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电刺激小脑顶核对缺血／再灌注大鼠脑组织内NF-κB活性及其活化的影响 被引量：18
1
作者 万东 罗勇 谢鹏 《中华物理医学与康复杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期660-665,共6页
目的观察Wistar大鼠局灶脑缺血/再灌注后,脑内核因子-κB(NF-κB)活性及其活化的基本规律,并探讨电刺激小脑顶核(FNS)对其影响。方法成年雄性Wistar大鼠27只,随机分为正常组、单纯局灶脑缺血/再灌注组(模型组)和局灶脑缺血/再灌注+电刺... 目的观察Wistar大鼠局灶脑缺血/再灌注后,脑内核因子-κB(NF-κB)活性及其活化的基本规律,并探讨电刺激小脑顶核(FNS)对其影响。方法成年雄性Wistar大鼠27只,随机分为正常组、单纯局灶脑缺血/再灌注组(模型组)和局灶脑缺血/再灌注+电刺激小脑顶核治疗组(FNS治疗组)。采用线栓法制备右侧大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,缺血时间均为2 h,根据再灌注时间分为缺血2 h/再灌注3,6,1 2和24 h组。模型组不给予任何干预处理,FNS治疗组在缺血2 h再灌注即刻给予FNS治疗1 h。用Western blot法捡测缺血脑组织核抽提物中NF-κB p65蛋白的表达,用电泳迁移率改变分析法(EMSA)检测核抽提物中NF-κB DNA的结合活性。结果正常组大鼠脑组织核抽提物中有少量NF-κB p65蛋白,NF-κB DNA结合活性较弱。模型组再灌注各时间点,即再灌注3,6,12和24 h．NF-κB p65蛋白含量均高于正常组,其中再灌注6 h和12 h均显著高于正常组(P＜0．05)。模型组NF-κB p65蛋白含量变化趋势为：再灌注3 h＜再灌注6 h＜再灌注12 h,再灌注12 h达峰值,各组间差异具有统计学意义(P＜0．05)；再灌注24 h时NF-κB p65蛋白含量明显低于再灌注6 h和12 h(P＜0．05)。模型组NF-κB DNA结合活性除再灌注3 h外,其余3个时间点均显著高于正常组(P＜0．05)；模型组再灌注3 h时,NF-κB DNA结合活性明显弱于组内其余3个时间点(P＜0．05),这3个时间点均为高活性状态,组内差异无统计学意义(P＞0．05)。FNS治疗组NF-κB p65蛋白含量及NF-κB DNA结合活性的变化趋势与模型组相似。其中,再灌注6 h和12 h时,FNS治疗组NF-κB p65蛋白含量明显低于模型组相应时间点(P＜0．05)；再灌注6,12和24 h时,FNS治疗组NF-κB DNA结合活性也明显低于模型组相应时间点(P＜0．05)。结论大鼠局灶脑缺血/再灌注后缺血脑组织中NF-κB活化明显,活性增强；FNS可下调NF-κB活化程度,抑制NF-κB DNA结合活性,这可能� 展开更多
关键词 电刺激小脑顶核 局灶脑缺血/再灌注 核因子-κB DNA结合活性 电泳迁移率改变分析法
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银杏内酯B对脂多糖刺激的小鼠腹腔巨噬细胞TNFα生成及大鼠胸腔多形核白细胞NF-κB活化的影响 被引量：14
2
作者 聂珍贵 彭珊瑛 王文杰 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期415-418,共4页
目的　研究银杏内酯B对脂多糖刺激的小鼠腹腔巨噬细胞TNFα生成及大鼠胸腔多形核白细胞NF κB活化的影响。方法　用L92 9细胞结晶紫染色法检测TNFα的含量 ,用电泳迁移率改变检测法检测NF κB的结合活性。结果　 1和 1 0 μmol·L-... 目的　研究银杏内酯B对脂多糖刺激的小鼠腹腔巨噬细胞TNFα生成及大鼠胸腔多形核白细胞NF κB活化的影响。方法　用L92 9细胞结晶紫染色法检测TNFα的含量 ,用电泳迁移率改变检测法检测NF κB的结合活性。结果　 1和 1 0 μmol·L- 1 银杏内酯B能够显著抑制LPS刺激的小鼠腹腔巨噬细胞TNFα的生成 ,其IC50 为 0 2 6 μmol·L- 1 ;1mg·L- 1 LPS和 1nmol·L- 1 PAF均可活化大鼠胸腔多形核白细胞NF κB ;银杏内酯B能够抑制LPS或PAF刺激的NF κB活化。结论　银杏内酯B能够抑制LPS刺激的小鼠腹腔巨噬细胞TNFα生成及大鼠胸腔多形核白细胞NF κB的活化。PAF参与LPS激活NF 展开更多
