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甲醇酵母基因表达系统的研究进展 被引量:19
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作者 李晶 赵晓祥 +2 位作者 沙长青 张淑梅 田洁萍 《生物工程进展》 CSCD 1999年第2期17-20,共4页
在大肠杆菌这一传统表达系统被频繁用作研究各种基因表达时,一种新型且有效的基因表达系统——甲醇酵母正逐渐引起人们的注意。此系统不仅具有高表达、高稳定、高分泌的特点,而且其宿主甲醇酵母——巴斯德毕赤酵母(Pichiapa... 在大肠杆菌这一传统表达系统被频繁用作研究各种基因表达时,一种新型且有效的基因表达系统——甲醇酵母正逐渐引起人们的注意。此系统不仅具有高表达、高稳定、高分泌的特点,而且其宿主甲醇酵母——巴斯德毕赤酵母(Pichiapastoris)具有高密度生长的特性。因此近年来此表达系统的研究得到迅速发展,在其中表达了多种具有商业价值的外源蛋白。本文对甲醇酵母基因表达系统的特点及研究进展作一简要综述。 展开更多
关键词 甲醇酵母 基因表达系统 外源性 蛋白质
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抗病毒植物基因工程的研究进展 被引量:19
2
作者 刘玉乐 田波 《中国病毒学》 CSCD 1993年第1期7-15,共9页
病毒病害一直是农业生产的一大问题,分子生物学的发展,特别是基因工程的发展为防治病毒病带来了希望。就目前的情况看,有效的抗基因主要来源于病毒本身,如外壳蛋白基因、卫星RNA基因、正义RNA序列,反义RNA序列等。除此之外,一些其它的... 病毒病害一直是农业生产的一大问题,分子生物学的发展,特别是基因工程的发展为防治病毒病带来了希望。就目前的情况看,有效的抗基因主要来源于病毒本身,如外壳蛋白基因、卫星RNA基因、正义RNA序列,反义RNA序列等。除此之外,一些其它的策略也被采用,如核酶(Ribozyme)策略等。人们也正在试图从植物本身分离抗病毒基因和探索新的抗病毒策略,这一切都有助于推动抗病毒植物基因工程的发展。 展开更多
关键词 抗病毒 植物基因工程 外源基因表达
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短小芽孢杆菌作为芽孢杆菌属基因工程受体菌的研究 被引量:10
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作者 陈启民 耿运琪 +2 位作者 倪津 王革伏 蒋如璋 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 1989年第3期206-212,共7页
以质粒pUB110 DNA转化B. pumilus 289原生质体,转化频率为10^(-3)—10^(-9)与B.tubtilis 168系统相当;但B.pumilus 289原生质体的再生频率(0.3—12.0%)略低于B.subtilis 168(1.53—24.16%);在无选择压力条件下质粒pUB110在B.pumilus ... 以质粒pUB110 DNA转化B. pumilus 289原生质体,转化频率为10^(-3)—10^(-9)与B.tubtilis 168系统相当;但B.pumilus 289原生质体的再生频率(0.3—12.0%)略低于B.subtilis 168(1.53—24.16%);在无选择压力条件下质粒pUB110在B.pumilus 289中经过45个世代周期,自发丢失率小于3%,同于B.subtilis 168系统。外源基因在B.pumilus 289中经25个世代周期丢失率低于5%,而在B.subtilis 168系统中则高达24%;外源基因的表达水平亦高于B.subtilis 168系统。因此,B.pumilus 289是一个值得进一步开发的基因工程受体系统。 展开更多
关键词 短小芽孢杆菌 基因工程 受体菌
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HIV-2gp105-gag截短体在毕赤酵母中重组表达研究 被引量:2
4
作者 李子健 金宁一 +3 位作者 江文正 张应玖 张立树 王宏伟 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期371-374,共4页
