强力素重组气道上皮细胞对铜绿假单胞菌生物膜的抵御作用 被引量：10

1

作者 聂晓红 周向东 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期257-260,共4页

目的观察人天然抗菌多肽强力素(Elafin)重组到气道上皮细胞后,对铜绿假单胞菌(PAE)生物膜(BF)是否有抵御作用。方法体外平板法制备铜绿假单胞菌BF模型,用银染法鉴定;体外培养A549细胞,将已构建好(pEGFP-N1-强力素)克隆载体通过脂质体转... 目的观察人天然抗菌多肽强力素(Elafin)重组到气道上皮细胞后,对铜绿假单胞菌(PAE)生物膜(BF)是否有抵御作用。方法体外平板法制备铜绿假单胞菌BF模型,用银染法鉴定;体外培养A549细胞,将已构建好(pEGFP-N1-强力素)克隆载体通过脂质体转染系统重组到A549细胞中,倒置荧光显微镜观察转染效率;转染后的A549细胞(正常组)、转染细胞分别用猪胰弹性蛋白酶(NE组)、PAE培养上清(PAE组)、大肠埃希菌(ECO组)各孵育24h后,分别采用Western印迹法和ELISA技术检测每组细胞内强力素含量和分泌水平,同时将BF载体放入3组诱导过的细胞中孵育8h,分别于4、8、12、24h观察细胞形态的破坏率。结果NE组、PAE组细胞内强力素含量和分泌水平较正常组的明显升高(均P<0.01),ECO组虽也较正常组有所升高(P<0.05),但升幅较小;3组诱导过的细胞在各时相点的破坏率均较正常组有所降低,但PAE组和NE组改善更显著,且PAE组的后期(24h)破坏率降低最明显。结论强力素能抵御铜绿假单胞菌BF对气道上皮细胞的损害,具有保护细胞作用;而PAE产物本身对这种保护细胞作用又有一定的诱导作用。 展开更多

关键词 强力素 生物膜 铜绿假单胞菌 气道上皮细胞

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系统性痰液分析技术在评估COPD病情进展中的意义 被引量：7

2

作者 王杰 周向东 +3 位作者 李琪 黄华萍 刘峰 覃英娇 《临床肺科杂志》 2019年第6期974-977,共4页

目的了解慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)病情不同阶段痰液理化特性及炎性因子弹性蛋白酶(neutrophile elastase,NE)、人白细胞弹性蛋白酶抑制因子(elafin)含量的演变,探究其在COPD病情评估中的价值。方... 目的了解慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)病情不同阶段痰液理化特性及炎性因子弹性蛋白酶(neutrophile elastase,NE)、人白细胞弹性蛋白酶抑制因子(elafin)含量的演变,探究其在COPD病情评估中的价值。方法收集20例COPD患者临床缓解期及急性加重期的痰液标本,观察痰液外观性状的差异;采用常规理化分析和免疫荧光定量方法,检测并分析痰液的粘度,痰液中粘蛋白、多糖、硫酸基、NE以及elafin的含量,同时计算痰液炎性损伤因素水平、抗损伤因素水平及损伤指数。结果COPD组痰液理化指标及NE含量均较正常人明显增高(P<0.01),elafin含量均较正常人降低。COPD组急性加重期与临床缓解期相比,痰液外观呈粘液脓性改变,痰液理化指标及NE含量升高(P<0.05),elafin含量降低(P<0.05)。COPD组痰液粘度与粘蛋白、多糖、硫酸基、NE呈正相关,与elafin呈负相关,急性加重期相关度更高。结论COPD病情的进展伴随痰液理化性质的恶化及炎性损伤因素/抗损伤因素水平的失衡,痰液分析在COPD患者病情评估中起重要作用。 展开更多

关键词 痰液分析 慢性阻塞性肺疾病 NE elafin

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天然内生抗菌多肽elafin真核表达载体的构建及在真核细胞的表达 被引量：6

3

作者 杨捷 周向东 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期608-610,共3页

采用RT-PCR法提取天然内生抗菌多肽elafin的基因,通过测序确认后亚克隆构建真核表达载体pEGFP-N 1-elafin,再转染至肺上皮细胞A 549,荧光显微镜观察pEGFP-N 1-elafin在细胞中表达及定位,采用N orthern杂交、EL ISA检测法分别从转录及蛋... 采用RT-PCR法提取天然内生抗菌多肽elafin的基因,通过测序确认后亚克隆构建真核表达载体pEGFP-N 1-elafin,再转染至肺上皮细胞A 549,荧光显微镜观察pEGFP-N 1-elafin在细胞中表达及定位,采用N orthern杂交、EL ISA检测法分别从转录及蛋白质水平分析表达情况,最后通过酶切电泳鉴定证实真核表达载体pEGFP-N 1-elafin构建成功,其转染细胞中有elafin的基因表达,且细胞上清液中elafin含量证实其主要是分泌性表达。E lafin基因cDNA真核表达载体的成功构建以及主要呈分泌性表达的特点显示了极具意义的潜在应用价值。 展开更多