关键词 银杏内酯B 脂多糖 小鼠 TNFΑ 多形核白细胞 NF-ΚB活化 巨噬细胞
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晚期糖基化终产物激活内皮细胞核因子κB 被引量：15
3
作者 张桂林 刘尚喜 +1 位作者 邓鹤秋 张训 《中国动脉硬化杂志》 CAS CSCD 2005年第3期329-331,共3页
目的探讨晚期糖基化终产物对人血管内皮细胞核因子κB的激活及作用机制。方法用晚期糖基化终产物修饰的人血清白蛋白与人脐静脉内皮细胞株ECV304体外共同培养。用Westernblot检测核因子κB抑制蛋白水平,凝胶滞留法检测核因子κB的活性... 目的探讨晚期糖基化终产物对人血管内皮细胞核因子κB的激活及作用机制。方法用晚期糖基化终产物修饰的人血清白蛋白与人脐静脉内皮细胞株ECV304体外共同培养。用Westernblot检测核因子κB抑制蛋白水平,凝胶滞留法检测核因子κB的活性。结果晚期糖基化终产物修饰的人血清白蛋白可致ECV304核因子κB抑制蛋白降解及核因子κB激活,并且呈时间、剂量依赖关系,抑制核因子κB抑制蛋白的降解,可抑制核因子κB的激活。结论晚期糖基化终产物修饰的人血清白蛋白通过引起核因子κB抑制蛋白降解,导致核因子κB的激活,这一作用机制可能参与动脉粥样硬化的进程。 展开更多
关键词 病理学与病理生理学 激活内皮细胞核因子KB 凝胶滞留法 晚期糖基化终产物 ECV304细胞株 核因子KB 核因子kB抑制蛋白
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脑组织核因子-κB激活对实验性变态反应性脑脊髓炎的作用 被引量：9
4
作者 檀国军 杨天祝 +3 位作者 赵晓云 周立霞 曹翠丽 马常升 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期58-64,共7页
为探讨脑组织核因子 κB(NF κB)对实验性变态反应性脑脊髓炎 (EAE)的作用 ,分别用凝胶电泳迁移分析和NF κBp65免疫组化方法测定了CFA GPSCH诱导大鼠EAE 1、7、14和 2 1d时脑组织NF κB活性和蛋白表达的动态变化 ,并观察了这些变化与EA... 为探讨脑组织核因子 κB(NF κB)对实验性变态反应性脑脊髓炎 (EAE)的作用 ,分别用凝胶电泳迁移分析和NF κBp65免疫组化方法测定了CFA GPSCH诱导大鼠EAE 1、7、14和 2 1d时脑组织NF κB活性和蛋白表达的动态变化 ,并观察了这些变化与EAE症状之间的关系。结果显示 :对照组大鼠脑组织仅有少量NF κB蛋白表达 ,其活性也很低 ;诱导EAE后 ,伴随着大鼠EAE症状及脑组织病理损伤的出现和进行性加重 ,其NF κB活性和蛋白表达量逐渐增高 ;在免疫后 14d达到高峰 ,NF κB阳性细胞主要位于脉络丛、穹隆下器、血管“套袖样”病灶的周围 ,与EAE病变部位一致 ,此时大鼠EAE发病率最高、病情最重、体重减轻最显著、脑组织病理改变也最明显 ;2 1d脑组织NF κB活性和蛋白表达量逐渐下降 ,大鼠EAE症状也逐渐恢复。应用NF κB特异性抑制剂PDTC以抑制脑内NF κB蛋白表达后 ,大鼠EAE症状和脑组织损伤明显减轻 ,说明脑组织NF κB的动态变化与EAE症状及脑组织损伤程度密切相关。结论 :脑组织NF κB的激活对EAE的发病起着关键的作用 ,应用NF κB抑制剂可能是防治该病的有效方法之一。 展开更多
关键词 神经生物学 脑脊髓炎 凝胶电泳迁移分析 核因子-ΚB 穹隆下器
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人肺癌中甲状腺转录因子-1DNA结合活性的意义 被引量：8
5
作者 高宗炜 郭春宝 金先庆 《中国肺癌杂志》 CAS 2009年第2期127-130,共4页
