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黄芪注射液对雌激素受体的激活作用研究 被引量：28
1
作者 王海彬 王军舰 +6 位作者 黄辉 刘琳 刘少军 徐传毅 何伟 樊粤光 黄志伟 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期2113-2115,共3页
目的构建含有雌激素受体配体结合域的哺乳动物细胞杂交基因报告系统,研究黄芪注射液对雌激素受体(ER)活性的影响。方法PCR扩增雌激素受体配体结合域,将配体结合域克隆到真核表达质粒pCMV-BD构建细胞杂交基因报告系统,研究黄芪注射液与... 目的构建含有雌激素受体配体结合域的哺乳动物细胞杂交基因报告系统,研究黄芪注射液对雌激素受体(ER)活性的影响。方法PCR扩增雌激素受体配体结合域,将配体结合域克隆到真核表达质粒pCMV-BD构建细胞杂交基因报告系统,研究黄芪注射液与雌激素受体的关系;MTT法检测黄芪注射液对细胞活力的影响。结果成功构建含有雌激素受体配体结合域的哺乳动物细胞杂交基因报告系统,黄芪注射液不能提高细胞活性,但对雌激素受体具有激活作用。结论黄芪注射液可能通过雌激素受体发挥疗效,细胞杂交基因报告系统是研究中药作用机理的手段之一。 展开更多
关键词 黄芪注射液 基因报告系统 雌激素受体 HELA细胞 配体结合域
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ERβ──一种新型的雌激素受体 被引量：6
2
作者 黄朝晖 王金福 《生命科学》 CSCD 2000年第3期126-129,共4页
介绍了一种新型的雌激素受体ERβ，对其基因及蛋白结构、分布、作用机制方面的研究进展作了综述，并将其与经典的雌激素受体ERα作了比较。
关键词 雌激素受体 ERΒ 结构 分布 作用机制
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利用哺乳动物细胞双杂交体系研究仙灵骨葆对雌激素受体的作用 被引量：8
3
作者 王小娟 王海彬 +2 位作者 于静娟 杨俊兴 黄志伟 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第23期2030-2032,共3页
目的:利用哺乳动物细胞双杂交体系研究仙灵骨葆对雌激素受体(ERs)活性的影响。方法:通过MTT法检测仙灵骨葆对Hela细胞活力的影响,并构建含有ERs配体结合域(LBD)的质粒pCMV-BD及含有报告基因Lusferase的质粒pFR-Luci,将二者与内标质粒pFR... 目的:利用哺乳动物细胞双杂交体系研究仙灵骨葆对雌激素受体(ERs)活性的影响。方法:通过MTT法检测仙灵骨葆对Hela细胞活力的影响,并构建含有ERs配体结合域(LBD)的质粒pCMV-BD及含有报告基因Lusferase的质粒pFR-Luci,将二者与内标质粒pFRTlaczeo共转染到Hela细胞中,形成Gal4DBD-ERa和ERb LBD细胞杂交报告系统。以染料木苷为阳性对照验证本杂交系统,并利用本系统考察仙灵骨葆对ERs活性的影响。结果:仙灵骨葆在25～2 500 ng·mL-1浓度范围内可以促进HeLa细胞的增殖。10μmol．L-1染料木苷可以显著提高Gal4DBD-ERα和ERβLBD细胞杂交报告系统中ERa和ERb的活性,证明本系统构建成功。仙灵骨葆对ERa具有浓度依赖性的激活作用,2500 ng·mL-1浓度时ERa的相对荧光活性是DMSO对照组的18倍;仙灵骨葆对ERb也具有一定的激活作用,2500 ng·mL-1浓度时ERb的相对荧光活性是DMSO对照组的4倍。结论:本研究成功构建了含有雌激素受体配体结合域的细胞杂交系统,仙灵骨葆对该系统的ERs具有激活作用。 展开更多
关键词 哺乳动物细胞双杂交 仙灵骨葆 雌激素受体 配体结合域 细胞转染
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新型核素报告基因系统hERL／核素标记雌二醇的实验研究 被引量：5
4
作者 兰晓莉 覃春霞 +4 位作者 田月丽 夏晓天 何勇 袁辉 张永学 《中华核医学与分子影像杂志》 CSCD 北大核心 2012年第1期10-15,共6页
