PCR法检测食品中大肠杆菌O157:H7 被引量：24

1

作者 巢强国 杨学明 +3 位作者 葛宇 熊薇 曲勤凤 王瑞元 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第8期212-215,共4页

对大肠杆菌O157:H7型菌株的各毒力基因及基因组中的特异序列进行了设计和比对,确定292bp的检测引物。常规定性PCR和实时定量PCR证明该引物特异性强。模拟样品的前增菌实验结果表明本方法可以在原样品活菌浓度约2.0CFU/mL时通过16h增菌... 对大肠杆菌O157:H7型菌株的各毒力基因及基因组中的特异序列进行了设计和比对,确定292bp的检测引物。常规定性PCR和实时定量PCR证明该引物特异性强。模拟样品的前增菌实验结果表明本方法可以在原样品活菌浓度约2.0CFU/mL时通过16h增菌后检测出来,总的检测时间可以控制在24h内。本实验建立的PCR方法可用于食品中大肠杆菌O157:H7的快速测定。 展开更多

关键词 大肠杆菌o157:h7 食源性致病菌 特异序列 PCR

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郑州市肠出血性大肠杆菌O157:H7感染监测 被引量：12

2

作者 殷毅峥 程春荣 +4 位作者 杨建国 安戈 武恩平 段晶晶 水艳 《现代预防医学》 CAS 北大核心 2007年第21期4175-4177,共3页

[目的]2005年监测郑州市肠出血性大肠杆菌O157:H7感染状况及病原分布特点,为各级卫生行政部门制订新发传染病防治措施,提供基础疫情资料。[方法]监测标本用免疫磁珠集菌方法(IMS)做病原学分离培养、毒力基因检测用多重PCR方法、药敏试验... [目的]2005年监测郑州市肠出血性大肠杆菌O157:H7感染状况及病原分布特点,为各级卫生行政部门制订新发传染病防治措施,提供基础疫情资料。[方法]监测标本用免疫磁珠集菌方法(IMS)做病原学分离培养、毒力基因检测用多重PCR方法、药敏试验用(K-B)常规方法。[结果]腹泻病人标本185份,大肠杆菌O157:H7检出阳性4份。外环境标本588份,检出大肠杆菌O157:H7阳性20份。用多重PCR方法做毒力基因检测,有6份家畜家禽阳性标本中检出O157:H7毒力基因(Stx2、eaeA、HIyA)为阳性。药敏试验24株肠出血性大肠杆菌O157:H7对8种抗菌药物敏感率为95%以上,对新生霉素100%耐药,其余7种对抗菌药物敏感程度各有差异。[结论]郑州市有散在的大肠杆菌O157:H7感染的病人及动物疫点。奶牛和波尔山羊是大肠杆菌O157:H7动物宿主。 展开更多

关键词 肠出血性大肠杆菌o157:h7 监测 免疫磁珠集菌法(IMS) 多重PCR法 药敏试验

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使用环介导等温扩增技术快速检测食品中肠出血性大肠杆菌O157:H7的初步研究 被引量：11

3

作者 易海华 赵金伟 +5 位作者 徐波 吴萍兰 宋阳威 房超 徐政 徐继承 《中国食品卫生杂志》 北大核心 2010年第3期206-213,共8页

目的探索建立一种快速、简单的食品中肠出血性大肠杆菌O157∶H7的检测方法。方法针对编码O157∶H7脂多糖的rfbE基因(GenBank S83460)和编码H7鞭毛抗原的fliC基因(GenBank L07388)特征性保守序列,利用环介导等温扩增(loop-mediated isoth... 目的探索建立一种快速、简单的食品中肠出血性大肠杆菌O157∶H7的检测方法。方法针对编码O157∶H7脂多糖的rfbE基因(GenBank S83460)和编码H7鞭毛抗原的fliC基因(GenBank L07388)特征性保守序列,利用环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)核酸扩增基因技术,对21株O157∶H7和非O157∶H7菌株进行特异性检测,并与聚合酶链式反应方法进行比较。同时使用部分食品样品对LAMP法检测肠出血性大肠杆菌O157∶H7的实际运用价值进行评估。结果LAMP法可以在1h内完成检测工作。LAMP法检测肠出血性大肠杆菌O157∶H7的灵敏度为96.72%,特异度为85.71%,准确性为93.26%。结论LAMP检测技术的灵敏度较聚合酶链式反应技术高。LAMP是一种简单、快速的检测技术,适用于筛选可疑大肠杆菌O157∶H7样本。 展开更多