背景与目的甲状腺转录因子-1(TTF-1)是一种细胞核蛋自,在调控肺泡上皮基因表达与活性物质分泌中具有潜在的重要作用。本研究观察在肺癌组织中TTF-1的DNA结合活性,探讨其与肺癌病理类型、分化程度的关系。方法采用电泳迁移率(Electrophor... 背景与目的甲状腺转录因子-1(TTF-1)是一种细胞核蛋自,在调控肺泡上皮基因表达与活性物质分泌中具有潜在的重要作用。本研究观察在肺癌组织中TTF-1的DNA结合活性,探讨其与肺癌病理类型、分化程度的关系。方法采用电泳迁移率(Electrophoretic mobility shift assay,EMSA)同位素放射自显影,光密度分析的方法分别检测有随访资料的96例肺癌组织中TTF-1的DNA结合活性。结果TTF-1DNA结合活性在腺癌组织其光密度值为172±23.2,高于其它病理类型,其中小细胞癌光密度值为141±16.3,鳞癌光密度值为122±13.6(P<0.05);在高分化程度肺癌组织中TTF-1DNA结合活性较高(P<0.05)。TTF-1DNA结合活性水平与肺癌患者生存情况呈负相关。结论TTF-1DNA结合活性在肺癌组织较高;在不同病理类型、分化程度的肺癌组织中,TTF-1的DNA结合活性明显不同,可能在其中起重要作用,可作为肺癌患者转移及生存情况的潜在预测因子。 展开更多
关键词 甲状腺转录因子-1 肺肿瘤 电泳迁移率 放射自显影
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核因子кB诱捕物寡核苷酸对肾小管上皮细胞炎症因子表达的影响 被引量：4
6
作者 曹长春 李鹏 +3 位作者 欧周罗 王磊 朱春芳 丁小强 《中华肾脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期244-249,共6页
目的 研究核因子(NF)κB结合位点诱捕物寡核苷酸(NF-κB decoy ODN)对肾小管上皮细胞的NF-κB活性及下游炎症因子表达的影响。方法 (1)鱼精蛋白-脂质体法转染NF-κB decoyODN:将NF-κB decoy ODN与鱼精蛋白、脂质体混合,转染至TNF-α刺... 目的 研究核因子(NF)κB结合位点诱捕物寡核苷酸(NF-κB decoy ODN)对肾小管上皮细胞的NF-κB活性及下游炎症因子表达的影响。方法 (1)鱼精蛋白-脂质体法转染NF-κB decoyODN:将NF-κB decoy ODN与鱼精蛋白、脂质体混合,转染至TNF-α刺激培养的大鼠肾小管上皮细胞内,测定转染率。(2)凝胶电泳迟滞分析测定转染 NF-κB decoy ODN后细胞NF-κB活性。(3)RT-PCR方法检测转染NF-κB decoy ODN后细胞 ET-1、iNOS、ICAM-1、VCAM-l以及MCP-1 mRNA表达水平。结果 当+/-比例为4时,鱼精蛋白-脂质体法转染率高达93.20％;转染NF-κB decoy ODN可抑制TNF-α激活的NF-κB活性,从而进一步抑制ET-1、iNOS、ICAM-1、VCAM-I和MCP-1的mRNA表达。结论(1)鱼精蛋白-脂质体法是一种不受血清影响的高效率转染方法。(2)NF-κB decoy ODN在体外通过抑制NF-κB活性,进而影响肾小管上皮细胞炎症因子的表达。 展开更多
关键词 核因子κB诱捕物寡核苷酸 肾小管上皮细胞炎症因子 表达 鱼精蛋白-脂质体 转染
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沉默信息调节因子1基因启动子区域单核苷酸多态性与老年退行性心脏瓣膜病的相关性分析 被引量：6
7
作者 宋志鹏 李家睿 +3 位作者 高蕊 崔英华 逄淑超 闫波 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第13期991-996,共6页
目的探讨沉默信息调节因子1(SIRT1)基因启动子序列单核苷酸多态性(SNPs)与老年退行性心脏瓣膜病(SDHVD)的相关性。方法对236例SDHVD组成员(2012年2月至2016年10月济宁医学院附属医院确诊为SDHVD的患者)与285名健康对照组成员(同期于济... 目的探讨沉默信息调节因子1(SIRT1)基因启动子序列单核苷酸多态性(SNPs)与老年退行性心脏瓣膜病(SDHVD)的相关性。方法对236例SDHVD组成员(2012年2月至2016年10月济宁医学院附属医院确诊为SDHVD的患者)与285名健康对照组成员(同期于济宁医学院附属医院体检中心体检的健康体检者)的SIRT1基因启动子序列进行统计分析。Sanger测序法检测SIRT1基因启动子序列SNPs;χ^2、Logistic回归对SNPs进行基因型、等位基因分析和相关性分析,Haploview 4.2软件对SNPs进行连锁不平衡分析,SHEsis程序进行单倍型分析,凝胶迁移率变异实验(EMSA)分析SNPs对转录因子与SIRT1基因启动子相结合的影响,Transfac程序预测受多态性影响的与SIRT1基因启动子相结合的转录因子。结果rs3740051位点GG基因型与SDHVD的发生具有相关性,校正年龄后,其致SDHVD效应是AA基因型的3.079倍(OR=3.079,95%CI:1.156~8.201,P=0.024)。