鸡新城疫病毒F基因和鸡IL-2重组DNA疫苗的构建 被引量：53

1

作者 姜永厚 陈奖励 +3 位作者 宋秀龙 童光志 孔宪刚 刘忠贵 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期81-84,共4页

利用已克隆到的新城疫D2 6株F基因和鸡IL_2基因 ,经过载体改建 ,将他们共同克隆于真核表达质粒pCDNA3上 ,经酶切分析、PCR鉴定证实成功构建了共表达鸡新城疫病毒F基因和鸡IL_2的重组质粒 。

关键词 新城疫 f基因 鸡IL-2 重组dna疫苗

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鸡新城疫病毒HeB02分离株F基因的克隆及其DNA疫苗的研究 被引量：14

2

作者 李楠 孙一敏 赵宝华 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期445-450,共6页

根据GenBank报道的鸡新城疫病毒F基因序列设计了一对引物,以鸡新城疫病毒HeB02分离株基因组为模板,通过RT-PCR扩增出了1·66kb左右的F基因片段,序列分析表明HeB02株F基因与国内标准强毒株F48E9及弱毒疫苗La Sota和Clone30的F基因核... 根据GenBank报道的鸡新城疫病毒F基因序列设计了一对引物,以鸡新城疫病毒HeB02分离株基因组为模板,通过RT-PCR扩增出了1·66kb左右的F基因片段,序列分析表明HeB02株F基因与国内标准强毒株F48E9及弱毒疫苗La Sota和Clone30的F基因核苷酸序列的同源性分别为88·1%、84·9%和83·8%。将HeB02株F基因插入真核表达载体pVAX1中,构建了真核表达质粒pSV-F,通过脂质体转染COS-7细胞,SDS-PAGE分析可见表达的特异蛋白条带;Western blot、ELISA和中和试验检测结果表明:真核表达的蛋白与抗新城疫病毒的抗体发生特异性反应,说明F蛋白具有很好的免疫原性。采用活体电击法以真核表达质粒pSV-F免疫3周龄SPF鸡,剂量为50μg/只,3周后加强免疫1次,5周后以100倍鸡胚感染剂量(EID)的F基因同源病毒对所有鸡进行攻毒,攻毒前后每周分别以喉拭子进行病毒分离和HI效价测定。结果显示对照组在攻毒前一直没有检测到抗体效价,攻毒后检测效价为3·0log2±1·40,并且于攻毒后第9天全部死亡;活疫苗组和实验组免疫后第2周检测到抗体效价,第5周最高,HI效价分别为8·3log2±1·30和7·2log2±1·23,攻毒1周后HI效价分别达9·8log2±1·55和8·9log2±1·77,极显著高于对照组(P<0·01)。免疫组未分离到新城疫病毒,对照组全部分离到新城疫病毒。表明所构建的F基因真核表达质粒可作为候选基因疫苗诱导鸡产生免疫保护反应。 展开更多

关键词 新城疫病毒 f基因 克隆和表达 dna疫苗

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鸡新城疫病毒F基因高效真核表达质粒的构建 被引量：7

3

作者 邓明俊 张彦明 +1 位作者 梁荣 段明星 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2003年第2期9-12,共4页

为进一步研究基因疫苗的免疫机制和基因疫苗的免疫效果 ,应用 DNA重组技术 ,根据载体 pc D-NA4 .0 / His Max的多克隆位点设计引物 ,对含有 NDV保护性抗原基因 F的质粒 PCR扩增。将得到的目的片段插入到载体的启动子下游 ,成功得到含有 ... 为进一步研究基因疫苗的免疫机制和基因疫苗的免疫效果 ,应用 DNA重组技术 ,根据载体 pc D-NA4 .0 / His Max的多克隆位点设计引物 ,对含有 NDV保护性抗原基因 F的质粒 PCR扩增。将得到的目的片段插入到载体的启动子下游 ,成功得到含有 NDV F基因的真核表达质粒载体 PC4 F的基因疫苗。 展开更多

关键词 鸡 新城疫病毒 f基因 真核表达质粒 基因疫苗 免疫机制 免疫效果

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羊口疮病毒F1L与B2L基因核酸疫苗联合免疫小鼠特性的研究 被引量：8

4

作者 张友 杨倩 +5 位作者 鲜思美 吕碧英 饶体宇 吴伯梅 包涛涛 闵德省 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期444-451,共8页