关键词 肠出血性大肠杆菌o157∶h7 环介导等温扩增 rfbE基因 fliC基因

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动物源性肠出血性大肠杆菌O157∶H7及其3个毒力基因的多重PCR快速检测研究 被引量：8

4

作者 陈雅君 王亚宾 +5 位作者 张莉娟 张龙现 陈丽颖 刘中原 申果 胡慧 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期686-691,共6页

目的建立快速、特异的分离鉴定大肠杆菌O157∶H7及其3个主要毒力基因(hylA、eaeA和stx2基因)的多重PCR方法。方法根据GenBank公布的大肠杆菌O157∶H7菌体抗原rfbE基因、鞭毛抗原fliC基因、溶血素(hlyA)基因、紧密黏附素(eaeA)基因和志... 目的建立快速、特异的分离鉴定大肠杆菌O157∶H7及其3个主要毒力基因(hylA、eaeA和stx2基因)的多重PCR方法。方法根据GenBank公布的大肠杆菌O157∶H7菌体抗原rfbE基因、鞭毛抗原fliC基因、溶血素(hlyA)基因、紧密黏附素(eaeA)基因和志贺样毒素2(stx2)基因为靶基因,设计5对特异性引物,在同一扩增体系中进行PCR,优化反应体系,测定特异性和灵敏度,并进行了临床样品的检测。结果该方法扩增目的基因片段分别为327bp、247bp、494bp、384bp和779bp,特异性和灵敏度均高,细菌纯培养物的检测灵敏度为104cfu/mL。结论初步建立了快速、灵敏、特异的检测肠出血性大肠杆菌O157∶H7及其3个毒力基因的多重PCR方法,可用于临床动物携带大肠杆菌O157∶H7的分子流行病学调查及食品微生物检测。 展开更多

关键词 动物源性 肠出血性大肠杆菌o157∶h7 毒力基因 多重PCR

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肠出血性大肠杆菌O157:H7的快速可视化检测 被引量：8

5

作者 吕恒 张锦海 +3 位作者 顾海涛 王平 王长军 王玉邦 《东南国防医药》 2013年第4期321-324,共4页

目的应用环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术和羟基萘酚蓝(Hydroxynaphthol blue,HNB)指示剂建立肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7快速可视化检测方法。方法针对EHEC O157∶H7脂多糖编码基因rfbE保守区设... 目的应用环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术和羟基萘酚蓝(Hydroxynaphthol blue,HNB)指示剂建立肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7快速可视化检测方法。方法针对EHEC O157∶H7脂多糖编码基因rfbE保守区设计LAMP引物及环引物,反应体系加入染料HNB作为LAMP扩增的指示剂,结合LAMP浊度仪优化扩增条件,根据HNB的颜色变化进行结果判定,并评价检测方法的特异性和灵敏度。结果本方法最低检出限约为100拷贝/反应管,高于普通PCR;检测特异性高,仅EHEC O157∶H7反应管HNB颜色由紫罗兰变成天蓝色,而肠产毒性大肠杆菌(ETEC)、肠致病性大肠杆菌(EPEC)、肠侵袭性大肠杆菌(EIEC)、肠聚集性大肠杆菌(EAEC)、宋内志贺菌、福氏志贺菌均不发生变色反应;体系的扩增效率高于普通PCR,40 min内出结果。结论建立的基于颜色判定的EHEC O157∶H7 LAMP检测方法具有特异、灵敏、设备要求简单等特点,适用于EHEC O157∶H7现场快速检测。 展开更多

关键词 肠出血性大肠杆菌o157∶h7 可视化检测 环介导等温扩增 羟基萘酚蓝

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肠出血性大肠埃希菌O157噬菌体的生物学特性 被引量：7

6

作者 刘悦 李菁华 +2 位作者 史红艳 温剑平 孙延波 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期79-83,共5页

