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胶体金免疫层析法快速检测鼠疫耶尔森菌F1抗体 被引量:17
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作者 胡孔新 王静 +7 位作者 周蕾 闫中强 李伟 姚李四 牛春莉 李瑾 马颖 陈维娜 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期198-201,共4页
目的建立检测鼠疫耶尔森菌F1抗体的胶体金标记免疫层析方法。方法胶体金标记纯化鼠疫F1抗原,双抗原夹心法原理制成免疫层析检测试纸条,并对兔、羊、人和黄鼠血清进行检测评价。结果用80份不同动物种属的阴性血清进行检测,未出现非特异... 目的建立检测鼠疫耶尔森菌F1抗体的胶体金标记免疫层析方法。方法胶体金标记纯化鼠疫F1抗原,双抗原夹心法原理制成免疫层析检测试纸条,并对兔、羊、人和黄鼠血清进行检测评价。结果用80份不同动物种属的阴性血清进行检测,未出现非特异性反应,对5份恢复期病人血清、13份免疫兔血清和2份免疫羊血清检测也取得阳性结果,对于8份I HA临界阳性(滴度1∶20)的达乌尔黄鼠血清检出阳性6份。结论建立了可以用于现场快速检测鼠疫F1抗体的胶体金免疫层析方法。 展开更多
关键词 鼠疫菌 f1抗原 胶体金 免疫层析法
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鼠疫快速诊断技术及其应用研究 被引量:14
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作者 于国林 王鹏 +8 位作者 尹家祥 杜春红 石丽媛 郭英 陈平 吴明寿 黄鹏 钟佑宏 董珊珊 《地方病通报》 2006年第3期1-10,94,F0003,共12页
目的寻找和确定引起特异性不足的因素,实施科学的对策加以解决,真正实现鼠疫的快速诊断技术并以此为基础构建新一代的检测技术。方法(1)研制高质量的鼠疫F1抗原的单克隆抗体,考虑到位点问题要求尽可能多的、针对不同位点的高效价瘤株,... 目的寻找和确定引起特异性不足的因素,实施科学的对策加以解决,真正实现鼠疫的快速诊断技术并以此为基础构建新一代的检测技术。方法(1)研制高质量的鼠疫F1抗原的单克隆抗体,考虑到位点问题要求尽可能多的、针对不同位点的高效价瘤株,构建稳定的“抗体源;”(2)利用获得的高效瘤株通过纯系小鼠生产抗体或用无蛋白细胞培基生产抗体;(3)对抗体进行纯化并使其达到“免疫纯水平”并建立提取、纯化工艺,最终建立稳定的低成本的无交叉“抗体源;”(4)纯化抗原至“免疫纯水平”或“电泳纯水平”,建立提取、纯化工艺,最终建立稳定低成本的无交叉“抗原源;”(5)对新一代快速检测技术进行实验室和现场评价,对特异性即实验的准确性做出评价。结果(1)确定了影响鼠疫免疫学诊断技术特别是间接红细胞凝集试验(IHA及R IHA)特异性不足的两大因素:a.技术落后,试验中采用的载体不适导致了相当数量的假性凝集;b.技术方法中使用的抗原、抗体严重不纯,尤其是制备抗体时免疫动物“自身抗体”的掺入是造成交叉反应更重要的因素;(2)研制并开发出分泌抗鼠疫F1单克隆抗体(F1-M cAb)的杂交瘤株164株,并从其中筛选出针对不同位点的高效瘤株6株,经活性鉴定及配对试验形成了4个组合,具高效价和高活性;(3)使用制备电泳技术将鼠疫F1抗原提纯至电泳纯水平;(4)将鼠疫F1-M cAb提纯至免疫纯水平;(5)引进、消化了具有先进水平的胶体金标免疫层析技术;(6)使用电泳纯的鼠疫F1抗原及免疫纯的鼠疫F1-M cAb构建了能自人和动物血液中直接检测鼠疫特异抗体的金标免疫层析技术(G ICA)和能自人和动物脏器或穿剌物中直接检测鼠疫F1抗原或鼠疫病原的反向金标免疫层析技术(RG ICA);(7)由于采用了纯化的抗原、抗体,提高了标记效果,其敏感性超过IHA和R IHA,阳性检出率在排除了假� 展开更多
关键词 鼠疫 鼠疫f1抗原(f1-Ag) 鼠疫f1单克隆抗体(f1-McAb) 杂交瘤株 纯化 电泳纯 免疫纯 胶体金标记免疫层析技术(GICA/RGICA) 敏感性 特异性 交叉反应
