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饲养层对维持新建ES细胞系的影响 被引量:40
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作者 尚克刚 胡新立 +4 位作者 李子玉 王学庆 刘爱民 孟国良 童英 《北京大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 1994年第4期500-508,共9页
以STO细胞和鼠胚原代成纤维细胞(PMEF)为饲养层建立了11个小鼠胚胎于细胞系(ES细胞系)。两种饲养层细胞都可以维持ES细胞的正常形态和体外分化能力,但STO细胞不能维持ES细胞的正常二倍体核型,PMEF的效果比... 以STO细胞和鼠胚原代成纤维细胞(PMEF)为饲养层建立了11个小鼠胚胎于细胞系(ES细胞系)。两种饲养层细胞都可以维持ES细胞的正常形态和体外分化能力,但STO细胞不能维持ES细胞的正常二倍体核型,PMEF的效果比STO为佳,但也仅能短期内维持二倍体状态,10代后染色体数目逐渐发生偏离。分离出10个ES细胞克隆。讨论了两种饲养层的不同和影响核型发生偏离的若干可能的原因。 展开更多
关键词 小鼠 ES细胞 饱养层
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人脐带间充质干细胞作为维持人胚胎干细胞生长饲养层细胞的研究 被引量:10
2
作者 刘峰 徐永胜 +2 位作者 俞海燕 王薇 张纯 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2011年第4期271-276,I0009,共7页
目的寻找可以维持人胚胎干细胞未分化生长的人源性细胞作为饲养层细胞,从而解决使用鼠源性细胞作为饲养层带来的安全问题。方法尝试以人脐带间充质干细胞作为饲养层细胞来培养人胚胎干细胞,检验其是否可以维持人胚胎干细胞的未分化生长... 目的寻找可以维持人胚胎干细胞未分化生长的人源性细胞作为饲养层细胞,从而解决使用鼠源性细胞作为饲养层带来的安全问题。方法尝试以人脐带间充质干细胞作为饲养层细胞来培养人胚胎干细胞,检验其是否可以维持人胚胎干细胞的未分化生长状态。用胶原酶消化法分离人脐带间充质干细胞,光镜下观察细胞形态;流式细胞仪检测其表面标志;诱导人脐带间充质干细胞向成骨细胞和脂肪细胞进行分化。将人胚胎干细胞系H1接种于丝裂霉素C灭活后的人脐带间充质干细胞上,每隔5d进行一次传代。培养20代后,对人胚胎干细胞特性进行相关检测,包括细胞形态、碱性磷酸酶染色、相关多能性基因的表达、分化能力。结果从人脐带中分离出的间充质干细胞为梭形,呈平行排列生长或漩涡状生长;细胞高表达CD44、CD29、CD73、CD105、CD90、CD86、CD147、CD117,不表达CD14、CD38、CD133、CD34、CD45、HLA-DR;具有分化成脂肪细胞和成骨细胞的潜能。人胚胎干细胞在人脐带间充质干细胞饲养层上培养20代后,继续保持人胚胎干细胞的典型形态,碱性磷酸酶染色为阳性,免疫荧光染色显示OCT4、Nanog、SSEA4、TRA-1-81、TRA-1-60的表达为阳性,SSEA1表达为阴性,体外悬浮培养可以形成拟胚体。结论人脐带间充质干细胞可以作为人胚胎干细胞的饲养层细胞,支持其生长,并维持其未分化生长状态。 展开更多
关键词 人胚胎干细胞 小鼠胚胎成纤维细胞 人脐带间充质干细胞 饲养层细胞 临床应用
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饲养层细胞对胚胎干细胞的影响及其分离培养的影响因素 被引量:6
3
作者 王颖 陈莉娜 +1 位作者 张艳艳 关伟军 《中国畜牧兽医》 CAS 2007年第11期39-42,共4页
胚胎干细胞及其相关研究是生命科学领域中最有活力、最有影响力、最有应用前景的研究方向之一,它与遗传工程,转基因技术等相结合具有重大的理论意义与实践价值。饲养层细胞在胚胎干细胞分离培养的过程中起着异常重要的作用。作者结合实... 胚胎干细胞及其相关研究是生命科学领域中最有活力、最有影响力、最有应用前景的研究方向之一,它与遗传工程,转基因技术等相结合具有重大的理论意义与实践价值。饲养层细胞在胚胎干细胞分离培养的过程中起着异常重要的作用。作者结合实践经验就饲养层细胞对胚胎干细胞的影响进行了概述,介绍了饲养层细胞的分类,并分析了饲养层细胞分离培养的影响因素。 展开更多
关键词 胚胎干细胞 饲养层细胞 分离培养
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SNL fibroblast feeder layers support derivation and maintenance of human induced pluripotent stem cells 被引量:5
4
作者 Chuanying Pan Amy Hicks +2 位作者 Xuan Guan Hong Chen Colin E. Bishop 《Journal of Genetics and Genomics》 SCIE CAS CSCD 2010年第4期241-248,共8页