目的:分离并鉴定肠出血性大肠埃希菌O157噬菌体,对其生物学特性进行研究,为开发抗肠出血性大肠埃希菌O157的生物制剂提供实验依据。方法:以肠出血性大肠埃希菌O157为宿主菌,采用噬斑法从环境污水中分离出针对肠出血性大肠埃希菌O157的... 目的:分离并鉴定肠出血性大肠埃希菌O157噬菌体,对其生物学特性进行研究,为开发抗肠出血性大肠埃希菌O157的生物制剂提供实验依据。方法:以肠出血性大肠埃希菌O157为宿主菌,采用噬斑法从环境污水中分离出针对肠出血性大肠埃希菌O157的噬菌体。噬菌体经超滤浓缩后,电镜观察其大小和形态;将宿主菌和噬菌体以不同的比例混合,测定噬菌体的最佳感染复数并观察其一步生长曲线;利用SDS-PAGE分析噬菌体的结构蛋白和非结构蛋白;提取噬菌体基因组,进行酶切电泳分析。结果:电镜显示噬菌体的头部呈球形、直径40nm,噬菌体的尾部长约80nm。噬菌体的最佳感染复数为10-2,即当宿主菌和噬菌体之间的比例为1∶100时裂解效率最高。一步生长曲线示噬菌体在裂解宿主菌时,潜伏期约为10min,爆发期约为30min,裂解量为130。SDS-PAGE凝胶电泳呈现13种蛋白,相对分子质量为16 000～22 000。琼脂糖凝胶电泳显示噬菌体基因组大小约23 000bp。结论:成功分离并鉴定一株针对肠出血性大肠埃希菌O157的噬菌体,是一种裂解性强、特异性高的毒性噬菌体,肠出血性大肠埃希菌O157噬菌体属于有尾病毒目,管尾噬菌体科。 展开更多

关键词 肠出血性大肠杆菌o157 噬菌体 最佳感染复数

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检测肠出血性大肠埃希菌O157:H7的环介导等温扩增和PCR法比较 被引量：7

7

作者 姜容 龙北国 +3 位作者 曾桂芬 王丹 范宏英 吴娴波 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期1026-1030,共5页

目的建立基于环介导等温扩增(LAMP)技术的肠出血性大肠埃希菌(EHEC)O157:H7快速简便检测方法,并与PCR进行比较。方法针对EHEC O157:H7保守的rfbE基因序列,设计特异性引物,建立LAMP和PCR检测技术并优化其反应条件,比较这两种检测方法的... 目的建立基于环介导等温扩增(LAMP)技术的肠出血性大肠埃希菌(EHEC)O157:H7快速简便检测方法,并与PCR进行比较。方法针对EHEC O157:H7保守的rfbE基因序列,设计特异性引物,建立LAMP和PCR检测技术并优化其反应条件,比较这两种检测方法的灵敏度、特异性和对实际样品的检测结果。结果成功建立了LAMP和PCR检测体系,灵敏度检测结果显示,LAMP检测限低至10 cfu/ml,PCR检测限为102cfu/ml,LAMP检测灵敏度高于PCR;对39株近源菌进行检测,结果显示,LAMP法仅7株EHEC O157:H7得到阳性结果,非EHEC O157:H7菌株均为阴性,PCR产物则出现非特异性条带,LAMP法特异性比PCR法高。对于32份猪肉样品的检测,LAMP和PCR与常规检测结果一致,3份样品检测阳性。结论 LAMP检测技术的特异性和灵敏度较PCR高,并且操作简便、检测成本低,耗时短,更有望发展成为快速准确检测EHEC O157:H7的有效手段。 展开更多

关键词 肠出血性大肠埃希菌o157:h7 环介导等温扩增技术 PCR技术 rfbE基因

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食品中肠出血性大肠埃希菌O_(157):H_7的PCR检测 被引量：6

8

作者 邢立新 孙武长 +3 位作者 刘桂华 乔凤 龚云伟 黄鑫 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期1504-1505,共2页

目的建立快速准确检测食品中肠出血性大肠埃希菌O157:H7的方法。方法采用多重聚合酶链式反应技术(MPCR)特异性扩增肠出血性大肠埃希菌O157:H7的STX、rfbEf、liC基因。结果分别在228,378,709 bp处扩增出3个目的基因片段,且只有肠出血性... 目的建立快速准确检测食品中肠出血性大肠埃希菌O157:H7的方法。方法采用多重聚合酶链式反应技术(MPCR)特异性扩增肠出血性大肠埃希菌O157:H7的STX、rfbEf、liC基因。结果分别在228,378,709 bp处扩增出3个目的基因片段,且只有肠出血性大肠埃希菌O157:H7获得扩增,其他菌种扩增均呈阴性。结论PCR方法比传统细菌检测方法更特异、快速、灵敏和简便,为食品中肠出血性大肠埃希菌O157:H7的快速检测提供了新的手段。 展开更多