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胶体金免疫层析法快速诊断鼠疫的实验研究 被引量:13
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作者 王鹏 杜春红 +9 位作者 郭英 尹家祥 石丽媛 陈平 唐雪 钟佑宏 黄鹏 吴明寿 董兴齐 于国林 《地方病通报》 2006年第1期1-3,5,共4页
目的建立一种快速、简易的检测鼠疫F1抗原的胶体金免疫层析法(G ICA)。方法采用直径为20nm胶体金颗粒,标记F1单克隆抗体,并将标记物以6μL/cm喷于玻璃纤维;将另1株F1单克隆抗体与羊抗鼠IgG以1μL/cm喷线固定于硝酸纤维素膜上,装配后以4... 目的建立一种快速、简易的检测鼠疫F1抗原的胶体金免疫层析法(G ICA)。方法采用直径为20nm胶体金颗粒,标记F1单克隆抗体,并将标记物以6μL/cm喷于玻璃纤维;将另1株F1单克隆抗体与羊抗鼠IgG以1μL/cm喷线固定于硝酸纤维素膜上,装配后以4mm/条切割制成免疫层析检测试条。分别用粗制F1抗原和EV菌对该试纸条的敏感性进行测定,同时用44株鼠疫近缘菌及昆明小鼠、黄胸鼠、褐家鼠、大足鼠的正常血清等标本进行特异性检测。结果本试纸条可在15m in之内完成实验,检测粗制F1抗原的浓度可达0.5ng/mL,最小检出EV菌菌量为10万个;本方法的特异性为100%。结论G ICA检测鼠疫F1抗原特异性强、灵敏度高、简便快速,无需特殊仪器设备,有广泛应用价值。 展开更多
关键词 鼠疫 胶体金 免疫层析 f1抗原
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分泌抗鼠疫耶尔森菌F1抗原单克隆抗体杂交瘤株的建立 被引量:9
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作者 尹家祥 陈平 +2 位作者 杜春红 董兴齐 于国林 《中国地方病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期566-568,共3页
目的应用杂交瘤技术,制备分泌抗鼠疫F1抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞株。方法用鼠疫菌F1抗原免疫雌性BALB/c小鼠,检测小鼠血清中的F1抗体,选抗体滴度最高的小鼠用于细胞融合,融合前3天F1抗原经腹腔注射加强免疫1次,然后取其脾脏细胞与处... 目的应用杂交瘤技术,制备分泌抗鼠疫F1抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞株。方法用鼠疫菌F1抗原免疫雌性BALB/c小鼠,检测小鼠血清中的F1抗体,选抗体滴度最高的小鼠用于细胞融合,融合前3天F1抗原经腹腔注射加强免疫1次,然后取其脾脏细胞与处于对数生长期的SP2/0骨髓瘤细胞混合,50%的PEG作为细胞融合剂,HAT培养液选择培养融合后的细胞,间接ELISA法检测细胞培养上清中的F1抗体,阳性杂交瘤细胞用有限稀释法进行克隆及再克隆。结果获得共计100余株分泌F1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,3株进行了4次克隆化,经8个月保存后抗体分泌稳定。结论应用杂交瘤技术,在云南首次成功制备了3株能稳定分泌抗鼠疫杆菌F1抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞株,建立了杂交瘤技术的实验程序。 展开更多
关键词 耶尔森菌 鼠疫 f1抗原 杂交瘤细胞 单克隆抗体
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鼠疫菌免疫胶体金快速检测方法的建立 被引量:8
5
作者 朱虹 张春华 +3 位作者 檀华 何君 赵斌 端青 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期253-255,共3页