为评价羊口疮病毒(OrfV)F1L与B2L基因核酸疫苗PVAX1-F1L、PVAX1-B2L联合免疫小鼠诱导体液和细胞免疫的应答效果,分别将PVAX1-F1L+PVAX1-B2L、PVAX1-B2L、PVAX1-F1L、PVAX1空载体与PBS通过后腿肌肉注射方式免疫小鼠,采用ELISA方法检测免... 为评价羊口疮病毒(OrfV)F1L与B2L基因核酸疫苗PVAX1-F1L、PVAX1-B2L联合免疫小鼠诱导体液和细胞免疫的应答效果,分别将PVAX1-F1L+PVAX1-B2L、PVAX1-B2L、PVAX1-F1L、PVAX1空载体与PBS通过后腿肌肉注射方式免疫小鼠,采用ELISA方法检测免疫不同时间段的小鼠血清中OrfV特异性抗体及细胞因子IL-2、IL-4和IFN-γ,并通过MTT法检测免疫小鼠脾淋巴细胞增殖反应。结果显示,PVAX1-F1L+PVAX1-B2L联合免疫组小鼠血清抗体效价及IL-2、IFN-γ细胞因子水平显著(P<0.05)高于PVAX1-F1L和PVAX1-B2L单独免疫组,IL-4细胞因子水平差异不明显,但均与PVAX1空载体和PBS组差异极显著(P<0.01);PVAX1-F1L+PVAX1-B2L联合免疫组小鼠脾淋巴细胞增殖水平与PVAX1-F1L和PVAX1-B2L单独免疫组相比,差异显著(P<0.05),与PVAX1空载体和PBS组相比,差异极显著(P<0.01)。结果表明,PVAX1-F1L+PVAX1-B2L联合免疫小鼠能够增强OrfV特异性抗体的分泌和细胞免疫应答,这为羊口疮新型疫苗的研制奠定了理论基础。 展开更多

关键词 羊口疮病毒 f1L、B2L基因 核酸疫苗 免疫应答

原文传递

NDVF基因DNA疫苗对新城疫病毒灭活油乳苗的免疫协同作用 被引量：4

5

作者 程相朝 吴庭才 +2 位作者 张春杰 李银聚 李祥瑞 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期901-905,共5页

目的：为进一步探讨控制新城疫发生和流行的新途径。方法：利用所构建的F基因pcDNA3真核表达质粒（DNA疫苗）和新研制的地方流行株灭活油乳苗，观察了新城疫病毒F基因DNA疫苗对地方分离株灭活油乳苗的免疫协同作用。结果：在7日龄时应... 目的：为进一步探讨控制新城疫发生和流行的新途径。方法：利用所构建的F基因pcDNA3真核表达质粒（DNA疫苗）和新研制的地方流行株灭活油乳苗，观察了新城疫病毒F基因DNA疫苗对地方分离株灭活油乳苗的免疫协同作用。结果：在7日龄时应用灭活油乳苗和DNA疫苗联合免疫的鸡群，在14～57日龄整个观察期内，不但其胸腺T淋巴细胞对ConA、法氏囊B淋巴细胞对PMA的反应均明显强于单纯油乳苗免疫组（其中除在接种后第7天时两组鸡的B淋巴细胞增殖OD570值差异不显著外，其余各检测时间两组间均表现为差异显著（P〈0．05）或极显著（P〈0．01），特别是T淋巴细胞增殖情况在接种第14天后均表现为差异极显著（P〈0．01））；而且HI抗体效价水平也持续性高于单纯油乳苗免疫鸡群，并在免疫接种后35～49天时差异显著（P〈0．05）。在免疫接种后第49天时进行的攻毒保护试验中，联合免疫组的保护率为100％，而单纯油乳苗免疫组鸡在观察期内则有2只发病，保护率为86．7％，且有1只死亡。结论：试验所用F基因DNA疫苗和灭活油乳苗联合免疫可显著提高机体的体液免疫和细胞免疫水平，产生较好的免疫协同作用，从而使机体对NDV的综合免疫保护能力得到进一步的提高。 展开更多

关键词 新城疫病毒 f基因 dna疫苗 新城疫地方株灭活油乳苗 联合免疫

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新城疫C3d-P29分子佐剂F基因疫苗的构建 被引量：5

6

作者 褚新星 彭军 +2 位作者 翁立雪 朱瑞良 牛钟相 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期234-238,共5页

