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全血γ干扰素释放试验在菌阴肺结核中诊断价值的临床观察 被引量：27
1
作者 杨新婷 贾红彦 +5 位作者 李琦 卜建玲 古淑香 杜凤娇 张宗德 陈效友 《中国临床医生杂志》 2013年第3期42-45,共4页
目的探讨基于RD1区抗原的全血γ干扰素释放实验对菌阴肺结核的诊断价值。方法选取健康对照组、菌阴肺结核组、菌阳肺结核组、肺部其他疾病对照组共计182例,抽取肝素抗凝血分别给以抗原ESAT-6、PPD、ESAT-6/CFP10融合抗原刺激,通过ELISA... 目的探讨基于RD1区抗原的全血γ干扰素释放实验对菌阴肺结核的诊断价值。方法选取健康对照组、菌阴肺结核组、菌阳肺结核组、肺部其他疾病对照组共计182例,抽取肝素抗凝血分别给以抗原ESAT-6、PPD、ESAT-6/CFP10融合抗原刺激,通过ELISA的方法检测抗原刺激后血浆中IFN-γ的数值。结果根据菌阳结核组和健康人群中IFN-γ分泌量绘制ROC曲线,选定ESAT-6为抗原刺激时cut-off值为31 pg/ml;PPD为抗原刺激时所分泌的IFN-γ的cut-off值为2068 pg/ml;ESAT-6/CFP-10融合抗原为抗原刺激时cut-off值为1458 pg/ml。如果选择ESAT-6或ESAT-6/CFP-10融合抗原任一阳性即判定为全血γ干扰素释放实验阳性,则其在菌阴肺结核中的敏感性为83%,特异性为76.8%。结论基于RD1区的全血γ干扰素释放实验在菌阴肺结核的诊断与鉴别诊断中,有较好的敏感性和特异性,可以用于菌阴肺结核的辅助诊断和鉴别诊断。 展开更多
关键词 esat-6 esat-6 CFP-10 干扰素释放试验 菌阴肺结核
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结核分支杆菌ESAT6蛋白的表达、纯化及抗原性研究 被引量：16
2
作者 吴雪琼 张俊仙 +4 位作者 史迎昌 李洪敏 金关甫 夏湘萱 刘军 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 2001年第9期14-17,共4页
目的 :获得重组ESAT6蛋白 ,研究其免疫学特性 ,评价其在结核病血清学诊断中的价值。方法 :分别用生理盐水和卡介苗免疫小鼠 8周后 ,以结核分支杆菌接种小鼠。应用基因工程技术表达、纯化ESAT6蛋白 ,分别以结核分支杆菌PPD或纯化的rESAT... 目的 :获得重组ESAT6蛋白 ,研究其免疫学特性 ,评价其在结核病血清学诊断中的价值。方法 :分别用生理盐水和卡介苗免疫小鼠 8周后 ,以结核分支杆菌接种小鼠。应用基因工程技术表达、纯化ESAT6蛋白 ,分别以结核分支杆菌PPD或纯化的rESAT6蛋白为抗原 ,通过ELISA方法及结核病一步法检测小鼠或人血清中抗结核抗体。结果 :重组质粒 pET2 4b -ESAT6在大肠杆菌BL2 (DE3)细胞内以包涵体形式存在 ,分子量约6kDa ,每 10 0ml培养菌可获得约 18mg纯化的重组蛋白。生理盐水和卡介苗免疫小鼠血后血清中抗ESAT6抗体无区别 ;结核分支杆菌攻击后 ,两组小鼠血清中抗ESAT6抗体均明显升高 ,但只有卡介苗组小鼠抗体水平超过平均值 +2标准误。以 33例正常人血清的OD值 +2S为正常界限值 ,33例正常人和 32例结核病人血清一步法和PDD、rESAT6ELISA检测抗结核抗体的特异性和敏感性分别为 :一步法 87.9% (2 9/33)、6 5 .6 %(2 1/32 ) ;PPD 93 .9% (31/33)、6 2 .5 % (2 0 /32 ) ;rESAT6 97% (32 /33)、18.2 % (4/32 )。结论 :pET2 4b -ESAT6大肠杆菌工程菌能以包涵形式高效表达重组ESAT6蛋白 ,卡介苗免疫对血清中抗ESAT6抗体无影响 ,结核病人血清中抗ESAT6抗体阳性率低 ,rESAT6纯化蛋白可作为结核病血清学诊断的混合抗原之一。 展开更多