关键词 elafin 真核表达载体 抗菌多肽

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Elafin重组气道上皮细胞对铜绿假单胞菌生物被膜的抗菌作用 被引量：4

4

作者 聂晓红 周向东 黄长武 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期725-728,共4页

目的探讨Elafin重组气道上皮细胞对铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,Pa)生物被膜(biofilm,BF)的抗菌作用。方法体外平板法制备Pa生物被膜模型,用银染法及扫描电镜鉴定。体外培养A549细胞,将pEGEP-N1-Elafin重组到A549细胞,倒置荧... 目的探讨Elafin重组气道上皮细胞对铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,Pa)生物被膜(biofilm,BF)的抗菌作用。方法体外平板法制备Pa生物被膜模型,用银染法及扫描电镜鉴定。体外培养A549细胞,将pEGEP-N1-Elafin重组到A549细胞,倒置荧光显微镜观察转染情况。采用猪胰弹性蛋白酶(NE组)、铜绿假单胞菌(Pa组)上清、大肠埃希杆菌(E．coli组)上清分别诱导孵育重组细胞24 h,另设转染未含Elafin基因空载体的A549细胞作为对照组。将成熟BF载体放入4组中继续孵育8 h,扫描电镜观察4组BF结构的变化,并于第8小时用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细菌存活数。结果扫描电镜下观察到3个诱导组的BF结构较对照组的BF明显松散,尤以Pa组和NE组为甚;NE组[(3．238±0．316)×106 CFU／cm2]、Pa组细菌数量[(3．317±0．247)×106 CFU／cm2]均较对照组[(5．946±0,453)×106 CFU／cm2]显著减少(P<0．01),E．coli组细菌数量[(5．138±0．391)×106 CFU／cm2]较Pa组和NE组减少,差异均有统计学意义(P<0．01)。3个诱导组BF细菌清除率与对照组相比分别为45．6％、44．2％和13．6％。结论Elafin重组气道上皮细胞能有效清除Pa生物被膜中的细菌,而Pa产物也是Elafin表达的有效诱导物。 展开更多

关键词 elafin 生物被膜 铜绿假单胞菌 气道上皮细胞 抗菌

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血清弹性蛋白酶抑制因子、骨桥蛋白及盆底电生理与盆底功能障碍性疾病的相关性研究 被引量：7

5

作者 张武香 刘佳 解育新 《实用临床医药杂志》 CAS 2021年第14期78-83,共6页

目的探讨血清弹性蛋白酶抑制因子(elafin)、骨桥蛋白(OPN)及盆底电生理与盆底功能障碍性疾病(PFD)的相关性。方法选取39例单纯盆腔脏器脱垂(POP)患者为单纯POP组,58例POP合并压力性尿失禁(SUI)患者为POP合并SUI组,63例无PFD女性体检者... 目的探讨血清弹性蛋白酶抑制因子(elafin)、骨桥蛋白(OPN)及盆底电生理与盆底功能障碍性疾病(PFD)的相关性。方法选取39例单纯盆腔脏器脱垂(POP)患者为单纯POP组,58例POP合并压力性尿失禁(SUI)患者为POP合并SUI组,63例无PFD女性体检者为对照组,检测3组血清elafin、OPN水平以及盆底肌力和疲劳度。采用Pearson相关或Spearman秩相关分析elafin、OPN与盆底肌力和疲劳度的相关性,采用Logistic回归分析探讨影响PFD发病的因素。结果血清elafin水平、Ⅰ类肌纤维肌电压、Ⅱ类肌纤维肌电压在对照组、单纯POP组、POP合并SUI组中依次降低,血清OPN水平、Ⅰ类肌纤维疲劳度绝对值、Ⅱ类肌纤维疲劳度绝对值依次升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。血清elafin水平、Ⅰ类肌纤维肌电压、Ⅱ类肌纤维肌电压在POP、SUI的Ⅰ度、Ⅱ度、Ⅲ度患者中依次降低,血清OPN水平、Ⅰ类肌纤维疲劳度绝对值、Ⅱ类肌纤维疲劳度绝对值依次升高,差异有统计学意义(P<0.05)。Spearman秩相关分析显示,血清elafin水平、Ⅰ类肌纤维肌电压、Ⅱ类肌纤维肌电压与POP、SUI分度呈负相关(P<0.05),血清OPN水平、Ⅰ类肌纤维疲劳度、Ⅱ类肌纤维疲劳度与POP、SUI分度呈正相关(P<0.05)。Pearson相关分析显示,Ⅰ类肌纤维肌电压、Ⅱ类肌纤维肌电压与elafin水平呈正相关(P<0.05),与OPN呈负相关(P<0.05),Ⅰ类肌纤维疲劳度、Ⅱ类肌纤维疲劳度与elafin水平呈负相关(P<0.05),与OPN呈正相关(P<0.05)。Logistic回归分析显示,年龄、产次、绝经、OPN、elafin与PFD发生具有相关性(P<0.01)。结论PFD患者血清elafin水平、盆底肌纤维肌电压降低,OPN水平、盆底肌肉疲劳度升高,elafin、OPN、盆底肌纤维肌电压和疲劳度均与PFD发生以及程度有关。 展开更多

