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小鼠Egr-1基因调控序列的克隆及其辐射诱导特性的鉴定 被引量:15
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作者 吕星 邢瑞云 +2 位作者 孙志贤 裴雪涛 吴祖泽 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1998年第1期16-19,共4页
Egr-1(early growth response-1)系-具有辐射诱导特性的转录因子.其调控序列被证实可通过与肿瘤杀伤基因相连接的方法而赋予后者以辐射诱导特性,因而被用于肿瘤的基因-放射治疗研究.为此,我们用PCR方法从BALB/c小鼠基因组DNA扩增出445bp... Egr-1(early growth response-1)系-具有辐射诱导特性的转录因子.其调控序列被证实可通过与肿瘤杀伤基因相连接的方法而赋予后者以辐射诱导特性,因而被用于肿瘤的基因-放射治疗研究.为此,我们用PCR方法从BALB/c小鼠基因组DNA扩增出445bp长Egr-1基因调控序列,序列分析证实,除-392位一个碱基(A→G)相差外,其余均与文献报道一致,包括6个对辐射诱导特性起关键作用的CC(A+T)_6GG结构域-将克隆的Egr-1基因调控序列连入pCL3荧光素酶报告质粒,转染小鼠恶性黑色素瘤细胞(B16),转染细胞用^(60)Coγ-线进行2.5、5.0和10.0Gy不同剂量照射后,检测细胞裂解液中荧光素酶活性.与未照射细胞比较.照射后细胞荧光素酶活性明显提高,以2.5Gy剂量最为显著.提高约138%,表明Egr-1基因调控序列具有辐射后诱导下游基因表达的功能. 展开更多
关键词 egr-1基因 基因调控序列 放射疗法 治疗 肿瘤
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Enhanced Effects of TRAIL-endostatin-based Double-gene-radiotherapy on Suppressing Growth, Promoting Apoptosis and Inducing Cell Cycle Arrest in Vascular Endothelial Cells 被引量:16
2
作者 李艳博 郭彩霞 +3 位作者 王志成 龚平生 孙志伟 龚守良 《Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences)》 SCIE CAS 2012年第2期167-172,共6页
This study examined the effects of TRAIL-endostatin-based gene-radiotherapy on cellu-lar growth, apoptosis and cell cycle progression in human vascular endothelial cells ECV304 in vitro. The expression of TRAIL and en... This study examined the effects of TRAIL-endostatin-based gene-radiotherapy on cellu-lar growth, apoptosis and cell cycle progression in human vascular endothelial cells ECV304 in vitro. The expression of TRAIL and endostatin protein in ECV304 cells was detected by ELISA after the transfection of recombinant plasmid pshuttle-Egr1-shTRAIL-shES and X-ray irradiation. Then MTT assay was used for determining the cellular proliferation, and flow cytometry (FCM) plus Annexin V and propidium iodide (PI) double-staining or PI single-staining were employed for the detection of apoptosis and cell cycle progression. The results showed that expression of TRAIL and endostatin protein exhibited a time- and dose-dependent change