目的:建立过表达EphB4的脱落乳牙牙髓干细胞(stem cells from human exfoliated deciduous teeth,SHED),观察其成骨分化能力的变化。方法:使用酶消化法分离、培养SHED,将第3代SHED分为2组,即病毒介导的EphB4基因转染SHED的实验组和空白...目的:建立过表达EphB4的脱落乳牙牙髓干细胞(stem cells from human exfoliated deciduous teeth,SHED),观察其成骨分化能力的变化。方法:使用酶消化法分离、培养SHED,将第3代SHED分为2组,即病毒介导的EphB4基因转染SHED的实验组和空白荧光载体转染SHED的对照组。通过荧光显微镜、实时荧光定量PCR(real time-PCR)检测转染后SHED细胞中EphB4 mRNA的表达水平,Western印迹法检测转染后EphB4蛋白的表达量。成骨诱导4周后,使用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)试剂盒及茜素红染色测定转染后SHED的ALP活性改变和成骨能力变化。采用SPSS16.0软件包对数据进行统计学分析。结果:实时荧光定量PCR显示,实验组细胞中EphB4基因表达增高约8倍(P<0.05),Western印迹法显示,实验组细胞中EphB4蛋白表达较对照组显著增高。成骨诱导4周后,ALP检测结果表明,基因转染EphB4,可显著促进SHED的ALP活性(P<0.05),增高约2倍;茜素红染色显示,转染EphB4后,SHED成骨能力显著增强。结论:基因转染EphB4可显著促进SHED的成骨分化能力,为SHED成为骨组织工程中的种子细胞提供了依据。展开更多
文摘目的:建立过表达EphB4的脱落乳牙牙髓干细胞(stem cells from human exfoliated deciduous teeth,SHED),观察其成骨分化能力的变化。方法:使用酶消化法分离、培养SHED,将第3代SHED分为2组,即病毒介导的EphB4基因转染SHED的实验组和空白荧光载体转染SHED的对照组。通过荧光显微镜、实时荧光定量PCR(real time-PCR)检测转染后SHED细胞中EphB4 mRNA的表达水平,Western印迹法检测转染后EphB4蛋白的表达量。成骨诱导4周后,使用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)试剂盒及茜素红染色测定转染后SHED的ALP活性改变和成骨能力变化。采用SPSS16.0软件包对数据进行统计学分析。结果:实时荧光定量PCR显示,实验组细胞中EphB4基因表达增高约8倍(P<0.05),Western印迹法显示,实验组细胞中EphB4蛋白表达较对照组显著增高。成骨诱导4周后,ALP检测结果表明,基因转染EphB4,可显著促进SHED的ALP活性(P<0.05),增高约2倍;茜素红染色显示,转染EphB4后,SHED成骨能力显著增强。结论:基因转染EphB4可显著促进SHED的成骨分化能力,为SHED成为骨组织工程中的种子细胞提供了依据。
