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Wnt/β-catenin信号通路在胚胎癌细胞增殖中作用及机制研究 被引量:2
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作者 张帅 李毅 +3 位作者 武玉玲 史琨 邴鲁军 郝晶 《山东大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2011年第6期53-58,共6页
目的探讨Wnt/β-catenin信号通路在胚胎癌细胞增殖中的作用及其机制。方法取小鼠胚胎癌细胞系P19进行传代培养,将细胞分为正常对照组(Con组)、添加反式维甲酸组(RA组)、添加GSK-3β特异性抑制剂SB216763组(SB组)和添加SB216763+RA组(SB... 目的探讨Wnt/β-catenin信号通路在胚胎癌细胞增殖中的作用及其机制。方法取小鼠胚胎癌细胞系P19进行传代培养,将细胞分为正常对照组(Con组)、添加反式维甲酸组(RA组)、添加GSK-3β特异性抑制剂SB216763组(SB组)和添加SB216763+RA组(SB+RA组)四组。采用免疫荧光染色、RT-PCR和Western blot-ting法分别检测细胞中β-catenin、Oct4及C-myc的表达状况;通过BrdU标记与MTT法检测细胞的增殖。结果 加入SB216763可促进P19细胞β-catenin入核,同时促进Oct4和C-myc基因的表达,阻断RA诱导的细胞分化,并可明显促进细胞增殖。结论 激活Wnt/β-catenin信号通路可促进胚胎癌细胞P19的增殖并抑制分化,其作用机制可能是通过上调C-myc基因表达来实现的。 展开更多
关键词 胚胎癌细胞 Β-CATENIN C-MYC 增殖
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胚胎癌F9细胞中Oct4在miRNA302启动子上的募集 被引量:1
2
作者 刘海英 石宇 刘见桥 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1321-1323,共3页
目的检测胚胎癌F9细胞中Oct4是否能在miR302启动子上募集。方法采用荧光半定量Real-time PCR检测F9细胞中Oct4RNA干扰后Oct4及miR302表达量的变化,采用染色质免疫沉淀技术(CHIP)检测F9细胞中Oct4在miR302启动子上募集的情况。结果 (1)Oc... 目的检测胚胎癌F9细胞中Oct4是否能在miR302启动子上募集。方法采用荧光半定量Real-time PCR检测F9细胞中Oct4RNA干扰后Oct4及miR302表达量的变化,采用染色质免疫沉淀技术(CHIP)检测F9细胞中Oct4在miR302启动子上募集的情况。结果 (1)Oct4 RNA干扰后Oct4表达下降了56%,miR302的表达下降了38%,两者具有相似的表达趋势。(2)Oct4能在miR302启动子上募集。结论 F9细胞中Oct4及miR302的表达具有相关性,miR302启动子上有Oct4募集,Oct4对miR302启动子具有调节作用,miR302可能是Oct4的靶基因之一。 展开更多
关键词 OCT4 miR302 多能性 胚胎癌细胞
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胚胎癌F9细胞中Oct4对miR-302启动子的调控作用
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作者 刘海英 黄青 +1 位作者 董静文 李莉 《癌变.畸变.突变》 CAS CSCD 2014年第4期258-260,265,共4页
目的:检测胚胎癌F9细胞中Oct4对miR-302启动子活性是否具有调节作用。方法:构建PGL3-P-miR-302启动子荧光素酶报告基因质粒并验证其活性,然后将0.5μg PGL3-P-miR-302分别与0.5和1.0 g Oct4表达质粒共转染至293T细胞中,检测过表达Oct4对... 目的:检测胚胎癌F9细胞中Oct4对miR-302启动子活性是否具有调节作用。方法:构建PGL3-P-miR-302启动子荧光素酶报告基因质粒并验证其活性,然后将0.5μg PGL3-P-miR-302分别与0.5和1.0 g Oct4表达质粒共转染至293T细胞中,检测过表达Oct4对miR-302启动子活性的影响;并将0.5μg PGL3-P-miR-302和Oct4 siRNA(2.0μg siRNA1和2.0μg siRNA2)共转染到F9细胞中,检测Oct4 RNA干扰对miR-302启动子活性的影响,以验证Oct4对miR-302启动子是否有调控作用。