in ECV304 cells after pshut-tle-Egr1-shTRAIL-shES transfection in conjunction with irradiation. In the TRAIL-endostatin-based single- or double-gene-radiotherapy, the cell viability declined in a time- and dose-dependent manner, the percentage of cells at G2/M phase and apoptotic rate was increased, and the percentage of cells at G0/G1 phase was lowered as compared with those receiving radiotherapy alone. Moreover, TRAIL-endostatin-based double-gene-radiotherapy demonstrated better effects on growth inhibition, promotion of apoptosis and induction of cell cycle arrest in ECV304 cells than single-gene-radiotherapy. 展开更多
关键词 TRAIL ENDOSTATIN egr-1 promoter gene-RADIOTHERAPY
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丙泊酚/异氟醚麻醉对大鼠获取空间记忆能力的损害及c-Fos和EGR-1蛋白的变化 被引量:9
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作者 张雪娜 陆冠宇 +5 位作者 冯春生 徐志鹏 王晖 王云 吴安石 岳云 《国际麻醉学与复苏杂志》 CAS 2009年第3期196-200,共5页
目的通过研究丙泊酚和异氟醚麻醉对青、老年大鼠Morris水迷宫训练成绩及海马CA1区脑神经元FOS核蛋白(c-Fos)和EGR-1核蛋白表达的变化,探讨麻醉后脑神经元分子水平变化与行为学表现的相关性。方法雄性SD大鼠3月龄(青年组)和20月龄... 目的通过研究丙泊酚和异氟醚麻醉对青、老年大鼠Morris水迷宫训练成绩及海马CA1区脑神经元FOS核蛋白(c-Fos)和EGR-1核蛋白表达的变化,探讨麻醉后脑神经元分子水平变化与行为学表现的相关性。方法雄性SD大鼠3月龄(青年组)和20月龄(老年组)各60只,随机分为对照组(不麻醉)、训练组(不麻醉,行Morris水迷宫训练)、丙泊酚组(丙泊酚100mg·kg^-h^-1,ip;分别于麻醉2h/4h后的2d,2周行Morris水迷宫训练:P2d,P4d,P2w,P4w)、异氟醚组(异氟醚1.2%;分别于麻醉2h/4h后的2d/2周行Morris水迷宫训练:I2d,I4d,12w,I4w)。Morris水迷宫实验连续进行5d,每天2次,记录逃避潜伏期变化,用以测试各组大鼠的空间学习记忆能力。行为学实验后立即分离海马组织CA1区,应用免疫组化法和酶标法半定量检测c-Fos和EGR-1核蛋白的阳性表达。结果4h异氟醚麻醉后,大鼠的认知功能损害均可持续至麻醉后2周,尤以老年大鼠常见且程度严重,表现为学习速度和记忆质量均有所下降(P〈0.05),青年组大鼠学习速度略有下降(P〈0.05);4h丙泊酚麻醉后,老年组大鼠认知功能改变可持续至麻醉后2周,但与异氟醚麻醉相比程度较轻,主要表现为学习速度减慢(P〈0.05)。免疫组化法和酶标法检测结果:与对照组相比,Morris水迷宫训练后,大鼠海马CA1区c-Fos和EGR-1的表达均明显增加(P〈0.05);I4d,I4w组老年大鼠和%组青年大鼠c-Fos阳性细胞率与单纯训练组大鼠相比有所下降(P〈0.05);I4d组老年大鼠EGR-1阳性细胞率与单纯训练组大鼠相比有所下降(P〈0.05)。结论麻醉可能会引起大鼠行为学改变,可持续至麻醉后2d至2周;随着麻醉时程的延长和年龄的增加,改变更为明显,且异氟醚作用较丙泊酚显著。麻醉对大鼠海马CA1区C-Fos和EGR-1表达的影响可能是导� 展开更多
关键词 丙泊酚 异氟醚 Morris水迷宫 海马 即刻早期基因 FOS蛋白 egr-1
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Egr-1基因与肿瘤及放射治疗研究进展 被引量:6
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作者 李洪佳 董广璐 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 北大核心 2012年第22期1753-1756,共4页