SIRT1基因启动子中,5个SNPs位点间呈强连锁不平衡(均D′>0.8),共形成11种P<0.05的单倍型,其中*A**C、AA**C、*AG*C、AAG*C、AA*AC、*AGAC和AAGAC在SDHVD组中具有更高的频率(均P<0.05,OR>1,95%CI不包含1)。EMSA示正常序列探针与核蛋白所孵育出的结合条带较突变序列探针与核蛋白所孵育出的结合条带颜色深。结论rs3740051位点GG基因型与SDHVD具有相关性且可能是SDHVD发生的危险性基因型。单倍型AC(跨rs932658和rs2394443)可能是SDHVD发生的危险性单倍型。rs3740051可能通过干扰FOXC蛋白与SIRT1基因启动子的结合影响SDHVD的发生发展。 展开更多
关键词 老年退行性心脏瓣膜病 沉默信息调节因子1 单核苷酸多态性 单倍型 凝胶迁移率变异实验
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改良EMSA法分析人α1(Ⅰ)胶原基因序列特异性DNA结合蛋白 被引量：6
8
作者 高春芳 李德岩 +3 位作者 万伟东 伍严安 王皓 孔宪涛 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第8期708-710,共3页
目的 :分析人α1( )胶原基因 5′侧翼区具有较高启动调控活性序列的 DNA结合蛋白。方法 :以原代培养人瘢痕皮肤成纤维细胞为胶原产生细胞 ,采用限制性内切酶消化、DNA混合片段末端标记和增强化学发光的改良电泳迁移率改变实验(EMSA)分析... 目的 :分析人α1( )胶原基因 5′侧翼区具有较高启动调控活性序列的 DNA结合蛋白。方法 :以原代培养人瘢痕皮肤成纤维细胞为胶原产生细胞 ,采用限制性内切酶消化、DNA混合片段末端标记和增强化学发光的改良电泳迁移率改变实验(EMSA)分析人 α1( )胶原基因 5′侧翼区 - 2 6 8～ + 42 bp序列 DNA结合蛋白。结果 :在胶原产生细胞——人瘢痕成纤维细胞中存在 α1( )胶原基因 - 2 6 8～ + 42 bp序列的 DNA结合蛋白 ,其结合活性具有特异性 ,并能被 Sp- 1,NF- 1,NF- κB识别序列所竞争。结论 :改良 EMSA法可用于分析较长序列的 DNA结合蛋白 ,人 α1( )胶原基因 - 2 6 8～ + 42 bp序列中存在转录因子Sp- 1,NF- 1,NF- κB结合序列 ,这些转录因子结合位点可能与人 α1( )胶原基因 - 2 6 8～ + 42 bp序列的高启动活性有关。 展开更多
关键词 基因 胶原 DNA结合蛋白 电泳迁移率改变分析
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炎性刺激剂对小鼠腹腔巨噬细胞NF-κB的诱导 被引量：4
9
作者 郭颖 胡玉芳 程桂芳 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第8期586-589,共4页
目的：建立炎性刺激剂诱导细胞核因子κＢ（ＮｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒκＢ，ＮＦκＢ）的模型，研究传统非甾体抗炎药阿斯匹林（ａｓｐｉｒｉｎ）作用机理。方法：用脂多糖（ＬＰＳ）和佛波酯（ＰＭＡ）刺激小鼠腹腔巨噬细胞，用电... 目的：建立炎性刺激剂诱导细胞核因子κＢ（ＮｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒκＢ，ＮＦκＢ）的模型，研究传统非甾体抗炎药阿斯匹林（ａｓｐｉｒｉｎ）作用机理。方法：用脂多糖（ＬＰＳ）和佛波酯（ＰＭＡ）刺激小鼠腹腔巨噬细胞，用电泳迁移率改变检测法（ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｉｃｍｏｂｉｌｉｔｙｓｈｉｆｔａｓａｙ，ＥＭＳＡ）检测。结果：ＬＰＳ１μｇ·ｍＬ－１及３μｇ·ｍＬ－１，ＰＭＡ２ｎｇ·ｍＬ－１均能诱导细胞核内ＮＦκＢ的含量。阿斯匹林１０－５ｍｏｌ·Ｌ－１可以显著抑制ＬＰＳ（１μｇ·ｍＬ－１）和ＰＭＡ（ＰＭＡ２ｎｇ·ｍＬ－１）对细胞核内ＮＦκＢ的活化。结论：所建立的以ＬＰＳ和ＰＭＡ为刺激剂，诱导细胞核内ＮＦκＢ的模型，可用于非甾体抗炎药的抗炎机理的研究。 展开更多
关键词 细胞核因子 小鼠 腹腔 阿斯匹林 巨噬细胞
