疫苗株基因组全长cDNA的克隆与序列分析 被引量:8
5
作者 余兴龙 涂长春 +3 位作者 徐兴然 张茂林 李作生 于师宇 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2003年第5期38-42,共5页
根据猪瘟病毒基因组的序列设计合成了覆盖HCLV基因组全部序列的5对引物,通过RT-PCR从感染家兔脾脏中扩增获得了包含HCLV(bog cholera lapinized virus,HCLV)基因组全序列的5个cDNA片段,并将它们分别克隆至pGEM-T vector中。然后将这5个c... 根据猪瘟病毒基因组的序列设计合成了覆盖HCLV基因组全部序列的5对引物,通过RT-PCR从感染家兔脾脏中扩增获得了包含HCLV(bog cholera lapinized virus,HCLV)基因组全序列的5个cDNA片段,并将它们分别克隆至pGEM-T vector中。然后将这5个cDNA片段按它们在HCLV基因组上的位置从5’端至3’端的顺序依次通过酶切连接,一并克隆到pPoly2载体中得到HCLV基因组全长cDNA的质粒pPOHCLV。序列分析表明,HCLV基因组长度共12310bp,有一个大的ORF,编码一3898个氨基酸的多聚蛋白。其5'-NCR和3’-NCR长度分别是374nt和239nt。与非兔化毒株相比较,HCLV基因组在12133nt处有12个碱基的插入CTTTTTTCTTTT,该序列可能是病毒在适应兔体增殖过程中形成的。基于基因组全序列及其所推导的氨基酸序列的同源性分析表明,毒株的亲缘关系的远近与它们的毒力之间并没有相关性。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 猪瘟兔化弱毒 基因组 疫苗株 HCLV cDNA 全长序列 克隆 同源性
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油茶苯丙氨酸解氨酶基因的cDNA克隆与序列分析 被引量:9
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作者 田晓明 谭晓风 +2 位作者 胡孝义 刘巧 罗茜 《南京林业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期24-28,共5页
苯丙氨酸解氨酶(phenylalanine ammonia lyase,PAL)是苯丙烷类代谢途径的关键酶之一。以油茶(Camelliaoleifera)近成熟种子cDNA文库和EST文库为材料,通过分子克隆方法鉴定了PAL全长cDNA。结果表明:油茶PAL基因的cDNA长2 118 bp,编码705... 苯丙氨酸解氨酶(phenylalanine ammonia lyase,PAL)是苯丙烷类代谢途径的关键酶之一。以油茶(Camelliaoleifera)近成熟种子cDNA文库和EST文库为材料,通过分子克隆方法鉴定了PAL全长cDNA。结果表明:油茶PAL基因的cDNA长2 118 bp,编码705个氨基酸,与其他物种的PAL具有较高的相似性,在进化上高度同源;油茶PAL编码的蛋白质序列包含与水稻、玉米PAL蛋白质相同的脱氨基位点和催化活性位点;PAL系统进化树表明,油茶PAL基因与灌木类植物的PAL基因聚类关系最近。 展开更多
关键词 油茶 苯丙氨酸解氨酶 全长CDNA 基因克隆 序列分析
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H9N2亚型禽流感病毒广东分离株的全基因克隆及序列分析 被引量:6
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作者 齐岩 袁润余 +6 位作者 张贺楠 亓文宝 单芬 胡玥 李小康 焦培荣 廖明 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期176-182,共7页