目的利用免疫胶体金技术建立一种简便、快速并适用于基层人员使用的鼠疫菌抗原检测方法。方法将抗鼠疫菌F1抗原的抗体致敏硝酸纤维素膜,用于捕获鼠疫抗原,然后用免疫胶体金颗粒进行标记。结果应用鼠疫菌免疫胶体金快速检测法最低可检出... 目的利用免疫胶体金技术建立一种简便、快速并适用于基层人员使用的鼠疫菌抗原检测方法。方法将抗鼠疫菌F1抗原的抗体致敏硝酸纤维素膜,用于捕获鼠疫抗原,然后用免疫胶体金颗粒进行标记。结果应用鼠疫菌免疫胶体金快速检测法最低可检出不同鼠疫菌(EV和Evp株)1.56×105CFU/ml,检测鼠疫菌F1抗原最低可检出1ng/ml,与鼠疫反向间接血凝法的检测结果一致;并且不与假结核小肠结肠炎等耶尔森菌以及其他相关细菌发生交叉反应。结论鼠疫菌免疫胶体金快速检测法具有较好的特异性、敏感性和简便快速的特点。 展开更多
关键词 鼠疫菌 鼠疫菌f1抗原 胶体金 免疫层析
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鼠疫耶尔森氏菌F1抗原在酿酒酵母中的表达及鉴定 被引量:6
6
作者 刘斌 郑文岭 +1 位作者 邓海 马文丽 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期425-427,431,共4页
目的:构建含鼠疫杆菌F1抗原结构基因caf1的重组载体,并在酿酒酵母中表达。方法:将鼠疫杆菌的F1抗原结构基因caf1插入到pHSS6mTn3xHA/lacZ质粒中,构建重组载体pHSS6mTn3xHA/lacZcaf1。将重组载体经NotI酶切后,以醋酸锂法转化酿酒酵母,将... 目的:构建含鼠疫杆菌F1抗原结构基因caf1的重组载体,并在酿酒酵母中表达。方法:将鼠疫杆菌的F1抗原结构基因caf1插入到pHSS6mTn3xHA/lacZ质粒中,构建重组载体pHSS6mTn3xHA/lacZcaf1。将重组载体经NotI酶切后,以醋酸锂法转化酿酒酵母,将转化的酿酒酵母接种于SCUra平板上筛选阳性克隆,表达产物用SDSPAGE和Westernblot进行鉴定。结果:经SDSPAGE鉴定和Westernblot分析表明,转化的酿酒酵母可表达鼠疫杆菌F1表面抗原蛋白。结论:成功地构建了重组载体pHSS6mTn3xHA/lacZcaf1,并在酿酒酵母中稳定表达鼠疫杆菌F1表面抗原,为制备可经消化道途径免疫的鼠疫杆菌基因疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 鼠疫杆菌 f1抗原 酿酒酵母 表达
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鼠疫菌F1抗体/抗原酶联免疫诊断试剂盒的应用评价 被引量:6
7
作者 杜春红 王鹏 +2 位作者 常娅莉 王秉翔 宋志忠 《微生物学免疫学进展》 2014年第4期21-25,共5页
目的对兰州生物制品研究所有限责任公司研制的鼠疫菌F1抗体酶联免疫诊断试剂盒和鼠疫菌F1抗原酶联免疫诊断试剂盒进行临床应用评价。方法采用双抗原/抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)、间接血球凝集试验(IHA)、胶体金免疫层析试验(GICA)... 目的对兰州生物制品研究所有限责任公司研制的鼠疫菌F1抗体酶联免疫诊断试剂盒和鼠疫菌F1抗原酶联免疫诊断试剂盒进行临床应用评价。方法采用双抗原/抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)、间接血球凝集试验(IHA)、胶体金免疫层析试验(GICA)3种方法的诊断试剂对比检测云南省地方病防治所中心实验室保藏的和现场采集的血清样品和脏器样品,对血清样品做鼠疫菌F1抗体检测,对脏器样品做鼠疫菌F1抗原检测。结果在358份血清样品中,ELISA试剂检出F1抗体阳性52份(14.52%),IHA试剂检出阳性37份(10.34%),GICA试剂检出阳性45份(12.57%)。ELISA与IHA试剂的符合率为95.23%,与GICA试剂的符合率为96.92%。经统计学χ2检验,ELISA试剂检出F1抗体阳性率高于IHA试剂(χ2=11.53,P=0.000 7),与GICA试剂检出的差异无统计学意义(χ2=3.27,P=0.070 4)。进一步分析滴度差值频数,ELISA试剂检测人血清的敏感性高于IHA试剂的样品占87.5%。在117份脏器样品中,3种试剂均检出F1抗原阳性15份(12.82%),符合率100%。滴度差值频数比较,ELISA试剂检测敏感性高于反向间接血球凝集试验(RIHA)试剂的样品为78.57%。结论兰州生物制品研究所有限责任公司研制的鼠疫菌F1抗体酶联免疫诊断试剂盒和鼠疫菌F1抗原酶联免疫诊断试剂盒性质特异,其敏感性优于IHA试剂盒和GICA试剂条,值得在鼠疫的监测和快速诊断中推广应用。 展开更多