Induced pluripotent stem (iPS) cells can be derived from human somatic cells by cellular reprograrnming. This technology provides a potential source of non-controversial therapeutic ceils for tissue repair, drug dis... Induced pluripotent stem (iPS) cells can be derived from human somatic cells by cellular reprograrnming. This technology provides a potential source of non-controversial therapeutic ceils for tissue repair, drug discovery, and opportunities for studying the molecular basis of human disease. Normally, mouse embryonic fibroblasts (MEFs) are used as feeder layers in the initial derivation of iPS lines. The pur- pose of this study was to determine whether SNL fibrohlasts can be used to support the growth of human iPS cells reprogrammed from somatic cells using lentiviral expressed reprogramming factors. In our study, iPS cells expressed common pluripotency markers, dis- played human embryonic stem cells (hESCs) morphology and unmethylated promoters of NANOG and OCT4. These data demonstrate that SNL feeder cells can support the derivation and maintenance of human iPS cells. 展开更多
关键词 induced pluripotent stem cells DERIVATION maintenance SNL feeder cells
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人诱导性多能干细胞的培养及鉴定 被引量:7
5
作者 冯年花 谢安 +5 位作者 娄远蕾 阮琼芳 郭菲 吴珏 邓志锋 汪泱 《实验与检验医学》 CAS 2010年第1期6-8,15,共4页
目的建立稳定的人诱导性多能干细胞(iPS细胞)培养体系。方法取第3~5代的小鼠胚胎成纤维细胞,丝裂霉素C处理后用作饲养层。人iPS细胞接种于饲养层上生长,胶原酶消化或机械法传代。倒置显微镜下观察iPS细胞生长状态;观察拟胚体形成能力;R... 目的建立稳定的人诱导性多能干细胞(iPS细胞)培养体系。方法取第3~5代的小鼠胚胎成纤维细胞,丝裂霉素C处理后用作饲养层。人iPS细胞接种于饲养层上生长,胶原酶消化或机械法传代。倒置显微镜下观察iPS细胞生长状态;观察拟胚体形成能力;RT-PCR检测iPS细胞多能性基因的表达情况。结果(1)小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)为贴壁生长细胞,呈梭形或多角形。细胞增殖旺盛。(2)生长在饲养层上的人iPS细胞呈典型的克隆状生长。克隆呈圆形或椭圆形,边界清晰。克隆内细胞排列紧密,细胞体积小,核大,细胞核/质比高。RT-PCR结果显示人iPS细胞强表达多能性基因Oct4,Nanog,Sox2;去除饲养层后悬浮培养能形成拟胚体(EB)。结论本实验的培养体系适合人iPS细胞的培养,人iPS细胞能稳定增殖,保持自我更新及分化潜能。 展开更多
关键词 人诱导性多能干细胞 细胞培养 饲养层
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一种新的人胚胎干细胞自身来源的滋养层支持其体外培养 被引量:4
6
作者 安世民 曾桥 +8 位作者 滕祥云 龙志高 李娟 潘乾 邬玲仟 梁德生 夏昆 夏家辉 张灼华 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1567-1573,共7页