本研究以一株2006年广东省分离的H9N2亚型禽流感病毒A/Chicken/Guangdong/HL/2006(H9N2)(简称Ck/GD/HL/06)为研究对象,用RT-PCR法扩增病毒基因组各片段(包括5′端和3′端的非编码区序列),将扩增片段进行克隆、测序并与参考毒株的相应序... 本研究以一株2006年广东省分离的H9N2亚型禽流感病毒A/Chicken/Guangdong/HL/2006(H9N2)(简称Ck/GD/HL/06)为研究对象,用RT-PCR法扩增病毒基因组各片段(包括5′端和3′端的非编码区序列),将扩增片段进行克隆、测序并与参考毒株的相应序列进行比较分析,绘制各基因片段的系统发生树。分析结果表明,Ck/GD/HL/06株的HA基因同1997年中国香港鸭源毒株Dk/HK/Y280/97(H9N2)在同一进化分支,从HA的糖基化位点、受体结合位点等综合分析,该毒株HA基因未发生明显的变异,符合我国大陆H9亚型禽流感病毒的特点。HA的226位氨基酸残基为亮氨酸(Leu),具有同哺乳动物SAα,2-6受体结合的特性。Ck/GD/HL/06的PB1、PA和NP基因,同2004年越南分离的人源高致病性H5N1亚型流感病毒A/VietNam/1203/2004(H5N1)株(简写A/VN/1203/04)的核苷酸序列一致性分别是93.8%、95%和96.8%,在先前的研究中未见有类似特性毒株的报道,而这种特性H9N2亚型AIV的出现,是否会增加在重组过程中产生新的高致病性H5N1亚型AIV的可能性,是值得我们关注的一个问题,也提醒在我国华南地区应更加重视防控H9N2亚型AIV,做好长期对H9N2亚型AIV监控及分子流行病学调查的工作。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H9N2亚型 全基因 克隆 序列分析
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油茶查尔酮合酶和异构酶基因的cDNA克隆 被引量:5
8
作者 谭晓风 张党权 +4 位作者 陈鸿鹏 谢禄山 王晓红 石明旺 胡芳名 《中南林业科技大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期9-13,共5页
查尔酮合酶和查尔酮异构酶是类黄酮代谢与色素苷代谢的关键酶.以油茶近成熟种子cDNA文库和EST文库为材料,通过分子克隆方法鉴定了1条查尔酮合酶基因全长cDNA和1条查尔酮异构酶全长cDNA.结果表明:油茶查尔酮合酶基因的cDNA含1479 bp,编码... 查尔酮合酶和查尔酮异构酶是类黄酮代谢与色素苷代谢的关键酶.以油茶近成熟种子cDNA文库和EST文库为材料,通过分子克隆方法鉴定了1条查尔酮合酶基因全长cDNA和1条查尔酮异构酶全长cDNA.结果表明:油茶查尔酮合酶基因的cDNA含1479 bp,编码412个氨基酸,为目前最长的查尔酮合酶,与其它物种的查尔酮合酶具有极高的相似性,在进化上高度同源;油茶查尔酮异构酶基因的cDNA含899 bp,编码206个氨基酸,与茶的查尔酮异构酶基因高度同源,但与其它物种的相似性较低. 展开更多
关键词 经济林 油茶 查尔酮合酶 查尔酮异构酶 全长CDNA 序列分析 基因克隆
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鸡传染性法氏囊病病毒超强毒上海株SH95基因组B片段的克隆与分子系统进化树分析 被引量:6
9
作者 孙建和 陆苹 +1 位作者 蒋静 赵渝 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期138-143,共6页
分离、纯化了鸡传染性法氏囊病病毒超强毒(vvIBDV)上海株(SH95)的病毒核酸dsRNA,应用随机引物将RNA反转录成cDNA,以此为模板一步扩增出全长基因组B片段,将其克隆入pGEM-T载体,并进行序列分析。克隆的B片段全长2827个核苷酸,其编码的氨... 分离、纯化了鸡传染性法氏囊病病毒超强毒(vvIBDV)上海株(SH95)的病毒核酸dsRNA,应用随机引物将RNA反转录成cDNA,以此为模板一步扩增出全长基因组B片段,将其克隆入pGEM-T载体,并进行序列分析。克隆的B片段全长2827个核苷酸,其编码的氨基酸与超强毒株HK46的同源性达98 18%(863/879)。分子系统进化树分析表明,SH95超强毒株与美国变异株E的亲缘关系最近,但与基于基因组A片段的系统进化分析完全不同,表明该毒株在发生过程中基因重配比基因重组发挥了更重要的作用。通过对14株IBDV编码氨基酸序列的分析、比较,推测B片段上11个独特的氨基酸位点可能与毒力相关。 展开更多
关键词 鸡传染性法氏囊病病毒 基因组 克隆 分子系统进化树 序列分析
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狂犬病毒街毒株全长基因cDNA克隆的构建及鉴定 被引量:4
10