关键词 esat6 基因表达 血清学诊断 分支杆菌 结核
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结核分枝杆菌ESAT6-CFP10融合蛋白诱导的小鼠免疫应答及其保护力 被引量：12
3
作者 张海 师长宏 +3 位作者 薛莹 柏银兰 王丽梅 徐志凯 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期443-446,共4页
目的:研究结核分枝杆菌(MTB)ESAT6-CFP10融合蛋白诱导的小鼠体液和细胞免疫应答以及对MTB感染小鼠的保护能力。方法:用预先转移到硝酸纤维素膜条的ES-AT6-CFP10融合蛋白采用皮下包埋的方法免疫小鼠。用MTB培养上清滤液蛋白(CFP)作为抗原... 目的:研究结核分枝杆菌(MTB)ESAT6-CFP10融合蛋白诱导的小鼠体液和细胞免疫应答以及对MTB感染小鼠的保护能力。方法:用预先转移到硝酸纤维素膜条的ES-AT6-CFP10融合蛋白采用皮下包埋的方法免疫小鼠。用MTB培养上清滤液蛋白(CFP)作为抗原,用ELISA法测定免疫小鼠血清特异性抗体的滴度。末次免疫后,取部分免疫小鼠脾淋巴细胞,体外用ESAT6-CFP10融合蛋白刺激后,以MTT比色法检测淋巴细胞增殖反应,同时检测免疫小鼠IFN-γ和IL-2水平及脾细胞杀伤效应。另一部分免疫的BALB/c小鼠经尾静脉感染MTB毒株H37Rv,4周后计数脾脏中的细菌数。结果:ESAT6-CFP10融合蛋白免疫小鼠血清特异性抗体的滴度为1∶6400。淋巴细胞刺激增殖指数为1.90±0.15,明显高于生理盐水组(0.90±0.15);IFN-γ和IL-2的含量分别为1.792±19ng/L和0.211±11ng/L,显著高于生理盐水对照组,但不及BCG免疫组;同时融合蛋白诱导的脾细胞杀伤率为36%。与生理盐水免疫组(细菌负荷6.51±0.13)相比较,融和蛋白免疫的BALB/c小鼠,对攻击感染后MTB在脾脏中增殖有显著作用(细菌负荷为5.24±0.15,P<0.05),但与BCG免疫组相比脾脏中细菌负荷减少甚微。结论:ESAT6-CFP10融合蛋白可作为新型结核疫苗的候选组分。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 疫苗 esat6 CFP10 重组融合蛋白
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早期诊断结核性脑膜炎的新方法:检测浓缩脑脊液中CFP-10和ESAT-6 被引量：15
4
作者 吴晓牧 刘丽娟 +5 位作者 许志强 胡国柱 曹文锋 黄刚 胡凡 张昆南 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期347-350,共4页