关键词 食品 肠出血性大肠埃希菌o157:h7 聚合酶链式反应

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2012-2020年江苏省东台市大肠埃希菌O157:H7监测结果 被引量：2

9

作者 袁义平 陈林 《河南预防医学杂志》 2023年第2期148-152,共5页

目的 了解东台市肠出血性大肠埃希菌(EHEC)O157:H7在不同来源标本(腹泻患者、食品、家畜、昆虫)中的分布情况,为EHEC O157:H7的防控提供科学依据。方法 采集东台市四个乡镇腹泻病人及动物的粪便、生熟肉制品和苍蝇进行病原菌分离培养、... 目的 了解东台市肠出血性大肠埃希菌(EHEC)O157:H7在不同来源标本(腹泻患者、食品、家畜、昆虫)中的分布情况,为EHEC O157:H7的防控提供科学依据。方法 采集东台市四个乡镇腹泻病人及动物的粪便、生熟肉制品和苍蝇进行病原菌分离培养、鉴定、毒力基因检测。结果 2012-2020年共采集各类标本6 129份,检出74株EHEC O157:H7,检出率为1.21%。其中四种动物粪便中共检出71株,牛羊猪鸡分别为35、27、7、2株,腹泻病人共检出3株,检出率分别为4.86%、3.66%、0.96%、0.27%、0.13%,牛羊带菌率最高。各年份检出率差异有统计学意义(χ^(2)=120.013,P<0.01)。经毒力基因检测,stx2^(+)eae A^(+)hly^(+)31株,eae A^(+)hly^(+)41株,另2株不带任何毒力基因,带毒率97.30%。四种毒力基因检出率差异有统计学意义(P<0.01)。结论 肠出血性大肠埃希菌O157:H7在东台市不同宿主动物和腹泻患者中均有检出,牛、羊是东台市肠出血性大肠埃希菌O157:H7的主要宿主动物,应进一步加强对两种动物及粪便的管理。 展开更多

关键词 肠出血性大肠杆菌o157:h7 带菌率 毒力基因

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出血性大肠埃希菌O157:H7可视化和实时荧光RPA检测方法的比较

10

作者 徐颖 庄国栋 +1 位作者 王丽丽 滕新栋 《中国食品卫生杂志》 CSCD 北大核心 2024年第1期26-31,共6页

目的以检测出血性大肠埃希菌(EHEC)O157:H7为目的,基于重组酶聚合酶扩增(RPA)技术,分别建立可视化RPA检测方法和实时荧光RPA检测方法。方法根据出血性大肠埃希菌O157:H7的rfbE基因设计引物和探针,进行特异性、灵敏度检测,建立实时荧光RP... 目的以检测出血性大肠埃希菌(EHEC)O157:H7为目的,基于重组酶聚合酶扩增(RPA)技术,分别建立可视化RPA检测方法和实时荧光RPA检测方法。方法根据出血性大肠埃希菌O157:H7的rfbE基因设计引物和探针,进行特异性、灵敏度检测,建立实时荧光RPA检测方法。结合SYBR Green I在核酸反应中的颜色变化特征,设计可视化RPA检测方法。结果建立的实时荧光RPA检测方法和可视化RPA检测方法,分别在35℃时反应不超过25 min即可检测EHEC O157:H7。设计的引物和探针仅对EHEC O157:H7出现特异性结果。两种检测方法的检测限低于10-5 ng/μL。结论EHEC O157:H7的可视化RPA检测方法和实时荧光RPA检测方法操作简便,且特异性强、敏感性高,可为EHEC O157:H7的现场快速检测和实验室检测提供新方法。 展开更多

关键词 重组酶聚合酶扩增技术 出血性大肠埃希菌o157:h7 可视化RPA 显色反应 实时荧光RPA 检测方法 食源性致病菌

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肠出血性大肠杆菌O157∶H7和霍乱弧菌的多重PCR检测 被引量：5