目的:总结关于早期生长反应-1(Egr-1)基因在肿瘤和放射治疗中的研究进展。方法:应用PubMed及CNKI期刊全文数据库检索系统,以"Egr-1基因、肿瘤、放射治疗、细胞凋亡"为关键词,检索1993-01-2012-03的相关文献,共检索到英文文献... 目的:总结关于早期生长反应-1(Egr-1)基因在肿瘤和放射治疗中的研究进展。方法:应用PubMed及CNKI期刊全文数据库检索系统,以"Egr-1基因、肿瘤、放射治疗、细胞凋亡"为关键词,检索1993-01-2012-03的相关文献,共检索到英文文献691篇,中文文献129篇。纳入标准:1)Egr-1基因的结构;2)Egr-1基因在肿瘤中的表达;3)Egr-1基因对肿瘤的作用;4)Egr-1基因与放射治疗。根据纳入标准符合分析文献41篇。结果:Egr-1基因的表达存在于绝大多数的肿瘤中,对肿瘤的发生和发展具有抑制或促进作用;肿瘤细胞放射后可诱导Egr-1基因表达,并可引起下游基因表达及细胞凋亡;放射后的Egr-1基因表达水平与肿瘤细胞凋亡有关。结论:Egr-1基因在肿瘤中具有重要作用,对其不断深入研究可为肿瘤的治疗尤其是放疗提供更多新的依据。 展开更多
关键词 egr-1基因 肿瘤 放射疗法 细胞凋亡 综述文献
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Egr-1基因启动子介导肿瘤基因放疗的研究进展 被引量:6
5
作者 王富友 高京生 《疾病控制杂志》 2004年第5期456-459,共4页
Egr 1基因是一种即刻早期基因 ,其启动子可感受自由基、电离辐射等理化刺激 ,继而诱导Egr 1基因或其下游基因表达。对转染了Egr 1基因启动子启动的肿瘤杀伤基因的肿瘤细胞 ,实施局部照射可诱导基因表达 ,通过射线与基因的双重作用杀伤... Egr 1基因是一种即刻早期基因 ,其启动子可感受自由基、电离辐射等理化刺激 ,继而诱导Egr 1基因或其下游基因表达。对转染了Egr 1基因启动子启动的肿瘤杀伤基因的肿瘤细胞 ,实施局部照射可诱导基因表达 ,通过射线与基因的双重作用杀伤肿瘤。此方法既解决了外源基因靶向表达的难题 ,又降低了照射剂量 。 展开更多
关键词 egr-1基因 基因启动子 肿瘤 基因放疗 辐射诱导性 基因功能
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宫颈癌超声造影的诊断价值及与Egr-1基因表达的相关性 被引量:6
6
作者 徐静 王萍 +1 位作者 罗新 刘民甫 《影像诊断与介入放射学》 2017年第2期152-156,共5页
目的探讨宫颈癌患者的超声造影特征及其与Egr-1基因表达的相关性。方法分析40例病理确诊为宫颈癌患者的经腹超声造影特征,观察肿瘤的形态结构、血流信号分布及多普勒血流特征,对术后的肿瘤组织应用QRTPCR检测Egr-1基因的表达,分析超声... 目的探讨宫颈癌患者的超声造影特征及其与Egr-1基因表达的相关性。方法分析40例病理确诊为宫颈癌患者的经腹超声造影特征,观察肿瘤的形态结构、血流信号分布及多普勒血流特征,对术后的肿瘤组织应用QRTPCR检测Egr-1基因的表达,分析超声造影表现与Egr-1基因表达之间的相关性。结果肿瘤组织的峰值强度(PI)为(75.71±2.13)显著高于正常组织(58.12±1.92),差异具有统计学意义(P<0.001)。肿瘤组织的病灶达峰时间(TTP)为(32.43±1.76)s显著短于正常组织(40.41±2.24)s,差异具有统计学意义(P=0.003);Egr-1基因在宫颈癌组织标本中的表达明显低于癌旁组织,差异具有统计学意义(P<0.001);Egr-1基因的表达与宫颈有无肿物,肿块的大小(≤4 cm)、淋巴结转移及病理分级相关(P均<0.05);宫颈癌造影增强强度与Egr-1表达相关,与肿瘤大小、淋巴结转移及病理分级无明显相关关系(P>0.05);非均匀性增强在Egr-1低表达患者中的比率明显高于Egr-1高表达者,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论宫颈癌超声造影特征可显示其与Egr-1基因表达的相关性,有助于无创性评估宫颈癌的预后评估。 展开更多
关键词 宫颈癌 egr-1基因 超声造影
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携带Egr-1基因调控序列的TK基因的腺病毒载体的构建 被引量:5
7
作者 刘金龙 郭仕英 +4 位作者 刘训良 李朝军 杜青 郭治源 夏建国 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期262-264,F0004,共4页