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脂肪酸合酶抑制剂对大肠癌细胞NF-κB活性的抑制作用 被引量：2
10
作者 黄培林 金月玲 +2 位作者 朱世能 陆世伦 邓江平 《中国肿瘤临床与康复》 2000年第5期11-13,共3页
目的　探讨脂肪酸合酶抑制剂对大肠癌细胞NF κB活性的抑制作用。方法　用脂肪酸合酶抑制剂(FASI) 浅蓝菌素处理大肠癌LoVo细胞株 ,用凝胶电泳迁移率法 (EMSA)检测NF κB活性。结果　实验分别用不同浓度浅蓝菌素 (10 -9～ 10 -5M )处理... 目的　探讨脂肪酸合酶抑制剂对大肠癌细胞NF κB活性的抑制作用。方法　用脂肪酸合酶抑制剂(FASI) 浅蓝菌素处理大肠癌LoVo细胞株 ,用凝胶电泳迁移率法 (EMSA)检测NF κB活性。结果　实验分别用不同浓度浅蓝菌素 (10 -9～ 10 -5M )处理LoVo细胞 12h后 ,可抑制NF κB活化 ,其抑制程度呈剂量依赖性递减 ,与对照组相比较浅蓝菌素 (10 -9～ 10 -5M )处理LoVo细胞 12h后NF κB条带扫描像素积分比分别为 0 .787,0 .45 1,0 .379,0 .338,0 .32 2。结论　浅蓝菌素处理人大肠癌LoVo细胞后 ,NF κB活化程度随浅蓝菌素的剂量递增而递减。提示浅蓝菌素对LoVo细胞NF κB活性的具有抑制作用。 展开更多
关键词 脂肪酸合酶抑制剂 NF-кB 大肠癌细胞株
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活血承气汤对小肠缺血再灌注家兔小肠及肺组织NF-κB活性的影响 被引量：3
11
作者 杨涛 崔乃强 +2 位作者 郭世铎 李东华 王宇歆 《中国中西医结合外科杂志》 CAS 2006年第5期482-484,共3页
目的:观察和探讨应用活血承气汤(HXCQ)对小肠缺血再灌注家兔小肠及肺组织NF-κB活性的影响。方法:建立小肠缺血再灌注家兔模型,采用电泳迁移率改变分析方法(electrophoretic mobility shiftassay,EMSA),分析活血承气汤灌胃后不同时段小... 目的:观察和探讨应用活血承气汤(HXCQ)对小肠缺血再灌注家兔小肠及肺组织NF-κB活性的影响。方法:建立小肠缺血再灌注家兔模型,采用电泳迁移率改变分析方法(electrophoretic mobility shiftassay,EMSA),分析活血承气汤灌胃后不同时段小肠缺血再灌注家兔小肠以及肺组织NF-κB活性的变化。结果:应用活血承气汤后小肠缺血再灌注家兔小肠和肺组织NF-κB活性显著降低。结论:应用活血承气中药可显著减轻小肠缺血再灌注引起的小肠及肺组织损伤。 展开更多
关键词 NF—κB 缺血再灌注 电泳迁移率改变分析 活血承气汤
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圆锥小麦ramosa2的克隆及其重组蛋白的DNA结合特性分析 被引量：2
12
作者 唐如春 杨宇衡 +1 位作者 范三红 郭蔼光 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期439-446,共8页
【目的】从四倍体圆锥小麦中克隆ramosa2(TtRa2),分析其序列特征、组织表达特异性和体外活性,为阐明ramosa2与麦类作物穗形态建成关系奠定基础。【方法】利用半定量RT-PCR分析ramosa2在不同组织中的表达水平,将其重组到pET-21a-MBP载体... 【目的】从四倍体圆锥小麦中克隆ramosa2(TtRa2),分析其序列特征、组织表达特异性和体外活性,为阐明ramosa2与麦类作物穗形态建成关系奠定基础。【方法】利用半定量RT-PCR分析ramosa2在不同组织中的表达水平,将其重组到pET-21a-MBP载体并在T7 Express菌株中诱导表达。利用Amylose亲和层析柱纯化重组蛋白,通过凝胶阻滞试验对其DNA特异结合能力进行鉴定。【结果】TtRA2含有LOB和RA2结构域,属于Ⅰ类LBD蛋白家族成员。TtRa2在幼穗中高丰度表达,而在根、茎、叶、种子中未检测到表达。融合的TtRA2主要以可溶性形式存在,其表达量占总蛋白的68.6%。重组TtRA2可与包含核心序列"GCGGCG"的DNA探针特异性结合,两者形成的复合体的解离常数约为10 nmol.L-1。【结论】TtRa2参与圆锥小麦穗形态建成,其编码产物具备RA2-like转录因子的典型特征,具有类似拟南芥LOB的DNA结合特性。 展开更多