作者 明平刚 黄莹 +4 位作者 唐青 杜加亮 陶小燕 严家新 扈荣良 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期17-22,共6页
利用分子克隆的方法,将狂犬病毒街毒株的全基因组分为4个片段按照它们基因组上的顺序克隆到真核表达载体pVAX1上,并将G-L间隔区的非编码区替换为表达绿色荧光蛋白(GFP)的核苷酸,构建出表达绿色荧光蛋白(GFP)的重组狂犬病毒HN10株全长基... 利用分子克隆的方法,将狂犬病毒街毒株的全基因组分为4个片段按照它们基因组上的顺序克隆到真核表达载体pVAX1上,并将G-L间隔区的非编码区替换为表达绿色荧光蛋白(GFP)的核苷酸,构建出表达绿色荧光蛋白(GFP)的重组狂犬病毒HN10株全长基因组cDNA真核表达质粒,同时,在全长cDNA的两侧嵌入锤头状核酶(HamRz)和丁型肝炎病毒核酶(HdvRz)的序列,并置于CMV启动子的控制下,为下一步拯救出该嵌合病毒提供了可直接使用的全长cDNA真核表达质粒。 展开更多
关键词 狂犬病毒 全长CDNA 克隆
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谢瓦氏曲霉间型变种veA基因全长克隆及序列分析 被引量:4
11
作者 马权 刘永翔 刘作易 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2012年第1期136-139,共4页
为进一步研究谢瓦氏曲霉间型变种中veA基因的结构及其与有性发育的关系,以谢瓦氏曲霉间型变种为有性发育研究材料对veA基因进行全长克隆,根据已克隆到的veA保守区片段设计基因特异性引物(GSP),使用RACE技术从总RNA克隆到了长度为2 515 b... 为进一步研究谢瓦氏曲霉间型变种中veA基因的结构及其与有性发育的关系,以谢瓦氏曲霉间型变种为有性发育研究材料对veA基因进行全长克隆,根据已克隆到的veA保守区片段设计基因特异性引物(GSP),使用RACE技术从总RNA克隆到了长度为2 515 bp的veA基因的cDNA。序列分析表明,该cDNA编码有562个氨基酸残基,其预测蛋白质序列与丝状真菌的其他种相应预测蛋白质比对结果发现,其相似性较好,保守区序列集中于蛋白质的N端。进一步研究表明,该基因开放阅读框内只含一个内含子,长度为54 bp,位于起始密码子下游149 bp处。说明,已成功地从谢瓦氏曲霉间型变种中克隆到了veA基因。 展开更多
关键词 谢瓦氏曲霉间型变种 veA基因 有性发育 全长克隆
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克隆全长cDNA的方法及其在兽药研究中的应用 被引量:2
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作者 谢馥交 卢向阳 《中国兽药杂志》 2006年第5期39-43,共5页
综述了获取基因全长cDNA序列的方法,即全长cDNA文库的构建、cDNA末端快速扩增和电子克隆;重点介绍了O ligo-capping、CAPture、Cap-trapper及SMART构建全长cDNA文库的方法,并阐述了其在兽药研究中的应用。
关键词 全长CDNA 全长CDNA文库 CDNA末端快速扩增 电子克隆
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茶尺蠖普通气味结合蛋白(GOBP)的基因克隆与序列分析 被引量:2
13
作者 陈华才 刘军 +1 位作者 张晓燕 殷坤山 《茶叶科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期37-44,共8页
以触角总RNA为模板,根据同源性设计简并性引物,采用RT-PCR扩增结合RACE技术克隆获得了茶尺蠖(Ectropis obliqua)普通气味结合蛋白GOBP1和GOBP2基因的cDNA全长序列。分别命名为EoblGOBP1和EoblGOBP2。EoblGOBP1的cDNA全长为1 528 bp,开... 以触角总RNA为模板,根据同源性设计简并性引物,采用RT-PCR扩增结合RACE技术克隆获得了茶尺蠖(Ectropis obliqua)普通气味结合蛋白GOBP1和GOBP2基因的cDNA全长序列。分别命名为EoblGOBP1和EoblGOBP2。EoblGOBP1的cDNA全长为1 528 bp,开放阅读框501 bp,编码166个氨基酸残基,预测分子量Mw=18 835.63 D,等电点pI=5.45,cDNA和氨基酸序列在NCBI/GenBank的登录号分别为FJ156732和ACN29680.1。EoblGOBP2的cDNA全长为1 315 bp,开放阅读框405 bp,编码160个氨基酸残基,预测分子量Mw=18 002.75 D,等电点pI=5.32。cDNA和氨基酸序列在NCBI/GenBank的登录号分别为FJ156733和ACN29681.1。两个气味结合蛋白的氨基酸序列中都含有6个保守的半胱氨酸位点,具有气味结合蛋白的典型特征,与已报道的鳞翅目昆虫气味结合蛋白的同源性为分别62%~82%和76%~88%。 展开更多