目的 实现HIV 2 RODgp10 5 gag截短体重组蛋白tgp10 5 gag的高效分泌表达 ,对其表达条件进行研究。方法 用PCR方法获得HIV 2 RODtgp10 5截短基因 ,将其与HIV 2 RODgag构建HIV 2 RODtgp10 5 gag嵌合基因并克隆到毕赤酵母 (Pichiapas... 目的 实现HIV 2 RODgp10 5 gag截短体重组蛋白tgp10 5 gag的高效分泌表达 ,对其表达条件进行研究。方法 用PCR方法获得HIV 2 RODtgp10 5截短基因 ,将其与HIV 2 RODgag构建HIV 2 RODtgp10 5 gag嵌合基因并克隆到毕赤酵母 (Pichiapastoris)分泌型表达载体pPIC9中 ,转化GS115酵母菌 ,经MD/MM表型筛选、PCR扩增筛选阳性克隆 ,以甲醇诱导表达后进行SDS PAGE分析及Westernblot证实。结果 HIV 2 RODtgp10 5 gag嵌合截短基因在Pichiapastoris酵母系统中获得了有效分泌表达 ,相对分子质量 (Mr)约为 14 0× 10 3 ,表达量约为 16 % ,表达产物可被HIV 2阳性血清识别。最佳表达条件是大于 85 %的溶解氧 ,摇瓶转速 2 4 0r/min ,1.0 %~ 1.5 %甲醇诱导 ,培养时间 3d。结论 在Pichiapas toris表达系统中实现了HIV 2 RODtgp10 5 gag蛋白的有效分泌性表达 ,表达产物具有良好的抗原特异性。 展开更多
关键词 HIV-2 人免疫缺陷病毒 gpl05-gag 毕赤酵母 基因表达
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人免疫缺陷病毒Ⅱ型(HIV-2)gag蛋白基因在毕赤酵母中的克隆表达 被引量:1
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作者 李子健 金宁一 +3 位作者 江文正 张应玖 张立树 孙兆增 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期75-78,共4页
目的:实现HIV-2ROD gag重组蛋白的分泌表达,为研究HIV-2ROD gag蛋白结构与功能及亚单位蛋白疫苗研究打下基础。方法:将HIV-2ROD gag蛋白基因片段,与分泌型毕赤酵母表达载体pPIC9重组,构建了相应的重组表达质粒pPIC9-gag,转化GS115酵母菌... 目的:实现HIV-2ROD gag重组蛋白的分泌表达,为研究HIV-2ROD gag蛋白结构与功能及亚单位蛋白疫苗研究打下基础。方法:将HIV-2ROD gag蛋白基因片段,与分泌型毕赤酵母表达载体pPIC9重组,构建了相应的重组表达质粒pPIC9-gag,转化GS115酵母菌,经MD/MM表型筛选、PCR扩增筛选阳性克隆,以甲醇诱导表达后进行SDS-PAGE分析及Western blot证实。结果:获得了HIV-2ROD gag重组蛋白在巴斯德毕赤酵母系统中的分泌表达,表达产物可被HIV-2抗血清识别,分子量约为57kD。结论:pPIC9-gag重组质粒在甲醇营养型酵母菌中可经甲醇诱导产生HIV-2ROD gag蛋白,该蛋白具有强免疫学活性。 展开更多
关键词 艾滋病 人免疫缺陷病毒Ⅱ型 HIV-2 HIV-2HCOgag蛋白 毕赤酵母 基因重组 基因表达
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昆虫杆状病毒表达系统中阳性重组病毒的筛选 被引量:1
6
作者 朱反修 王福山 齐义鹏 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1995年第1期35-39,共5页
近年来,随着杆状病毒表达系统的普遍应用,阳性重组病毒筛选方法也有了很大的改进,从过去的经验性的ocu ̄+/ocu ̄-空斑表型筛选发展到根据颜色差异,药物抗性,抗生素抗性等等筛选重组病毒。同源重组过程也可在大肠杆菌或酵... 近年来,随着杆状病毒表达系统的普遍应用,阳性重组病毒筛选方法也有了很大的改进,从过去的经验性的ocu ̄+/ocu ̄-空斑表型筛选发展到根据颜色差异,药物抗性,抗生素抗性等等筛选重组病毒。同源重组过程也可在大肠杆菌或酵母甚至体外进行,大大提高了重组率,由于重组率是如此之高,有些方法可以免去繁琐的空斑选择,很快得到重组病毒的纯培养。文章对各种筛选方法进行了比较,并指出各自的优缺点。 展开更多
关键词 杆状病毒 外源基因表达 表达系统 重组病毒 筛选
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转基因动物制作及提高外源基因表达的策略 被引量:13
7
作者 王继英 杜立新 《中国畜牧兽医》 CAS 2002年第2期30-34,共5页
本文综述了近年来发展起来的转基因新方法及技术路线 。
关键词 转基因动物 外源基因 基因表达 基因整合
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宿主域扩大的重组救活昆虫杆状病毒表达载体的构建及外源基因的表达 被引量:4
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作者 易咏竹 陈寅 +2 位作者 张志芳 何家禄 秦俭 《蚕业科学》 CAS CSCD 2002年第4期304-307,共4页
