目的选取嗜肺军团菌mip和flaA优势抗原表位基因,构建mip/flaA二联优势抗原表位基因融合表达载体,并在原核系统中表达,为后续制备嗜肺军团菌蛋白疫苗提供初步的实验基础。方法运用生物信息学方法对Mip和FlaA蛋白的二级结构和表面特性如...目的选取嗜肺军团菌mip和flaA优势抗原表位基因,构建mip/flaA二联优势抗原表位基因融合表达载体,并在原核系统中表达,为后续制备嗜肺军团菌蛋白疫苗提供初步的实验基础。方法运用生物信息学方法对Mip和FlaA蛋白的二级结构和表面特性如理化性质、亲水性、可塑性、抗原指数以及胞外区等方面进行分析,选择其活性表位可能存在的区域为优势抗原表位区。通过PCR扩增和T4连接酶构建pET-mip、pET-flaA和pET-mip/flaA优势抗原表位基因融合表达载体,并诱导其在大肠杆菌中表达。结果 Mip和FlaA都存在多个潜在的抗原表位位点,选取其优势抗原表位区域进行克隆和表达获得成功,并成功表达了mip/flaA二联优势抗原表位融合蛋白。结论 DNA Star软件和Expasy在线蛋白分析系统能够成功预测嗜肺军团菌Mip和FlaA抗原的表位;选取其优势抗原表位成功构建了pET-mip/flaA二联原核表达载体,并高效表达。展开更多
我们对52例胃粘膜活检标本和18株 Hp 临床分离株进行 Hp 特异的16S rRNA 基因和鞭毛素 A 基因 PCR 扩增和 PCR-RFLP 及 PCR-RFLP-SSCP 分析,以检测 Hp 鞭毛素 A 基因的变异性,进而研究其与 Hp 致病性的关系。结果对43例 Hp(+)的 flaA 基...我们对52例胃粘膜活检标本和18株 Hp 临床分离株进行 Hp 特异的16S rRNA 基因和鞭毛素 A 基因 PCR 扩增和 PCR-RFLP 及 PCR-RFLP-SSCP 分析,以检测 Hp 鞭毛素 A 基因的变异性,进而研究其与 Hp 致病性的关系。结果对43例 Hp(+)的 flaA 基因 PCR-RFLP(HindⅢ)大约可分7个型(变异检出率为16.3%),而PCR-RFLP-SSCP 可分37个型(变异检出率为86.0%),两者有非常显著性差异。本研究表明,flaA 基因变异性极大,PCR-RFLP-SSCP 是检测其变异的有效方法。展开更多
文摘目的选取嗜肺军团菌mip和flaA优势抗原表位基因,构建mip/flaA二联优势抗原表位基因融合表达载体,并在原核系统中表达,为后续制备嗜肺军团菌蛋白疫苗提供初步的实验基础。方法运用生物信息学方法对Mip和FlaA蛋白的二级结构和表面特性如理化性质、亲水性、可塑性、抗原指数以及胞外区等方面进行分析,选择其活性表位可能存在的区域为优势抗原表位区。通过PCR扩增和T4连接酶构建pET-mip、pET-flaA和pET-mip/flaA优势抗原表位基因融合表达载体,并诱导其在大肠杆菌中表达。结果 Mip和FlaA都存在多个潜在的抗原表位位点,选取其优势抗原表位区域进行克隆和表达获得成功,并成功表达了mip/flaA二联优势抗原表位融合蛋白。结论 DNA Star软件和Expasy在线蛋白分析系统能够成功预测嗜肺军团菌Mip和FlaA抗原的表位;选取其优势抗原表位成功构建了pET-mip/flaA二联原核表达载体,并高效表达。
文摘我们对52例胃粘膜活检标本和18株 Hp 临床分离株进行 Hp 特异的16S rRNA 基因和鞭毛素 A 基因 PCR 扩增和 PCR-RFLP 及 PCR-RFLP-SSCP 分析,以检测 Hp 鞭毛素 A 基因的变异性,进而研究其与 Hp 致病性的关系。结果对43例 Hp(+)的 flaA 基因 PCR-RFLP(HindⅢ)大约可分7个型(变异检出率为16.3%),而PCR-RFLP-SSCP 可分37个型(变异检出率为86.0%),两者有非常显著性差异。本研究表明,flaA 基因变异性极大,PCR-RFLP-SSCP 是检测其变异的有效方法。