C3d是补体C3的裂解产物之一,与抗原相连时可以明显提高抗原分子的免疫原性。CR2/CD21在其功能发挥过程中起到重要作用,P29为编码C3d与CR2结合区域的基因。从健康AA肉鸡肝脏中RT-PCR克隆C3d CDNA,设计引物克隆P29至pUC19载体,利用同裂酶B... C3d是补体C3的裂解产物之一,与抗原相连时可以明显提高抗原分子的免疫原性。CR2/CD21在其功能发挥过程中起到重要作用,P29为编码C3d与CR2结合区域的基因。从健康AA肉鸡肝脏中RT-PCR克隆C3d CDNA,设计引物克隆P29至pUC19载体,利用同裂酶BamHⅠ和BglⅡ构建pUC-P29.n。酶切获得P29.n,将其克隆至真核表达载体pCDNA3.1(+)。最后RT-PCR扩增新城疫F基因,定向克隆至真核表达载体pCDNA-P29.n中P29.n的上游,构建完成新城疫F基因疫苗。3周龄SPF鸡进行基因免疫,结果pCDNA-F-P29.4、pCDNA-F-P29.6较pCDNA-F都能够提高HI抗体水平及保护力,虽然HI抗体水平不及灭活苗,但是能够抵抗致死量病毒的攻击,并且pCDNA-F-P29.6效果更好。目前发表的关于C3d的佐剂作用的文章多是关于鼠C3d,相应的抗原不能够自然感染鼠类,关于鸡C3d的报道较少。研究结果为进一步开发和利用鸡C3d奠定了基础。 展开更多

关键词 鸡C3d pUC—P29n HI f基因疫苗

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小反刍兽疫病毒F基因核酸疫苗的构建及免疫原性 被引量：4

7

作者 杨香芳 窦永喜 +4 位作者 王秋霞 骆学农 曾巧英 朱启运 才学鹏 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期500-504,共5页

为了寻求一种有效的疫苗用于预防小反刍兽疫(PPR),运用RT-PCR方法扩增PPRV的F基因并将其克隆到pCAGGS载体中,构建了真核表达质粒pCAGGS-F。将构建的重组质粒转染哺乳动物细胞上进行瞬时表达,通过Western-blotting、间接免疫荧光检测证实... 为了寻求一种有效的疫苗用于预防小反刍兽疫(PPR),运用RT-PCR方法扩增PPRV的F基因并将其克隆到pCAGGS载体中,构建了真核表达质粒pCAGGS-F。将构建的重组质粒转染哺乳动物细胞上进行瞬时表达,通过Western-blotting、间接免疫荧光检测证实F蛋白得到了高效表达。将重组质粒作为DNA疫苗,通过脚掌皮内注射免疫BALB/c小鼠,采用间接ELISA检测抗体的产生情况。结果显示,pCAGGS-F重组质粒在有无佐剂CpG的情况下均能诱导小鼠产生较高的抗体水平。 展开更多

关键词 小反刍兽疫病毒 dna疫苗 f基因 免疫印迹 间接免疫荧光 酶联免疫吸附试验

原文传递

鸡IL-18真核表达质粒与新城疫病毒F基因疫苗联合免疫探讨 被引量：3

8

作者 谢安新 尹会方 +4 位作者 温纳相 黄桂菊 赵明秋 郑海华 黄青云 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期82-85,89,共5页

为探讨鸡IL-18基因真核表达质粒pcDNA-chIL-18在新城疫病毒(NDV)F基因疫苗免疫中的作用,克隆了新城疫病毒标准株F48E9的F基因,构建F基因重组真核表达质粒pcDNA-F;将11日龄试验鸡分为4组,每组10只,14日龄一免,28日龄二免,分别肌注pcDNA-F... 为探讨鸡IL-18基因真核表达质粒pcDNA-chIL-18在新城疫病毒(NDV)F基因疫苗免疫中的作用,克隆了新城疫病毒标准株F48E9的F基因,构建F基因重组真核表达质粒pcDNA-F;将11日龄试验鸡分为4组,每组10只,14日龄一免,28日龄二免,分别肌注pcDNA-F、pcDNA-F+pcDNA-chIL-18、新城疫传统疫苗(14日龄NDV弱毒疫苗首免,28日龄NDV油苗二免)、生理盐水,一免疫后第7、14、21、28 d均采血进行ND抗体(ELISA)检测和T淋巴细胞转化(MTT)试验;第29 d均肌注50LD50NDV强毒F48E9株.结果显示:免疫保护效率,生理盐水组0/10,pcDNA-F免疫组3/10,pcDNA-F+pcDNA-chIL-18免疫组5/10,新城疫传统疫苗免疫组10/10;ND抗体水平,pcDNA-F免疫组与pcDNA-F+pcDNA-chIL-18免疫组无差异(P>0.05),均显著低于传统疫苗免疫组(P<0.05);T细胞转化水平,pcDNA-F+pcDNA-chIL-18免疫组明显高于pcDNA-F免疫组(P<0.05),pcDNA-F免疫组与传统疫苗免疫组无差异(P>0.05).试验结果综合显示pcDNA-F免疫试验鸡可产生一定程度的免疫保护;pcDNA-chIL-18对pcD-NA-F具有一定的免疫增强作用. 展开更多