关键词 鼠疫 鼠疫菌 f1抗原 抗体 酶联免疫诊断试剂盒 评价
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十株不同鼠疫菌苗株的质粒图型和重要抗原特性的比较研究 被引量:6
8
作者 任士明 朱凤云 《中国地方病学杂志》 CAS CSCD 1990年第3期145-149,共5页
研究十株不同鼠疫菌苗株(包括变异株)的质粒图型和它们与重要抗原特性的关系的结果表明:除了45Mdal 质粒和6Mdal 质粒分别与菌株的Ca^(++)依赖特性和鼠疫菌素1产生有关之外,鼠疫菌的大质粒(52-91Mdal)可能在 F_1抗原的合成中起调控作用... 研究十株不同鼠疫菌苗株(包括变异株)的质粒图型和它们与重要抗原特性的关系的结果表明:除了45Mdal 质粒和6Mdal 质粒分别与菌株的Ca^(++)依赖特性和鼠疫菌素1产生有关之外,鼠疫菌的大质粒(52-91Mdal)可能在 F_1抗原的合成中起调控作用。根据我国各鼠疫疫源地的菌株类型的不同,在用菌苗预防不同地区的鼠疫时,考虑菌苗株的类型可能是有益的。 展开更多
关键词 鼠疫菌 质粒图型 抗原 鼠疫菌素1
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鼠疫菌F1抗原双抗体夹心ELISA诊断试剂盒的研制 被引量:5
9
作者 常娅莉 席仲兴 +10 位作者 吴智远 徐秉臣 彭林锋 胡丽娜 热娜 雷刚 韩少波 张正雷 卜培英 袁浩嘉 王秉翔 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2013年第11期1632-1636,共5页
目的研制鼠疫菌F1抗原双抗体夹心ELISA诊断试剂盒,并进行验证。方法用鼠疫菌F1抗原免疫家兔制备抗血清,经50%饱和硫酸铵盐析2次后,再经Sephacryl S-300凝胶柱层析纯化,作为包被抗体;制备鼠疫菌F1抗原单克隆抗体腹水,并进行纯化,... 目的研制鼠疫菌F1抗原双抗体夹心ELISA诊断试剂盒,并进行验证。方法用鼠疫菌F1抗原免疫家兔制备抗血清,经50%饱和硫酸铵盐析2次后,再经Sephacryl S-300凝胶柱层析纯化,作为包被抗体;制备鼠疫菌F1抗原单克隆抗体腹水,并进行纯化,用HRP标记单抗,作为酶标抗体;建立鼠疫菌F1抗原双抗体夹心ELISA检测方法,连续制备3批诊断试剂盒,并建立内部质控品。对试剂盒进行板内板间精密性、灵敏度、线性范围、特异性、重复性、准确性和稳定性验证。结果制备的试剂盒检测精密性参比品的板内变异系数为5.2%,板间变异系数为8.23%;试剂盒的线性范围为3.91~62.5ng/ml,最低检测限为3.0ng/ml;试剂盒检测鼠疫菌菌液的结果为阳性,而与近缘假结核耶尔森菌无交叉反应;试剂盒检测高、中、低3种浓度Fl抗原含量的变异系数为4.54%~8.4%,回收率在104%-108%之间;试剂盒稳定性良好,有效期至少为1年。结论成功制备了鼠疫菌F1抗原双抗体夹心ELISA诊断试剂盒,为鼠疫的临床诊断及流行病学监测提供了一种快速检测手段,也为新型鼠疫组分疫苗F1抗原含量的检测提供了方法。 展开更多
关键词 鼠疫耶尔森菌 f1抗原 单克隆抗体 酶联免疫吸附测定
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鼠疫组分疫苗F1抗原、rV抗原含量的检测及其质量控制 被引量:4
10
作者 常娅莉 吴智远 +6 位作者 魏东 韩少波 胡丽娜 焦磊 卜培英 王国治 王秉翔 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2012年第10期1254-1257,共4页