11

作者 金慧英 陈华标 +4 位作者 陶开华 李越希 李法卿 李素芹 谭维国 《解放军预防医学杂志》 CAS 北大核心 2003年第4期252-255,共4页

目的　建立同时检测肠出血性大肠杆菌 (O15 7∶H7)和霍乱弧菌的多重PCR方法 ,为霍乱和肠出血性大肠杆菌感染的快速诊断提供实验依据。方法　首先选择O15 7∶H7的O抗原(rfbE)、H鞭毛抗原 (fliC)基因以及霍乱弧菌外膜蛋白 (ompW )和肠毒素... 目的　建立同时检测肠出血性大肠杆菌 (O15 7∶H7)和霍乱弧菌的多重PCR方法 ,为霍乱和肠出血性大肠杆菌感染的快速诊断提供实验依据。方法　首先选择O15 7∶H7的O抗原(rfbE)、H鞭毛抗原 (fliC)基因以及霍乱弧菌外膜蛋白 (ompW )和肠毒素A亚单位 (ctxA)基因特异的 4对引物 ,分别或共同对O15 7∶H7和霍乱弧菌进行PCR扩增 ,并以琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物。结果　所有O15 7∶H7菌株均在 4 97bp和 6 2 5bp处出现O15 7rfbE基因和H7fliC基因扩增产物 ;霍乱菌株均出现 5 6 0bp、30 2bp的ompW和ctxA基因扩增产物 ,O15 7∶H7和霍乱弧菌共同扩增可出现 4条单一条带。结论　选择 4对特异引物的多重PCR方法可简便、特异、快速、灵敏地对O15 7∶H7和霍乱弧菌进行同时检测。 展开更多

关键词 聚合酶链反应 o157:h7 霍乱弧菌

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肠出血性大肠杆菌O157∶H7 LAMP-LFD快速检测方法的建立及初步应用 被引量：5

12

作者 王利丽 张莉 +4 位作者 李秀丽 任卫科 池晶晶 杨春蕾 鄢明华 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期807-812,共6页

针对肠出血性大肠杆菌O157∶H7(EHEC O157∶H7)的rfbE基因保守序列设计特异引物,通过优化反应体系、反应温度和反应时间等参数,建立了一种快速、简便的肠出血性大肠杆菌O157∶H7的环介导等温扩增-横向流动试纸条(LAMP-LFD)检测方法。特... 针对肠出血性大肠杆菌O157∶H7(EHEC O157∶H7)的rfbE基因保守序列设计特异引物,通过优化反应体系、反应温度和反应时间等参数,建立了一种快速、简便的肠出血性大肠杆菌O157∶H7的环介导等温扩增-横向流动试纸条(LAMP-LFD)检测方法。特异性试验结果显示,该方法与大肠杆菌O8∶K88和O141∶K99、无乳链球菌、停乳链球菌、金黄色葡萄球菌、痢疾志贺菌、产单核细胞李氏杆菌、表皮葡萄球菌、肠炎沙门菌、猪链球菌2型、副猪嗜血杆菌、胸膜肺炎放线杆菌等12种细菌均无交叉反应。灵敏度试验结果表明,该方法对纯培养的EHEC O157∶H7的检测下限为13CFU/mL,污染食品中EHEC O157∶H7的检测下限为18CFU/mL。研究结果表明,该方法特异性好,灵敏度高,操作简便,可肉眼直接判定结果,1h内完成检测,在食品卫生检验和临床疾病诊断方面具有良好的应用前景。 展开更多

关键词 肠出血性大肠杆菌o157∶h7 环介导等温扩增-横向流动试纸条技术 rfbE基因

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肠出血性大肠杆菌O157:H7的分子生物学检测及PCR检测 被引量：5

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作者 党苗苗 李芳菲 +1 位作者 费楠 夏秀芳 《食品安全质量检测学报》 CAS 2015年第2期523-527,共5页

大肠杆菌一些特殊的血清型具有致病性,肠出血性大肠杆菌是大肠杆菌的一个亚型,主要致病菌株为O157:H7,可引起感染性腹泻,因能引起人类的出血性肠炎而得名。本文综述了分子生物学检测肠出血性大肠杆菌O157:H7的研究进展。分子生物学检测... 大肠杆菌一些特殊的血清型具有致病性,肠出血性大肠杆菌是大肠杆菌的一个亚型,主要致病菌株为O157:H7,可引起感染性腹泻,因能引起人类的出血性肠炎而得名。本文综述了分子生物学检测肠出血性大肠杆菌O157:H7的研究进展。分子生物学检测是利用抗原抗体特异性结合反应检测各种物质的分析方法,主要包括酶联免疫吸附法(ELISA)、胶体免疫金层析法以及免疫磁珠分离法(IMS)。PCR技术检测肠出血性大肠杆菌O157:H7,主要包括常规PCR检测、多重PCR检测以及实时荧光定量PCR检测。这两种方法灵敏度高、特异性强、操作简便、结果准确等优点,是检测肠出血性大肠杆菌O157:H7的常用方法。 展开更多

