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题名重组人IL-29的原核表达、纯化及活性分析
被引量：5
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作者
李明才
何韶衡
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机构
汕头大学医学院变态反应学与炎症学研究所
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出处
《第四军医大学学报》
北大核心
2006年第23期2131-2134,共4页
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基金
国家自然科学基金(30671932)
李嘉诚基金(C0200001)
广东省卫生厅立项课题(A2003484)
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文摘
目的:在大肠杆菌中表达具有活性的重组人白细胞介素-29(IL-29).方法:用PCR技术扩增人IL-29成熟蛋白的编码序列,克隆入原核表达载体pET-44Ek/LIC中,构建融合表达载体pET-44Ek/LIC-IL-29,转化大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG诱导表达IL-29融合蛋白,经镍柱亲和层析纯化,然后用肠激酶消化除去N端融合标签得到完全天然状态的重组人IL-29,经N-端氨基酸测序鉴定纯化的IL-29,用细胞病变抑制法测定其活性.结果:成功构建了表达载体pET-44Ek/LIC-IL-29,DNA序列测定结果与预期结果一致.在30℃培养条件下,IPTG诱导表达的IL-29融合蛋白占菌体蛋白总量43%左右,并且大部分以可溶形式存在.纯化后的融合蛋白经肠激酶切割和回收后,所得目的蛋白(IL-29)纯度大于96%,该蛋白N-端序列与理论值一致,其抗病毒活性与IFN-α2b相当.结论:获得了具有生物学活性的重组人IL-29.
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关键词
白细胞介素-29
大肠杆菌
可溶性蛋白质
纯化
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Keywords
interleukin-29
esdmriefiia eoli
soluble protein
purification
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分类号
Q786
[生物学—分子生物学]
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