关键词 新城疫病毒 f基因 基因疫苗 白细胞介素18基因

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CpG基序对新城疫病毒DNA免疫效果的影响 被引量：3

9

作者 石星明 王玫 +6 位作者 张晶 杨桂花 孙鹏 高宏博 董鹏 崔红玉 王云峰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期554-558,共5页

为评价CpG基序对新城疫病毒(NDV)DNA免疫效果的影响,本研究将NDVF48E9株的F基因分别克隆至真核表达载体pVAX1和含有3个CpG基序的载体pVAX1-CpG中,分别命名为pV-F和pVC-F,体外表达检测结果显示,pV-F和pVC-F外源基因表达量无明显差别。将p... 为评价CpG基序对新城疫病毒(NDV)DNA免疫效果的影响,本研究将NDVF48E9株的F基因分别克隆至真核表达载体pVAX1和含有3个CpG基序的载体pVAX1-CpG中,分别命名为pV-F和pVC-F,体外表达检测结果显示,pV-F和pVC-F外源基因表达量无明显差别。将pVAX1、pVAX1-CpG、pV-F和pVC-F经腿部肌肉多点注射3周龄SPF鸡(200μg/只),2周后以相同的剂量加强免疫,二免后2周通过滴鼻以103EID50NDV的F48E9强毒株进行攻毒。抗体检测结果表明,免疫组的抗体水平与对照组相比差异显著(p<0.01),pVC-F免疫组的抗体水平高于pV-F免疫组;淋巴细胞检测结果表明,pV-F和pVC-F免疫组与对照组显著差异(p<0.01);攻毒保护率结果显示,pVC-F和pV-F组的保护率分别为60%和50%,对照组为0。以上结果表明,CpG基序对机体细胞免疫反应有一定的增强作用。 展开更多

关键词 NDV f基因 dna疫苗 CpG-ODN基序

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鼠疫耶尔森氏菌核酸疫苗的构建及其免疫学评价 被引量：3

10

作者 韩岳 王希良 +5 位作者 何凤田 摆茹 董梅 赵光宇 王英 曾政 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期474-477,481,共5页

目的获得鼠疫F1和V抗原的重组质粒pVAX1/F1和pVAX1/V,并比较其诱导的特异性免疫应答的能力。方法PCR扩增鼠疫菌F1和V编码基因,分别与pGEMT连接测序,构建pVAX1/F1和pVAX1/V重组质粒,转染COS7细胞。用细胞免疫化学方法鉴定目的蛋白的表达... 目的获得鼠疫F1和V抗原的重组质粒pVAX1/F1和pVAX1/V,并比较其诱导的特异性免疫应答的能力。方法PCR扩增鼠疫菌F1和V编码基因,分别与pGEMT连接测序,构建pVAX1/F1和pVAX1/V重组质粒,转染COS7细胞。用细胞免疫化学方法鉴定目的蛋白的表达,重组质粒加GMCSF免疫Balb/c小鼠,观察免疫效果。结果F1和V均在COS7细胞中表达;免疫鼠体内产生特异性抗体,pVAX1/V所诱导的抗体水平比pVAX1/F1高;通过抗体亚型分析、细胞因子和CD分子等指标的测定表明所构建DNA疫苗以诱发Th1型免疫为主。结论成功构建重组真核表达质粒pVAX1/F1和pVAX1/V,并且均具有诱导特异性细胞免疫和体液免疫应答的能力,为鼠疫菌新型疫苗研制奠定了基础。 展开更多

关键词 鼠疫杆菌 f1抗原 V抗原 dna疫苗 免疫应答

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密码子优化增强新城疫病毒DNA疫苗的表达水平和免疫效果 被引量：1