目的在体外细胞摄取实验及在体显像基础上，评价新型核素报告基因系统人ER配体结合域（hERL）／核素标记雌二醇（E2）应用的可行性，为其用于基因治疗的监测提供依据。方法以内部核糖体进入位点序列（IRES）方式构建携带hERL和治疗VEGF... 目的在体外细胞摄取实验及在体显像基础上，评价新型核素报告基因系统人ER配体结合域（hERL）／核素标记雌二醇（E2）应用的可行性，为其用于基因治疗的监测提供依据。方法以内部核糖体进入位点序列（IRES）方式构建携带hERL和治疗VEGF165的重组质粒pDC316-hERL-IRES．VEGF165（简写为EIV），将其用腺病毒包装构建重组腺病毒复合体（Ad-EIV）。采用悬浮贴壁法从sD大鼠股骨和胫骨原代提取骨髓MSCs并培养。将Ad-EIV和脂质体2000包裹重组质粒（Lipo-EIV）分别转染MSCs，利用RT-PCR和Westernblot，对hERL和VEGF165mRNA和蛋白质水平的表达分别进行检测。测定Ad．EIV组、Lipo．EIV组和未转染组MSCs对125I-E在不同时间（1、3,6、9、12和24h）的摄取率。将转染Ad-EIV的MSCs注射至大鼠左前肢、未转染MSCs注射至右前肢后1d，注射16a-^18TMF-17a-E2（^18F-FES）进行micro PET／CT活体显像。2组间均数比较采用t检验，相关性研究采用Pearson相关分析。结果Ad—EIV转染MSCs后RT—PCR检测示hERL和VEGFl65mRNA的表达随着感染滴度的增加而增加，且呈正相关（r2分别为0．953和0．966，P均〈0．05）；感染复数（MOI）=25、50、75和100时，其mRNA表达高于Lipo-EIV组。Westernblot检测蛋白质水平的表达也得到同样的结果。Ad-EIV组和Lipo-EIV组MSCs对^125I-E2的摄取率均随时间延长逐渐增高，24h最高，分别达到（10．94±0．30）％和（8．934-0．18）％；各个时间点2种载体转染组均明显高于未转染对照组（3．54％-5．52％；t值分别为15．489-26．560、10．523-24．204，P均〈0．05），而Ad-EIV组摄取率高于Lipo-EIV组（t=g．132—16．168，P均〈0．05）。MicroPET／CT大鼠活体显像显示注射Ad-EIV转染的MSCs之左前肢放射性浓聚明显高于对侧。结论报告基因hERL可以通过腺病毒转染、脂质体包裹等多种形式转染细胞并成功表达，应用核素标记E2可以对其� 展开更多
关键词 基因 报告 雌激素受体配体结合域 放射性核素显像 雌二醇 同位素标记 大鼠
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利用细胞杂交技术检测强骨胶囊对雌激素受体的影响 被引量：2
5
作者 王海彬 王军舰 +4 位作者 徐传毅 刘少军 何伟 樊粤光 黄辉 《上海中医药大学学报》 CAS 2006年第3期43-45,共3页
目的:探讨强骨胶囊对雌激素受体(ER)活性的影响。方法:将含有ERs配体结合域(LBD)的质粒pCMV-BD和pFR-Luci报告基因及内标质粒pFRTlaczeo共转染到Hela细胞中,检测强骨胶囊与雌激素受体的关系;MTT法检测强骨胶囊对细胞活力的影响。结果:... 目的:探讨强骨胶囊对雌激素受体(ER)活性的影响。方法:将含有ERs配体结合域(LBD)的质粒pCMV-BD和pFR-Luci报告基因及内标质粒pFRTlaczeo共转染到Hela细胞中,检测强骨胶囊与雌激素受体的关系;MTT法检测强骨胶囊对细胞活力的影响。结果:低剂量(12.5ng/ml)的强骨胶囊对两种ER均无明显效果,但是高剂量(125ng/ml和1.25μg/ml)可以显著地激活ERs,并可以显著提高细胞活性。结论:强骨胶囊治疗骨质疏松的疗效可能与激活ERs的作用有关。 展开更多
关键词 强骨胶囊 质粒共转染 雌激素受体 HELA细胞 配体结合域
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雌激素受体ERβ配体结合区的异源表达与纯化
6
作者 时国庆 郭彦峰 +3 位作者 魏巍 宋青 张怀 钟广蓉 《北京科技大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第S2期208-211,共4页
为研究环境化合物与雌激素受体的相互作用,在大肠杆菌中异源表达了人雌激素受体ERβ的配体结合区(hERβ-LBD)蛋白。在诱导剂(IPTG)浓度为0.2mmol.L-1,培养温度25℃,诱导时间为8h的优化表达条件下,经亲和色谱法纯化后,hERβ(LBD蛋白的产... 为研究环境化合物与雌激素受体的相互作用,在大肠杆菌中异源表达了人雌激素受体ERβ的配体结合区(hERβ-LBD)蛋白。在诱导剂(IPTG)浓度为0.2mmol.L-1,培养温度25℃,诱导时间为8h的优化表达条件下,经亲和色谱法纯化后,hERβ(LBD蛋白的产量可达236mg.L-1. 展开更多
关键词 雌激素受体 配体结合区 表达 纯化
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骨科相关中药对雌激素受体的激活作用
7