关键词 茶尺蠖 普通气味结合蛋白(GOBP) 全长序列 基因克隆 序列分析
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汉族人甘露聚糖结合凝集素全长基因的克隆与序列分析 被引量:1
14
作者 赖钦涛 左大明 +2 位作者 饶朗毓 张丽芸 陈政良 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期283-285,289,共4页
目的克隆汉族人甘露聚糖结合凝集素(MBL)全长基因。方法提取汉族人白细胞基因组DNA,高保真PCR扩增MBL基因,应用TA克隆方法将PCR产物与载体pCR-XL-TOPO连接,经DNA测序后利用软件DNAStar进行分析。结果MBL基因反向插入pCR-XL-TOPO,全长632... 目的克隆汉族人甘露聚糖结合凝集素(MBL)全长基因。方法提取汉族人白细胞基因组DNA,高保真PCR扩增MBL基因,应用TA克隆方法将PCR产物与载体pCR-XL-TOPO连接,经DNA测序后利用软件DNAStar进行分析。结果MBL基因反向插入pCR-XL-TOPO,全长6321bp,与GenBank收录的基因序列相比,有17个碱基不同,其中仅1个位于编码区(外显子4),但编码的氨基酸没有改变,且该碱基恰与GenBank收录的人MBL cDNA一致,此序列已被GenBank收录,登录号EU596574。结论成功克隆了汉族人MBL基因全长序列,其结构基因的基因型属于野生型,这为研究MBL基因非编码区对MBL表达的影响奠定了基础。 展开更多
关键词 甘露聚糖结合凝集素 全长基因 克隆 序列分析
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茶树中精氨酸脱羧酶基因的cDNA克隆及序列分析 被引量:2
15
作者 徐乾 史成颖 +1 位作者 宛晓春 汤志近 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期464-469,共6页
通过SMARTRACE PCR技术获得了茶树中精氨酸脱羧酶(ADC)的cDNA全长序列,并登录GenBank(登录号为JQ653274)。ADC基因cDNA全长为2 988 bp,开放阅读框(ORF)全长为2 163 bp,共编码720个氨基酸,编码的蛋白质的分子量为77.430 kDa,理论等电点为... 通过SMARTRACE PCR技术获得了茶树中精氨酸脱羧酶(ADC)的cDNA全长序列,并登录GenBank(登录号为JQ653274)。ADC基因cDNA全长为2 988 bp,开放阅读框(ORF)全长为2 163 bp,共编码720个氨基酸,编码的蛋白质的分子量为77.430 kDa,理论等电点为5.373,其序列中不存在卷曲螺旋结构。ADC蛋白为亲水性非分泌不稳定蛋白,不跨膜运动,无信号肽序列存在,共有41个可能的磷酸化位点,存在于叶绿体基质中,是细胞质蛋白。精氨酸脱羧酶的基因cDNA全长序列的获得,对于进一步研究精氨酸在茶树氮代谢中的作用及茶氨酸代谢途径提供基础。 展开更多
关键词 茶精氨酸脱羧酶 全长CDNA 基因克隆 序列分析
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松墨天牛漆酶基因MaLac1的克隆、原核表达及表达谱分析 被引量:2
16
作者 陈昊 罗巧玉 +9 位作者 马秋雨 初旭 袁超 刘颖 余伟 吴松青 王荣 梁光红 张飞萍 胡霞 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期381-389,共9页