关键词 弹性蛋白酶抑制因子 骨桥蛋白 盆底电生理 盆底功能障碍性疾病 肌电压 疲劳度

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重组人Elafin转染气道上皮细胞对脂多糖致气道黏液高分泌的影响 被引量：4

6

作者 徐晓艳 元东明 周向东 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期340-344,共5页

目的 探讨重组人自细胞弹性蛋白酶抑制因子Elafin对脂多糖（LPS）致气道黏液高分泌的影响.方法 通过构建人Elafin重组质粒pEGFP-C1-Elafin,并转染人人气道黏液上皮细胞系NCI-H292,将其与多形核粒细胞（PMN）共孵育,并用LPS刺激24 h,采... 目的 探讨重组人自细胞弹性蛋白酶抑制因子Elafin对脂多糖（LPS）致气道黏液高分泌的影响.方法 通过构建人Elafin重组质粒pEGFP-C1-Elafin,并转染人人气道黏液上皮细胞系NCI-H292,将其与多形核粒细胞（PMN）共孵育,并用LPS刺激24 h,采用底物检测法、酶联免疫吸附测定（ELISA）和RT-PCR分别检测培养细胞上清中性粒细胞弹性蛋白酶（NE）活性、黏蛋白（MUC）5AC蛋白含量和细胞中MUC5AC mRNA水平.结果 LPS各浓度均可明显提高转染空载体组培养细胞上清液的NE活性、MUC5AC含最及细胞中MUC5AC mRNA水平,与空白对照组相比,差异有统计学意义（P＜0.01） 并且在0.5～25 mg/L终浓度范围内呈剂量依赖关系.转染Elafin组与转染空载体组在不同浓度LPS（终浓度分别为0.5 mg/L和5.0 mg/L）干预时各个指标相比较差异有统计学意义（P＜0.05）,但在LPS终浓度为25 mg/L组各指标与转染空载体组相比较差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 转染重组人Elafin可抑制一定浓度范围LPS引起的炎症终效应因子NE活性及其诱导的黏液高分泌,但不能抑制高浓度LPS的作用. 展开更多

关键词 elafin 脂多糖类 白细胞弹性蛋白酶 粘蛋白类

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Elafin在炎症性肠病患者外周血中的表达及其临床意义 被引量：6

7

作者 张维 滕贵根 +1 位作者 田雨 王化虹 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第14期1120-1123,共4页

目的检测炎症性肠病（1BD）患者外周血白细胞中弹力素（Elgin）表达水平，探讨其在评价IBD疾病活动性及严重程度方面的临床应用价值。方法选择2015年7月1日至8月15日在北京大学第一医院住院治疗的IBD患者23例，包括溃疡性结肠炎（UC）1... 目的检测炎症性肠病（1BD）患者外周血白细胞中弹力素（Elgin）表达水平，探讨其在评价IBD疾病活动性及严重程度方面的临床应用价值。方法选择2015年7月1日至8月15日在北京大学第一医院住院治疗的IBD患者23例，包括溃疡性结肠炎（UC）15例，克罗恩病（cD）8例。其中缓解期5例（UC3例，CD2例），轻度活动期6例（UC3例，CD3例），中度活动期3例（UC1例，CD2例），重度活动期9例（UC8例，CD1例）。另选择21名健康人群作为对照组。采集IBD组和对照组外周静脉血，采用荧光定量PCR方法检测两组外周血白细胞中ElginmRNA表达水平，组间比较采用Mann．Whitney检验。ElafinmRNA相对表达量与IBD患者疾病活动性评分的相关性经变量变换后行Pearson相关检验。结果外周血ElafinmRNA表达中位水平在IBD组和对照组分别为0．0058（0．0002，0．0435）和0．0153（0．0021，0．1758），差异无统计学意义（P〉0．05）；而在IBD活动期患者明显低于对照组[0．0046（0．0002，0．0348）比0．0153（0．0021，0．1758），P〈0．05]和缓解期患者[0．0046（0．0002，0．0348）比0．0231（0．0126，0．0435），P〈0．05]；在UC活动期患者明显低于对照组[0．0037（0．0002，0．0270）比0．0153（0．0021，0．1758），P〈0．05]。UC患者外周血ElginmRNA相对表达量与改良Mayo评分呈负相关（r=-0．513，P〈0．05），CD患者外周血ElginmRNA相对表达量与Best的克罗恩病活动指数（CDAI）评分呈负相关（r=-0．889，P〈0．05）。结论ElafinmRNA在活动期IBD患者外周血中表达水平降低，与疾病活动度相关，而且与相应疾病活动性评分呈负相关，提示其在IBD疾病过程中具有保护作用，可能预测疾病活动性。 展开更多