目的采用双抗体夹心ELISA法检测鼠疫组分疫苗中F1和rV的抗原含量。方法利用F1、rV抗原单克隆抗体,对鼠疫组分疫苗原液进行抗原鉴别试验;分别应用F1、rV抗原双抗体夹心ELISA法对疫苗原液进行抗原定量检测;验证A(l OH)3佐剂吸附抗原的完全... 目的采用双抗体夹心ELISA法检测鼠疫组分疫苗中F1和rV的抗原含量。方法利用F1、rV抗原单克隆抗体,对鼠疫组分疫苗原液进行抗原鉴别试验;分别应用F1、rV抗原双抗体夹心ELISA法对疫苗原液进行抗原定量检测;验证A(l OH)3佐剂吸附抗原的完全性;将疫苗成品于4℃放置18个月,分别于1和18个月时取样,用建立的双抗体夹心ELISA法检测F1和rV抗原含量,分析抗原的稳定性;对3批鼠疫菌rV抗原原液3步纯化工艺进行验证。结果鼠疫组分疫苗原液中的F1和rV抗原具有良好的反应原性;用建立的双抗体夹心ELISA法检测4批F1和rV抗原原液中F1和rV抗原的含量与Lowry法检测结果的误差均在±20%以内;4批鼠疫组分疫苗离心后的上清液中均未检测到F1和rV抗原,表明A(lOH)3佐剂吸附抗原完全;4℃保存18个月,疫苗中的F1和rV抗原含量稳定;3批鼠疫菌rV抗原原液经阴离子交换层析、疏水层析、凝胶过滤层析3步纯化,rV抗原在纯度增加的同时,抗原含量也增加。结论已建立的F1、rV抗原双抗体夹心ELISA法可用于鼠疫组分疫苗中F1和rV抗原的定量检测。 展开更多
关键词 鼠疫组分疫苗 f1抗原 rV抗原 双抗体夹心ELISA法
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鼠疫耶尔森菌F1抗原制备中超滤工艺的优化
11
作者 李朋伟 王婷 +4 位作者 孙田华 蒋保余 张光磊 马维民 焦磊 《微生物学免疫学进展》 CAS 2024年第5期43-47,共5页
目的通过单因素实验(experiment of single factor)和响应面分析法(response surface methodology)优化鼠疫耶尔森菌(Yersinia pestis)F1抗原纯化过程中的超滤工艺。方法以单因素试验优化鼠疫菌F1抗原超滤浓缩工艺,研究跨膜压、进液流... 目的通过单因素实验(experiment of single factor)和响应面分析法(response surface methodology)优化鼠疫耶尔森菌(Yersinia pestis)F1抗原纯化过程中的超滤工艺。方法以单因素试验优化鼠疫菌F1抗原超滤浓缩工艺,研究跨膜压、进液流速和料液质量浓度对膜通量的影响;采用Box-behnken中心设计法设计三因素两水平的响应面实验,建立二次回归模型,研究氨氮含量、料液质量浓度和跨膜压3个因素对F1抗原超滤过程中氨氮去除效率的影响,以优化鼠疫菌F1抗原超滤除盐工艺。结果单因素试验中,以进液速度300 mL/min和500 mL/min分别进行试验,跨膜压分别升至20.0 Psi和40.0 Psi后,膜通量不再明显增加;当料液蛋白浓度<0.30 g/L时,料液浓度升高不会对膜通量产生影响,料液蛋白浓度>0.30 g/L时,随着料液浓度升高,膜通量随之降低。响应面超滤除盐试验中,料液质量浓度和跨膜压对氨氮去除效率均有显著影响(P均<0.05),并且两者之间有交互作用。结论鼠疫菌F1抗原纯化过程中超滤工艺的应用,及其工艺条件的优化,可以显著节省F1抗原的纯化制备时间,同时也更易于生产规模的放大。 展开更多
关键词 鼠疫耶尔森菌 f1抗原 超滤 响应面分析法 膜通量 超滤纯化 工艺优化
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辣根过氧化物酶标记不同表型鼠疫F1单克隆抗体的效果观察 被引量:3
12
作者 尹家祥 唐雪 +3 位作者 陈平 杜春红 董兴齐 于国林 《中国地方病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期596-597,共2页