关键词 圆锥小麦 ramosa2 原核表达 LOB结构域 凝胶迁移阻滞分析
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小麦WPBF与高分子量谷蛋白基因上游Prolamin-Like box的特异结合 被引量：4
13
作者 卫晓彬 王亚楠 +3 位作者 张超 单丽伟 唐如春 范三红 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期7-15,共9页
【目的】克隆普通小麦胚乳特异表达转录因子基因WPBF,对其原核表达条件进行优化,并验证其编码蛋白和小麦高分子量谷蛋白亚基基因(HMW-GS)上游Prolamin-Like box的结合特性,为小麦HMW-GS表达调控机制的阐明奠定基础。【方法】利用RT-PCR... 【目的】克隆普通小麦胚乳特异表达转录因子基因WPBF,对其原核表达条件进行优化,并验证其编码蛋白和小麦高分子量谷蛋白亚基基因(HMW-GS)上游Prolamin-Like box的结合特性,为小麦HMW-GS表达调控机制的阐明奠定基础。【方法】利用RT-PCR扩增得到WPBF编码区,将其连接到pET-21a-MBP载体中,并分别在E.coliT7 Express和Origami B(DE3)菌株中诱导表达。依次利用Amylose和Ni-NTA亲和层析柱纯化重组蛋白,最后通过凝胶迁移阻滞试验(EMSA)对重组蛋白的DNA结合特性进行分析。【结果】在33℃的Origami B(DE3)菌株中表达含MBP和His双标签的重组WPBF大部分以可溶性形式存在,其表达量占细菌总蛋白的48.0%。重组WPBF和含HMW-GS上游Prolamin-Like box的两类DNA探针能发生特异结合,但重组WPBF和含"TGCAAAG"基序DNA探针的结合强度高于其和含"TGCAAG"基序DNA探针的结合。【结论】建立了优化的WPBF原核表达系统,并获得具有生物活性的重组蛋白;重组WPBF能与HMW-GS启动子来源的两种Prolamin-Like box特异性结合,但结合能力存在差异。 展开更多
关键词 小麦 WPBF 表达纯化 HMW-GS Prolamin—Like BOX 凝胶迁移阻滞试验
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转录因子Sp1在人内皮细胞高表达脂多糖相关因子1基因转录中的作用 被引量：4
14
作者 梁自文 吴惠玲 +4 位作者 罗敏 杨宗城 陈建 陈渝 罗勤 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第21期2249-2251,共3页
目的明确转录因子Sp1在人内皮细胞高表达脂多糖相关因子1(endothelial-overexpressed lipopolysiccha-ride-associated factor 1,EOLA1)基因转录调控中的作用。方法定点突变EOLA1基因核心启动子-734～-666序列中推断的Sp1结合位点,观察... 目的明确转录因子Sp1在人内皮细胞高表达脂多糖相关因子1(endothelial-overexpressed lipopolysiccha-ride-associated factor 1,EOLA1)基因转录调控中的作用。方法定点突变EOLA1基因核心启动子-734～-666序列中推断的Sp1结合位点,观察启动子活性变化;进行凝胶电泳迁移和染色质免疫共沉淀验证Sp1转录因子与启动子区顺式作用元件发生相互作用。结果突变Sp1结合位点后,核心启动子的活性(0.12±0.01)较野生启动子(2.51±0.98)显著下降(P<0.05),EMSA和染色质免疫共沉淀验证了SP1与启动子区顺式作用元件相互作用。结论转录因子Sp1调控了EOLA1基因的基础转录。 展开更多
关键词 EOLA1 SP1 启动子 凝胶电泳迁移 染色质共沉淀
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骆驼乳及其制品中非热变性乳铁蛋白含量的快速电泳迁移检测
15
作者 黄珍 李汉芳 +4 位作者 路梦凡 徐丹 舒国伟 黄锐 徐秦峰 《中国乳品工业》 CAS 北大核心 2023年第10期56-59,64,共5页