关键词 炎性肠疾病 弹性蛋白酶抑制因子 疾病活动性

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Elafin对气道上皮细胞黏蛋白5AC的调节作用 被引量：3

8

作者 刘峰 周向东 +2 位作者 余红梅 李琪 钟有清 《中国呼吸与危重监护杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期296-300,共5页

目的探讨天然内生多肽Elafin对气道上皮细胞黏蛋白5AC(MUC5AC)的调节作用。方法通过培养气道上皮细胞,选择采用香烟烟雾提取物(CSE)以及脂多糖(LPS)作为刺激因素,使用细胞免疫荧光法以及ELISA法,分别检测各组气道上皮细胞MUC5AC的胞内... 目的探讨天然内生多肽Elafin对气道上皮细胞黏蛋白5AC(MUC5AC)的调节作用。方法通过培养气道上皮细胞,选择采用香烟烟雾提取物(CSE)以及脂多糖(LPS)作为刺激因素,使用细胞免疫荧光法以及ELISA法,分别检测各组气道上皮细胞MUC5AC的胞内蛋白以及胞外蛋白分泌的表达情况。结果单纯LPS刺激组细胞内的MUC5AC蛋白的分泌水平为(0.785±0.005)μg/ml,单纯CSE刺激组细胞内的MUC5AC蛋白的分泌水平为(0.803±0.005)μg/ml,均较对照组明显增多(均P<0.01)。在LPS刺激前予Elafin预处理组细胞内的MUC5AC蛋白的分泌水平为(0.363±0.003)μg/ml,显著低于单纯LPS刺激组(P<0.01)。在CSE刺激前予Elafin预处理组细胞内的MUC5AC蛋白的分泌水平为(0.406±0.006)μg/ml,显著低于单纯CSE刺激组(P<0.01)。单纯予Elafin处理组细胞内的MUC5AC蛋白的分泌水平先后为(0.176±0.002)μg/ml及(0.193±0.004)μg/ml(P<0.05),均较对照组显著降低。结论 Elafin可以通过阻断气道黏蛋白的生成及分泌,从而达到抑制气道黏液高分泌的目的。 展开更多

关键词 elafin 气道上皮细胞 黏蛋白5AC 气道黏液高分泌

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核转录因子-κВ在中性粒细胞弹力酶诱导肺A549细胞Elafin表达中的作用 被引量：2

9

作者 杨捷 周向东 《中国呼吸与危重监护杂志》 CAS 2004年第4期245-247,共3页

目的　探讨在中性粒细胞弹力酶 (NE)诱导肺上皮细胞表达Elafin过程中核转录因子 κВ(NF κВ)的信号传导作用。方法　肺上皮细胞株A5 4 9传代培养后分 3组行条件孵育 ,分别为正常组、加精制猪胰NE孵育的对照组以及同时加酶和NF κВ... 目的　探讨在中性粒细胞弹力酶 (NE)诱导肺上皮细胞表达Elafin过程中核转录因子 κВ(NF κВ)的信号传导作用。方法　肺上皮细胞株A5 4 9传代培养后分 3组行条件孵育 ,分别为正常组、加精制猪胰NE孵育的对照组以及同时加酶和NF κВ抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)孵育的实验组。孵育 2h后的细胞涂片行免疫荧光细胞染色法检测NF κВ的表达 ,酶联免疫吸附法 (ELISA)检测孵育 2 4h上清液的Elafin水平。结果　加入NE孵育的细胞上清液中的Elafin和NF κВ的表达强度与空白对照组比较均有显著性差异 (P <0 0 1) ;同时加入NE和PDTC孵育细胞的上述指标与NE组比较也存在显著性差异 (P <0 0 5 )。培养细胞NF κВ的表达强度与上清液中的Elafin呈显著正相关 (r=0 6 6 ,P <0 0 1)。结论　NE诱导肺上皮细胞Elafin表达的作用可能是通过激活NF 展开更多

关键词 核转录因子-ΚB 中性粒细胞弹力酶 elafin NE NF-κB 终末气道 肺炎性疾病

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转染重组人Elafin基因保护NCI-H292细胞系 被引量：3

10

作者 徐晓艳 周向东 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2007年第3期302-305,共4页