关键词 肠出血性大肠杆菌o157:h7 分子生物学 PCR

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贵州省首次从腹泻病例中检出肠出血性大肠杆菌O157∶H7 被引量：5

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作者 韦小瑜 游旅 +2 位作者 田克诚 唐光鹏 王定明 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期183-185,188,共4页

目的从贵州省1例腹泻病例的粪便标本中分离鉴定O157肠出血性大肠杆菌并对其进行毒力基因检测。方法收集腹泻病例的粪便标本,mEC肉汤增菌后,采用O157胶体金进行初筛,阳性者增菌液经免疫磁珠富集后进行肠出血性大肠杆菌的分离,对分离株进... 目的从贵州省1例腹泻病例的粪便标本中分离鉴定O157肠出血性大肠杆菌并对其进行毒力基因检测。方法收集腹泻病例的粪便标本,mEC肉汤增菌后,采用O157胶体金进行初筛,阳性者增菌液经免疫磁珠富集后进行肠出血性大肠杆菌的分离,对分离株进行系统生化鉴定,O157、H7诊断血清凝集,应用特异性PCR进行rfbE和fliC基因鉴定,以及stx1、stx2、eaeA和hlyA 4种毒力基因检测。结果腹泻病例粪便标本经mEC肉汤增菌后,检测O157胶体金阳性;增菌液经免疫磁珠富集后培养出可疑菌落,经系统生化鉴定为大肠杆菌,血清型为O157∶H7;PCR检测O抗原特异性rfbE基因和H7特异性fliC基因均阳性;毒力基因eaeA、stx2和hly均阳性,stx1阴性。结论分离株确诊为肠出血性大肠杆菌O157∶H7,为贵州省腹泻病例中首株该病原体。 展开更多

关键词 肠出血性大肠杆菌o157∶h7 贵州 腹泻 PCR 毒力基因

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肠出血性大肠杆菌O157∶H7鞭毛可变区基因片段的克隆、表达与免疫原性 被引量：5

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作者 张雪寒 何孔旺 +11 位作者 赵攀登 栾晓婷 叶青 温立斌 李彬 王小敏 郭容利 倪艳秀 周俊明 俞正玉 茅爱华 吕立新 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2011年第5期1021-1025,共5页

肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC)O157∶H7是食源感染的人兽共患病原菌。鞭毛蛋白(H7)是EHEC O157∶H7重要的毒力因子,其编码基因为flic。该研究在体外克隆和表达flic基因的可变区,并检测其免疫原性,旨在为EH... 肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC)O157∶H7是食源感染的人兽共患病原菌。鞭毛蛋白(H7)是EHEC O157∶H7重要的毒力因子,其编码基因为flic。该研究在体外克隆和表达flic基因的可变区,并检测其免疫原性,旨在为EHEC O157∶H7疫苗的研制提供候选抗原。PCR扩增到flic基因538～1 483bp的可变区,成功克隆入冷诱导表达载体pColdⅠ中,构建重组表达质粒。重组菌BL21(pCold I-flic)0.5 mmol/LIPTG过夜诱导,SDS-PAGE和Western blotting进行鉴定。Balb/c小鼠免疫和攻毒试验评价重组H7蛋白的免疫原性。结果显示:H7基因(flic)片段945 bp在pColdⅠ中成功表达,大小为31 000,能够与天然EHEC O157∶H7全抗血清反应;免疫小鼠存活率可以达到80%,而非免疫小鼠存活率仅为20%;免疫组粪便排菌数量显著低于对照组(P<0.05)。以上结果说明,H7鞭毛的可变区与菌体黏附密切相关,并且其诱导产生的抗体具有一定的抑制黏附作用,可以作为亚单位疫苗研制的候选抗原,在EHEC O157∶H7早期黏附时,协同Ⅲ型分泌系统蛋白降低菌体在肠道内的黏附。 展开更多