目的:构建以GFP做标志基因的放射敏感基因Egr-1调控单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(herpssimplexvirusthymidinekinase,TK)的腺病毒载体。方法:以PCl-neo-Egr-1-TK(pET)为模板扩增Egr-1,插入到pAdTrack的XbaI和XhoI位点,构建重组质粒pAdTrack... 目的:构建以GFP做标志基因的放射敏感基因Egr-1调控单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(herpssimplexvirusthymidinekinase,TK)的腺病毒载体。方法:以PCl-neo-Egr-1-TK(pET)为模板扩增Egr-1,插入到pAdTrack的XbaI和XhoI位点,构建重组质粒pAdTrack/Egr-1;与pET酶切获得TKcDNA相连,构成pAdTrack/Egr-1-TK;用PmeI酶切后与pAdEasy-1混合,应用细菌内同源重组法获得重组表达质粒pAdEgr-1-TK。结果:重组表达质粒pAdEgr-1-TK的酶切鉴定符合预期结果,感染肿瘤细胞可见绿色荧光表达。结论:通过细菌内同源重组成功构建含GFP做标志基因的pAdEgr-1-TK重组表达质粒,为研究Egr-1调控自杀基因及对肿瘤细胞进行灭活打下了基础。 展开更多
关键词 腺病毒载体 egr-1 TK自杀基因
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Egr-1基因剔除减少炎性相关因子在实验性胰腺炎中的表达 被引量:5
8
作者 段佑才 姜泊 +5 位作者 马高峰 徐智民 陈晓文 程天明 戴益琛 陈学清 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期739-743,共5页
目的:探讨Egr-1基因剔除对实验性胰腺炎小鼠胰腺组织中炎性相关因子表达的影响。方法:利用Egr-1基因剔除小鼠,采用大剂量雨蛙素诱导的实验性胰腺炎模型,观察Egr-1基因剔除后,胰腺组织水肿、MPO水平、血清淀粉酶水平、肺组织MPO水平的改... 目的:探讨Egr-1基因剔除对实验性胰腺炎小鼠胰腺组织中炎性相关因子表达的影响。方法:利用Egr-1基因剔除小鼠,采用大剂量雨蛙素诱导的实验性胰腺炎模型,观察Egr-1基因剔除后,胰腺组织水肿、MPO水平、血清淀粉酶水平、肺组织MPO水平的改变。并利用定量PCR的方法,检测胰腺组织中炎症相关因子组织因子(TF)、纤维蛋白溶酶原激活因子抑制因子(PAI-1)、单核细胞趋化吸引蛋白1(MCP-1)、Gro-1、IL-6和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)mRNA的表达。结果:Egr-1基因剔除小鼠胰腺组织水肿明显轻于野生型,但组织MPO水平与血清淀粉酶与野生型组间相比无明显差异;肺组织MPO水平明显低于野生型。定量PCR检测结果表明,Egr-1基因剔除组,胰腺组织中TF、PAI-1,以及MCP-1、ICAM-1和IL-6 mRNA的表达,明显少于野生型组。结论:Egr-1基因剔除可明显减轻急性胰腺炎的严重程度,其作用可能通过减少胰腺组织中TF、PAI-1,以及MCP-1、ICAM-1和IL-6的表达而实现。 展开更多
关键词 胰腺炎 早期生长反应因子 基因 egr-1 基因敲除 趋化因子 巨噬细胞
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Egr-1对APP基因表达的调控作用 被引量:5
9
作者 马琳 周瑜 +5 位作者 李永玲 柴娟 贾中发 郭克 孙涛 崔建奇 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2015年第1期39-46,共8页
该研究构建了含有APP启动子的荧光素酶报告质粒以及缺失突变的报告质粒,将该质粒与Egr-1真核表达载体p CDNA3-Egr-1共转染到HEK293与U87MG细胞中进行荧光素酶活性测定,以确定Egr-1对APP基因表达的调控作用。通过染色质免疫共沉淀实验(ch... 该研究构建了含有APP启动子的荧光素酶报告质粒以及缺失突变的报告质粒,将该质粒与Egr-1真核表达载体p CDNA3-Egr-1共转染到HEK293与U87MG细胞中进行荧光素酶活性测定,以确定Egr-1对APP基因表达的调控作用。通过染色质免疫共沉淀实验(chromatin immunoprecipitation assay,Ch IP)和凝胶电泳迁移实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)确定Egr-1蛋白在APP启动子上的结合部位,同时利用组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA(trichostatin A)和butyrate诱导内源性Egr-1的表达以及Egr-1抑制剂suramin来作用于细胞,通过蛋白免疫印迹分析(Western blot)检测Egr-1对APP蛋白表达的作用。结果显示,Egr-1蛋白在APP基因启动子上5′UTR区域有特异性的结合部位,去除该结合部位则Egr-1失去对APP基因启动子的调控作用,Ch IP和EMSA的结果也证实了该结合位点;通过HDAC抑制剂和suramin干扰内源性Egr-1的表达则显著影响了Egr-1对APP基因表达的调控作用。 展开更多