目的观察用辣根过氧化物酶(HRP)标记4种鼠疫F1抗体的效果。方法使用过碘酸钠改良法制备酶结合物,酶标抗体的效价和最适工作浓度用双抗体夹心法测定。结果3株鼠疫F1单克隆抗体中B12标记成功;鼠疫γ球蛋白标记效果较鼠疫F1单克隆抗体B12... 目的观察用辣根过氧化物酶(HRP)标记4种鼠疫F1抗体的效果。方法使用过碘酸钠改良法制备酶结合物,酶标抗体的效价和最适工作浓度用双抗体夹心法测定。结果3株鼠疫F1单克隆抗体中B12标记成功;鼠疫γ球蛋白标记效果较鼠疫F1单克隆抗体B12差。结论过碘酸钠改良法制备辣根过氧化物酶标记鼠疫F1单克隆抗体B12效果优于另外3种鼠疫F1抗体。 展开更多
关键词 鼠疫 f1抗原 单克隆抗体 过碘酸钠改良法
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鼠疫耶尔森菌F1抗原的纯化方法改进及其免疫原性的评价 被引量:4
13
作者 祁芝珍 赵海红 +11 位作者 代瑞霞 张青雯 任玲玲 杨永海 李存香 吴海莲 何建 魏荣杰 王虎 杨瑞馥 王祖郧 王效义 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期602-606,共5页
目的建立从减毒鼠疫菌培养物中提取天然F1抗原的方法,评价F1抗原对鼠疫的免疫保护效果。方法通过用玻璃珠裂解菌体替代有机溶剂的方法,结合饱和硫酸铵沉淀和凝胶过滤的方法从鼠疫菌培养物中纯化出天然F1抗原。将F1抗原吸附到25%氢氧... 目的建立从减毒鼠疫菌培养物中提取天然F1抗原的方法,评价F1抗原对鼠疫的免疫保护效果。方法通过用玻璃珠裂解菌体替代有机溶剂的方法,结合饱和硫酸铵沉淀和凝胶过滤的方法从鼠疫菌培养物中纯化出天然F1抗原。将F1抗原吸附到25%氢氧化铝佐剂中,肌肉注射免疫BALB/c小鼠,于初次免疫后第18周皮下攻毒10^4 CFU活鼠疫菌141强毒株。结果一次免疫的两个剂量组之间产生的抗体滴度差异无统计学意义,而加强免疫的两个剂量组中,F1-40μg剂量组产生的抗体滴度明显高于F1-20μg剂量组。F1抗原免疫的小鼠全部存活,而且健康状况良好,对照组小鼠全部死亡。结论本研究提供了一种简单、有效和便于大规模提取F1抗原的方法。提取的F1抗原具有较高的免疫原性,可作为鼠疫亚单位疫苗的重要抗原组分用于鼠疫亚单位疫苗的研制。 展开更多
关键词 鼠疫耶尔森菌 f1抗原 免疫保护
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鼠疫耶尔森氏菌核酸疫苗的构建及其免疫学评价 被引量:3
14
作者 韩岳 王希良 +5 位作者 何凤田 摆茹 董梅 赵光宇 王英 曾政 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期474-477,481,共5页
目的获得鼠疫F1和V抗原的重组质粒pVAX1/F1和pVAX1/V,并比较其诱导的特异性免疫应答的能力。方法PCR扩增鼠疫菌F1和V编码基因,分别与pGEMT连接测序,构建pVAX1/F1和pVAX1/V重组质粒,转染COS7细胞。用细胞免疫化学方法鉴定目的蛋白的表达... 目的获得鼠疫F1和V抗原的重组质粒pVAX1/F1和pVAX1/V,并比较其诱导的特异性免疫应答的能力。方法PCR扩增鼠疫菌F1和V编码基因,分别与pGEMT连接测序,构建pVAX1/F1和pVAX1/V重组质粒,转染COS7细胞。用细胞免疫化学方法鉴定目的蛋白的表达,重组质粒加GMCSF免疫Balb/c小鼠,观察免疫效果。结果F1和V均在COS7细胞中表达;免疫鼠体内产生特异性抗体,pVAX1/V所诱导的抗体水平比pVAX1/F1高;通过抗体亚型分析、细胞因子和CD分子等指标的测定表明所构建DNA疫苗以诱发Th1型免疫为主。结论成功构建重组真核表达质粒pVAX1/F1和pVAX1/V,并且均具有诱导特异性细胞免疫和体液免疫应答的能力,为鼠疫菌新型疫苗研制奠定了基础。 展开更多
关键词 鼠疫杆菌 f1抗原 V抗原 DNA疫苗 免疫应答
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首例入境集装箱中发现疑似鼠疫感染死鼠的检测 被引量:3
15
作者 胡群 童淑梅 +1 位作者 马思杰 郭利平 《中国国境卫生检疫杂志》 CAS 2011年第1期17-18,62,共3页