目的:应用酶联免疫吸附试验检测浓缩的脑脊液中结核分枝杆菌特异性抗原培养滤液蛋白10(CFP10)和6000早期分泌性抗原靶(ESAT-6),评价其在结核性脑膜炎(TBM)早期诊断中的价值。方法:应用ELISA测定46例临床诊断为TBM和56例非TBM患者脑脊液... 目的:应用酶联免疫吸附试验检测浓缩的脑脊液中结核分枝杆菌特异性抗原培养滤液蛋白10(CFP10)和6000早期分泌性抗原靶(ESAT-6),评价其在结核性脑膜炎(TBM)早期诊断中的价值。方法:应用ELISA测定46例临床诊断为TBM和56例非TBM患者脑脊液原液及经透析袋浓缩10倍的脑脊液浓缩液中CFP10和ESAT-6。结果:TBM患者脑脊液原液CFP10检测敏感度为13.04%、特异度为100.00%,ESAT-6的敏感度为13.04%、特异度为100.00%;而浓缩液CFP10的敏感度为78.26%、特异度为96.42%,ESAT-6的敏感度为76.09%、特异度为98.18%。结论:应用反透析方法浓缩脑脊液,使用抗CFP10和ESAT-6 ELISA检测脑脊液CFP10和ESAT-6能显著提高其敏感度,是一种简单、快速早期诊断结核性脑膜炎的有效辅助方法。 展开更多
关键词 结核性脑膜炎 酶联免疫吸附试验 CFP10 esat-6
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细胞因子IL-2、IL-12及IL-18增强结核杆菌ESAT-6 DNA疫苗的免疫保护作用 被引量：15
5
作者 尹芳 胡月圆 +1 位作者 郭琼 李贵南 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期954-959,共6页
目的探讨白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-12(IL-12)以及白细胞介素-18(IL-18)对结核分枝杆菌ESAT-6DNA疫苗免疫保护作用的影响。方法50只雌性Balb/c小鼠随机分为IL-2-pcDNA-ESAT-6、IL-12-pcDNA-ESAT-6、IL-18-pcDNA-ESAT-6、pcDNA-ESA... 目的探讨白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-12(IL-12)以及白细胞介素-18(IL-18)对结核分枝杆菌ESAT-6DNA疫苗免疫保护作用的影响。方法50只雌性Balb/c小鼠随机分为IL-2-pcDNA-ESAT-6、IL-12-pcDNA-ESAT-6、IL-18-pcDNA-ESAT-6、pcDNA-ESAT-6以及PBS对照组,分别于0、2、4周共免疫3次。末次免疫2周后各组处死5只小鼠,ELISA检测小鼠血清IgG、IgA,并分别检测0、2、4、6周小鼠阴道灌洗液中sIgA水平。CCK-8法检测免疫小鼠脾细胞的增殖情况,并测定脾细胞上清中细胞因子IFN-γ、IL-2、TNF-α、IL-6、IL-10的分泌水平。末次免疫2周后,腹腔注射结核杆菌H37Rv感染小鼠,感染后4周取小鼠肺组织进行菌落培养计数;同时通过HE染色以及肺组织炎症因子检测评估其炎症情况。结果细胞因子IL-2、IL-12以及IL-18均能够显著增加小鼠血清IgG、IgA以及阴道灌洗液sIgA的分泌(P<0.05),并促进免疫小鼠脾淋巴细胞的增殖(P<0.05);IL-2、IL-12及IL-18还能够显著增加脾细胞中IFN-γ、IL-2、TNF-α的分泌水平;此外,相较于ESAT-6真核疫苗组以及PBS对照组,IL-2、IL-12及IL-18均能够显著降低小鼠肺组织菌体载量以及炎性侵润,并减少炎性因子分泌。结论细胞因子IL-2、IL-12及IL-18均能不同程度的增强结核杆菌ESAT-6 DNA疫苗的体液以及细胞免疫应答水平,并显著提高其免疫保护效果。 展开更多
关键词 细胞因子 结核杆菌 esat-6 疫苗
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结核分枝杆菌Ag85B-ESAT6融合蛋白在小鼠体内诱导的免疫应答及其保护力 被引量：11
6
作者 师长宏 范雄林 +3 位作者 柏银兰 薛莹 张海 徐志凯 《第四军医大学学报》 北大核心 2004年第18期1633-1636,共4页