通过人胚胎干细胞(Human embryonic stemcells,hESCs)经体内分化获取间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)为人胚胎干细胞提供一种新的滋养层。将约5×106个hESCs注射入重症免疫联合缺陷小鼠形成畸胎瘤,8周后再从畸胎瘤中分离... 通过人胚胎干细胞(Human embryonic stemcells,hESCs)经体内分化获取间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)为人胚胎干细胞提供一种新的滋养层。将约5×106个hESCs注射入重症免疫联合缺陷小鼠形成畸胎瘤,8周后再从畸胎瘤中分离MSCs并鉴定,将MSCs作为hESCs的滋养层细胞,并检测和观察hESCs的生长情况、细胞特性和分化能力。从畸胎瘤中获得了纯度较高的具有类似骨髓来源的MSC特性的细胞群,其形态相似、表面抗原标志相似(CD34和CD45阴性,CD29、CD49b、CD105、CD73和CD90阳性),经诱导可以向成骨细胞和成脂细胞分化。将hESCs在MSCs滋养层细胞上传代培养10代以上,hESCs依然具有正常的细胞形态,反转录PCR证实其特异转录因子Oct4、Nanog的表达,干细胞表面标记SSEA-1显示为阴性,SSEA-4、TRA-1-60、TRA-1-81显示为阳性,碱性磷酸酶染色显示为阳性,并且核型正常。体外EB形成和体内畸胎瘤形成证明了其全能性。因此来源于hESCs本身的MSCs可以被用来作为支持胚胎干细胞生长并维持其未分化状态的滋养层细胞。 展开更多
关键词 人胚胎干细胞 间充质干细胞 滋养层
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人眼睑组织来源的成纤维细胞作为饲养层细胞构建人口腔黏膜上皮细胞片层的研究
7
作者 张明琦 王乐 +3 位作者 孙岩 郑玉强 李娜 王卓实 《沈阳医学院学报》 2023年第2期127-130,共4页
目的:探讨人眼睑组织来源的成纤维细胞作为饲养层细胞代替鼠源饲养层细胞在体外培养人口腔黏膜上皮细胞的可行性。方法:通过酶消化法从人眼睑组织中分离成纤维细胞传代培养,取P5代成纤维细胞通过丝裂霉素C方法制备饲养层细胞,将其制备... 目的:探讨人眼睑组织来源的成纤维细胞作为饲养层细胞代替鼠源饲养层细胞在体外培养人口腔黏膜上皮细胞的可行性。方法:通过酶消化法从人眼睑组织中分离成纤维细胞传代培养,取P5代成纤维细胞通过丝裂霉素C方法制备饲养层细胞,将其制备成的饲养层细胞用来培养商品化人口腔黏膜上皮细胞。通过罗丹明染色观察其细胞克隆形成率;HE染色观察细胞片层的结构;免疫荧光检测特征蛋白P63、β1-integrin的表达。结果:人眼睑组织来源的成纤维细胞在体外具有较强的增殖能力,高表达成纤维细胞特异性标志性蛋白CD90,培养的人口腔黏膜上皮细胞呈克隆样生长,细胞克隆形成率约为2.2%,并将其构建成3~4层口腔黏膜细胞片层,且高表达上皮细胞标志物P63及β1-integrin。结论:人眼睑组织来源的成纤维细胞可以作为饲养层细胞构建人口腔黏膜上皮细胞片层,为临床应用提供一种新的人源化饲养层工具细胞。 展开更多
关键词 人口腔黏膜上皮细胞 成纤维细胞 饲养层细胞 眼睑组织
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不同培养基与饲养细胞组合对多房棘球绦虫体外培养模型的影响 被引量:4
8
作者 韩振阳 邓子 +1 位作者 王泽宇 张示杰 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第19期3080-3085,共6页
背景:多房棘球绦虫原头节的体外成囊培养是提取与研究其生发层干细胞的实验基础。D-MEM与RPMI-1640是最适宜用于泡球蚴体外培养的商业培养基,HeLa细胞与大鼠肝癌细胞(ATCC No. CRL-1600)也是常用饲养细胞。目的:构建多房棘球绦虫体外培... 背景:多房棘球绦虫原头节的体外成囊培养是提取与研究其生发层干细胞的实验基础。D-MEM与RPMI-1640是最适宜用于泡球蚴体外培养的商业培养基,HeLa细胞与大鼠肝癌细胞(ATCC No. CRL-1600)也是常用饲养细胞。目的:构建多房棘球绦虫体外培养模型,观察泡球蚴在不同饲养细胞[HeLa细胞与大鼠肝癌细胞(ATCC No.CRL-1600)]及含有体积分数10%胎牛血清的不同培养基[D-MEM(高/低糖型)与RPMI-1640]下生长情况。方法:预先培养HeLa细胞及大鼠肝癌细胞(ATCC No.CRL-1600),从新疆石河子大学第一附属院实验动物中心提供的感染多房棘球绦虫6个月以上的种鼠体内提取原头节后分别与不同饲养细胞及培养基体外共同培养。实验经石河子大学医学院第一附属医院医学伦理委员会批准,批准号:2015-018-01,批准时间:2017-04-07。实验根据饲养细胞与培养基组合分为6组,每组加入1×10~6饲养细胞与50mL含体积分数10%胎牛血清的培养基及5000个原头节,Ⅰ组:HeLa细胞与1640培养基培养;Ⅱ组:HeLa细胞与D-MEM(高糖型)培养基培养;Ⅲ组:大鼠肝癌细胞与1640培养基培养;Ⅳ组:大鼠肝癌细胞与D-MEM(高糖型)培养基培养;Ⅴ组:HeLa细胞与D-MEM(低糖型)培养基培养;Ⅵ组:大鼠肝癌细胞与D-MEM(低糖型)培养基培养,观察泡球蚴原头节的生存、生长和发育,每隔7d计算原头蚴成囊率,使用目镜测微尺测量囊泡平均直径大小。结果与结论:①原头蚴在6种组合中均可长期存活,大部分都形成囊泡,囊泡直径分布在1-6 mm;②培养第56天原头蚴成囊率和囊泡平均直径均为大鼠肝癌细胞与D-MEM(高糖型)培养基组效果最佳(P <0.05),成囊率(72.08±1.79)%,囊泡平均直径(3.379±0.199) mm;③囊泡囊液蛋白定量检测结果显示6组囊液蛋白含量均低于体内囊泡,Ⅳ组蛋白含量高于其他5组(P <0.05);④结果证实:同条件下D-MEM(高糖型)培养基囊泡大小与数量优于其他2种培养基。� 展开更多