关键词 egr-1 淀粉样前体蛋白 阿尔茨海默病 基因表达调控
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EGR-1启动子在肿瘤基因治疗中的应用 被引量:3
10
作者 厉兴君 夏爱娣 +1 位作者 陈诗书 钱关祥 《生命科学》 CSCD 2002年第1期53-55,8,共4页
EGR-1的启动子为早期生长反应因子-1基因上游约-550~0bp的一顺式作用元件,其活性受控于一些诱导剂,如电离辐射。联合EGR-1的启动子与治疗基因(如TNF-a、自杀基因),用辐射能在肿瘤局部从时、空调控治疗基... EGR-1的启动子为早期生长反应因子-1基因上游约-550~0bp的一顺式作用元件,其活性受控于一些诱导剂,如电离辐射。联合EGR-1的启动子与治疗基因(如TNF-a、自杀基因),用辐射能在肿瘤局部从时、空调控治疗基因的表达,使其产物局限于肿瘤局部,并发挥放疗的杀肿瘤效应,而放疗与转基因产物又有协同作用。放射治疗与基因治疗的配伍为肿瘤的治疗提供了新思路。 展开更多
关键词 egr-1 启动子 电离辐射 自杀基因 TNF-Α 肿瘤 基因治疗 应用
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EGR-1基因转染对高糖环境中小鼠肾小球系膜细胞TGF-β及PDGF-B表达的影响 被引量:4
11
作者 刘洁 候明辉 +4 位作者 刘莉 张耀 孟杰 郭雅卿 李鸿燕 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期497-501,共5页
目的:观察EGR-1基因转染对高糖环境中小鼠肾小球系膜细胞TGF-β及PDGF-B表达的影响,探讨EGR-1在糖尿病肾病发病机制中的作用。方法:高糖环境中培养小鼠肾小球系膜细胞,采用LipofectamineTM2000瞬时转染EGR-1质粒,于培养12、24、48小时末... 目的:观察EGR-1基因转染对高糖环境中小鼠肾小球系膜细胞TGF-β及PDGF-B表达的影响,探讨EGR-1在糖尿病肾病发病机制中的作用。方法:高糖环境中培养小鼠肾小球系膜细胞,采用LipofectamineTM2000瞬时转染EGR-1质粒,于培养12、24、48小时末,应用MTT法检测细胞增殖程度,免疫细胞化学和Western印迹法检测系膜细胞EGR-1、TGF-β及PDGF-B蛋白表达水平,酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清Ⅳ型胶原浓度。结果:高糖环境中肾小球系膜细胞EGR-1、TGF-β及PDGF-B表达增强,细胞增殖明显,细胞上清液中Ⅳ型胶原浓度升高,EGR-1基因转染后上述变化较高糖组更加显著。结论:EGR-1可上调TGF-β及PDGF-B表达,促进系膜细胞增殖及系膜外基质积聚,是加速肾小球硬化的可能机制之一。 展开更多
关键词 egr-1 系膜细胞 基因转染 TGF-Β PDGF-B
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早期生长反应基因-1在急性肺栓塞大鼠肺组织中表达 被引量:3
12
作者 叶瑞海 陈少贤 +4 位作者 张鸣华 慈晓 王良兴 张琦 李焕斌 《中国应用生理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期220-224,共5页
目的:研究早期生长反应基因-1在急性自体血栓肺栓塞大鼠肺组织不同时间点的表达。方法:采用改良右心导管法建立大鼠自体血栓急性肺栓塞模型,动态监测肺动脉压,结合肺灌注扫描ECT影像和组织病理镜下观察评估,用免疫组化、逆转录-聚合酶... 目的:研究早期生长反应基因-1在急性自体血栓肺栓塞大鼠肺组织不同时间点的表达。方法:采用改良右心导管法建立大鼠自体血栓急性肺栓塞模型,动态监测肺动脉压,结合肺灌注扫描ECT影像和组织病理镜下观察评估,用免疫组化、逆转录-聚合酶链反应检测Egr-1蛋白和mRNA表达。结果:模型组肺动脉压在注栓后0.5 h明显升高,2 h达到峰值,能维持4 h,和同时间点对照组比较(P<0.01)。造模后1 h,ECT扫描可见明显充盈缺损,HE染色镜下观察见注入血栓团块。免疫组化法显示Egr-1蛋白在造模后2 h的支气管上皮细胞、肺泡上皮细胞和肺血管平滑肌细胞表达显著升高,和同时间点对照组比较(P<0.01),4 h后表达逐渐下降,RT-PCR法显示mRNA同步改变。结论:Egr-1在对照组肺组织中仅低水平表达,在急性肺栓塞肺组织2 h表达显著升高,表达具有组织细胞特异性,可能是急性肺栓塞后病理变化的重要环节。 展开更多
