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单细胞克隆小鼠胚胎干细胞系的建立 被引量：11
1
作者 彭红梅 陈贵安 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期431-434,共4页
目的 :建立胚胎干细胞的培养系统及培养方法。方法 :用免疫溶解法 (immunosurgery)分离 3.5d的 1 2 9SvJ系小鼠囊胚内细胞团 ,在γ射线照射的胎鼠成纤维细胞饲养层上培养 ,胰酶消化传代。用组织化学法、免疫组织化学方法识别细胞表面标... 目的 :建立胚胎干细胞的培养系统及培养方法。方法 :用免疫溶解法 (immunosurgery)分离 3.5d的 1 2 9SvJ系小鼠囊胚内细胞团 ,在γ射线照射的胎鼠成纤维细胞饲养层上培养 ,胰酶消化传代。用组织化学法、免疫组织化学方法识别细胞表面标志 ,常规G带法行染色体核型分析 ,在体、离体分别观察细胞的多向分化能力。结果 :得到一个单细胞克隆 1 2 9系小鼠胚胎干细胞系G1 1 ,能长期稳定增殖不分化 ,具有正常 4 0XY核型 ,碱性磷酸酶阳性、SSEA 1阳性 ,在体和离体条件下可分化为多种细胞。结论 展开更多
关键词 单细胞克隆 小鼠 胚胎干细胞系 细胞培养
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微粒体Ⅱ相代谢酶基因在小鼠胚胎干细胞定向分化肝细胞中的表达 被引量：3
2
作者 郭美媛 朱丹雁 +1 位作者 杜悦 楼宜嘉 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 2007年第3期229-235,共7页
目的:评价微粒体Ⅱ相代谢酶基因在小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cells,ES细胞)定向分化肝细胞中的表达,为进一步探索酶蛋白表达及其催化活性提供依据。方法:ES细胞体外悬滴培养定向分化成肝细胞表型,RT-PCR法检测肝细胞发育依赖性基因... 目的:评价微粒体Ⅱ相代谢酶基因在小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cells,ES细胞)定向分化肝细胞中的表达,为进一步探索酶蛋白表达及其催化活性提供依据。方法:ES细胞体外悬滴培养定向分化成肝细胞表型,RT-PCR法检测肝细胞发育依赖性基因AFP、ALB、CYP7a1的表达,免疫细胞化学法确认成熟肝细胞特异性标记物白蛋白(ALB)表达,RT-PCR法检测上述肝细胞中Ⅱ相代谢酶尿苷二磷酸葡萄糖醛酸结合酶系(UGTs)和微粒体谷胱甘肽S-转移酶1(mGST1)基因表达。结果:ES细胞在定向分化至d8时,肝细胞发育依赖性基因AFP和ALB有较高表达,d18时AFP表达甚微而ALB表达显著增加,并伴有成熟肝细胞特异性基因CYP7a1的表达。定向分化呈肝细胞表型时,成熟肝细胞特异性蛋白ALB呈强阳性表达。分化过程中Ⅱ相代谢酶基因UGT1a1、UGT1a9在分化前后均稳定表达;UGT1a6表达呈发育依赖性;UGT2b5未见表达;mGST1在分化前后均有少量表达,但在成熟肝细胞中表达显著增加,与成熟小鼠肝相似。结论:ES细胞体外悬滴培养可定向分化为成熟肝细胞;Ⅱ相代谢酶UGTs、mGST1基因在分化成熟肝细胞表达与小鼠肝细胞相似,可望为Ⅱ相代谢酶代谢深层次研究提供高效模型。 展开更多
关键词 葡萄糖醛酸基转移酶 肝细胞 细胞分化 胚胎/细胞学 干细胞/生理学 细胞 培养的 谷胱甘肽转移酶
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细胞骨架蛋白基因转录与小分子促小鼠胚胎干细胞定向分化神经元样细胞的相关性
3
作者 许敏华 吴佳莹 +3 位作者 欧丽丽 朱丹雁 俞永平 楼宜嘉 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期242-248,共7页
目的:探索细胞骨架蛋白基因转录是否涉及全反式维甲酸(RA)促胚胎干(ES)细胞早期定向分化神经元样细胞,以此构建快速评价药物对ES细胞定向分化神经元的促进或抑制作用。方法:采用悬滴培养法模拟体内胚胎发育状态,形成拟胚体,进而贴壁向... 目的:探索细胞骨架蛋白基因转录是否涉及全反式维甲酸(RA)促胚胎干(ES)细胞早期定向分化神经元样细胞,以此构建快速评价药物对ES细胞定向分化神经元的促进或抑制作用。方法:采用悬滴培养法模拟体内胚胎发育状态,形成拟胚体,进而贴壁向神经细胞分化。利用RT-PCR法评价神经元呈特征性表达的一类细胞骨架蛋白基因微管相关蛋白(Mtap2)、神经丝(Nefm)和微管蛋白(β-tubulin)转录水平,作为RA促ES细胞定向分化神经元指标,结合光镜和免疫荧光法鉴定神经细胞的形成,由此构建快速评价体系。并在此基础上进一步评价合成化合物库内6个小分子对细胞骨架蛋白基因转录的影响。结果:RA诱导ES细胞定向分化神经元过程,Mtap2和Nefm转录水平均呈上调趋势,其中以Mtap2为甚,增加了1.27倍,并与同期细胞表型改变相一致,但β-tubulin无明显变化。6个合成小分子均使Mtap2转录受到抑制,但Nefm转录水平有不同程度上调,1号和3号化合物尤甚,分别增加了1.4和1.2倍,该上调作用与同期细胞表型改变不尽一致。结论:RA诱导ES细胞定向分化神经元早期,Mtap2和Nefm转录水平均呈上调趋势,其中Mtap2的表达与否与早期细胞表型改变相一致。 展开更多
关键词 干细胞/药物作用 胚胎/细胞学 微管相关蛋白质类/转录 神经元/细胞学 维甲酸/药理学 基因表达 中间丝蛋白质类 细胞 培养的 细胞分化
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人胚胎干细胞建系及其研究进展
4
作者 徐晨明 黄荷凤 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 2008年第1期103-107,共5页
人胚胎干细胞(human embryonic stem cell,hES)在再生医学、药物筛选和发育生物学等领域具有重要的研究和应用价值。hES细胞系通常生长在小鼠胚胎成纤维细胞上,动物源性病原生物的污染风险限制了这类hES的临床应用,因此寻找无血清、无... 人胚胎干细胞(human embryonic stem cell,hES)在再生医学、药物筛选和发育生物学等领域具有重要的研究和应用价值。hES细胞系通常生长在小鼠胚胎成纤维细胞上,动物源性病原生物的污染风险限制了这类hES的临床应用,因此寻找无血清、无饲养层细胞的成分明确的培养体系进行hES细胞建系及培养,生产细胞移植临床安全应用标准的hES是近年hES建系的努力方向。 展开更多
关键词 干细胞/细胞学 胚胎/细胞学 细胞分化 细胞培养技术 细胞 培养的
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