11

作者 曾伟伟 石星明 +7 位作者 高宏博 王玫 黄婷婷 李继松 孙妍 崔红玉 童光志 王云峰 《中国动物传染病学报》 CAS 2009年第2期8-16,共9页

为提高新城疫病毒(Newcastl Disease Virus,NDV)F基因DNA疫苗的表达量,增强其免疫效果。按照鸡体内偏嗜性密码子人工合成了NDV F48E9株的F基因optiF,插入到真核表达载体pVAX1中获得pVAX1-optiF。将F48E9株的F基因pVAX1-F与pVAX1-optiF... 为提高新城疫病毒(Newcastl Disease Virus,NDV)F基因DNA疫苗的表达量,增强其免疫效果。按照鸡体内偏嗜性密码子人工合成了NDV F48E9株的F基因optiF,插入到真核表达载体pVAX1中获得pVAX1-optiF。将F48E9株的F基因pVAX1-F与pVAX1-optiF分别转染COS-7细胞,72h后间接免疫荧光和Western blot检测细胞中瞬时表达的F蛋白。将质粒pVAX1、pVAX1-F和pVAX1-opti F以200μg/只的剂量分别股四头肌多点注射18只2周龄SPF鸡,2周后加强免疫1次,同时设立PBS对照。二免2周后每组取12只鸡以105EID50的F48E9株NDV强毒进行攻毒,评价这2种DNA疫苗的免疫效果。结果表明,F基因密码子的优化可显著提高NDVDNA疫苗诱导的保护性体液免疫和细胞免疫应答水平,攻毒后所有pVAX1-optiF免疫鸡均获得保护(12/12),而pVAX1-F组保护率只有17%(2/12)。DNA疫苗的免疫效果与抗原基因的表达量及表达抗原的免疫原性有直接关系。与未经修饰的F基因相比,修饰后的F基因体外瞬时表达水平明显提高。 展开更多

关键词 新城疫病毒(NDV) dna疫苗 密码子优化 f基因 免疫保护

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新城疫病毒F-HN基因DNA疫苗的免疫效果评价 被引量：1

12

作者 沙万里 宋泰 +4 位作者 尹柏双 王奔 宋永利 闫满 宫宇宏 《吉林农业科技学院学报》 2014年第1期7-9,共3页

新城疫是由新城疫病毒引起的一种高度接触性传染病,严重危害全球养禽业。DNA疫苗因其独特的安全、有效等特点将会是解决传统疫苗不足的新途径。为了评价NDV保护性抗原F、HN融合基因的效果,以PBS作为空白对照,将pVAXⅠ、pVAXⅠ-F、pVAXⅠ... 新城疫是由新城疫病毒引起的一种高度接触性传染病,严重危害全球养禽业。DNA疫苗因其独特的安全、有效等特点将会是解决传统疫苗不足的新途径。为了评价NDV保护性抗原F、HN融合基因的效果,以PBS作为空白对照,将pVAXⅠ、pVAXⅠ-F、pVAXⅠ-HN和pVAXⅠ-F-HN四种质粒肌肉注射2周龄雏鸡,一免后二免。IHA检测免疫期血清样本(1次/7d)抗体效价;二免后,FCM检测外周血淋巴细胞亚群,淋巴细胞增殖实验检测脾细胞淋巴细胞增殖情况;免疫完毕14d后用105EID50的lasota株NDV滴鼻攻毒,统计发病率、死亡率。结果:F、HN融合基因诱导机体体液免疫和细胞免疫水平显著提高,攻毒后pVAXⅠ-F组保护率为30%,pVAXⅠ-HN组为46.7%,pVAXⅠ-F-HN组保护率为93.3%,表明F、HN融合基因DNA疫苗具有明显的免疫效果。 展开更多

关键词 新城疫病毒 dna疫苗 f HN基因 免疫效果

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核酸疫苗pVAX1-F的构建及瞬时表达 被引量：1

13

作者 张园 李晓眠 王华 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第23期2031-2033,共3页

目的:构建仙台病毒核酸疫苗pVAX1-F,并在COS7细胞中表达。方法:利用PCR法以仙台病毒cDNA为模板扩增出F基因,与pMD18-T连接,测序正确后用HindⅢ/EcoRⅠ双酶切,将F基因引入经同样酶切的pVAX1载体,构建pVAX1-F表达载体,用PCR法和双酶切法鉴... 目的:构建仙台病毒核酸疫苗pVAX1-F,并在COS7细胞中表达。方法:利用PCR法以仙台病毒cDNA为模板扩增出F基因,与pMD18-T连接,测序正确后用HindⅢ/EcoRⅠ双酶切,将F基因引入经同样酶切的pVAX1载体,构建pVAX1-F表达载体,用PCR法和双酶切法鉴定,并将此重组质粒通过脂质体介导转染COS 7细胞,流式细胞术检测抗原蛋白表达、RT-PCR法检测外源基因的表达。结果:经PCR法和酶切鉴定,目的片段大小与预期相符,经测序目的基因序列与GenBank(EF679198)公布结果一致。重组质粒pVAX1-F转染COS 7细胞72 h后,能够表达抗原蛋白,流式细胞术检测达到58.3%,与对照组3.6%比较差异具有显著性(P<0.01),且F基因mRNA明显表达。结论:成功构建pVAX1-F,并能够在COS 7细胞中瞬时表达,为仙台病毒F基因核酸疫苗进行免疫学评价奠定基础。 展开更多