关键词 泡球蚴 体外培养 培养基 饲养细胞 囊泡 葡萄糖 囊液 直径 成囊率 蛋白定量
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不同刺激因子组合诱导NK细胞体外扩增及其功能的研究 被引量:3
9
作者 马杰 赵卫东 +5 位作者 张丽娜 周虎 丁玉兰 宣恒华 桂云 金夏 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期510-513,518,共5页
目的探讨不同刺激因子组合对人自然杀伤细胞(NK细胞)体外扩增及其功能的影响。方法 VarioMACS分选健康成人外周血单个核细胞(PBMC)中的NK细胞,依据添加刺激因子的不同分为A组(IL-2)、B组(IL-2+IL-15)、C组(IL-2+IL-15+饲养细胞),饲养细... 目的探讨不同刺激因子组合对人自然杀伤细胞(NK细胞)体外扩增及其功能的影响。方法 VarioMACS分选健康成人外周血单个核细胞(PBMC)中的NK细胞,依据添加刺激因子的不同分为A组(IL-2)、B组(IL-2+IL-15)、C组(IL-2+IL-15+饲养细胞),饲养细胞为30 Gyγ射线照射后的同种异体外周血单个核细胞(allogeneic PB-MNCs,AlloMNCs),未添加任何刺激因子的细胞的作为对照组,在干细胞生长培养基(SCGM)中进行培养扩增14 d,第1天添加PHA及OKT3,第5天离心洗去;台盼蓝拒染法进行活细胞计数;流式细胞术检测分选及扩增前后CD56+CD3-NK细胞纯度;改良的MTT法检测NK细胞对K562、HO8910及PBMC的杀伤活性。结果经VarioMACS免疫磁珠阴性分选后NK细胞纯度由分选前的(9.2±2.9)%提高到(93.5±3.2)%,培养14 d后,除对照组NK细胞纯度降低外,其余组与扩增前无明显差异(P>0.05)。细胞扩增倍数分别为17.2±1.7、51.3±6.6和82.4±9.8倍,均显著高于对照组(5.7±1.2)(P<0.01)。实验组组间比较,C组明显高于A组和B组(P<0.01)。细胞杀伤实验表明,当效靶比为10∶1时,各组的杀伤活性显示为C组>B组>A组>对照组,C组扩增的NK细胞对K562及HO8910的杀伤率可分别达到(70.1±8.9)%和(64.6±6.2)%,显著高于对照组、A组(P<0.01)和B组(P<0.05),对PBMC的杀伤率仅为(4.2±1.2)%。结论经VarioMACS分选获得的NK细胞,在体外使用SCGM培养基培养,添加IL-2、IL-15和照射后AlloMNCs作为刺激因子,可获得高效扩增和有效活化的NK细胞,为NK细胞的肿瘤过继免疫治疗提供了一种简单有效的扩增高纯度NK细胞的方法。 展开更多
关键词 自然杀伤细胞 扩增 饲养细胞 刺激因子组合 免疫治疗
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克隆法检测大鼠体细胞HPRT基因突变探讨 被引量:3
10
作者 崔凤梅 赵经涌 +2 位作者 劳勤华 王六一 杨淑琴 《苏州大学学报(医学版)》 CAS 2003年第4期385-387,共3页
目的 探讨克隆法检测大鼠体细胞HPRT基因突变 ,为后续研究打下基础。方法 参照文献提供的克隆法 ,靶细胞为外周血淋巴细胞或脾淋巴细胞时 ,选取自体或异体的外周血淋巴细胞或脾淋巴细胞作为滋养细胞 ,比较相应的克隆率。结果 无论靶... 目的 探讨克隆法检测大鼠体细胞HPRT基因突变 ,为后续研究打下基础。方法 参照文献提供的克隆法 ,靶细胞为外周血淋巴细胞或脾淋巴细胞时 ,选取自体或异体的外周血淋巴细胞或脾淋巴细胞作为滋养细胞 ,比较相应的克隆率。结果 无论靶细胞为外周血淋巴细胞还是脾淋巴细胞 ,自体来源的滋养细胞组的克隆率高于异体来源的滋养细胞组 ,脾淋巴细胞为滋养细胞时克隆率较高。结论 自体来源的滋养细胞优于异体来源的滋养细胞 。 展开更多
关键词 HPRT基因 克隆法 滋养细胞 克隆率
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乳腺癌组织细胞的高效原代培养及其特性 被引量:3
11
作者 杨振丽 徐雅丽 +3 位作者 卞晓翠 冯海凉 刘玉琴 孙强 《基础医学与临床》 CSCD 2017年第2期224-229,共6页