【目的】本研究旨在克隆并鉴定松墨天牛Monochamus alternatus内源漆酶基因MaLac1,分析其在松墨天牛不同发育阶段的表达水平,为进一步明确MaLac1功能提供依据。【方法】基于松墨天牛肠道转录组测序数据,通过RACE克隆松墨天牛MaLac1基因... 【目的】本研究旨在克隆并鉴定松墨天牛Monochamus alternatus内源漆酶基因MaLac1,分析其在松墨天牛不同发育阶段的表达水平,为进一步明确MaLac1功能提供依据。【方法】基于松墨天牛肠道转录组测序数据,通过RACE克隆松墨天牛MaLac1基因的全长cDNA序列,并对其进行生物信息学分析;将该基因与pET-32a载体链接构建表达载体pET-MaLac1,导入大肠杆菌Escherichia coli Rosetta (DE3)使其表达;使用qPCR检测MaLac1基因在松墨天牛不同发育阶段(低龄幼虫、老熟幼虫、蛹、雌成虫和雄成虫)肠道中的表达差异。【结果】克隆获得松墨天牛MaLac1的cDNA全长序列(GenBank登录号:KY073340)。MaLac1开放阅读框全长2 067 bp,编码一个含688个氨基酸的蛋白质,预测分子量为78.34 kD,等电点为5.30。SignalP 4.1 Server预测MaLac1在N端包含一个15个氨基酸的信号肽。序列比对分析表明,MaLac1具有典型的昆虫漆酶基因特征,与赤拟谷盗Tribolium castaneum漆酶基因的氨基酸序列一致性达93%。SDS-PAGE检测发现IPTG诱导表达了一条大约78 kD的特异蛋白条带,与推测大小一致。qPCR结果显示,MaLac1在不同发育阶段的松墨天牛肠道中均有表达,其中,在雌成虫肠道中表达量最高,在雄成虫肠道中的次之,在幼虫肠道中的最低。【结论】MaLac1在松墨天牛成虫中表达量显著高于其在幼虫中的,这一结果可能与幼虫和成虫的取食习性差异相关。MaLac1在松墨天牛体内的功能还有待进一步研究。 展开更多
关键词 松墨天牛 肠道 漆酶 全长克隆 原核表达 表达谱
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传染性法氏囊病病毒疫苗株B87基因组A节段的克隆和序列分析 被引量:1
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作者 刘锴 王兴龙 +3 位作者 王学理 任林柱 闫广谋 段小宇 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2007年第9期646-651,共6页
目的 获得传染性法氏囊病病毒疫苗株B87 A节段全长cDNA,并对其进行序列分析.方法 使用蛋白酶K、酚/氯仿抽提法提取病毒基因组,用LiCl分级沉淀方法纯化病毒基因组dsRNA,通过RT-PCR一步扩增获得A节段的全长cDNA.将其克隆至pGEM-T载体上,测... 目的 获得传染性法氏囊病病毒疫苗株B87 A节段全长cDNA,并对其进行序列分析.方法 使用蛋白酶K、酚/氯仿抽提法提取病毒基因组,用LiCl分级沉淀方法纯化病毒基因组dsRNA,通过RT-PCR一步扩增获得A节段的全长cDNA.将其克隆至pGEM-T载体上,测序,并用DNAStar软件进行序列分析.结果 测序结果表明,克隆的B87株A节段全长为3 260 bp,与Gt株的同源性最高为99.5%,与其他毒株的核苷酸同源性介于95.2%~99.4%之间,与Ⅱ型毒株OH仅为84.0%.结论 通过对20株IBDV编码氨基酸序列的分析、比较,推测A片段上7个独特的氨基酸位点可能与毒力相关. 展开更多
关键词 传染性法氏囊病病毒 全长CDNA A节段 克隆 序列分析
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油茶亲环素基因的鉴定与其在大肠杆菌中的表达 被引量:1
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作者 王保明 谭晓风 《中南林业科技大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期85-93,共9页
利用构建的油茶近成熟种子cDNA文库,分离鉴定了一条油茶亲环素基因的cDNA序列;该序列全长975bp(base pair),含有一个621bp的开放码框,编码207个氨基酸,将其命名为co-cyp(GenBank登录号:FJ377540)。该基因与其它物种的亲环素基因具有较... 利用构建的油茶近成熟种子cDNA文库,分离鉴定了一条油茶亲环素基因的cDNA序列;该序列全长975bp(base pair),含有一个621bp的开放码框,编码207个氨基酸,将其命名为co-cyp(GenBank登录号:FJ377540)。