关键词 仙台病毒 核酸疫苗 f基因

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基于融合蛋白的呼吸道合胞病毒疫苗的研究进展 被引量：1

14

作者 瓦晓霞 朱传凤 高雪军 《微生物学免疫学进展》 2018年第1期60-66,共7页

呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)是一种引起严重下呼吸道感染的病原体,易感人群为婴幼儿、老年人及免疫功能低下者。目前尚无有效的抗病毒药物和预防疫苗。RSV融合蛋白(fusion protein,F蛋白)具有高度保守性,其诱导的... 呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)是一种引起严重下呼吸道感染的病原体,易感人群为婴幼儿、老年人及免疫功能低下者。目前尚无有效的抗病毒药物和预防疫苗。RSV融合蛋白(fusion protein,F蛋白)具有高度保守性,其诱导的抗体可同时抑制A型和B型两个亚型的RSV感染。因此,以F蛋白作为靶抗原的RSV亚单位疫苗、颗粒样疫苗和病毒载体疫苗是目前研究的主要策略。现就基于F蛋白的RSV疫苗研究进展作一综述。 展开更多

关键词 呼吸道合胞病毒 融合蛋白 亚单位疫苗 病毒载体疫苗 dna疫苗

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基于甲病毒复制子的犬瘟热核酸疫苗的构建及表达性研究

15

作者 孙建涛 侯绍华 +3 位作者 于萍 朱鸿飞 梁欠 郝志明 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第9期96-100,共5页

本试验利用T-A克隆技术,构建克隆载体pEASY-Blunt-F,BamHⅠ酶切pEASY-Blunt-F,回收F基因,将其克隆至pSCA1真核表达载体中,获得重组质粒pSCA1-F。经DNA测序、限制性内切酶分析和PCR鉴定,结果表明重组质粒pSCA1-F成功构建。通过间接免疫... 本试验利用T-A克隆技术,构建克隆载体pEASY-Blunt-F,BamHⅠ酶切pEASY-Blunt-F,回收F基因,将其克隆至pSCA1真核表达载体中,获得重组质粒pSCA1-F。经DNA测序、限制性内切酶分析和PCR鉴定,结果表明重组质粒pSCA1-F成功构建。通过间接免疫荧光试验和Western blotting证实F基因在转染细胞中表达。此外,细胞凋亡的检测结果表明,pSCA1-F能引起转染的细胞发生凋亡。 展开更多

关键词 核酸疫苗 犬瘟热病毒 f基因 甲病毒复制子 细胞凋亡

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犬瘟热病毒H、F、N基因试验免疫研究 被引量：13

16

作者 闫芳 夏咸柱 +4 位作者 扈荣良 谢之景 赵忠鹏 高玉伟 黄耕 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期50-55,共6页

以构建的真核表达载体pVAXLPH、pVAXLPF和pVAXLPN为基因疫苗，分组进行了免疫小鼠试验，对免疫鼠体内免疫应答水平进行了检测。结果显示：所构建的基因疫苗可以诱导小鼠产生特异性免疫应答反应，pVAXLPH＋pVAXLPF＋pVAXLPN3个基因混合... 以构建的真核表达载体pVAXLPH、pVAXLPF和pVAXLPN为基因疫苗，分组进行了免疫小鼠试验，对免疫鼠体内免疫应答水平进行了检测。结果显示：所构建的基因疫苗可以诱导小鼠产生特异性免疫应答反应，pVAXLPH＋pVAXLPF＋pVAXLPN3个基因混合免疫小鼠诱导产生了较强的体液免疫和细胞免疫应答，免疫3次后血清中抗CDV ELISA抗体效价为0．332，而免疫前为0．158；抗CDV中和抗体效价为1：（4～16）；CD4^＋T／CD8^＋T比值为2．05±0．38，而对照组为1．99±0．56；免疫小鼠脾细胞对CDVLP及ConA刺激的增殖反应值分别为0．384和0．356。基因疫苗免疫犬试验中，进行了单用基因疫苗免疫和基因疫苗与CDV弱毒疫苗联合免疫效果的比较研究。结果显示，基因疫苗免疫3次后，血清中抗CDVELISA抗体效价为0．296，抗CDV中和抗体效价为1：（8～32）。基因疫苗免疫2次，再使用弱毒疫苗加强免疫1次，血清中抗CDVELISA抗体效价为0．433，抗CDV中和抗体效价为1：（16～64）。 展开更多

