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ETEC F4-F5融合基因表达及间接ELISA方法建立
被引量：
5
1
作者
张强
张雪寒
+1 位作者
何孔旺
王春凤
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第8期1312-1317,共6页
表达产肠毒素性大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)黏附素F4和F5融合蛋白,建立间接ELISA方法,旨在监测猪场ETEC感染以及疫苗免疫情况。根据GenBank中登录F4和F5基因序列,分析保守区,优化密码子,合成F4-F5串联基因,克隆入...
表达产肠毒素性大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)黏附素F4和F5融合蛋白,建立间接ELISA方法,旨在监测猪场ETEC感染以及疫苗免疫情况。根据GenBank中登录F4和F5基因序列,分析保守区,优化密码子,合成F4-F5串联基因,克隆入原核表达载体,表达重组蛋白His-F4-F5。以纯化的His-F4-F5蛋白作为检测抗原,建立检测ETEC抗体的间接EIISA方法。经酶切和DNA序列分析,成功构建重组菌BL21(pCold I-F4-F5),SDS-PAGE和Western blot分析,融合表达F4-F5相对分子质量为29 000,与ETEC高免血清发生特异性反应,条带单一。经优化筛选的间接ELISA最佳反应条件:抗原包被浓度6ng/孔,待检血清稀释比例1∶200,HRP-羊抗猪二抗的工作浓度1∶15 000,5%脱脂奶封闭l h,底物作用时间15min。本研究建立F4-F5间接ELISA方法具有特异性好、敏感性高、重复性好、稳定性强的特点,是猪场ETEC感染和疫苗免疫效果检测的有效工具,进而指导疫苗使用和新型疫苗研发。
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关键词
产肠毒索性大肠杆菌
f
4
菌毛
f
5菌毛
间接酶联免疫吸附试验
原文传递
产肠毒素大肠杆菌F4菌毛抗体间接ELISA检测方法的建立
被引量：
1
2
作者
杨绪秋
方一臻
+1 位作者
张艳艳
范红结
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第8期655-658,共4页
为建立检测产肠毒素大肠杆菌(ETEC)F4菌毛抗体的方法,本研究以纯化的重组F4菌毛蛋白作为检测抗原建立了间接ELISA方法,并对该方法的反应条件进行了优化。确定ELISA最佳条件为:包被抗原浓度为3.5 ng/孔;5%脱脂奶封闭液封闭2 h;血清最佳...
为建立检测产肠毒素大肠杆菌(ETEC)F4菌毛抗体的方法,本研究以纯化的重组F4菌毛蛋白作为检测抗原建立了间接ELISA方法,并对该方法的反应条件进行了优化。确定ELISA最佳条件为:包被抗原浓度为3.5 ng/孔;5%脱脂奶封闭液封闭2 h;血清最佳稀释度为1∶3 200、血清最佳作用时间为1 h;酶标二抗的最佳作用时间为1 h。该方法对F5、F6菌毛阳性血清和猪链球菌阳性血清无交叉反应,具有良好的特异性。其组内和组间的变异系数均小于10%,具有良好的重复性。利用建立的间接ELISA方法检测血清并采用PCR方法检测其肛拭子进行符合性试验,其总符合率为96.2%。临床检测312份未经ETEC免疫的猪血清,阳性率为9.9%。表明该方法可以用于ETEC F4菌毛抗体的临床检测。
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关键词
产肠毒素大肠杆菌
f
4
菌毛
间接酶联免疫吸附试验
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职称材料
题名
ETEC F4-F5融合基因表达及间接ELISA方法建立
被引量：
5
1
作者
张强
张雪寒
何孔旺
王春凤
机构
吉林农业大学动物科学技术学院
江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心
出处
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第8期1312-1317,共6页
基金
国家自然科学基金资助项目(31201919)
农业部"948"计划资助项目(2014-S17)
江苏省农业科技自主创新资金资助项目(CX(13)5033)
文摘
表达产肠毒素性大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)黏附素F4和F5融合蛋白,建立间接ELISA方法,旨在监测猪场ETEC感染以及疫苗免疫情况。根据GenBank中登录F4和F5基因序列,分析保守区,优化密码子,合成F4-F5串联基因,克隆入原核表达载体,表达重组蛋白His-F4-F5。以纯化的His-F4-F5蛋白作为检测抗原,建立检测ETEC抗体的间接EIISA方法。经酶切和DNA序列分析,成功构建重组菌BL21(pCold I-F4-F5),SDS-PAGE和Western blot分析,融合表达F4-F5相对分子质量为29 000,与ETEC高免血清发生特异性反应,条带单一。经优化筛选的间接ELISA最佳反应条件:抗原包被浓度6ng/孔,待检血清稀释比例1∶200,HRP-羊抗猪二抗的工作浓度1∶15 000,5%脱脂奶封闭l h,底物作用时间15min。本研究建立F4-F5间接ELISA方法具有特异性好、敏感性高、重复性好、稳定性强的特点,是猪场ETEC感染和疫苗免疫效果检测的有效工具,进而指导疫苗使用和新型疫苗研发。
关键词
产肠毒索性大肠杆菌
f
4
菌毛
f
5菌毛
间接酶联免疫吸附试验
Keywords
enterotoxigenic
Escherichia
coli
（ETEC）
f
4
pilus
f
5
pilus
indirect
ELISA
分类号
S852.61 [农业科学—基础兽医学]
原文传递
题名
产肠毒素大肠杆菌F4菌毛抗体间接ELISA检测方法的建立
被引量：
1
2
作者
杨绪秋
方一臻
张艳艳
范红结
机构
南京农业大学动物医学院
出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第8期655-658,共4页
基金
江苏省科技支撑计划(BE2013433)
文摘
为建立检测产肠毒素大肠杆菌(ETEC)F4菌毛抗体的方法,本研究以纯化的重组F4菌毛蛋白作为检测抗原建立了间接ELISA方法,并对该方法的反应条件进行了优化。确定ELISA最佳条件为:包被抗原浓度为3.5 ng/孔;5%脱脂奶封闭液封闭2 h;血清最佳稀释度为1∶3 200、血清最佳作用时间为1 h;酶标二抗的最佳作用时间为1 h。该方法对F5、F6菌毛阳性血清和猪链球菌阳性血清无交叉反应,具有良好的特异性。其组内和组间的变异系数均小于10%,具有良好的重复性。利用建立的间接ELISA方法检测血清并采用PCR方法检测其肛拭子进行符合性试验,其总符合率为96.2%。临床检测312份未经ETEC免疫的猪血清,阳性率为9.9%。表明该方法可以用于ETEC F4菌毛抗体的临床检测。
关键词
产肠毒素大肠杆菌
f
4
菌毛
间接酶联免疫吸附试验
Keywords
enterotoxigenic
Escherichia
coli
（ETEC）
f
4
pilus
indirect
ELISA
分类号
S852.61 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
ETEC F4-F5融合基因表达及间接ELISA方法建立
张强
张雪寒
何孔旺
王春凤
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016
5
原文传递
2
产肠毒素大肠杆菌F4菌毛抗体间接ELISA检测方法的建立
杨绪秋
方一臻
张艳艳
范红结
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014
1
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