目的探讨转染重组人白细胞弹性蛋白酶抑制剂内生多肽(Elafin)基因保护气道上皮的分子机制。方法构建人Elafin重组质粒pEGFP-C1-Elafin,并转染入人气道黏膜上皮细胞系NCI-H292细胞,将其与多形核粒细胞(PMN)共孵育,经脂多糖(LPS)刺激24 h... 目的探讨转染重组人白细胞弹性蛋白酶抑制剂内生多肽(Elafin)基因保护气道上皮的分子机制。方法构建人Elafin重组质粒pEGFP-C1-Elafin,并转染入人气道黏膜上皮细胞系NCI-H292细胞,将其与多形核粒细胞(PMN)共孵育,经脂多糖(LPS)刺激24 h后,用Western blot检测细胞中紧密连接相关蛋白ZO-1的表达及MTT法测定细胞与胶原的附着能力。结果经LPS刺激后,Western blot及MTT法发现,与对照组和转染重组质粒组相比,转染空载体的NCI-H292细胞中ZO-1的表达及细胞与胶原附着能力均明显降低(P<0.01);而与对照组相比,转染重组质粒的细胞中ZO-1的表达及细胞与胶原附着能力均未见明显下降。结论通过转染重组人Elafin可保护气道上皮,增强气道抵抗炎性损伤能力。 展开更多

关键词 elafin 气道

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Elafin基因重组气道上皮调节脂多糖诱导的人气道黏液高分泌 被引量：3

11

作者 余红梅 李琪 +2 位作者 尤列.皮尔曼 维克多.科罗索夫 周向东 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2011年第4期371-376,共6页

目的探讨天然内生多肽Elafin对脂多糖诱导的气道黏液高分泌的调节机制。方法构建人Elafin重组质粒pEGFP-N1-Elafin,转染正常人支气管上皮细胞HBE16,给予脂多糖(LPS)刺激,激光共聚焦扫描显微镜检测Elafin蛋白含量,Western blot法检测Iκ... 目的探讨天然内生多肽Elafin对脂多糖诱导的气道黏液高分泌的调节机制。方法构建人Elafin重组质粒pEGFP-N1-Elafin,转染正常人支气管上皮细胞HBE16,给予脂多糖(LPS)刺激,激光共聚焦扫描显微镜检测Elafin蛋白含量,Western blot法检测IκBα蛋白含量;荧光素酶报告基因检测系统测定核转录因子-κB(NF-κB)活性;RT-PCR检测Elafin和黏蛋白(MUC)5AC mRNA表达水平;ELISA法分析MUC5AC蛋白相对含量。结果成功构建内生多肽Elafin真核表达载体pEGFP-N1-Elafin并转染HBE16细胞。转染重组Elafin后Elafin蛋白含量及mRNA水平明显增加。与对照组相比,LPS刺激组IκBα蛋白含量降低,NF-κB相对活性明显增强,MUC5AC蛋白含量及mRNA水平也显著增加。转染重组Elafin后再予以LPS刺激,与单纯LPS刺激组相比,IκBα蛋白含量明显增加,NF-κB相对活性显著降低,MUC5AC蛋白含量及mRNA水平也明显降低。结论天然内生多肽Elafin重组气道上皮可下调NF-κB的活性,降低脂多糖诱导的气道黏液高分泌。 展开更多

关键词 脂多糖 内生多肽 elafin 黏蛋白 核转录因子-ΚB

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Elafin的功能及在肿瘤中的研究进展 被引量：3

12

作者 蒋静 屈佳肴 +3 位作者 王丽 李香凝 贺荣章 罗迪贤 《现代肿瘤医学》 CAS 北大核心 2021年第7期1275-1279,共5页

Elafin是一种人内源性蛋白,具有抑制弹性蛋白酶的作用。在炎症过程中,它可以抑制中性粒细胞释放的弹性蛋白酶等对机体的过度损伤。既往的文献主要研究了elafin在控制炎症反应、抵抗微生物等方面的影响。近期有研究证明elafin在肿瘤中参... Elafin是一种人内源性蛋白,具有抑制弹性蛋白酶的作用。在炎症过程中,它可以抑制中性粒细胞释放的弹性蛋白酶等对机体的过度损伤。既往的文献主要研究了elafin在控制炎症反应、抵抗微生物等方面的影响。近期有研究证明elafin在肿瘤中参与相关信号通路的调控从而介导肿瘤细胞的增殖迁移并影响患者预后。在本综述中,我们分析了癌症和人elafin蛋白之间存在关系的相关证据,并讨论了elafin在肿瘤进展中的潜在作用。本文就elafin的结构、功能及在肿瘤中的作用进行综述。 展开更多

关键词 elafin 炎症 肿瘤

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内生多肽Elafin对气道黏蛋白5AC表达的影响 被引量：5

13

作者 余红梅 李琪 +2 位作者 Juliy M.Perelman Victor P.Kolosov 周向东 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期801-805,共5页

