目的探究抑制miR-21-5p表达通过靶向叉头蛋白P2抗体(FOXP2)对肺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、Western印迹检测正常肺上皮细胞株及肺癌细胞株中miR-21-5p、FOXP2的表达水平,双荧光素酶实验检测miR-21...目的探究抑制miR-21-5p表达通过靶向叉头蛋白P2抗体(FOXP2)对肺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、Western印迹检测正常肺上皮细胞株及肺癌细胞株中miR-21-5p、FOXP2的表达水平,双荧光素酶实验检测miR-21-5p与FOXP2的联系,Western印迹检测转染后A549细胞中细胞周期蛋白(Cyclin)D1、p21、p27、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关x蛋白(Bax)、酶切含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)3蛋白水平,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果与正常肺上皮细胞BEAS-2B比较,肺癌细胞株A549、NCl-H460、H1299中miR-21-5p表达水平均显著升高,FOXP2 mRNA及蛋白水平均显著降低(均P<0.05)。miR-21-5p组FOXP2蛋白表达水平(0.29±0.03)显著低于miR-NC组(0.62±0.06),anti-miR-21-5p组FOXP2蛋白表达水平(0.94±0.08)显著高于anti-miR-NC组(0.61±0.05,均P<0.05)。与anti-miR-NC组比较,anti-miR-21-5p组miR-21-5p水平显著降低,48 h、72 h OD值显著降低,CyclinD1蛋白水平显著降低,p21、p27蛋白水平显著升高,细胞凋亡率显著升高,Bcl-2蛋白水平显著降低,Bax、酶切caspase3蛋白水平显著升高(均P<0.05)。与pcDNA组比较,pcDNA-FOXP2组FOXP2水平显著升高,48 h、72 h OD值显著降低,CyclinD1蛋白水平显著降低,p21蛋白水平显著升高,细胞凋亡率显著升高,Bcl-2蛋白水平显著降低,Bax蛋白水平显著升高(P<0.05)。与anti-miR-21-5p+si-NC组比较,anti-miR-21-5p+si-FOXP2组FOXP2水平显著降低,48 h、72 h OD值显著升高,细胞凋亡率显著降低,CyclinD1、Bcl-2蛋白水平显著升高,p21、Bax蛋白水平显著降低(均P<0.05)。结论miR-21-5p靶向调控肺癌细胞中FOXP2的表达,抑制FOXP2的表达能逆转抑制miR-21-5p引起的细胞增殖抑制,凋亡促进作用。展开更多
文摘目的探究抑制miR-21-5p表达通过靶向叉头蛋白P2抗体(FOXP2)对肺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、Western印迹检测正常肺上皮细胞株及肺癌细胞株中miR-21-5p、FOXP2的表达水平,双荧光素酶实验检测miR-21-5p与FOXP2的联系,Western印迹检测转染后A549细胞中细胞周期蛋白(Cyclin)D1、p21、p27、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关x蛋白(Bax)、酶切含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)3蛋白水平,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果与正常肺上皮细胞BEAS-2B比较,肺癌细胞株A549、NCl-H460、H1299中miR-21-5p表达水平均显著升高,FOXP2 mRNA及蛋白水平均显著降低(均P<0.05)。miR-21-5p组FOXP2蛋白表达水平(0.29±0.03)显著低于miR-NC组(0.62±0.06),anti-miR-21-5p组FOXP2蛋白表达水平(0.94±0.08)显著高于anti-miR-NC组(0.61±0.05,均P<0.05)。与anti-miR-NC组比较,anti-miR-21-5p组miR-21-5p水平显著降低,48 h、72 h OD值显著降低,CyclinD1蛋白水平显著降低,p21、p27蛋白水平显著升高,细胞凋亡率显著升高,Bcl-2蛋白水平显著降低,Bax、酶切caspase3蛋白水平显著升高(均P<0.05)。与pcDNA组比较,pcDNA-FOXP2组FOXP2水平显著升高,48 h、72 h OD值显著降低,CyclinD1蛋白水平显著降低,p21蛋白水平显著升高,细胞凋亡率显著升高,Bcl-2蛋白水平显著降低,Bax蛋白水平显著升高(P<0.05)。与anti-miR-21-5p+si-NC组比较,anti-miR-21-5p+si-FOXP2组FOXP2水平显著降低,48 h、72 h OD值显著升高,细胞凋亡率显著降低,CyclinD1、Bcl-2蛋白水平显著升高,p21、Bax蛋白水平显著降低(均P<0.05)。结论miR-21-5p靶向调控肺癌细胞中FOXP2的表达,抑制FOXP2的表达能逆转抑制miR-21-5p引起的细胞增殖抑制,凋亡促进作用。
