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东北雅罗鱼微卫星分子标记的筛选及特征分析 被引量：16
1
作者 刘金亮 常玉梅 +5 位作者 徐丽华 刘春雷 梁利群 韩国苍 高玉奎 柳玉海 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2011年第1期87-93,共7页
通过磁珠富集法筛选东北雅罗鱼的微卫星分子标记。采用限制性内切酶Sau 3AI对东北雅罗鱼基因组DNA进行酶切,选取400～900 bp的片段进行PCR全基因组扩增,并利用生物素标记的(CAG)8、(TGA)8、(AGAT)6、(GATT)6 4个探针进行微卫星片段的富... 通过磁珠富集法筛选东北雅罗鱼的微卫星分子标记。采用限制性内切酶Sau 3AI对东北雅罗鱼基因组DNA进行酶切,选取400～900 bp的片段进行PCR全基因组扩增,并利用生物素标记的(CAG)8、(TGA)8、(AGAT)6、(GATT)6 4个探针进行微卫星片段的富集。将得到的片段与T载体连接后转入DH5α大肠杆菌中,然后以SaulA为引物对长出的菌落进行PCR扩增,挑取扩增后片段大小符合条件的菌落送生物公司测序。结果表明:1 416个阳性克隆中有1 047个克隆含有重复次数大于5次的微卫星序列,完美型占67.99%,非完美型为15.31%;混合性标记占16.70%。从中选出160个微卫星序列设计105对引物并合成,经过筛选,56对引物可扩增出清晰条带,其中23对具有多态性。选取18对多态性引物对达里湖东北雅罗鱼群体进行扩增,结果显示等位基因数为3～11,多态信息含量(PIC)为0.207 7～0.882 0,67%(12对/18对)的位点处于高度多态水平(PIC>0.5)。 展开更多
关键词 东北雅罗鱼 微卫星 磁珠富集
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乌鳢微卫星DNA分子标记的分离及筛选 被引量：5
2
作者 温晓曦 孙效文 《大连水产学院学报》 CSCD 北大核心 2010年第3期260-264,共5页
利用磁珠富集法结合放射性同位素杂交方法分离乌鳢Ophiocephalus argus的微卫星分子标记,共获得阳性克隆1 200个,从中挑选466个进行测序,得到400个含有微卫星的序列(占86.6%)。结果表明:完美型微卫星座位325个,占76.11%;非完美型微卫星... 利用磁珠富集法结合放射性同位素杂交方法分离乌鳢Ophiocephalus argus的微卫星分子标记,共获得阳性克隆1 200个,从中挑选466个进行测序,得到400个含有微卫星的序列(占86.6%)。结果表明:完美型微卫星座位325个,占76.11%;非完美型微卫星座位75个,占17.57%;复合型微卫星座位27个,占6.32%。在得到的微卫星序列中,重复单元除CAG/GTC外,还观察到二碱基重复单元。根据侧翼序列设计引物139对,选择合成50对,通过优化PCR反应条件,结果有27对引物可扩增出清晰可重复的目的条带,19对引物在黑龙江群体、山东群体乌鳢的DNA样本中表现出多态性。 展开更多
关键词 乌鳢 微卫星 磁珠富集
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青蟹微卫星DNA的筛选及特征分析 被引量：5
3
作者 周宇芳 舒妙安 朱晓宇 《水产科学》 CAS 北大核心 2010年第10期616-619,共4页
利用磁珠富集法,结合生物素标记的(CA)16寡核苷酸探针从青蟹基因组MboI酶切片段中筛选微卫星DNA序列。将得到的片段与pGEM-T Easy载体连接后转化克隆构建微卫星富集文库。经PCR筛选检测,对89个阳性克隆进行测序,其中52个克隆中含有64个... 利用磁珠富集法,结合生物素标记的(CA)16寡核苷酸探针从青蟹基因组MboI酶切片段中筛选微卫星DNA序列。将得到的片段与pGEM-T Easy载体连接后转化克隆构建微卫星富集文库。经PCR筛选检测,对89个阳性克隆进行测序,其中52个克隆中含有64个微卫星,完全型占87.50%,重复次数超过11次的占78.12%。根据所获微卫星的侧翼序列设计并合成了30对引物,通过优化PCR反应条件,并在35只青蟹个体中进行PCR扩增检测,最终获得了10对具有多态性的引物,为进一步开展青蟹遗传多样性分析、遗传图谱构建等研究提供了基础资料。 展开更多
关键词 青蟹 磁珠富集法 微卫星DNA 特征分析
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