目的通过对入境集装箱中发现的死鼠进行实验室检测,加强口岸对入境啮齿动物携带鼠疫杆菌的监测力度。方法分别用胶体金和PCR方法对入境集装箱中发现的死鼠进行鼠疫杆菌检测。结果该样本鼠疫杆菌F1抗原阳性,pla基因和fra基因PCR扩增均为... 目的通过对入境集装箱中发现的死鼠进行实验室检测,加强口岸对入境啮齿动物携带鼠疫杆菌的监测力度。方法分别用胶体金和PCR方法对入境集装箱中发现的死鼠进行鼠疫杆菌检测。结果该样本鼠疫杆菌F1抗原阳性,pla基因和fra基因PCR扩增均为阳性,判定该样本为疑似鼠疫杆菌感染。结论在口岸一线加强对入境鼠类携带鼠疫杆菌检测具有重要意义。同时,应不断加强口岸公共卫生核心能力建设,加强公共卫生实验室建设及重大疫情检测技术储备。 展开更多
关键词 鼠疫杆菌 f1抗原 PCR 检测
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应用胶体金层析法快速检测鼠疫耶尔森氏菌F1抗原 被引量:3
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作者 李珺 江凌晓 +3 位作者 张文炳 彭亮 陈清 曹虹 《热带医学杂志》 CAS 2009年第4期372-374,共3页
目的研究胶体金免疫层析法用于鼠疫耶尔森菌的快速诊断。方法采用胶体金免疫层析测试条,加入待测鼠疫耶尔森菌液及对照菌液。结果金标免疫层析试纸条在检测中并未出现交叉反应,特异性达到100%,显示其在鼠疫耶尔森菌的检测中特异性较好,... 目的研究胶体金免疫层析法用于鼠疫耶尔森菌的快速诊断。方法采用胶体金免疫层析测试条,加入待测鼠疫耶尔森菌液及对照菌液。结果金标免疫层析试纸条在检测中并未出现交叉反应,特异性达到100%,显示其在鼠疫耶尔森菌的检测中特异性较好,结果可靠。同时该试纸条敏感性亦较高,少量细菌或抗原就可得到阳性结果,检测效果好。结论该方法简便、快速、敏感、特异性好,适合于公共突发卫生事件中的鼠疫快速诊断和现场鼠疫监测。 展开更多
关键词 耶尔森菌 f1抗原 胶体金免疫层析 特异性 敏感性
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鼠疫菌检测技术在鼠疫实际监测工作的应用效果分析 被引量:3
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作者 吴斌 张宏 +7 位作者 苗克军 葛亚俊 郭丽民 徐大琴 达文平 陈国娟 穆洮霞 席进孝 《中国地方病防治》 2010年第6期441-443,共3页
目的评价鼠疫菌检测技术在鼠疫实际监测工作的应用效果。方法分别用细菌培养、反向血凝、金标、PCR和ELISA方法检测染疫动物脏器材料F1抗原,比较了不同方法在实际监测工作中的差异。结果细菌培养、ELISA、R IHA、PCR、金标阳性检出率分... 目的评价鼠疫菌检测技术在鼠疫实际监测工作的应用效果。方法分别用细菌培养、反向血凝、金标、PCR和ELISA方法检测染疫动物脏器材料F1抗原,比较了不同方法在实际监测工作中的差异。结果细菌培养、ELISA、R IHA、PCR、金标阳性检出率分别为4.68(、8.19(、15.79(、15.20(、14.62(;以标准值为对照,敏感度和特异度分别为细菌培养:敏感度36.4%、特异度100%;ELISA敏感度63.6%、特异度100%;R IHA敏感度72.7%、特异度92.6%;PCR敏感度95.5%、特异度96.6%;金标敏感度81.8%、特异度95.3%。结论细菌培养在实际应用中,受到材料腐败程度影响较大,但能培养出鼠疫菌。反向血凝在应用中以其方便、迅速且成本较低,在大范围的疫源监测中起到重要作用。胶体金法在应用中简单、准确、便捷,适用于现场操作。PCR技术在非典型鼠疫菌的检测中意义重大[1]。ELISA技术方便、快捷、特异性强,但对材料要求较高。 展开更多
关键词 鼠疫 f1抗原 检测 效果分析
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鼠疫F1单克隆抗体建株过程中的动物免疫 被引量:3
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作者 尹家祥 于国林 +2 位作者 陈平 杜春红 唐雪 《地方病通报》 2005年第4期4-6,共3页