关键词 呼吸系统 肺栓塞 egr-1 基因表达 ECT
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早期耳鸣和持续耳鸣对大鼠听觉中枢GAP43和egr-1基因表达的影响及变化 被引量:3
13
作者 魏婷婷 赵德安 +3 位作者 高兴强 苏文玲 朱艳双 赵岩 《中国中西医结合耳鼻咽喉科杂志》 2011年第3期141-145,共5页
目的通过检测早期耳鸣与持续耳鸣大鼠听觉通路中GAP43和egr-1基因的表达情况来探讨耳鸣发生的中枢源性机制。方法将48只大鼠随机分为6组,每组均8只:水杨酸钠组分为早期组与持续组,每次训练前2小时腹腔注射10%水杨酸钠溶液(400mg/kg),其... 目的通过检测早期耳鸣与持续耳鸣大鼠听觉通路中GAP43和egr-1基因的表达情况来探讨耳鸣发生的中枢源性机制。方法将48只大鼠随机分为6组,每组均8只:水杨酸钠组分为早期组与持续组,每次训练前2小时腹腔注射10%水杨酸钠溶液(400mg/kg),其中持续组在耳鸣模型建立成功后,继续每天同一时间腹腔注射相同剂量水杨酸钠溶液10天;盐水1组与盐水2组,每次训练前2小时腹腔注射与水杨酸钠组相同体积生理盐水,其中盐水2组在造模成功后,继续每天同一时间腹腔注射同体积生理盐水10天;空白对照组也分为空白1组与空白2组。早期组、盐水1组、空白1组同时断头取标本,而盐水2组、空白2组与持续组一同断头取标本。再利用实时荧光(sybgreena染料法)相对定量PCR检测GAP43和egr-1的mRNA在听觉通路四个核团中的表达情况。结果空白组与生理盐水组相比较,听皮层GAP43与egr-1的mRNA表达水平明显提高(P<0.01)。耳蜗核中GAP43的mRNA随着水杨酸钠注射次数的增加先下降(P<0.01),后又逐渐回升(P<0.01);egr-1mRNA明显下降(P<0.01)。下丘GAP43、egr-1的mRNA表达水平均有明显提高。上橄榄核中,仅持续组GAP43的mRNA有明显降低(P<0.01);两组水杨酸钠组的egr-1的mRNA随着水杨酸钠注射次数的增多而逐渐降低(P<0.05)。结论 GAP43和egr-1基因表达水平的改变不但证实了由水杨酸钠诱导的耳鸣大鼠的听觉通路中听觉神经元发生了可塑性改变,并且能够维持这种可塑性改变,从而使大鼠耳鸣症状得以长期持续。 展开更多
关键词 耳鸣 基因 GAP43 egr-1 听觉核团 水杨酸钠
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构建Egr-1启动子调控Smad7基因的重组腺病毒及启动子活性研究 被引量:3
14
作者 蔡旭伟 杨健 +1 位作者 宋后燕 付小龙 《中华放射医学与防护杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期13-17,共5页
目的 构建含Egr 1启动子和Smad7cDNA的重组复制缺陷型腺病毒并研究射线诱导Egr 1基因启动子调控Smad7体外表达的时间和剂量效应 ,为下一步的基因治疗奠定基础。方法以Adeno XTM表达试剂盒为基础 ,应用分子克隆技术 ,将穿梭质粒pShuttle... 目的 构建含Egr 1启动子和Smad7cDNA的重组复制缺陷型腺病毒并研究射线诱导Egr 1基因启动子调控Smad7体外表达的时间和剂量效应 ,为下一步的基因治疗奠定基础。方法以Adeno XTM表达试剂盒为基础 ,应用分子克隆技术 ,将穿梭质粒pShuttle的CMV启动子替换为Egr 1启动子 ,将Smad7cDNA亚克隆至穿梭质粒内 ,与腺病毒DNA重组 ,在HEK2 93细胞中进行包装、扩增 ,纯化测定病毒滴度。通过Westernblot检测X射线照射激活Egr 1启动子调控Smad7体外表达的时间和剂量效应。结果 经酶切、PCR及测序鉴定证实成功构建了含Egr 1启动子和Smad7的重组复制缺陷型腺病毒pAdES。病毒滴度为 3 0× 10 1 1 TCID50 ml。感染重组腺病毒的靶细胞经不同剂量的深部X射线照射后Smad7蛋白表达量存在一定的时间、剂量差异 :实验组Smad7蛋白表达量在照射后 1h即已升高 ,2~ 7h之间维持在一个较高水平 ,尔后表达量开始下降 ;实验组中Smad7蛋白表达量随着吸收剂量的增加而增加 ,在 8~ 15Gy之间维持一个较高的表达水平。而对照组Smad7蛋白表达量无明显的时间和剂量效应。结论 成功构建了含Egr 1启动子和Smad7的重组复制缺陷型腺病毒pAdES ,重组于腺病毒内的Egr 1启动子经射线激活后具有调控下游Smad7表达的活性。 展开更多