关键词 犬瘟热 基因疫苗 犬瘟热病毒H基因 犬瘟热病毒f基因 犬瘟热病毒N基因

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鸡新城疫病毒F48E9株血凝素神经氨酸酶基因免疫诱导免疫保护的初步研究 被引量：6

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作者 刘胜旺 孔宪刚 +2 位作者 童光志 马云燕 卢景良 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2002年第12期1565-1569,共5页

将我国新城疫病毒标准强毒F4 8E9株的血凝素 神经氨酸酶基因克隆于真核表达载体 pcDNA3 中 ,进行鉴定后筛选阳性质粒。将此阳性质粒进行大量法提取并纯化后作为基因疫苗以每只鸡 10 0 μg的剂量肌肉接种 4 5日龄SPF鸡 ,并以 pcDNA3 空... 将我国新城疫病毒标准强毒F4 8E9株的血凝素 神经氨酸酶基因克隆于真核表达载体 pcDNA3 中 ,进行鉴定后筛选阳性质粒。将此阳性质粒进行大量法提取并纯化后作为基因疫苗以每只鸡 10 0 μg的剂量肌肉接种 4 5日龄SPF鸡 ,并以 pcDNA3 空质粒作为对照。结果表明 ,新城疫基因疫苗能够诱导机体产生新城疫病毒特异的血清IgG抗体反应 ,但产生抗体所需的时间较长 ,抗体滴度的增加较为缓慢。人工接种新城疫强毒后 ,基因疫苗免疫组 4 / 6的鸡得到保护 ,而且保护鸡具有明显的抗体反应 ,2只鸡未得到保护 ,但其死亡时间明显迟于对照组鸡 ,死亡鸡具有典型的新城疫病毒感染鸡的病理形态学变化。 展开更多

关键词 鸡新城疫病毒f48E9株 血凝素-神经氨酸酶基因 诱导 免疫保护 基因免疫 基因疫苗

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羊IL-2和OrfV-F1L基因疫苗联合免疫小鼠的免疫应答研究 被引量：9

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作者 李婷 包细明 +7 位作者 鲜思美 张益 饶体宇 吴伯梅 张友 刘嫒 李鹏飞 闵德省 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期924-931,共8页

为评价pVAX1-IL-2和pVAX1-F1L联合免疫小鼠诱导的体液和细胞免疫应答,分别将pVAX1-F1L+pVAX1-IL-2、pVAX1-F1L、pVAX1空载体、PBS对照组通过后腿肌肉注射的方式免疫KM系小鼠,采用ELISA方法检测免疫小鼠血清中OrfV特异性抗体以及Th1型(I... 为评价pVAX1-IL-2和pVAX1-F1L联合免疫小鼠诱导的体液和细胞免疫应答,分别将pVAX1-F1L+pVAX1-IL-2、pVAX1-F1L、pVAX1空载体、PBS对照组通过后腿肌肉注射的方式免疫KM系小鼠,采用ELISA方法检测免疫小鼠血清中OrfV特异性抗体以及Th1型(IL-2、IFN-γ和TNF-α)、Th2型(IL-4、IL-6和IL-10)细胞因子;MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖反应。结果显示,pVAX1-F1L+pVAX1-IL-2联合免疫组小鼠血清抗体效价及IL-2、IFN-γ和TNF-α细胞因子水平均显著高于pVAX1-F1L组,与pVAX1组、PBS组相比差异极显著(P<0.01);pVAX1-F1L+pVAX1-IL-2联合免疫组小鼠血清IL-4、IL-6和IL-10细胞因子水平均显著高于pVAX1组和PBS组,与pVAX1-F1L组相比差异不显著(P>0.05);且pVAX1-F1L+pVAX1-IL-2免疫组的脾淋巴细胞增殖水平高于pVAX1-F1L组、pVAX1组和PBS组(P<0.01)。结果表明,pVAX1-IL-2和pVAX1-F1L联合免疫小鼠,能诱导小鼠产生OrfV特异性体液免疫和细胞免疫,pVAX1-IL-2诱导的免疫反应以细胞免疫应答为主,且能促进Th1型细胞因子的分泌。 展开更多