目的 探讨内生多肽Elafin调节气道黏液高分泌的分子机制.方法 构建人 Elafin 重组质粒,原代培养正常人支气管上皮细胞 HBE16,分为对照组、香烟抽提物（CSE）刺激组、CSE 刺激＋转染重组质粒、CSE 刺激＋空质粒组、单纯转染重组质粒以及... 目的 探讨内生多肽Elafin调节气道黏液高分泌的分子机制.方法 构建人 Elafin 重组质粒,原代培养正常人支气管上皮细胞 HBE16,分为对照组、香烟抽提物（CSE）刺激组、CSE 刺激＋转染重组质粒、CSE 刺激＋空质粒组、单纯转染重组质粒以及空质粒组6组.四甲基偶氮唑盐法检测各组细胞活力,Western blot法检测p-JNK、p-ERK、p-P38和IκBα蛋白含量,荧光素酶报告基因系统测定激活蛋白-1（AP-1）及核转录因子-κB（NF-κB）活性,RT-PCR检测各组黏蛋白（MUC）5AC mRNA 表达水平,ELISA 法分析各组细胞 MUC5AC 蛋白的相对含量.结果 CSE刺激组的p-JNK、p-ERK、p-c-Jun、IκBα、AP-1、NF-κB、MUC5AC和MUC5AC mRNA 含量分别为（0.55±0.03）μg/mg、（0.64±0.06）μg/mg、（0.60±0.07）μg/mg、（0.27±0.03）μg/mg、7.49±0.31、4.42±0.22、（0.71±0.04）mg/L和0.81±0.04,与对照组的（0.26±0.02）μg/mg、（0.30±0.05）μg/mg、（0.19±0.04）μg/mg（0.61±0.04）μg/mg、2.54±0.22、2.37±0.16、（0.23±0.02）mg/L和0.32±0.03比较差异有统计学意义（均P＜0.05）.转染重组Elafin后再给予CSE刺激,p-JNK、p-ERK、p-c-Jun、IκBα、AP-1、NF-κB、MUC5AC和MUC5AC mRNA含量分别为（0.38±0.04）μg/mg、（0.31±0.04）μg/mg、（0.14±0.03）μg/mg、（0.54±0.03）μg/mg、2.60±0.19、2.55±0.21、（0.28±0.03）mg/L、0.35±0.05,与CSE组相比差异有统计学意义（均P＜0.05）;p-P38蛋白含量在CSE刺激及转染Elafin前后无明显变化.结论 内生多肽Elafin可降低JNK和ERK磷酸化水平并抑制IκBα蛋白降解,从而降低转录激活蛋白-1和核因子-κB的活性,下调黏蛋白5AC的高表达,而p38MAPK在其中的作用并不明显. 展开更多

关键词 弹性蛋白酶抑制因子 黏蛋白类 吸烟 转录因子AP-1 NF-ΚB

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转染Elafin对百草枯诱导的肺泡上皮凋亡的影响 被引量：2

14

作者 秦开秀 宗建春 +1 位作者 方艳 王晓龙 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期45-47,共3页

目的:探讨转染Elafin对百草枯(Paraquat,PQ)诱导的肺泡上皮凋亡的影响及可能机制。方法:电穿孔法转染p EGFP-C1-Elafin进入A549细胞,培养24 h后,RT-PCR检测Elafin mRNA在A549细胞中的表达情况;并给予生理盐水、不同浓度PQ(5、50、100μm... 目的:探讨转染Elafin对百草枯(Paraquat,PQ)诱导的肺泡上皮凋亡的影响及可能机制。方法:电穿孔法转染p EGFP-C1-Elafin进入A549细胞,培养24 h后,RT-PCR检测Elafin mRNA在A549细胞中的表达情况;并给予生理盐水、不同浓度PQ(5、50、100μmol/L)作用后,Annexin V/PI双染法流式细胞仪检测A549细胞凋亡率、活性氧类物质(Reactive oxygen species,ROS)含量。Western blot检测核因子相关因子2(Nuclear factor erythroid like-2,Nrf2)、血红素加氧酶-1(Heme oxygenase-1,HO-1)表达情况。结果:转入A549细胞Elafin成功表达。PQ呈浓度依赖性导致A549细胞凋亡;PQ可使ROS含量明显增加,Nrf2、HO-1表达下调。Elafin可抑制PQ诱导的细胞调亡,上调Nrf2、HO-1蛋白表达。结论:Elafin可以一定程度抑制PQ诱导的A549细胞凋亡,其机制可能与其上调抗氧化蛋白Nrf2等有关。 展开更多

关键词 百草枯 肺泡上皮 凋亡 elafin 核因子相关因子2

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重组融合蛋白BoNT-LH(N)-Elafin在毕赤酵母中的表达及其活性 被引量：2

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作者 余红梅 李琪 +2 位作者 周向东 尤列.皮尔曼 维克多.科罗索夫 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2011年第4期389-393,共5页