关键词 肠出血性大肠杆菌o157∶h7 flic基因 表达 小鼠

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肉桂精油抑制肠出血性大肠杆菌O157∶H7活性研究 被引量：4

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作者 费莹莹 张珍 +1 位作者 陈雪琴 李雯 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2022年第14期63-67,共5页

肠出血性大肠杆菌O157∶H7(Enterohemorrhagic Escherichia coli 157∶H7,EHEC O157)因具有生长繁殖快,污染途径广泛,高染病率和高致病率的特点成为最常见的食源性病菌之一。为探究肉桂精油对EHEC O157细胞膜特性和呼吸代谢的影响。以EH... 肠出血性大肠杆菌O157∶H7(Enterohemorrhagic Escherichia coli 157∶H7,EHEC O157)因具有生长繁殖快,污染途径广泛,高染病率和高致病率的特点成为最常见的食源性病菌之一。为探究肉桂精油对EHEC O157细胞膜特性和呼吸代谢的影响。以EHEC O157为研究对象,用不同浓度的的肉桂精油处理,37℃恒温振荡培养。结果显示,肉桂精油对EHEC O157的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)为0.0004 g/L。随精油处理时间的延长,菌液中核酸和蛋白质含量,β-半乳糖苷酶含量均逐渐上升;蛋白质含量,碱性蛋白酶(alkaline protease,AKP)活性逐渐下降;琥珀酸脱氢酶(succinate dehydrogenase,SDH)活性先上升后下降。综上表明,肉桂精油对EHEC O157表现出良好的抑菌性,可以破坏菌体细胞膜,改变细胞膜表面特性,导致细胞膜通透性变大,胞内大分子物质流出,最终影响三羧酸循环。希望该研究为精油抑菌机制向分子层面深入拓展提供有效的理论依据。 展开更多

关键词 肉桂精油 肠出血性大肠杆菌o157∶h7 细胞膜特性 呼吸代谢 抑菌

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TaqMan探针荧光PCR检测肠出血性大肠埃希菌O157:H7方法的建立 被引量：5

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作者 刘生峰 肖进文 +5 位作者 刘利成 杨俊 王昱 聂福平 周庆 李应国 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2012年第5期6-10,共5页

肠出血性大肠埃希菌(Enterohemorrhagie Escherichia coli,EHEC)O157:H7是一种重要的传染病病原菌,以EHEC O157:H7标准菌株rfbE保守区设计一对特异引物和一条探针,建立了检测EHEC O157:H7核酸的荧光定量PCR检测方法。实验结果表明荧光定... 肠出血性大肠埃希菌(Enterohemorrhagie Escherichia coli,EHEC)O157:H7是一种重要的传染病病原菌,以EHEC O157:H7标准菌株rfbE保守区设计一对特异引物和一条探针,建立了检测EHEC O157:H7核酸的荧光定量PCR检测方法。实验结果表明荧光定量PCR检测方法特异性好,最低检测限为20 cfu/mL,线性范围是102～108cfu/mL。稳定性试验表明批内变异系数和批间变异系数分别为2.06%和2.45%。 展开更多

关键词 肠出血性大肠埃希菌o157:h7 荧光PCR 检测

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肠出血性大肠杆菌O157多重PCR检测方法的建立 被引量：4

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作者 张昕杨 李火明 +2 位作者 夏颖 李干武 蔡文通 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期360-365,共6页

为了建立肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157的多重PCR检测方法,本研究选取调控基因fusR与n5512,联合经典的rfbE、stx1和stx2基因,共同作为靶基因,通过对引物浓度等参数优化,建立了稳定性好的检测EHEC O157的多重PCR方法。并检测了该方法的特... 为了建立肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157的多重PCR检测方法,本研究选取调控基因fusR与n5512,联合经典的rfbE、stx1和stx2基因,共同作为靶基因,通过对引物浓度等参数优化,建立了稳定性好的检测EHEC O157的多重PCR方法。并检测了该方法的特异性与敏感性,结果显示,该方法对非O157的产志贺毒素的大肠杆菌、肠致病性大肠杆菌(EPEC)、沙门氏菌、假结核耶尔森菌等检测均为阴性,特异性强;对EHEC基因组DNA的检测下限约为2.27×10-2ng/μL,对EHEC CFU的检测下限约为104cfu/mL。对人工感染菌的样品进行检测,增菌前与增菌后的检测限分别为:饲料,4×103cfu/g和4×10-4cfu/g;土壤,4×103cfu/g和4×10-2cfu/g;牛肉,8×10-1cfu/g和8×10-3cfu/g;废水,4×103cfu/g和4×10-3cfu/g。该方法还能检出感染了EHEC O157小鼠的粪便。综上,本研究建立了一种优化的EHEC O157多重PCR检测方法,为动物养殖与肉品加工过程中EHEC O157的检测提供了便捷、灵敏、可靠的技术手段。 展开更多

