目的研究乙型肝炎病毒(HBV)启动子(含增强子)调控下的增强型绿色荧光蛋白(EGFP) 报告基因在肝癌细胞中的表达。方法用聚合酶链反应(PCR)技术分别扩增出HBV的4个启动子,载入 T载体,测序后插入到含EGFP报告基因的质粒pEGFP-1,构建出HBV不...目的研究乙型肝炎病毒(HBV)启动子(含增强子)调控下的增强型绿色荧光蛋白(EGFP) 报告基因在肝癌细胞中的表达。方法用聚合酶链反应(PCR)技术分别扩增出HBV的4个启动子,载入 T载体,测序后插入到含EGFP报告基因的质粒pEGFP-1,构建出HBV不同启动子调控的EGFP基因表达载体,经酶切、测序鉴定各重组体。采用脂质体介导法将4种构建好的载体转染肝癌细胞株H e p G 2,用倒置荧光显微镜观察各重组体转染细胞中EGFP的表达。结果各目的片段测序正确并成功插入表达载体中, 转染了各质粒的阳性细胞克隆均可检测出E G F P的表达,不同启动子调控下的蛋白表达量有所不同。结论 H B V启动子调控下的E G F P报告基因能够在肝癌细胞中特异表达,不同启动子表达效率之间存在一定的差异性,从而为肝脏疾病的基因治疗提供了一个新的选择。展开更多
文摘目的研究乙型肝炎病毒(HBV)启动子(含增强子)调控下的增强型绿色荧光蛋白(EGFP) 报告基因在肝癌细胞中的表达。方法用聚合酶链反应(PCR)技术分别扩增出HBV的4个启动子,载入 T载体,测序后插入到含EGFP报告基因的质粒pEGFP-1,构建出HBV不同启动子调控的EGFP基因表达载体,经酶切、测序鉴定各重组体。采用脂质体介导法将4种构建好的载体转染肝癌细胞株H e p G 2,用倒置荧光显微镜观察各重组体转染细胞中EGFP的表达。结果各目的片段测序正确并成功插入表达载体中, 转染了各质粒的阳性细胞克隆均可检测出E G F P的表达,不同启动子调控下的蛋白表达量有所不同。结论 H B V启动子调控下的E G F P报告基因能够在肝癌细胞中特异表达,不同启动子表达效率之间存在一定的差异性,从而为肝脏疾病的基因治疗提供了一个新的选择。