目的利用毕赤酵母表达系统表达BoNT-LH(N)-Elafin融合蛋白,并检测其生物学活性。方法构建pPIC9K-BoNT-LH(N)-Elafin重组真核表达质粒,转化毕赤酵母GS115菌株,甲醇诱导表达,取上清,经阳离子交换层析纯化融合蛋白,并检测其反应原性、抗弹... 目的利用毕赤酵母表达系统表达BoNT-LH(N)-Elafin融合蛋白,并检测其生物学活性。方法构建pPIC9K-BoNT-LH(N)-Elafin重组真核表达质粒,转化毕赤酵母GS115菌株,甲醇诱导表达,取上清,经阳离子交换层析纯化融合蛋白,并检测其反应原性、抗弹性蛋白酶活性及对SNARE蛋白复合体的裂解作用。结果重组表达质粒pPIC9K-BoNT-LH(N)-Elafin经双酶切及测序证实构建正确;表达的BoNT-LH(N)-Elafin融合蛋白相对分子质量约为110 000,纯化的融合蛋白纯度达92%,浓度为54 mg/L,反应原性良好,具有抗弹性蛋白酶活性及裂解SNARE蛋白复合体的作用。结论已在毕赤酵母GS115中成功表达了重组融合蛋白BoNT-LH(N)-Elafin,该融合蛋白具有良好的生物学活性,为进一步研究其抑制气道黏液高分泌的机制奠定了基础。 展开更多

关键词 芽孢神经毒素类肉毒毒素 elafin 中性粒细胞弹性蛋白酶 重组融合蛋白质类 SNARE 毕赤酵母

原文传递

COPD患者气道中性粒细胞弹力酶活性与肺组织Elafin表达的关系及意义 被引量：2

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作者 徐晓艳 周向东 《临床肺科杂志》 2005年第1期33-34,共2页

目的　探讨慢性阻塞性肺疾病 (COPD)患者气道中性粒细胞弹力酶与肺组织 Elafin表达的关系及意义。方法　通过底物检测法、EL ISA法及 Dot- Blot印迹杂交分别检测正常肺组织和 COPD患者肺组织支气管肺泡灌洗液 (BAL F)中性粒细胞弹力酶 (... 目的　探讨慢性阻塞性肺疾病 (COPD)患者气道中性粒细胞弹力酶与肺组织 Elafin表达的关系及意义。方法　通过底物检测法、EL ISA法及 Dot- Blot印迹杂交分别检测正常肺组织和 COPD患者肺组织支气管肺泡灌洗液 (BAL F)中性粒细胞弹力酶 (NE)活力、Elafin含量及肺组织 Elafin m RNA水平。结果　 COPD组 BAL F中 NE活力单位与正常组相比较明显增高 (P<0 .0 5 ) ,COPD组 Elafin m RNA与正常组相比较亦见明显增高 (P<0 .0 1) ,NE活力单位与 Elafin m RNA呈显著正相关 (r=0 .6 1,P<0 .0 5 )。但 COPD组 BAL F中 Elafin含量与正常组相比并未见明显升高 (P>0 .0 5 )。结论　 NE可引起 COPD患者肺组织中 Elafin转录水平增加 ,由于 NE可与游离的 Elafin结合 ,这种消耗使得 BAL F中 Elafin蛋白水平未见明显提高。 展开更多

关键词 elafin 中性粒细胞弹力酶

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内生多肽Elafin转染气道上皮细胞对不同细菌生物膜作用的差异 被引量：4

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作者 聂晓红 周向东 黄长武 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2007年第4期398-401,共4页

目的探讨内生多肽(Elafin)转染气道上皮细胞经不同细菌产物诱导后对铜绿假单胞菌(P.aeruginosa,Pa)生物膜(biofilm,BF)的效应差异。方法将pEGFP-N1-elafin转染到培养的肺腺癌细胞株A549细胞后,用表皮葡萄球菌(表葡组)、大肠埃希杆菌(E.c... 目的探讨内生多肽(Elafin)转染气道上皮细胞经不同细菌产物诱导后对铜绿假单胞菌(P.aeruginosa,Pa)生物膜(biofilm,BF)的效应差异。方法将pEGFP-N1-elafin转染到培养的肺腺癌细胞株A549细胞后,用表皮葡萄球菌(表葡组)、大肠埃希杆菌(E.coli组)和铜绿假单胞菌(Pa组)培养上清分别孵育细胞24h,另设转染空载体A549细胞作为正常组。用ELISA和Western blot检测每组细胞Elafin分泌水平和细胞内含量;体外平板法制备Pa-BF模型,用快速银染法和扫描电镜鉴定;将BF载体放入上述4组细胞中继续孵育8h,银染法观察BF中每个视野细菌的(灰度)面积积分,扫描电镜观察形态学改变。结果Pa组细胞Elafin分泌水平和细胞内含量均较正常组的明显升高(P<0.01),E.coli组也有升高(P<0.05),表葡组无明显变化;各组BF面积积分也显示有明显差异,Pa组、E.coli组BF结构较正常组明显松散,尤以Pa组为甚,表葡组则没有明显变化。结论不同细菌对Elafin的诱导表达能力有差异:Pa较强,E.coli次之,表葡不明显;Elafin能清除生物膜细菌。 展开更多