关键词 Smad7 egr-1启动子 重组腺病毒 蛋白表达 缺陷型 剂量效应 X射线照射 调控 体外表达 启动子活性
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Egr-1启动子基因调控FLT3配基基因表达的实验研究 被引量:3
15
作者 杜楠 裴雪涛 +5 位作者 罗成基 李梁 冯凯 白慈贤 孙兵 赵鹏 《中华放射医学与防护杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第5期306-309,共4页
目的 探索辐射诱导基因调控元件启动的造血生长因子表达及其对造血的保护作用。方法 本实验将携带Egr 1调控序列的FLT3配基 (FL)和EGFP基因双顺反子载体 (Egr EF)转染骨髓基质细胞系HFCL ,采用流式细胞仪、RT PCR、ELISA及细胞增殖法... 目的 探索辐射诱导基因调控元件启动的造血生长因子表达及其对造血的保护作用。方法 本实验将携带Egr 1调控序列的FLT3配基 (FL)和EGFP基因双顺反子载体 (Egr EF)转染骨髓基质细胞系HFCL ,采用流式细胞仪、RT PCR、ELISA及细胞增殖法等观察细胞受照后Egr 1调控元件诱导的FL表达及促进造血细胞的增殖作用。 结果 在转染细胞HFCL/EF细胞中证实有外源性基因的整合和表达 ,在 2 5Gy辐射后 16h的细胞培养上清液中表明FL含量较照射前明显增高 ((P <0 0 1) ,) ;辐射后 10dHFCL/EF培养上清液对CD34+造血祖细胞的作用较辐射前具有明显的扩增作用 ((P <0 0 1) ,)。结论 在辐射后Egr 1启动子调控的FL基因表达明显增高并具有保护造血作用。 展开更多
关键词 egr-1 启动子 FLT3配基 基因治疗 电离辐射
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Egr-1基因与肿瘤腺癌放射敏感性关系的研究 被引量:3
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作者 李洪佳 于洪洋 +2 位作者 原浩 周宏 董广璐 《现代生物医学进展》 CAS 2012年第28期5411-5414,共4页
目的:研究Egr-1基因在2种腺癌细胞A549和Hela放射前后的表达变化及对放射敏感性的影响。方法:培养肺腺癌A549细胞和宫颈腺癌Hela细胞,分别提取4 GyX射线照射前及照射后不同时间点的细胞的总RNA行荧光定量PCR(FQ-PCR)检测Egr-1表达水平;... 目的:研究Egr-1基因在2种腺癌细胞A549和Hela放射前后的表达变化及对放射敏感性的影响。方法:培养肺腺癌A549细胞和宫颈腺癌Hela细胞,分别提取4 GyX射线照射前及照射后不同时间点的细胞的总RNA行荧光定量PCR(FQ-PCR)检测Egr-1表达水平;收获4 GyX射线照射前及照射后不同时间点的细胞处理行流式细胞术检测其凋亡;对照射不同剂量的细胞继续培养10-14天,进行克隆形成计数,计算克隆形成率及存活分数。结果:FQ-PCR结果显示,放射后Egr-1基因表达水平在2种细胞中均明显升高且于放射后1 h达到峰值,A549细胞的峰值明显高于Hela细胞;流式细胞术检测结果显示,A549细胞凋亡明显高于Hela细胞;克隆形成实验结果显示,A549细胞存活分数明显低于Hela细胞。结论:Egr-1基因在不同腺癌细胞表达水平不同并影响其放射敏感性。 展开更多
关键词 egr-1基因 荧光定量PCR(FQ-PCR) 腺癌 放射敏感性
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大黄灵仙颗粒对兔肝损伤胆石症的干预及调控EGR-1表达作用的研究 被引量:3
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作者 王兵 唐乾利 +5 位作者 王宇 俞渊 黄欣 吕震 刘明 王澍 《中国临床新医学》 2016年第11期959-963,共5页
目的通过构建慢性肝损伤性胆石症模型,利用大黄灵仙颗粒药物干预,探究EGR-1在防治肝损伤胆石症过程中的表达变化。方法利用腹腔注射CCl4-橄榄油溶液构建兔慢性肝损伤模型,同时予高热量、高胆固醇致石饲料,建立兔慢性肝损伤胆石症模型。... 目的通过构建慢性肝损伤性胆石症模型,利用大黄灵仙颗粒药物干预,探究EGR-1在防治肝损伤胆石症过程中的表达变化。方法利用腹腔注射CCl4-橄榄油溶液构建兔慢性肝损伤模型,同时予高热量、高胆固醇致石饲料,建立兔慢性肝损伤胆石症模型。模型构建成功后,治疗组采用大黄灵仙颗粒0.4 g/(kg·d)进行干预,其余各组大白兔均正常饮食。用药12周后,麻醉后取肝脏组织,分别通过RT-PCR、免疫组化等方法进行检测。结果 (1)免疫组化结果:与各模型组相比,喂食大黄灵仙颗粒剂的各治疗组大白兔EGR-1的阳性表达明显减少,表现为肝脏汇管区及肝窦的肝细胞胞浆上棕褐色颗粒沉积表达明显减少,说明用药后可减少EGR-1蛋白的阳性表达使受损肝功能得到改善。(2)RT-PCR结果:各治疗组的EGR-1 mRNA的表达量均有不同程度降低(P均<0.05),说明大黄灵仙颗粒可通过减少EGR-1 mRNA表达量有效减轻肝损伤。结论大黄灵仙颗粒可以有效预防结石的形成,减少慢性肝损伤性胆石症动物模型EGR-1的mRNA与蛋白的表达量,具有减轻肝损伤及改善肝功能的作用。 展开更多