该基因与其它物种的亲环素基因具有较高的同源性,结构分析表明该蛋白的二级结构以片层为主,并伴有α-螺旋、β转角和大量的无规则卷曲;其N端有一个强疏水性的信号肽序列,具有跨膜结构和较好的柔性;还具有N-连接糖基化位点、蛋白激酶C磷酸化位点、酪氨酸激酶Ⅱ磷酸化位点、酪氨酸激酶磷酸化位点、N-连接肉豆蔻酰位点、脯氨酸顺反异构酶标志序列、环孢菌素(CsA)结合位点(Trp)以及植物亲环素基因特有的7个氨基酸特征序列KSGKPLH。该蛋白属于亲环素B族,为球状分泌蛋白。在获得油茶亲环素基因全长cDNA的基础上,构建了该基因的原核表达重组子pET30b-CyP,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,获得了约21kDa的油茶亲环素蛋白。本研究对揭示油茶种子的油脂合成和抗逆性能等生物学规律具有重要意义。 展开更多
关键词 油茶 亲环素基因 全长CDNA 克隆 原核表达
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传染性法氏囊病病毒浙江分离株(TL2004)A节段cDNA的克隆及序列分析
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作者 郑江涛 魏永伟 +1 位作者 刘岩 于涟 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期658-662,667,共6页
用Long accurate RT-PCR(LA-PCR)的方法一步法克隆了IBDV TL2004基因组A节段全长cDNA。序列测定结果表明:克隆的A节段全长3260个核苷酸,包括5′、3′的非编码区(NCRs)和2个重叠的开放阅读框(ORF1和ORF2),与来自GenBank IBDV血清Ⅰ型毒... 用Long accurate RT-PCR(LA-PCR)的方法一步法克隆了IBDV TL2004基因组A节段全长cDNA。序列测定结果表明:克隆的A节段全长3260个核苷酸,包括5′、3′的非编码区(NCRs)和2个重叠的开放阅读框(ORF1和ORF2),与来自GenBank IBDV血清Ⅰ型毒株核苷酸序列的同源性高达95.2%~99.2%。二级结构分析表明,在5′-NCRs和3′-NCRs各存在一个大型的颈环发夹结构。ORF1编码1 012个氨基酸的VP2-VP3-VP4,在氨基酸水平上VP2、VP3、VP4与参比Ⅰ型毒株的同源性分别达96.7%~99.6%、94.2%~99.2%、96.7%~99.6%。PRF2编码145个氨基酸的VP5,与参比Ⅰ型毒株的同源性高达95.9%~99.3%。TL2004在第2个小亲水区内279位氨基酸由S替代了N、290位M替代了L,这2个突变可能是IBDV抗原漂变的原因。分子系统进化树分析表明,TL2004与欧洲Cu21株和中国JD1、Harbin株的关系较近,而与欧洲、香港、日本的超强毒株和美国的变异株相对较远。 展开更多
关键词 IBDV 基因组A节段全长cDNA 克隆 序列分析
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海南番木瓜花叶病毒全长cDNA克隆及序列分析 被引量:1
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作者 王永辰 沈文涛 +4 位作者 王树昌 庹德财 言普 黎小瑛 周鹏 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2013年第2期297-300,共4页
提取海南果园番木瓜病叶样品总RNA,反转录得到cDNA第一链,基于已报道的番木瓜花叶病毒(Papaya mosaic virus,PaMV)全长基因组序列,设计引物,PCR扩增PaMV-CP基因序列,通过测序和序列比对分析确定发病植物感染了PaMV。再通过RT-PCR扩增PaM... 提取海南果园番木瓜病叶样品总RNA,反转录得到cDNA第一链,基于已报道的番木瓜花叶病毒(Papaya mosaic virus,PaMV)全长基因组序列,设计引物,PCR扩增PaMV-CP基因序列,通过测序和序列比对分析确定发病植物感染了PaMV。再通过RT-PCR扩增PaMV全长cDNA序列,克隆及测序结果表明,所获得的cDNA全长为6 656 bp,与国外报道的PaMV分离物全长核苷酸序列的相似性达99.6%。 展开更多
关键词 番木瓜花叶病毒 全长CDNA 克隆 序列分析
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