关键词 内生多肽 生物膜 铜绿假单胞菌 大肠埃希杆菌 表皮葡萄球菌

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Elafin在气道炎症性疾病中的作用 被引量：1

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作者 邓玥 张婷 周向东 《国际呼吸杂志》 2014年第20期1576-1579,共4页

Elafin是一种内源性的低分子量丝氨酸蛋白酶抑制剂,它来自于其前体trappin-2（或称pre-Elafin）的蛋白水解.Elafin的N端区段可以在转谷酰胺酶的介导下与细胞外基质铰连,而C端可以继续发挥抗蛋白酶作用.此外,Elafin还有抗感染、抗炎和免... Elafin是一种内源性的低分子量丝氨酸蛋白酶抑制剂,它来自于其前体trappin-2（或称pre-Elafin）的蛋白水解.Elafin的N端区段可以在转谷酰胺酶的介导下与细胞外基质铰连,而C端可以继续发挥抗蛋白酶作用.此外,Elafin还有抗感染、抗炎和免疫调节作用.因此,在气道炎症性疾病的治疗方面,Elafin是一种极具吸引力的候选分子. 展开更多

关键词 elafin 气道炎症 治疗

原文传递

Elafin在人支气管上皮细胞系16HBE胞质内对黏蛋白5AC生成的影响 被引量：1

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作者 魏华生 尤列.皮尔曼 +1 位作者 维克多.科罗索夫 周向东 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2011年第7期809-813,共5页

目的探讨Elafin在胞质内对表皮生长因子(EGF)诱导的黏蛋白(MUC)5AC生成的影响及其作用机制。方法体外培养人支气管上皮细胞系16HBE,将已构建好的pEGFP-N1-Elafin载体通过LipofectamineTM2000转染到16HBE细胞中,以转染空质粒载体的16HBE... 目的探讨Elafin在胞质内对表皮生长因子(EGF)诱导的黏蛋白(MUC)5AC生成的影响及其作用机制。方法体外培养人支气管上皮细胞系16HBE,将已构建好的pEGFP-N1-Elafin载体通过LipofectamineTM2000转染到16HBE细胞中,以转染空质粒载体的16HBE细胞作为对照,均给予外源性EGF作为刺激物共同孵育。以RT-PCR和ELISA分别检测细胞内黏蛋白(MUC)5AC mRNA水平和MUC5AC含量。间接免疫荧光细胞化学法结合激光共聚焦显微镜检测细胞核中核因子(NF)-κB的活性。免疫共沉淀法结合Western blot检测SUMO-1-p-IκBα含量。结果转染重组质粒的细胞中MUC5ACmRNA水平、MUC5AC的含量(0.36±0.09)以及NF-κB的活性显著低于转染空载体的对照组细胞(MUC5AC的含量0.55±0.07)(P<0.01),而SUMO-1-p-IκBα的含量则显著高于后者(P<0.01)。结论 Elafin能够通过促进p-IκBα的类泛素化阻止NF-κB的活化,从而下调MUC5AC的生成。 展开更多

关键词 elafin 核因子-ΚB 小泛素样修饰蛋白-1 类泛素化 黏蛋白5AC

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转染重组Elafin对炎症状态下巨噬细胞表面受体CD14的保护作用 被引量：1

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作者 王晓龙 周向东 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期393-396,共4页

目的:研究转染重组Elafin对炎症状态下巨噬细胞表面受体CD14的保护作用。方法:重组质粒pEG-FP-C1-Elafin转染入离体培养巨噬细胞株,与多形核中性粒细胞(polymorphonuclear granulocyte,PMN)、脂多糖(li-popolysaccharide,LPS)共作用4 h... 目的:研究转染重组Elafin对炎症状态下巨噬细胞表面受体CD14的保护作用。方法:重组质粒pEG-FP-C1-Elafin转染入离体培养巨噬细胞株,与多形核中性粒细胞(polymorphonuclear granulocyte,PMN)、脂多糖(li-popolysaccharide,LPS)共作用4 h后,倒置荧光显微镜观察重组Elafin胞内表达,流式细胞仪检测巨噬细胞表面受体CD14表达情况。同时,转染重组质粒的巨噬细胞与凋亡PMN共孵育1 h后,观测结合凋亡PMN的巨噬细胞百分比。结果:pEGFP-C1-Elafin转染入巨噬细胞后被成功表达,其表面受体CD14数量明显升高,结合凋亡PMN的巨噬细胞的数量的增加。结论:通过转染重组人Elafin,可保护炎症状态下巨噬细胞表面凋亡相关受体CD14,促进PMN凋亡。 展开更多

关键词 巨噬细胞 多形核中性粒细胞 凋亡 细胞受体CD14 elafin

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