关键词 慢性肝损伤 胆石症 egr-1 基因 蛋白
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pEGFP-Egr-1表达质粒构建及其表达抑制HepG2细胞增殖 被引量:1
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作者 黄心怡 虞游 +1 位作者 金韵特 陈建明 《杭州师范大学学报(自然科学版)》 CAS 2016年第4期382-386,共5页
将RT-PCR扩增的Egr-1基因连接到pMD-18载体上并测序鉴定,经测序正确的Egr-1基因亚克隆到绿色荧光蛋白真核表达载体pEGFP-C1上构建成重组质粒pEGFP-Egr-1.重组质粒pEGFP-Egr-1转染HepG2细胞后,运用荧光显微镜及荧光定量PCR技术分析其在He... 将RT-PCR扩增的Egr-1基因连接到pMD-18载体上并测序鉴定,经测序正确的Egr-1基因亚克隆到绿色荧光蛋白真核表达载体pEGFP-C1上构建成重组质粒pEGFP-Egr-1.重组质粒pEGFP-Egr-1转染HepG2细胞后,运用荧光显微镜及荧光定量PCR技术分析其在HepG2细胞中的表达情况,并进一步运用WST-1法分析其表达对HepG2细胞增殖的影响.结果显示,重组质粒pEGFP-Egr-1构建正确,转染后在荧光显微镜下观察可见HepG2细胞发出绿色荧光信号,荧光定量PCR分析发现转染后HepG2细胞Egr-1基因mRNA水平明显升高.WST-1结果表明,与对照组相比,转染pEGFP-Egr-1质粒的HepG2细胞,其增殖速率明显下降.上述结果表明,pEGFP-Egr-1重组质粒构建成功,外来过表达Egr-1基因能够抑制HepG2细胞增殖. 展开更多
关键词 egr-1基因 pEGFP-egr-1表达质粒 HEPG2细胞 细胞增殖
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辐射敏感性早期生长应答-1基因启动子的研究 被引量:2
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作者 张春智 郭阳 吕仲宏 《国际放射医学核医学杂志》 2006年第2期120-121,126,共3页
肿瘤基因放射治疗已成为研究热点,早期生长应答-1(Egr-1)基因启动子为肿瘤基因放射治疗提供一种可能的方法。综述了Egr-1基因启动子及应用Egr-1基因启动子构建辐射诱导调控系统的研究。
关键词 基因 egr-1 放射疗法 基因疗法 基因启动子
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Egr-1启动子辐射诱导的基因表达特性
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作者 朱慧 曹传华 谢丛华 《武汉大学学报(医学版)》 CAS 2008年第2期186-189,共4页
目的:研究电离辐射作用下早期生长反应因子1(Egr-1)启动子调控增强绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因在人结肠癌细胞SW480中的表达。方法:利用基因重组手段构建质粒Egr-1-EGFP;阳离子脂质体介导转染人结肠癌细胞SW480,给予不同剂量γ射线照射... 目的:研究电离辐射作用下早期生长反应因子1(Egr-1)启动子调控增强绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因在人结肠癌细胞SW480中的表达。方法:利用基因重组手段构建质粒Egr-1-EGFP;阳离子脂质体介导转染人结肠癌细胞SW480,给予不同剂量γ射线照射,流式细胞仪检测照射后不同时间点EGFP的表达。结果:电离辐射能够诱导Egr-1启动子调控下游基因的表达,且6 Gy照射后最为明显,在照射后24 h达到高峰。结论:Egr-1启动子具有电离辐射诱导特性。 展开更多
关键词 egr-1启动子 增强绿色荧光蛋白 基因表达 电离辐射
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