骆驼乳具有丰富的营养价值和保健功能,但其活性蛋白—乳铁蛋白对热处理加工工艺敏感,因此骆驼乳及其制品中非热变性乳铁蛋白含量的快速测定对其生产工艺控制和营养价值评估至关重要。文章研究了乳铁蛋白热变性对DNA结合的影响,发现特异... 骆驼乳具有丰富的营养价值和保健功能,但其活性蛋白—乳铁蛋白对热处理加工工艺敏感,因此骆驼乳及其制品中非热变性乳铁蛋白含量的快速测定对其生产工艺控制和营养价值评估至关重要。文章研究了乳铁蛋白热变性对DNA结合的影响,发现特异性的DNA序列仅能够结合非热变性驼乳铁蛋白而不结合热变性乳铁蛋白,据此建立了骆驼源乳铁蛋白的快速电泳迁移检测方法,仅需5 min即可完成一个样品检测,检出限为5.45μg/mL。该方法无需肝素亲和柱富集提取等复杂的样品前处理步骤,即可直接检测样品中活性乳铁蛋白含量,可用于包括骆驼乳在内的各种特色乳制品热加工工艺的精准控制及乳制品营养价值的评估。 展开更多
关键词 驼乳铁蛋白 非热变性乳蛋白 电泳迁移分析 直接快速检测
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家蚕脑核蛋白抽提及其与PTTH基因启动子的凝胶阻滞分析 被引量：4
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作者 魏兆军 洪桂云 +1 位作者 姜绍通 鲁成 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期265-271,共7页
【目的】转录调控对于明确昆虫许多生理过程如抗药性、抗病性、行为、进化及发育等方面的机理具有重要意义。家蚕PTTH是调控生长发育的重要神经肽,明确其转录调控机理对阐明其表达的发育和组织特异性具有重要价值。【方法】本文克隆并... 【目的】转录调控对于明确昆虫许多生理过程如抗药性、抗病性、行为、进化及发育等方面的机理具有重要意义。家蚕PTTH是调控生长发育的重要神经肽,明确其转录调控机理对阐明其表达的发育和组织特异性具有重要价值。【方法】本文克隆并测定了家蚕PTTH启动子序列,利用Matinspector分析软件预测该片段可能包含的顺式作用元件,采用高糖抽提缓冲液抽提家蚕脑核蛋白;标记PTTH启动子片段进行凝胶阻滞分析。【结果】家蚕PTTH启动子分析含有MEF2、TATA box、pbx-1等元件;抽提获得理想的脑核蛋白,脑核蛋白可以与PTTH转录起始位点附件119bp的序列特异地结合,把TATA Box的TATATAA突变后,脑核蛋白与突变后的探针MBS2不能结合。【结论】表明本研究中抽提的脑核蛋白是有效的,首次检测家蚕PTTH启动子可以与转录因子特异结合,初步鉴定了TATA Box。 展开更多
关键词 核蛋白 凝胶阻抑分析 PTTH基因 家蚕
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红外荧光成像技术分析DNA-蛋白复合物电泳迁移率的变动 被引量：3
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作者 王毅飞 蔡德鸿 +3 位作者 陈宏 莫永炎 伊娜 邢飞跃 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期289-291,共3页
目的通过红外荧光技术研究糖皮质激素诱导亮氨酸拉链蛋白(GILZ)与过氧化物酶体增殖物活化受体γ2(PPARγ2)启动子寡核苷酸的结合,了解一种非放射性研究电泳迁移率变动分析的新方法。方法原核表达制备GILZ蛋白,与红外荧光染料IRDye800标... 目的通过红外荧光技术研究糖皮质激素诱导亮氨酸拉链蛋白(GILZ)与过氧化物酶体增殖物活化受体γ2(PPARγ2)启动子寡核苷酸的结合,了解一种非放射性研究电泳迁移率变动分析的新方法。方法原核表达制备GILZ蛋白,与红外荧光染料IRDye800标记的PPARγ2启动子寡核苷酸结合,丙烯酰胺非变性胶电泳分离,Odyssey红外荧光成像系统扫描分析。结果一条DNA-蛋白结合复合物图像清晰直观,信号强度随着蛋白量的增加而增加。结论红外荧光技术可用于DNA-蛋白复合物电泳迁移率变动的分析,具有灵敏度高、操作方便的优点。 展开更多
关键词 红外荧光 电泳迁移率 DNA-蛋白复合物 糖皮质激素诱导亮氨酸拉链蛋白 过氧化物酶体增殖物活化受体γ2
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利拉鲁肽对高脂喂养肥胖大鼠胰腺中核转录因子κB和蛋白酪氨酸磷酸酶1B的影响 被引量：3
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作者 刘洋 赵琳 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期294-296,共3页