目的高效扩增乳腺癌组织细胞,明确其特性,为乳腺癌深入研究及个体化治疗提供实验材料。方法利用小鼠胚胎成纤维细胞3T3swiss作饲养层细胞,培养基中添加ROCK抑制剂Y-27632,对乳腺癌组织细胞进行原代培养。CCK-8检测细胞增殖;流式细胞术... 目的高效扩增乳腺癌组织细胞,明确其特性,为乳腺癌深入研究及个体化治疗提供实验材料。方法利用小鼠胚胎成纤维细胞3T3swiss作饲养层细胞,培养基中添加ROCK抑制剂Y-27632,对乳腺癌组织细胞进行原代培养。CCK-8检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期;免疫细胞化学检测细胞CK分子表达;RT-PCR检测HER-2,ER,PR及乳腺癌干细胞相关标志分子(如CD44,CD24等)mRNA的表达;STR检测以明确细胞身份。结果在饲养层细胞和Y-27632抑制剂同时存在的情况下,所培养的乳腺癌组织细胞增殖速度较快,可短时间获得大量细胞;细胞呈多角形上皮样,CK、HER-2、ER表达阳性,PR不表达;CD44和CD24表达阳性;经STR分析证明其身份正确。结论饲养层细胞及ROCK抑制剂有助于乳腺癌组织细胞的原代培养及大量扩增,扩增的细胞性质稳定,可用于个体化治疗研究。 展开更多
关键词 3T3swiss 饲养层细胞 Y-27632 原代培养 乳腺癌
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以人皮肤成纤维细胞作为饲养层细胞培养人胚胎干细胞 被引量:2
12
作者 杨俊林 刘雄昊 +9 位作者 喻姣玲 冯劢 谭杨 李卓 吴奔 高庭 潘盛 邬玲仟 梁德生 夏家辉 《现代生物医学进展》 CAS 2009年第16期3001-3005,共5页
目的:比较人皮肤成纤维细胞(human dermal fibroblasts,HDFs)与小鼠胚胎成纤维细胞(Mouse embryonic fibroblasts,MEFs)的增殖能力及研究人皮肤成纤维细胞作为饲养层支持人胚胎干细胞(human embryonic stem cells,hESCs)未分化生长的能... 目的:比较人皮肤成纤维细胞(human dermal fibroblasts,HDFs)与小鼠胚胎成纤维细胞(Mouse embryonic fibroblasts,MEFs)的增殖能力及研究人皮肤成纤维细胞作为饲养层支持人胚胎干细胞(human embryonic stem cells,hESCs)未分化生长的能力。方法:利用组织贴壁法从人皮肤中分离出HDFs,通过细胞形态的观察和生长曲线的绘制比较HDFs与MEFs的体外增殖能力。将HDFs作为饲养层细胞与hESCs共培养,传代12代后,检测hESCs碱性磷酸酶(AKP)、表面特异性标志及胚胎干细胞特异性转录因子。结果:HDFs可连续传代培养15代以上,10代以下的HDFs增殖迅速,而MEFs自第4代起,增殖能力就明显下降;hESCs在HDFs饲养层上可传代培养12代以上,克隆边界清晰,细胞排列紧密,碱性磷酸酶、表面标志物检测均呈阳性,表达了hESCs特异性转录因子。结论:HDFs比MEFs具有更强的增殖能力;HDFs可作为培养hESCs的饲养层细胞。 展开更多
关键词 人胚胎干细胞 人皮肤成纤维细胞 饲养层细胞
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自剪切多肽P2A对自然杀伤细胞的高效诱导扩增作用的研究 被引量:2
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作者 陈雪梅 张曦 +2 位作者 林建炜 薛祯智 刘韬 《中华细胞与干细胞杂志(电子版)》 2019年第5期282-291,共10页
目的改进现有过继性人自然杀伤(NK)细胞体外诱导、分化及扩增方法,实现高效定向分化及大量扩增NK细胞的目的。方法利用自剪切多肽P2A连接IL-15和4-1BBL基因,通过慢病毒感染和药物筛选的方法制备稳定表达IL-15和4-1BBL的K562滋养层细胞... 目的改进现有过继性人自然杀伤(NK)细胞体外诱导、分化及扩增方法,实现高效定向分化及大量扩增NK细胞的目的。方法利用自剪切多肽P2A连接IL-15和4-1BBL基因,通过慢病毒感染和药物筛选的方法制备稳定表达IL-15和4-1BBL的K562滋养层细胞株。该方法可刺激人PBMC细胞向NK细胞分化及高效增殖。实验结果以x±s表示并用两样本t检验进行比较。结果经该方法培养的CD3-CD16^+56^+NK细胞增殖倍数达到(4480.43±37.80)倍;CD3-CD16^+56^+NK细胞纯度达到94.79﹪;细胞内表达IFN-γ和TNF-α的NK细胞比例为(63.07±3.37)﹪和(54.85±2.04)﹪,分别高于对照组(16.28±2.86)﹪和(14.53±1.15)﹪(t=62.25,22.66,P均<0.01);细胞分泌至培养上清液中的IFN-γ和TNF-α浓度为(111.39±6.95)pg/ml和(32.76±3.23)pg/ml,分别高于对照组(44.99±4.74)pg/ml和(11.09±2.45)pg/ml(t=20.56,7.21,P均<0.01);在体外,该方法培养的NK细胞对K562细胞的杀伤效率为(78.52±7.36)﹪,高于对照组(48.53±6.66)﹪(t=11.56,P<0.01);对H520细胞的杀伤效率为(65.03±3.27)﹪,高于对照组(35.85±3.99)﹪(t=11.35,P<0.01)。结论利用自剪切多肽P2A构建稳定高表达的IL-15和4-1BBL的K562滋养层细胞株,从而提高了NK细胞增殖倍数、纯度和细胞毒性。 展开更多