通过克隆的家蚕核多角体病毒解旋酶基因DNA与重组救活可线性化的苜蓿尺蠖核多角体病毒基因工程载体病毒 (BacPAK6 )DNA在昆虫细胞中发生重组 ,经累代筛选获得了既可感染家蚕又可感染秋粘虫细胞Sf 2 1的宿主域扩大的昆虫杆状病毒表达载体... 通过克隆的家蚕核多角体病毒解旋酶基因DNA与重组救活可线性化的苜蓿尺蠖核多角体病毒基因工程载体病毒 (BacPAK6 )DNA在昆虫细胞中发生重组 ,经累代筛选获得了既可感染家蚕又可感染秋粘虫细胞Sf 2 1的宿主域扩大的昆虫杆状病毒表达载体 (HyBacPAK6 )。HyBacPAK6DNA经Bsu36Ⅰ酶切后与含植酸酶基因的转移载体pVL1393 phy在家蚕细胞中重组后 ,通过蓝白斑筛选发现重组率可达 90 %以上。然而以杂交病毒为载体的外源基因表达量仅为以BmNPV为载体病毒的表达量的 2 0 %左右。分析认为HyBacPAK6可用于表达一些对蚕体有害的外源基因。 展开更多
关键词 表达载体 宿主域 外源基因表达 家蚕 昆虫杆状病毒表达系统 HyBacPAK6
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EXPRESSION OF HUMAN INTERFERON-α cDNA IN TRANSFORMED TOBACCO PLANT
9
作者 陈炬 孙勇如 +3 位作者 李向辉 曾伟强 李玉英 侯云德 《Science China Chemistry》 SCIE EI CAS 1991年第7期804-813,共10页
Human interferon-α cDNA has been successfully introduced into tobacco plant cells. And some plants producing active IFN-α have been obtained. By blunt end ligation of DNA, human IFN-α cDNA was inserted into the Bam... Human interferon-α cDNA has been successfully introduced into tobacco plant cells. And some plants producing active IFN-α have been obtained. By blunt end ligation of DNA, human IFN-α cDNA was inserted into the BamHI site between the promotor of transcripton 1 and the tailing signal of transcripton 7 in the plant expression plasmid pAP2304, and so a recombinant plasmid pIG3031 was constructed, and the recombinant plasmid was introduced into the T-region of the Ti plasmid vector pGV3850. By means of agrobacterium infection to the leaf disc of general tobacco plant 1551, some transformed plants resistant to kana-mycin were obtained. DNA Southern hybridization showed that the human IFN-α gene together with T-DNA was integrated into the genome of tobacco cells. The assay of neomycin phosphate transferase Ⅱ indicated that the ability of resistance to kanamycin in the transformed plants resulted from the expression of the NPT Ⅱ gene. The assay of the biological activity of IFN-α showed that active IFN-α could be produced from the transformed plants. 展开更多
关键词 plant genetie engineering HUMAN IFN-Α TOBACCO the expression of the foreign gene.
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