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CFSE标记神经祖细胞方法的建立与验证 被引量：1
1
作者 周佳锋 马孟杰 +1 位作者 彭小忠 舒鹏程 《基础医学与临床》 2021年第5期648-652,共5页
目的建立并验证羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)荧光探针标记神经祖细胞(NPCs)的方法。方法在胚胎期小鼠侧脑室注射CFSE以标记室周区(VZ)细胞,在注射后的1 h和3 h分别收集组织,通过免疫荧光方法检测其特异性。在注射后的1 h分离... 目的建立并验证羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)荧光探针标记神经祖细胞(NPCs)的方法。方法在胚胎期小鼠侧脑室注射CFSE以标记室周区(VZ)细胞,在注射后的1 h和3 h分别收集组织,通过免疫荧光方法检测其特异性。在注射后的1 h分离出背侧新皮质,通过流式细胞荧光分选术(FACS)分选强阳性细胞,并通过干细胞标志物、神经元标志物等验证。结果CFSE能够瞬时标记VZ区细胞,标记窗在3~6 h。CFSE进行长时程标记会出现衰减。利用CFSE分选所得细胞70%为神经祖细胞,少量为神经元等。结论CFSE能够用于瞬时及长时程在体标记。CFSE还可用于分选神经祖细胞,但尚需调整分选策略以提高特异性(FACS)。 展开更多
关键词 羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE) 神经祖细胞 流式细胞荧光分选术(facs)
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脑源性神经营养因子在体外诱导SH-SY5Y细胞分化过程中的作用 被引量：1
2
作者 李学礼 吕立夏 +3 位作者 张红娟 高景霞 李静琪 徐磊 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期687-691,共5页
目的探讨不同浓度的脑源性神经营养因子(BDNF)在体外诱导SH-SY5Y细胞分化时,对G2期及其前后细胞周期相关蛋白mRNA表达的影响。方法采用全反式维甲酸(RA)和低(1μg/L)、中(10μg/L)、高(100μg/L)3种不同浓度BDNF在无血清培养液中相继诱... 目的探讨不同浓度的脑源性神经营养因子(BDNF)在体外诱导SH-SY5Y细胞分化时,对G2期及其前后细胞周期相关蛋白mRNA表达的影响。方法采用全反式维甲酸(RA)和低(1μg/L)、中(10μg/L)、高(100μg/L)3种不同浓度BDNF在无血清培养液中相继诱导SH-SY5Y细胞分化,形成均一的具有神经元形态的细胞。以一步法实时定量RT-PCR检测其G2期细胞周期相关蛋白mRNA的表达,荧光激活细胞分类术(FACS)检测各组细胞时相。结果在各浓度BDNF组中周期蛋白B1(cyclinB1)的mRNA含量与对照组及RA组比较均明显降低(P<0.05);仅高浓度组cyclinB2和周期蛋白依赖性激酶1(Cdk1)的mRNA含量显著降低(P<0.05),;低浓度和中浓度BDNF组Cdk5 mRNA含量均高于RA组(P<0.05)。BDNF各浓度组处于G1期的细胞百分率均显著高于RA和对照组(P<0.01),而处于S期的细胞百分率均显著低于对照组(P<0.01),且低浓度及高浓度组同时低于对照组(P<0.01)。结论提示BDNF在有效促进SH-SY5Y细胞进一步分化的同时,没有引起G2期及其前后细胞周期相关蛋白mRNA表达的异常升高,BDNF无诱导细胞凋亡的危险,可能有减缓AD进程的作用,并且呈剂量依赖性。 展开更多
关键词 脑源性神经营养因子 细胞周期相关蛋白 诱导分化 实时定量RT-PCR 荧光激活细胞分类术 SH—SY5Y细胞系
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基于C6流式细胞仪平台应用FRET技术在活细胞中研究蛋白质相互作用 被引量：1
3
作者 孟坤 何庆瑜 +1 位作者 王通 卢少华 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期45-51,共7页
荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)显微镜技术被广泛应用于在活细胞中研究蛋白质相互作用。随着流式细胞术(fluorescence activated cell sorting,FACS)的发展与应用,FACS-FRET技术不但可以检测活细胞中... 荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)显微镜技术被广泛应用于在活细胞中研究蛋白质相互作用。随着流式细胞术(fluorescence activated cell sorting,FACS)的发展与应用,FACS-FRET技术不但可以检测活细胞中蛋白质相互作用,还可以进行定量统计分析。由于流式细胞仪价格昂贵、FRET技术对荧光基团发光光谱的特殊要求等原因,目前为止FACS-FRET技术仅仅被应用到一些特殊的科学研究。为了解决这些问题,构建了一对新的FRET荧光基团EGFP-m Cherry,并且在小型流式细胞仪C6上检测了EGFP-m Cherry融合蛋白的FRET信号,最后使用已明确有相互作用关系的p53蛋白和MDM2蛋白做验证,证明了所构建的EGFPm Cherry可以作为检测FRET信号的荧光基团。不仅促进了FACS-FRET技术的发展,还为人类疾病治疗的药物作用靶点研究提供了有利的研究手段。 展开更多
关键词 荧光共振能量转移 流式细胞术 活细胞 蛋白质相互作用
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HAb18G/CD147拮抗肽对肝癌细胞表面抗原HAb18G的亲和性 被引量：6
4
作者 骞爱荣 商澎 +5 位作者 李郁 樊春梅 陈丹 王春梅 朱平 陈志南 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期127-129,共3页
目的 :研究HAb18G/CD14 7拮抗肽对肝癌细胞上HAb18G/CD14 7抗原的亲和性。方法 :利用流式细胞仪测定人肝癌细胞 (HHCC ,SMMC772 1)上HAb18G抗原的表达。分别在HAb18G/CD14 7拮抗肽AP 1、AP 2和AP 6的N端标记生物素 ,用流式细胞仪和激光... 目的 :研究HAb18G/CD14 7拮抗肽对肝癌细胞上HAb18G/CD14 7抗原的亲和性。方法 :利用流式细胞仪测定人肝癌细胞 (HHCC ,SMMC772 1)上HAb18G抗原的表达。分别在HAb18G/CD14 7拮抗肽AP 1、AP 2和AP 6的N端标记生物素 ,用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜测定AP 1、AP 2和AP 6与HHCC或SMMC772 1的结合能力。结果 :HAb18G抗原在HHCC和SMMC772 1细胞上均呈高表达。AP 6对HHCC的亲和力最强 ,AP 2次之 ,AP 1最弱。AP 6对与SMMC772 1的亲和力也最强 ,AP 1次之 ,AP 2未检测到。结论 :HAb18G/CD14 7拮抗肽对肝癌细胞表面抗原HAb18G/CD14 展开更多
关键词 肝癌 拮抗肽 HAb18G/CDl47 抗原 流式细胞仪 激光共聚焦显微镜
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半胱氨酸单细胞生物传感器的构建及应用 被引量：1
5
作者 刘川 刘清岱 +2 位作者 徐宁 周威 刘君 《中国食品添加剂》 CAS 2018年第5期147-154,共8页
半胱氨酸是一种食品添加剂,被应用于食品的增色、增香以及抗氧化。单细胞生物传感器可以用于氨基酸(如苯丙氨酸,缬氨酸等)的快速检测,但有关半胱氨酸的单细胞生物传感器还没有被报道。本研究基于转录调控因子Ccd R,构建了荧光信号与半... 半胱氨酸是一种食品添加剂,被应用于食品的增色、增香以及抗氧化。单细胞生物传感器可以用于氨基酸(如苯丙氨酸,缬氨酸等)的快速检测,但有关半胱氨酸的单细胞生物传感器还没有被报道。本研究基于转录调控因子Ccd R,构建了荧光信号与半胱氨酸浓度相偶联的单细胞生物传感器,并对其线性范围进行了检测。在0 mmol/L至32 mmol/L的半胱氨酸浓度下,荧光信号强度与半胱氨酸浓度之间具有良好的线性关系。利用构建的半胱氨酸单细胞传感器,结合等离子诱变和流式细胞分选方法,从约5万株突变菌中筛选到两株半胱氨酸高产菌,其产量分别是野生型菌株的2.1倍和3.2倍。实验结果表明构建的单细胞生物传感器可以应用于半胱氨酸的快速检测及高产菌株的筛选。 展开更多
关键词 半胱氨酸 单细胞生物传感器 CcdR 荧光细胞分选
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