关键词 自剪切多肽P2A 自然杀伤细胞 滋养层细胞 细胞免疫治疗
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NK细胞体外扩增的影响因素 被引量:2
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作者 潘梅萍 何伟 谢必峰 《药物生物技术》 CAS 2015年第3期279-282,共4页
NK细胞是机体天然免疫的主要承担者,无需肿瘤特异性抗原识别便可以直接杀伤肿瘤细胞,是肿瘤免疫治疗的重要效应细胞,在机体早期抗肿瘤和免疫监视中具有重要作用。近年来,NK细胞的过继免疫治疗获得了长足的进步引起了人们的重视,但由于N... NK细胞是机体天然免疫的主要承担者,无需肿瘤特异性抗原识别便可以直接杀伤肿瘤细胞,是肿瘤免疫治疗的重要效应细胞,在机体早期抗肿瘤和免疫监视中具有重要作用。近年来,NK细胞的过继免疫治疗获得了长足的进步引起了人们的重视,但由于NK细胞在体内数量较少,制约了其大规模研究试验。因此,研制高效的体外扩增技术是NK细胞过继免疫治疗研究进展的关键。目前,NK细胞的体外扩增培养中除选用合适的细胞来源和培养基外,还需要细胞因子、饲养细胞及其他因素的刺激作用。文章结合近年来文献报道就NK细胞体外扩增技术的影响因素作了综述,以期对已有扩增技术的进一步优化提供有价值的参考。 展开更多
关键词 NK细胞 体外扩增 细胞因子 饲养细胞 其他因素
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建立稳定表达猪LIF蛋白的小鼠STO细胞系 被引量:1
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作者 陈袁 赵丽华 +7 位作者 杨宁 张曼玲 金永 侯道荣 吴兆强 李艳如 姜海滨 李荣凤 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期897-904,共8页
目的:在STO小鼠成纤维细胞中表达猪白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF),并尝试使用其作为饲养层培养大鼠诱导多能性干细胞(i PS细胞)。方法:通过脂质体转染的技术,将已构建的猪LIF基因真核表达载体p CAG-p LIF转染至小鼠ST... 目的:在STO小鼠成纤维细胞中表达猪白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF),并尝试使用其作为饲养层培养大鼠诱导多能性干细胞(i PS细胞)。方法:通过脂质体转染的技术,将已构建的猪LIF基因真核表达载体p CAG-p LIF转染至小鼠STO细胞中,获得能够稳定表达猪LIF的转基因STO细胞(STO-p LIF细胞)。通过RT-PCR、q PCR、Western blot等方法检测STO-p LIF细胞中猪LIF基因的表达量,选择高效表达猪LIF的STO-p LIF细胞作为饲养层,培养大鼠i PS细胞。通过生长曲线检测、碱性磷酸酶染色、干细胞多能因子的RT-PCR和免疫荧光染色等方法,检验STO-p LIF细胞饲养层在大鼠i PS细胞培养方面的功能。结果:STO-p LIF细胞中LIF RNA和蛋白表达水平均上调(P<0.05),而该细胞系作为饲养层所培养的大鼠i PS细胞在形态、多能性因子表达方面更接近于传统培养的大鼠i PS细胞,与无外源添加LIF所培养的大鼠i PS存在差异(P<0.05)。结论:成功获得了稳定表达猪LIF基因的STO-p LIF细胞,并证明该细胞作为饲养层在大鼠i PS细胞培养中具有一定优势。 展开更多
关键词 猪白血病抑制因子 小鼠STO细胞 饲养层细胞 大鼠i PS细胞
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NIH3T3-CD40L稳定细胞系构建及在EBV转化B淋巴细胞中的应用 被引量:2
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作者 刘玺 赵烨 +1 位作者 许崇凤 段子渊 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2018年第5期768-774,共7页