结果:成功构建了PGL3-P-miR-302启动子荧光素酶报告基因质粒,并证实了PGL3-P-miR-302在F9细胞中具有启动子活性;在T293细胞中,当Oct4表达质粒为0.5μg时miR-302启动子转录活性是对照组的2.6倍(P<0.05),当Oct4为1.0μg时miR-302启动子转录活性是对照组的4.3倍(P<0.05);在F9细胞中miR-302启动子的活性在转染Oct4 siRNA后明显下降,约为siRNA非特异性对照组的68%(P<0.05)。结论:Oct4对miR-302启动子具有正调节作用,miR-302可能是Oct4的靶基因之一。 展开更多
关键词 OCT4 miR-302 胚胎癌细胞 启动子
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siRNA干扰Oct4基因对P19细胞中miR-302启动子活性的影响
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作者 刘海英 宋巍 石宇 《中国优生与遗传杂志》 2012年第8期17-18,25,共3页
目的检测siRNA干扰Oct4基因对P19细胞中miR-302启动子活性的影响,探讨维持胚胎癌(EC)细胞及胚胎干细胞(ES)全能性的调控机制。方法采用Western blotting检测Oct4 siRNA对Oct4蛋白的干扰效果;采用双荧光素酶报告基因分析系统检测siRNA干... 目的检测siRNA干扰Oct4基因对P19细胞中miR-302启动子活性的影响,探讨维持胚胎癌(EC)细胞及胚胎干细胞(ES)全能性的调控机制。方法采用Western blotting检测Oct4 siRNA对Oct4蛋白的干扰效果;采用双荧光素酶报告基因分析系统检测siRNA干扰Oct4基因对P19细胞中miR-302基因启动子活性的影响。结果对于Oct4蛋白的最适干扰量为2.0μg siRNA1和2.0μg siRNA2;向P19细胞中转染Oct4 siRNA可以降低miR-302启动子的荧光素酶活性。结论 Oct4对miR-302的启动子具有正向调控作用。 展开更多
关键词 胚胎癌细胞 Oct4基因 miR-302 RNA干扰
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Screening of natural compounds with neuronal differentiation promoting effects in a cell-based model 被引量:1
5
作者 CHEN Tao WANG Juan +2 位作者 LIU Mei ZHANG Lu-Yong LIAO Hong 《Chinese Journal of Natural Medicines》 SCIE CAS CSCD 2015年第8期602-608,共7页
The purpose of this study was to establish a drug screening method for small molecules extracted from traditional Chinese medicines(TCM) that have neuronal differentiation promoting effects, using P19 embryonic carcin... The purpose of this study was to establish a drug screening method for small molecules extracted from traditional Chinese medicines(TCM) that have neuronal differentiation promoting effects, using P19 embryonic carcinoma cell as a cell-based model. First, the constructed plasmid(p Tα1-Luc) was transfected into P19 cells to establish a screening model. Second, several TCMs were screened using the established model and all-trans-retinoic acid as a positive control. Finally, the underlying