作者 王海彬 王军舰 +6 位作者 黄辉 刘琳 刘少军 徐传毅 何伟 樊粤光 黄志伟 《中国中医骨伤科杂志》 CAS 2006年第6期43-45,共3页
目的构建含有雌激素受体配体结合域的哺乳动物细胞杂交基因报告系统,研究骨科相关中药对雌激素受体(ER)活性的影响。方法PCR扩增雌激素受体配体结合域,将配体结合域克隆到真核表达质粒pCMV-BD构建细胞杂交基因报告系统,研究骨科相关中... 目的构建含有雌激素受体配体结合域的哺乳动物细胞杂交基因报告系统,研究骨科相关中药对雌激素受体(ER)活性的影响。方法PCR扩增雌激素受体配体结合域,将配体结合域克隆到真核表达质粒pCMV-BD构建细胞杂交基因报告系统,研究骨科相关中药与雌激素受体的关系;MTT法检测中药对细胞活力的影响。结果成功构建含有雌激素受体配体结合域的哺乳动物细胞杂交基因报告系统,部分中药可以显著提高细胞活性,并对雌激素受体具有激活作用。结论中药治疗骨质疏松可能通过雌激素受体发挥疗效,细胞杂交基因报告系统可以用来研究中药的作用机理。 展开更多
关键词 中药 基因报告系统 雌激素受体 HELA细胞 配体结合域
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通络生骨胶囊对雌激素受体的激活作用 被引量：2
8
作者 王海彬 王军舰 +6 位作者 黄辉 刘琳 刘少军 徐传毅 何伟 樊粤光 黄志伟 《四川中医》 北大核心 2006年第7期23-25,共3页
目的:构建含有雌激素受体配体结合域的哺乳动物细胞杂交基因报告系统,研究通络生骨胶囊对雌激素受体(ER)活性的影响。方法:PCR扩增雌激素受体配体结合域,将配体结合域克隆到真核表达质粒pCMVBD构建细胞杂交基因报告系统,研究通络生骨胶... 目的:构建含有雌激素受体配体结合域的哺乳动物细胞杂交基因报告系统,研究通络生骨胶囊对雌激素受体(ER)活性的影响。方法:PCR扩增雌激素受体配体结合域,将配体结合域克隆到真核表达质粒pCMVBD构建细胞杂交基因报告系统,研究通络生骨胶囊与雌激素受体的关系;MTT法检测通络生骨胶囊对细胞活力的影响。结果:成功构建含有雌激素受体配体结合域的哺乳动物细胞杂交基因报告系统,通络生骨胶囊可以显著提高细胞活性,并对雌激素受体具有激活作用。结论:通络生骨胶囊可能通过雌激素受体发挥疗效,细胞杂交基因报告系统可以用来研究中药的作用机理。 展开更多
关键词 通络生骨胶囊 基因报告系统 雌激素受体 HELA细胞 配体结合城
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hERα-LBD原核表达载体的构建及蛋白表达活性鉴定
9
作者 王艳芳 赵继军 +1 位作者 田再民 郭彦峰 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期61-65,共5页
目的构建人雌激素受体α亚型配体结合区(hERα-LBD)的原核表达载体,并进行表达蛋白的活性鉴定。方法以hERα-LBD质粒为模板,采用PCR方法扩增hERα-LBD基因,PCR扩增产物鉴定后与T载体(pGEM-T-easy)连接,将连接物转化到感受态细胞中,阳性... 目的构建人雌激素受体α亚型配体结合区(hERα-LBD)的原核表达载体,并进行表达蛋白的活性鉴定。方法以hERα-LBD质粒为模板,采用PCR方法扩增hERα-LBD基因,PCR扩增产物鉴定后与T载体(pGEM-T-easy)连接,将连接物转化到感受态细胞中,阳性菌落经酶切和测序鉴定,和pET-28a(+)质粒分别进行双酶切,T4DNA连接酶连接,构建重组表达载体pET-28a(+)-hERα-LBD,转化到大肠杆菌JM109和BL21感受态细胞中。异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导细胞表达hERα-LBD融合蛋白;将雌二醇-牛血清白蛋白(BSA)偶联抗原(E2-BSA)与融合蛋白混合,通过电泳法鉴定hERα-LBD的雌激素配体结合活性。结果 PCR扩增的hERα-LBD基因片段约为1.9kb,与预期目的片段大小一致。与T载体连接,形成pGM-T-hERα-LBD重组质粒,转化到感受态细胞,阳性菌落酶切和测序鉴定正确,与pET-28a(+)质粒酶切后连接,成功构建原核重组表达载体pET-28a(+)-hERα-LBD;在大肠杆菌中异源表达人雌激素受体ERα的配体结合区hERα-LBD蛋白。经亲和色谱法纯化后,hERα-LBD蛋白的表达量可达250mg/L。电泳法证实hERα-LBD具有雌激素结合活性。结论成功构建原核重组表达载体pET-28a(+)-hERα-LBD,hERα-LBD具有雌激素结合活性。 展开更多
关键词 雌激素受体α亚型配体结合区 表达载体活性
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