目的探讨在建立抗鼠疫F1抗原的单克隆抗体杂交瘤株的过程中抗原免疫的剂量及免疫方法.方法采用F1抗原常规免疫、改良的F1抗原脾内注射免疫以及EV菌免疫3种方法免疫6~8周龄,体重为10~20g,健康的雌性BALB/c小鼠,并用间接ELISA法检测尾... 目的探讨在建立抗鼠疫F1抗原的单克隆抗体杂交瘤株的过程中抗原免疫的剂量及免疫方法.方法采用F1抗原常规免疫、改良的F1抗原脾内注射免疫以及EV菌免疫3种方法免疫6~8周龄,体重为10~20g,健康的雌性BALB/c小鼠,并用间接ELISA法检测尾血中的抗体. 结果在常规免疫中,200μg 组和100μg组免疫效果优于50μg组,而200μg组和100μg组免疫效果基本一致;改良的F1抗原脾内注射免疫,血中抗体效价较高;EV菌免疫的效果不理想. 结论用F1抗原常规免疫小鼠,免疫剂量用100μg/只较为合适;若要缩短免疫时间,采用改良的脾内注射免疫法是理想的选择. 展开更多
关键词 鼠疫f1抗原 动物免疫 单克隆抗体
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预测鼠疫耶尔森氏菌F1抗原的CTL表位 被引量:3
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作者 王文敬 张艳玲 李明 《国外医学(医学地理分册)》 CAS 2009年第3期120-122,128,共4页
目的预测鼠疫菌F1抗原的CTL表位,为鼠疫菌表位疫苗研究奠定基础,并为绘制鼠疫菌抗原表位图谱提供一种可行的研究手段。方法采用nHLAPred网络预测法对F1抗原的CTL表位进行预测。结果预测得到了鼠疫菌F1抗原的特异性CTL优势表位:120~128 ... 目的预测鼠疫菌F1抗原的CTL表位,为鼠疫菌表位疫苗研究奠定基础,并为绘制鼠疫菌抗原表位图谱提供一种可行的研究手段。方法采用nHLAPred网络预测法对F1抗原的CTL表位进行预测。结果预测得到了鼠疫菌F1抗原的特异性CTL优势表位:120~128 SPKVNGENL和153~161 KLAAGKYTD。结论利用nHLAPred法,并结合其他T细胞表位预测方法,可得到抗原的CTL表位,准确率较高,可作为表位图谱绘制的有效工具。 展开更多
关键词 鼠疫菌 f1抗原 CTL表位 预测
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酶免疫染色技术快速检测鼠疫F1抗原的应用效果评价 被引量:2
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作者 白雪薇 刘合智 +5 位作者 史献明 王海峰 杨顺林 周松 胡乐乐 李玉贵 《中国媒介生物学及控制杂志》 CAS CSCD 2016年第2期184-185,189,共3页
目的评价酶免疫染色法检测鼠疫F1抗原效果。方法通过辣根过氧化酶标记鼠疫F1单克隆抗体(HRP-F1Mc Ab)免疫染色法,检测266只强毒鼠疫耶尔森菌(鼠疫菌)感染鼠脏器标本和207只对照啮齿动物标本,同时用反向间接血凝试验(RIHA)微量法和胶体... 目的评价酶免疫染色法检测鼠疫F1抗原效果。方法通过辣根过氧化酶标记鼠疫F1单克隆抗体(HRP-F1Mc Ab)免疫染色法,检测266只强毒鼠疫耶尔森菌(鼠疫菌)感染鼠脏器标本和207只对照啮齿动物标本,同时用反向间接血凝试验(RIHA)微量法和胶体金纸上色谱法(RGICA)进行对比。结果 HRP-F1Mc Ab免疫染色法和RIHA检测一致率为98.52%,Kappa值为0.970,阳性检出率差异有统计学意义(χ2=5.140,P=0.016);HRP-F1Mc Ab免疫染色和RGICA检测一致率为98.50%,Kappa值为0.901,阳性检出率差异无统计学意义(χ2=0.250,P=0.625)。HRP-F1Mc Ab免疫染色法灵敏度为100%,特异度为97.02%,阳性预测值为97.14%,阴性预测值为100%,约登指数为0.970。结论鼠疫F1抗原免疫染色法敏感特异、快速简单,在鼠疫早期快速诊断中有应用价值。 展开更多
关键词 鼠疫f1单克隆抗体 鼠疫f1抗原 酶免疫染色法
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