通过脂质体法转染p CMV6-CD40L重组质粒和G418阳性克隆筛选,构建了稳定表达CD40L的NIH3T3细胞系,在RNA和蛋白质水平进行了功能鉴定,对其作为饲养细胞在体外B淋巴母细胞系(B lymphoblastoid cell lines,B-LCLs)培养和在EBV转化B细胞中的... 通过脂质体法转染p CMV6-CD40L重组质粒和G418阳性克隆筛选,构建了稳定表达CD40L的NIH3T3细胞系,在RNA和蛋白质水平进行了功能鉴定,对其作为饲养细胞在体外B淋巴母细胞系(B lymphoblastoid cell lines,B-LCLs)培养和在EBV转化B细胞中的作用进行了实验验证。结果表明,NIH3T3-CD40L细胞系不仅可以提高体外低密度B-LCLs存活率,而且可以降低成功建立B-LCLs所需的细胞密度,促进其增殖。该细胞系的成功构建,进一步确证了NIH3T3-CD40L作为饲养细胞可以促进体外低密度B-LCLs的增殖及提高EBV转化B淋巴细胞的效率,优化了体外B细胞培养及EBV转化B淋巴细胞的流程,也为单克隆抗体的制备奠定了基础。 展开更多
关键词 NIH3T3-CD40L 饲养细胞 B-LCLs
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利用饲养细胞体外扩增高纯度的效应NK细胞 被引量:2
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作者 郭振兴 张艳慧 刘绍辉 《同济大学学报(医学版)》 CAS 2019年第2期174-179,共6页
目的比较两类饲养细胞(FC)体外扩增自然杀伤(NK)细胞的效果,鉴定出特定的NK细胞群并进行功能性分析,从而确定最优的FC。方法构建两类FC,分别是第1代FC(FC-000,K562-41BBL)和第2代FC(FC-002,K562-41BBL-mbIL15-mbIL21),分别与人外周血单... 目的比较两类饲养细胞(FC)体外扩增自然杀伤(NK)细胞的效果,鉴定出特定的NK细胞群并进行功能性分析,从而确定最优的FC。方法构建两类FC,分别是第1代FC(FC-000,K562-41BBL)和第2代FC(FC-002,K562-41BBL-mbIL15-mbIL21),分别与人外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)共培养14 d,收获细胞,流式细胞术鉴定NK细胞表型,利用实时无标记细胞分析仪检测两类NK细胞对A549肿瘤细胞的杀伤能力。结果培养14 d后,FC-002扩增的NK细胞纯度(93. 5%)高于FC-000扩增的NK细胞(70. 2%)(P<0. 05); FC-002扩增的NK细胞增殖倍数(3 325)高于FC-000扩增的NK细胞增殖倍数(10)(P<0. 05)。两者均促进了具有NKG2D、NKp44、CD69功能性受体的NK细胞群增殖,且FC-002扩增的NK细胞具有更高的肿瘤杀伤能力及干扰素-γ表达能力(P<0. 05)。结论利用FC能够在体外有效地扩增高纯度的NK细胞,并能够选择性扩增具有NKG2D、NKp44、CD69功能性受体的NK细胞群,且第2代FC所扩增的NK细胞对于肿瘤细胞具有更强的杀伤能力,并在NK细胞增殖倍数、纯度上均优于第1代FC。 展开更多
关键词 自然杀伤细胞 体外扩增 饲养细胞 体外杀伤
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人成纤维细胞饲养层的制备及其对胚胎干细胞生长支持作用 被引量:1
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作者 米蔷 何志旭 +2 位作者 段茂利 王志华 杨燕 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期654-660,共7页
目的为建立不含动物细胞成分的人胚胎干细胞(human embryonic stem cell,hESc)体外培养系统,用人包皮成纤维细胞(human postnatal foreskin fibroblasts,hPFF)制备细胞饲养层并观察其对hESc体外生长的支持功能及生物学特性的维持作用。... 目的为建立不含动物细胞成分的人胚胎干细胞(human embryonic stem cell,hESc)体外培养系统,用人包皮成纤维细胞(human postnatal foreskin fibroblasts,hPFF)制备细胞饲养层并观察其对hESc体外生长的支持功能及生物学特性的维持作用。方法利用儿童阴茎包皮环切术后遗弃包皮组织分离培养成纤维细胞,纯化增殖细胞,采用35Gyγ射线照射灭活法制备成饲养层。将hESc(HS181细胞株)接种在该饲养层上,连续传代至20代,倒置显微镜观察其形态学变化,测定其细胞碱性磷酸酶活性,类胚体形成实验及干细胞转录因子表达,严重联合免疫缺陷的小鼠(severe combined immune deficiency mice,SCID)体内畸胎瘤形成及体内全能分化特性实验对hESc生物学特性进行鉴定。结果hPFF体外培养过程中生长增殖旺盛,连续传20代以上能保持正常细胞形态学和生物学特性。经γ射线照射使其停止增殖,24 h内能较好地保持细胞活力和形态学特征,具备饲养层细胞基本条件。HS181 hESc在hPFF上传到20代仍能较好地保持未分化状态,细胞呈克隆性生长,高度表达碱性磷酸酶及Oct-4、Nanog等胚胎干细胞转录因子;悬浮法培养连续传20代的hESc可获得由3个胚层细胞所形成的类胚体(Embryoid bodies,EB)结构,可检测到CD90、Flt-1、Nestin基因的表达,证明得到的类胚体中含了3个胚层细胞,说明hESc具有体外多能干性特征。体内全能分化实验显示:将第20代的hESc接种到SCID小鼠体内,6周后可形成畸胎瘤,组织学切片分析其包含了源于全部3个胚层的各种分化细胞,直接证明其具有体内多向分化的全能性。结论hPFF可作为一种来源丰富,取材方便的人源化饲养层细胞,能有效地支持hESc体外生长。克服了目前hESc建系和体外培养过程中使用动物细胞饲养层带来的异种蛋白污染和致病微生物的危险,初步解决了hESc临床应用的生物安全性问题。 展开更多