目的 :研究Ag85B与ESAT6融合蛋白在小鼠体内诱导的体液和细胞免疫应答以及对MTB感染小鼠的保护力 .方法 :采用皮下包埋的方法 ,将预先转移到硝酸纤维素膜上的表达蛋白免疫小鼠 3次 ,每次间隔 2wk,用MTB培养上清滤液蛋白 (culturefiltrat... 目的 :研究Ag85B与ESAT6融合蛋白在小鼠体内诱导的体液和细胞免疫应答以及对MTB感染小鼠的保护力 .方法 :采用皮下包埋的方法 ,将预先转移到硝酸纤维素膜上的表达蛋白免疫小鼠 3次 ,每次间隔 2wk,用MTB培养上清滤液蛋白 (culturefiltrateproteins,CFP)作为抗原 ,ELASA测定免疫小鼠血清特异性抗体的滴度 .为了检测融合蛋白免疫小鼠引起的细胞免疫应答 ,最后一次免疫完成后 4wk ,取一部分免疫小鼠分离脾淋巴细胞 ,体外用抗原刺激 ,MTT法检测淋巴细胞刺激反应 ,ELISA检测悬液中IFN γ水平 .另一部分免疫的BALB/c小鼠经尾静脉感染MTB毒株H37Rv ,4wk后计数脾脏细菌负荷数 .结果 :Ag85B ESAT6蛋白免疫小鼠血清特异性抗体滴度为 1∶10 0 0 ,ESAT6 Ag85B蛋白免疫小鼠血清特异性抗体滴度为 1∶5 0 0 0 .融合蛋白Ag85B ESAT6和ESAT6 Ag85B免疫组淋巴细胞刺增殖指数分别为 2 .4 0± 0 .17和 2 .6 0± 0 .2 5 ,而生理盐水组只有 0 .90± 0 .2 1;相对应的IFN γ含量分别为 (3.5 1± 0 .30 ) μg/L和 (4 .0 5± 0 .4 1) μg/L ,显著高与生理盐水对照组 (0 .5 0± 0 .2 5 ) μg/L ,P <0 .0 5 ,但不及BCG免疫组 (5 .5 5±0 .31) μg/L .与生理盐水免疫组 (细菌负荷6 .31± 0 .13)相比较 ,融合蛋白免疫的BALB/c小鼠 。 展开更多
关键词 分支杆菌 结核 疫苗 抗原85B esat6 重组融合蛋白质类
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结核分枝杆菌Hsp65-Ag85B、Hsp65-ESAT6融合基因DNA疫苗株的构建及免疫原性研究 被引量：13
7
作者 张真 赵玲娜 +3 位作者 申梦 王希良 杨鹏辉 包金风 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期109-115,共7页
目的构建结核分枝杆菌Hsp65-Ag85B、Hsp65-ESAT6 DNA候选疫苗株并鉴定,初步评价其免疫原性。方法从GenBank中获取M.tuberculosis H37Rv的Ag85B、ESAT6和Hsp65基因序列优化后合成,经PCR、酶切、连接与真核表达载体PVAX1重组,构建重组质粒... 目的构建结核分枝杆菌Hsp65-Ag85B、Hsp65-ESAT6 DNA候选疫苗株并鉴定,初步评价其免疫原性。方法从GenBank中获取M.tuberculosis H37Rv的Ag85B、ESAT6和Hsp65基因序列优化后合成,经PCR、酶切、连接与真核表达载体PVAX1重组,构建重组质粒PVAX1-Hsp65-Ag85B和PVAX1-Hsp65-ESAT6。重组质粒体外转染验证其表达后,免疫C57BL/6小鼠,检测特异性细胞免疫应答反应。结果Hsp65-Ag85B、Hsp65-ESAT6 DNA疫苗株在体内外均能表达,Western blot结果显示,DNA疫苗株体外转染293T细胞,24 h可检测到特异性蛋白条带,48 h蛋白表达量达最高。小鼠体内实验表明,Hsp65-Ag85B、Hsp65-ESAT6 DNA疫苗株均可激发较强的免疫反应,可诱导机体产生分泌高水平TNF-α的Th型免疫应答,且Hsp65-Ag85B优于Hsp65-ESAT6。结论Hsp65-Ag85B、Hsp65-ESAT6 DNA疫苗株均具有较强的免疫原性,呈Th型细胞介导的免疫应答,推测Hsp65-Ag85B DNA疫苗的保护效力优于Hsp65-ESAT6,为新型结核DNA疫苗研制提供了实验依据。 展开更多
