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循环酶法同型半胱氨酸检测关键酶CBS和CBL的开发及试剂盒研制初探 被引量：2
1
作者 王笃强 沈云龙 +5 位作者 廖远平 李德彬 刘虹均 陈帅 卢大儒 朱化星 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期81-87,共7页
以酿酒酵母基因组为模板通过PCR分别扩增胱硫醚β合成酶(cystathionine β-synthase,CBS)和胱硫醚β-裂解酶(cystathionine β-lyase,CBL)目的基因片段,经无缝克隆构建表达质粒并转化大肠杆菌菌株E.coli BL21(DE3)。经诱导表达和纯化后... 以酿酒酵母基因组为模板通过PCR分别扩增胱硫醚β合成酶(cystathionine β-synthase,CBS)和胱硫醚β-裂解酶(cystathionine β-lyase,CBL)目的基因片段,经无缝克隆构建表达质粒并转化大肠杆菌菌株E.coli BL21(DE3)。经诱导表达和纯化后,重组蛋白的纯度均达到90%,回收率均达到80%,可溶表达量分别为26 mg/L和332 mg/L。经催化活性测定,CBS的单位酶活为15 U/mg,CBL的单位酶活为72 U/mg。在此基础上初步开发了循环酶法同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)检测试剂盒,实验结果证明该试剂盒的有效性和稳定性均符合体外诊断检测的要求,其检测性能与市售进口同类试剂盒基本一致。 展开更多
关键词 胱硫醚Β-合成酶 胱硫醚β-裂解酶 同型半胱氨酸 酶活测定
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混合血清经量值传递后用于酶活性测定的定标 被引量：1
2
作者 张林 《淮海医药》 CAS 2007年第4期290-292,共3页
目的探讨混合血清经酶校准品量值传递后,用于标定血清酶活性定量测定的因子数的可行性。方法用Trucal U复合校准血清和经量值传递的混合血清分别定标血清丙氨酸氨基转移酶(ALT),门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酰转... 目的探讨混合血清经酶校准品量值传递后,用于标定血清酶活性定量测定的因子数的可行性。方法用Trucal U复合校准血清和经量值传递的混合血清分别定标血清丙氨酸氨基转移酶(ALT),门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酰转肽酶(GGT)、活性测定的因子数以及理论K值计算法,分别测定20份新鲜血清样品中四种酶的活性。结果1、TruCal复合标准血清标定后的测定结果与理论K值计算法测定结果比较,ALP、GGT的相对偏倚分别为-25.21%和15.67%,作回归分析和配对t检验,(t=15.644和3.846,P<0.001)。与经量值传递的混合血清标定后的测定结果比较,ALP、GGT的相对偏倚分别为2.31%和0.98%。2、混合血清标定后,测定高、中、低三个水平的混合血清及TruCal U复合校准血清,CV%、相对偏倚均小于5%,但低值样品的ALT、AST的CV%为9.08和7.68。结论经量值传递的混合血清标定血清酶活性定量测定的因子数,可以提高血清酶测定的因子数,可以提高血清酶活性测定的准确度,使血清酶活性定量测定的结果有可溯源性。 展开更多
关键词 酶活性测定 酶校准品 溯源性
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