关键词 肠出血性大肠杆菌o157 多重PCR 检测

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肠出血性大肠埃希菌O157∶H7黏附HeLa细胞模型的建立 被引量：4

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作者 余抒 顾江 +6 位作者 曾浩 杨琴 刘艳青 张卫军 罗萍 王庆旭 毛旭虎 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第20期1933-1935,共3页

目的建立肠出血性大肠埃希菌O157∶H7体外黏附HeLa细胞模型,为进一步研究其致病机制奠定基础。方法以细菌黏附HeLa细胞数量为指标,分别评价细菌数量、细菌与细胞孵育时间对细菌黏附数量的影响,得到最佳条件,最后肌动蛋白荧光染色(FAS)... 目的建立肠出血性大肠埃希菌O157∶H7体外黏附HeLa细胞模型,为进一步研究其致病机制奠定基础。方法以细菌黏附HeLa细胞数量为指标,分别评价细菌数量、细菌与细胞孵育时间对细菌黏附数量的影响,得到最佳条件,最后肌动蛋白荧光染色(FAS)试验鉴定模型。结果加入细菌为1×105CFU,细菌与细胞孵育4h时,黏附细胞的数量最佳,FAS检测发现该条件下细菌能够引起细胞特异性黏附、擦拭(attaching&effacing,A/E)损伤,模型建立成功。结论成功建立O157∶H7体外黏附HeLa细胞模型,为进一步研究其致病机制提供了条件。 展开更多

关键词 肠出血性大肠埃希菌o157:h7 细胞模型 hELA细胞

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O157大肠杆菌生物学特性及分离鉴定技术研究 被引量：4

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作者 顾玲 郭喜玲 +3 位作者 李玉青 曾晓燕 史智扬 汪华 《疾病监测》 CAS 2004年第10期368-371,共4页

目的　研究肠出血性大肠杆菌 (EnterohemorrhagicEscherichiacoli)O15 7:H7和其他O15 7大肠杆菌 (以下简称O15 7:非H7)的生物学特性 ,制定高效、实用的O15 7:H7分离程序及鉴定指标。方法　生化试验和玻片凝集试验分别检测菌株的生化特... 目的　研究肠出血性大肠杆菌 (EnterohemorrhagicEscherichiacoli)O15 7:H7和其他O15 7大肠杆菌 (以下简称O15 7:非H7)的生物学特性 ,制定高效、实用的O15 7:H7分离程序及鉴定指标。方法　生化试验和玻片凝集试验分别检测菌株的生化特性和菌体抗原 ;穿刺法接种抗 -H7抗血清琼脂检测H7鞭毛抗原 ,试管凝集试验检测其它鞭毛抗原。聚合酶链反应 (PCR)分别检测特异性基因和毒力基因。结果　 194株O15 7:H7与10 1株O15 7:非H7在山梨醇、蔗糖、赖氨酸和鸟氨酸等生化反应中有差异。 194株O15 7:H7中 192株(98 97% )携带O15 7特异性基因 ,189株 (97 4 2 % )菌体抗原表型阳性 ;10 1株O15 7:非H7均携带O15 7特异性基因同时表型亦为阳性。 194株O15 7:H7均携带H7特异性基因 ,186株 (95 88% )鞭毛抗原表型阳性。 194株O15 7:H7中除 1株 (0 5 2 % )四种毒力基因检测均为阴性外 ,其余 193株 (99 4 8% )均携带 2种及其以上毒力基因 ;10 1株O15 7:非H7四种毒力基因检测均为阴性。结论　O15 7:H7特征性生化反应、O15 7和H7特异性基因检测及其携带毒力基因的特性 ,在区分不同类型的O15 7方面有重要意义 ,据此可以制定针对性强的O15 7:H7分离鉴定程序。 展开更多

关键词 o157 大肠杆菌 生物学特性 分离技术 鉴定技术 聚合酶链反应

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