molecular mechanism was explored using immunofluorescence staining, q T-PCR, and Western blot analysis. Our results indicated that the drug screen model was established successfully and that both honokiol and hyperoside induced P19 differentiation into neurons, with the possible molecular mechanism being modulating the Wnt signaling pathway. In conclusion, the drug screening model developed in the present study provides a rapid, cell-based screening platform for identifying natural compounds with neuronal differentiation effects. 展开更多
关键词 Drug SCREENING MODEL NEURONAL differentiation P19 embryonic carcinoma cells Wnt signaling pathway Traditional Chinese Medicine
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不同剂量铝对小鼠F9畸胎瘤细胞周期、凋亡和DNA-蛋白质交联的影响 被引量:2
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作者 彭巍 张君 徐尚荣 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期127-131,共5页
本试验旨在研究不同剂量铝对小鼠F9畸胎瘤细胞周期、凋亡和DNA-蛋白质交联(DNA-protein crosslinks,DPC)的影响。不同水平的氯化铝(0、50、100、200μmol/L,Ⅰ~Ⅳ组)作用F9细胞24h后,采用MTT法观察细胞的增殖毒性,流式细胞术和荧光... 本试验旨在研究不同剂量铝对小鼠F9畸胎瘤细胞周期、凋亡和DNA-蛋白质交联(DNA-protein crosslinks,DPC)的影响。不同水平的氯化铝(0、50、100、200μmol/L,Ⅰ~Ⅳ组)作用F9细胞24h后,采用MTT法观察细胞的增殖毒性,流式细胞术和荧光染色法分别研究细胞周期和凋亡的变化,荧光比色法研究DPC含量的变化。结果显示:与Ⅰ组相比,各剂量组细胞的增殖活力、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活性呈不同水平的降低,S期细胞数量的百分比、细胞凋亡率、乳酸脱氢酶(LDH)释放水平和丙二醛(MDA)含量不同程度的升高,存在剂量-效应相关。结果表明:过量的铝能够打破F9细胞氧化抗氧化的平衡,对细胞DNA产生损伤。 展开更多
关键词 F9畸胎瘤细胞 细胞周期 凋亡 DNA-蛋白质交联
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1pcDNA3.1-Ercc6l真核表达载体的构建及在P19细胞内的表达
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作者 张庆 陈祥贵 《泰山医学院学报》 CAS 2008年第3期164-168,共5页
目的构建Ercc6l的正、反义真核表达载体,并在P19胚胎癌细胞内瞬时表达,在细胞学水平对基因功能进行初步研究。方法KpnⅠ/XhoⅠ双酶切pGEM-T-Ercc6l获得目的基因Ercc6l,将其克隆到同样经过双酶切的真核表达载体pcDNA3.1(+)和pcDNA3.1(-)M... 目的构建Ercc6l的正、反义真核表达载体,并在P19胚胎癌细胞内瞬时表达,在细胞学水平对基因功能进行初步研究。方法KpnⅠ/XhoⅠ双酶切pGEM-T-Ercc6l获得目的基因Ercc6l,将其克隆到同样经过双酶切的真核表达载体pcDNA3.1(+)和pcDNA3.1(-)Myc His6,重组质粒pcDNA3.1(+/-)-Ercc6l经菌落PCR和双酶切鉴定;脂质体介导法体外瞬时转染正义载体至P19细胞,RT-PCR检测基因在细胞内的表达活性情况。结果重组质粒经菌落PCR和KpnⅠ/XhoⅠ双酶切鉴定,表明真核表达载体构建正确;脂质体介导法瞬时转染正义载体至P19细胞后,检测表明转染细胞能够表达Ercc6l。结论成功构建了Ercc6l正、反义真核表达载体,其正义载体转染真核细胞后能在其中表达。 展开更多