关键词 DNA疫苗 AG85B esat6 HSP65 分枝杆菌
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人IL-12与结核分枝杆菌抗原ESAT-6联合基因疫苗的免疫效果观察 被引量：10
8
作者 郝牧 鲍朗 高蕾 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期477-481,共5页
人白细胞介素12（IL-12）与结核分枝杆菌免疫优势抗原ESAT-6真核表达质粒联合基因免疫,诱导免疫应答效果观察.近交系BALB/c小鼠,随机分组：A组（生理盐水对照）、B组（pcDNA3.1空质粒对照）、C组（BCG对照）、D组（pcESAT-6）和E组（pcI... 人白细胞介素12（IL-12）与结核分枝杆菌免疫优势抗原ESAT-6真核表达质粒联合基因免疫,诱导免疫应答效果观察.近交系BALB/c小鼠,随机分组：A组（生理盐水对照）、B组（pcDNA3.1空质粒对照）、C组（BCG对照）、D组（pcESAT-6）和E组（pcIL-12＋pcESAT-6）.B、D、E质粒免疫组小鼠分别于胫前肌肌肉注射布比卡因（7.5g/L）和质粒的混和物（1：4,100μL,含质粒70μg/次）,A组小鼠肌肉注射生理盐水和布比卡因的混和物（1：4,100μL）,均间隔2周免疫一次,共免疫3次;末次免疫时,C组小鼠皮下注射BCG菌液,0.3mL/只,含10^6CFU/mL.末次免疫后14d和28d,各组小鼠分别取血分离血清用于总IgG测定,同时分离脾细胞,经TB-PPD刺激后检测脾细胞增殖（XTT比色法）活性和脾细胞培养上清液中γ干扰素（IFN-γ）、白介素4（IL-4）分泌水平.pcESAT-6质粒DNA单独免疫（D组）或与pcIL-12质粒DNA联合免疫（E组）,均能诱导小鼠产生特异性抗体,且抗体水平在末次加强免疫后14～28d逐渐增加;但pcIL-12与pcESAT-6联合免疫后,特异性抗体水平较pcESAT-6单独免疫增加不明显（P＜0.05）.c、D、E组免疫小鼠脾细胞体外经TB-PPD刺激后,E组小鼠特异性淋巴细胞增殖活性和IFN-γ分泌水平明显强于C组和D组（P＜0.05）,而IL-4分泌水平相互间未发现明显差异.末次加强免疫后14～28d,E组小鼠脾细胞增殖活性维持在较高水平,而C组小鼠脾细胞增殖活性先低后高,D组则先高后低;IFN-γ诱生水平,E组最高,C组次之,D组最低.pcIL-12与pcESAT-6质粒DNA联合免疫后能刺激机体产生强烈的细胞免疫和稳定的体液免疫,在动物体内诱发的细胞免疫较ESAT-6或BCG单独免疫时均有明显增加并维持较长时间,此外联合免疫后诱导的体液免疫也较BCG免疫有明显增加. 展开更多
关键词 白细胞介素12 结核分枝杆菌 esat-6 DNA疫苗
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ELISPOT检测技术在儿童结核病诊断中的应用 被引量：12
9
作者 孙琳 焦伟伟 +8 位作者 赵顺英 李兆娜 胡英慧 冯雪莉 李惠民 迟巍 江沁波 江载芳 申阿东 《标记免疫分析与临床》 CAS 2008年第6期349-353,共5页