关键词 IL-2 OrfV f1L基因 核酸疫苗 免疫应答

原文传递

铜绿假单胞菌外膜蛋白F与HSV-1VP22融合DNA疫苗的构建与表达 被引量：1

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作者 杨勤 雍熙 +2 位作者 李婷婷 余娴 雷军 《川北医学院学报》 CAS 2018年第3期338-342,共5页

目的:构建铜绿假单胞菌外膜蛋白F与Ⅰ型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus 1,HSV-1)VP22融合表达的DNA疫苗,并研究其在真核细胞中的表达情况。方法:构建重组质粒pVAX1-Opr F、pVAX1-VP22、pVAX1-VP22-Opr F、pVAX1-Opr F-VP22。原核表... 目的:构建铜绿假单胞菌外膜蛋白F与Ⅰ型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus 1,HSV-1)VP22融合表达的DNA疫苗,并研究其在真核细胞中的表达情况。方法:构建重组质粒pVAX1-Opr F、pVAX1-VP22、pVAX1-VP22-Opr F、pVAX1-Opr F-VP22。原核表达VP22的碳端蛋白,以电洗脱的方法得到纯化蛋白,免疫BALB/c小鼠,制备VP22蛋白的抗血清,Western blot鉴定抗体特异性。最后,以脂质体法将重组质粒转染真核细胞,利用Western blot检测其在真核细胞中的表达情况。结果:成功制备了抗VP22的抗血清,重组质粒在真核细胞中得到了表达。结论:铜绿假单胞菌Opr F与HSV-1VP22融合表达的重组质粒能够在真核细胞中表达,这为进一步的动物实验打下了基础。 展开更多

关键词 铜绿假单胞菌 外膜蛋白f VP22 dna疫苗

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小鼠PRL-3表达载体的构建及对乳腺癌D2F2细胞小鼠移植瘤的治疗作用

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作者 曹燕飞 吕娟 +1 位作者 黄昊 寿成超 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期266-271,共6页

目的:探讨靶向小鼠肝细胞再生磷酸酶-3(mouse phosphatase of regenerating liver-3,mPRL-3)的DNA疫苗对小鼠乳腺癌D2F2细胞体内生长的抑制作用。方法:构建靶向mPRL-3的真核表达载体pVAX1-mPRL-3,并转染至鹌鹑肌成纤维细胞QM7内,Western... 目的:探讨靶向小鼠肝细胞再生磷酸酶-3(mouse phosphatase of regenerating liver-3,mPRL-3)的DNA疫苗对小鼠乳腺癌D2F2细胞体内生长的抑制作用。方法:构建靶向mPRL-3的真核表达载体pVAX1-mPRL-3,并转染至鹌鹑肌成纤维细胞QM7内,Western blotting检测mPRL-3蛋白在QM7细胞中的表达;通过重组慢病毒Lv-mPRL-3或对照载体Lv-Ctrl感染小鼠乳癌D2F2细胞,分别建立高表达mPRL-3的mPRL-3-D2F2细胞或对照NC-D2F2细胞,Western blotting检测小鼠乳腺癌D2F2细胞中mPRL-3蛋白的表达。BALB/c小鼠左侧乳腺脂肪垫下分别接种mPRL-3-D2F2和NC-D2F2细胞后,通过基因枪接种pVAX1-mPRL-3疫苗(mPRL-3-D2F2/pVAX1-mPRL-3),同时设立疫苗对照组(mPRL-3-D2F2/pVAX1-Ctrl)和细胞对照组(NC-D2F2/pVAX1-mPRL-3),检测小鼠的肿瘤体积及生存期。结果:pVAX1-mPRL-3质粒经酶切鉴定及测序验证均正确,并能在QM7细胞中表达。Western blotting检测结果显示,慢病毒感染的mPRL-3-D2F2细胞中mPRL-3蛋白过表达,而NC-D2F2细胞中不表达mPRL-3蛋白。荷瘤小鼠经pVAX1-mPRL-3 DNA疫苗免疫,其肿瘤体积明显低于对照组[(835.3±509.8)vs(1 543.0±578.4)mm3,P<0.01],且pVAX1-mPRL-3疫苗能显著延长荷瘤小鼠的生存期(中位生存期55.5 vs 38 d,P<0.05)。结论:基因枪接种的靶向mPRL-3的DNA疫苗能抑制高表达mPRL-3的小鼠乳腺癌D2F2细胞移植瘤的生长,并延长荷瘤小鼠生存期,提示其对mPRL-3阳性肿瘤有潜在的治疗作用。 展开更多

关键词 小鼠肝细胞再生磷酸酶-3 小鼠 乳腺癌 D2f2细胞 dna疫苗 基因枪

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