关键词 Ercc6l 真核表达 P19胚胎癌细胞 RT-PCR
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低剂量力达霉素对小鼠P19胚胎癌细胞的生长抑制作用及其机制
8
作者 李映 王畅 +2 位作者 谭业辉 甄红英 姚程 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期249-253,I0003,共6页
目的:探讨低剂量力达霉素对小鼠P19胚胎癌细胞生长的影响及其可能的作用机制,为以肿瘤干细胞为靶点的肿瘤治疗提供依据。方法:体外培养P19细胞,实验分非加药组、阿霉素组和力达霉素组。MTT法检测力达霉素处理P19细胞后的剂量曲线和时间... 目的:探讨低剂量力达霉素对小鼠P19胚胎癌细胞生长的影响及其可能的作用机制,为以肿瘤干细胞为靶点的肿瘤治疗提供依据。方法:体外培养P19细胞,实验分非加药组、阿霉素组和力达霉素组。MTT法检测力达霉素处理P19细胞后的剂量曲线和时间曲线。流式细胞术进一步确定力达霉素和阿霉素处理过的P19细胞的非凋亡剂量,并检测其细胞周期改变。Rea-l time PCR、Western blotting和免疫荧光化学技术检测力达霉素和阿霉素处理过的P19细胞中转录因子Oct4 mRNA和蛋白质的表达水平。结果:MTT法分析结果显示,力达霉素和阿霉素分别处理P19细胞后的半数有效抑制浓度(IC50)为1×10-11mol·L-1和0.5×10-6mol·L-1,从0.001 nmol·L-1到0.1 nmol·L-1浓度范围内的力达霉素处理细胞120 h后,仍可有效抑制小鼠P19胚胎癌细胞生长。流式细胞术分析表明,非凋亡剂量0.01 nmol·L-1力达霉素阻滞P19细胞生长发生在G1期,而0.5μmol·L-1阿霉素阻滞P19细胞生长则发生在G2期。Rea-l time PCR、Western blotting和免疫荧光化学实验均揭示低剂量力达霉素下调P19细胞中的Oct4表达,而阿霉素无此作用。结论:低剂量力达霉素抑制P19细胞生长可能与其下调了胚胎干细胞基因Oct4有关。 展开更多
关键词 力达霉素 P19胚胎癌细胞 转录因子Oct4
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内皮素1调控P19细胞向心脏传导细胞分化的机制 被引量:5
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作者 陈浩 张武 +2 位作者 王浩 张恒一 徐志伟 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2018年第12期1915-1921,共7页
背景:内皮素1作为一种来源于心内膜和动脉血管内皮的旁分泌信号,能够诱导心脏传导细胞的分化成熟。目的:探讨内皮素1在体外诱导P19细胞向心脏传导细胞分化的作用。方法:P19细胞分别与1%二甲基亚砜和100 nmol/L浓度内皮素1孵育,通过Weste... 背景:内皮素1作为一种来源于心内膜和动脉血管内皮的旁分泌信号,能够诱导心脏传导细胞的分化成熟。目的:探讨内皮素1在体外诱导P19细胞向心脏传导细胞分化的作用。方法:P19细胞分别与1%二甲基亚砜和100 nmol/L浓度内皮素1孵育,通过Western blot、免疫荧光和qR T-PCR鉴定早期心肌细胞特征性转录因子GATA4、MEF2C和心肌细胞分化标志物MHC-α、cTnT,以及重要的传导细胞转录因子Nkx2.5、Tbx5和分化标志物Cx40、ANP的变化。qRT-PCR鉴定内皮素1特异性受体阻断剂和阻断PI3K-AKT-mTOR信号通路对内皮素1诱导P19细胞分化的影响。结果与结论:(1)内皮素1能够上调P19细胞早期心肌转录因子、心肌结构基因和传导系统特征表型表达;(2)与二甲基亚砜相比,内皮素1能够确实诱导P19细胞向心脏传导细胞分化;(3)内皮素1主要通过ETA通路上调Nkx2.5和Cx40表达水平从而诱导P19细胞向传导细胞分化,ETB通路可能还参与了一条负反馈调节通路;(4)内皮素1能够通过PI3K-AKT-mT OR信号通路调控Nkx2.5表达进而影响传导细胞分化。 展开更多
关键词 内皮素1 组织构建 分化 二甲基亚砜 P19细胞 心脏传导细胞 心肌细胞 胚胎性癌干细胞 心脏传导系统 细胞分化 组织工程
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