目的研究利拉鲁肽对高脂喂养肥胖大鼠胰腺中核转录因子κB(NF-κB)和蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP-1B)表达的影响。方法用高脂饮食诱导建立大鼠肥胖模型,并随机分组对照组和实验组,每组7只;另取7只正常大鼠作为空白组。实验组予以皮下注射利... 目的研究利拉鲁肽对高脂喂养肥胖大鼠胰腺中核转录因子κB(NF-κB)和蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP-1B)表达的影响。方法用高脂饮食诱导建立大鼠肥胖模型,并随机分组对照组和实验组,每组7只;另取7只正常大鼠作为空白组。实验组予以皮下注射利拉鲁肽注射液0.6 mg·kg^(-1)·d^(-1),对照组和空白组均予以皮下注射同体积0.9%NaCl约2 mL。3组大鼠均干预2周。比较3组大鼠胰腺中NF-κB活性和PTP-1B蛋白表达量。结果干预2周后,实验组、对照组和空白组的NF-κB积分灰度值分别为69.2,150.5和70.4,PTP-1B蛋白表达量分别为(1.53±0.34),(1.79±0.12)和(1.32±0.34),实验组和空白组的上述指标比较,差异均无统计学意义(均P>0.05),对照组的上述指标与实验组、空白组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论利拉鲁肽注射液可阻断高脂饮食对胰腺组织NF-κB的活化作用,同时可降低PTP-1B蛋白的表达。 展开更多
关键词 利拉鲁肽注射液 胰岛素抵抗 蛋白酪氨酸磷酸酶1B 凝胶电泳迁移率变化分析
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核因子-κB电泳迁移率变动分析方法的改进 被引量：3
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作者 蒲泽锦 吴灵飞 《汕头大学医学院学报》 2005年第3期169-171,174,共4页
目的:建立一种快速、简化的电泳迁移率变动分析(EMSA)方法检测DNA结合蛋白核因子-κB(NF-κB)。方法:NF-κB的提取和浓度测定,32P标记探针,探针与核蛋白结合,电泳和放射自显影。结果:该法可获得背景干净、条带清晰整齐的图片,能直接目测... 目的:建立一种快速、简化的电泳迁移率变动分析(EMSA)方法检测DNA结合蛋白核因子-κB(NF-κB)。方法:NF-κB的提取和浓度测定,32P标记探针,探针与核蛋白结合,电泳和放射自显影。结果:该法可获得背景干净、条带清晰整齐的图片,能直接目测NF-κB的活性。结论:改良的EMSA用于检测NF-κB更简便、实用、敏感性高,值得推广。 展开更多
关键词 电泳迁移率变动分析 核因子-KB 放射自显影术
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用改良的非同位素凝胶电泳迁移实验鉴定核酸适配体与靶蛋白的结合 被引量：3
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作者 葛兴枫 李慧 +6 位作者 李少华 丁红梅 黄皑雪 白琛俊 刘雪梅 李洁 邵宁生 《生物技术通讯》 CAS 2015年第2期249-251,共3页
目的:在核酸适配体与靶蛋白特异结合的凝胶电泳迁移实验(EMSA)测定方法中,探索使用非同位素标记取代同位素标记。方法:取一定量的生物素标记的核酸适配体与靶蛋白(或无关蛋白)于室温孵育,聚丙烯酰胺非变性凝胶电泳后将核酸适配体湿转至... 目的:在核酸适配体与靶蛋白特异结合的凝胶电泳迁移实验(EMSA)测定方法中,探索使用非同位素标记取代同位素标记。方法:取一定量的生物素标记的核酸适配体与靶蛋白(或无关蛋白)于室温孵育,聚丙烯酰胺非变性凝胶电泳后将核酸适配体湿转至带正电荷的尼龙膜上,紫外交联,经蛋白酶K消化后,用化学发光法检测。结果:与未使用蛋白酶K消化组相比,经蛋白酶K消化后,可明显呈现核酸适配体与靶蛋白特异结合后产生的阻滞条带,其灵敏度不次于同位素标记的检测方法。结论:经蛋白酶K消化步骤优化的生物素标记的EMSA方法,可以替代放射性同位素标记的EMSA方法,用于核酸适配体与靶蛋白结合情况的鉴定。 展开更多
关键词 凝胶电泳迁移实验 适配体 凝胶电泳 非同位素标记
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