关键词 胚胎干细胞 成纤维细胞 饲养层 人类
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辐照后的AlloMNCs诱导NK细胞体外扩增 被引量:1
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作者 马杰 赵卫东 +5 位作者 周虎 张丽娜 丁玉兰 宣恒华 桂云 金夏 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期54-57,共4页
目的探讨照射后的同种异体外周血单个核细胞(allogeneic PB-MNCs,AlloMNCs)对人自然杀伤细胞(NK)体外扩增的影响,为NK细胞的过继免疫治疗奠定基础。方法 Ficoll密度梯度离心法分离健康成人外周血单个核细胞(PBMCs),30、50和70 Gyγ射线... 目的探讨照射后的同种异体外周血单个核细胞(allogeneic PB-MNCs,AlloMNCs)对人自然杀伤细胞(NK)体外扩增的影响,为NK细胞的过继免疫治疗奠定基础。方法 Ficoll密度梯度离心法分离健康成人外周血单个核细胞(PBMCs),30、50和70 Gyγ射线照射后的AlloMNCs作为饲养细胞,分别加入上述PBMCs,在添加细胞因子的X-VIVO15TM无血清培养基中进行培养扩增,同时选择未添加饲养细胞的作为对照组;台盼蓝拒染法进行活细胞计数;流式细胞术检测CD56+CD3-NK细胞纯度;MTT法检测细胞杀伤活性。结果加入饲养细胞的PBMCs在添加了细胞因子的X-VIVO15TM无血清培养基中可培养21 d,30 Gy照射后的AlloMNCs作为饲养细胞时细胞扩增最明显,在第21天时扩增了270.3±10.4倍,CD56+CD3-NK细胞纯度由培养前的(9.7±2.4)%提高到扩增后的(56.5±7.8)%,与无饲养细胞的对照组相比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。细胞杀伤实验表明,当效靶比为10∶1时,添加30Gy照射后的AlloMNCs刺激扩增的NK细胞对K562和HO8910的杀伤率平均达到59.7%、63.2%,分别与对照组的28.3%、32.2%相比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 30 Gy照射后的AlloMNCs可作为饲养细胞在体外促进NK细胞的增殖,为NK细胞的肿瘤过继免疫治疗提供了一种简单有效的扩增NK细胞的方法。 展开更多
关键词 自然杀伤细胞 扩增 饲养细胞 照射后的AlloMNCs 免疫治疗
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SNL细胞作为饲养层细胞培养人胚胎干细胞 被引量:1
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作者 谢峰 张文杰 +3 位作者 王鸿 陆峻泓 丛笑倩 曹谊林 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期802-804,828,共4页
目的为便于人胚胎干细胞(ES细胞)的培养和研究,寻找一种建系细胞作为人ES细胞的饲养层细胞。方法以小鼠成纤维细胞系SNL细胞作为饲养层细胞培养人ES细胞株hES1。传代17代后,检测hES细胞表面特异性标志,包括碱性磷酸酶(AKP)、Oct-4、阶... 目的为便于人胚胎干细胞(ES细胞)的培养和研究,寻找一种建系细胞作为人ES细胞的饲养层细胞。方法以小鼠成纤维细胞系SNL细胞作为饲养层细胞培养人ES细胞株hES1。传代17代后,检测hES细胞表面特异性标志,包括碱性磷酸酶(AKP)、Oct-4、阶段特异性胚胎抗原(SSEA)-3和SSEA-4的表达;同时观察细胞的多向分化潜能。结果hES1细胞在SNL细胞饲养层上能持续生长。经多次传代后持续表达人ES细胞表面特异性标志,其注射于重症联合免疫缺陷小鼠皮下仍能形成畸胎瘤组织。结论SNL细胞能够作为饲养层细胞用于人ES细胞的培养,且操作更方便;该细胞已转染了耐受新霉素的基因,为将来对人ES细胞基因操作时进行药物筛选提供了可能。 展开更多
关键词 人胚胎干细胞 饲养层细胞 SNL细胞
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