为了评价ELISPOT试验在儿童结核病诊断中的应用价值,采用以结核分枝杆菌特异性蛋白ESAT-6和CFP-10(cu lture filtrate prote in-10)为抗原的ELISPOT试验技术,检测了42例非结核性肺疾病患儿和27例活动性结核病患儿体内特异性T淋巴细胞分... 为了评价ELISPOT试验在儿童结核病诊断中的应用价值,采用以结核分枝杆菌特异性蛋白ESAT-6和CFP-10(cu lture filtrate prote in-10)为抗原的ELISPOT试验技术,检测了42例非结核性肺疾病患儿和27例活动性结核病患儿体内特异性T淋巴细胞分泌的γ-干扰素水平,评价其在儿童活动性结核病和潜伏结核感染中的敏感性和特异性,并将结果与结核菌素皮试结果(PPD)进行比较;同时分析了该试验的各影响因素。结果显示,ELIS-POT试验的敏感性为88.9%,特异性(97.6%)高于PPD(81%,P(0.05);与PPD试验结果结合分析,其诊断阳性率为96.3%。此外,ELISPOT试验结果与性别、年龄、BCG接种史、结核病接触史、机体免疫状态、PPD直径和感染部位等影响因素之间的相关性进行了初步探讨。实验结果提示ELISPOT试验适宜作为儿童PPD试验初筛后结核病诊断的重要辅助工具。 展开更多
关键词 结核病 诊断 ELISPOT esat-6 CFP-10
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结核分枝杆菌MPT64-ESAT6融合蛋白在小鼠体内诱导的免疫应答及其保护力 被引量：8
10
作者 师长宏 安家泽 +4 位作者 唐小凤 王晓武 张海 柏银兰 徐志凯 《第四军医大学学报》 北大核心 2006年第9期769-771,共3页
目的:测定MPT64与ESAT6融合蛋白在小鼠体内诱导的免疫应答及保护力.方法:将MPT64与ESAT6的融合蛋白皮下免疫小鼠3次,每次间隔2wk,ELISA测定免疫小鼠血清特异性抗体的滴度.最后一次免疫完成后4wk,分离部分免疫小鼠脾淋巴细胞,MTT法检测... 目的:测定MPT64与ESAT6融合蛋白在小鼠体内诱导的免疫应答及保护力.方法:将MPT64与ESAT6的融合蛋白皮下免疫小鼠3次,每次间隔2wk,ELISA测定免疫小鼠血清特异性抗体的滴度.最后一次免疫完成后4wk,分离部分免疫小鼠脾淋巴细胞,MTT法检测淋巴细胞刺激指数,ELISA检测悬液中IFNγ水平.另一部分免疫的BALB/c小鼠经尾静脉感染MTB毒株H37Rv,4wk后计数脾脏细菌负荷数.结果:MPT64ESAT6融合蛋白免疫小鼠血清特异性抗体滴度1∶1500,免疫小鼠后淋巴细胞刺激增殖指数为2.23,而生理盐水免疫组只有0.88;脾淋巴细胞悬液中诱发的IFNγ为(4.28±0.27)μg/L,显著高于生理盐水免疫组[(0.48±0.17)μg/L,P<0.05],但不及BCG免疫组[(5.18±0.31)μg/L].与生理盐水免疫组(细菌负荷6.45±0.17)相比较,融合蛋白免疫的小鼠,对攻击感染后抗MTB在脾脏中增殖有显著作用,细菌负荷为5.04±0.11,但与BCG免疫组相比脾脏细菌负荷减少甚微(细菌负荷4.38±0.22).结论:MPT64与ESAT6融合蛋白可作为新型结核疫苗的候选组分. 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 疫苗 MPT64 esat6 融合表达
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ELISA法检测浓缩脑脊液ESAT-6对结核性脑膜炎的诊断价值 被引量：11
11
作者 张昆南 文安 +5 位作者 杨赟 柴文 胡凡 胡国柱 吴梨华 吴晓牧 《中国神经免疫学和神经病学杂志》 CAS 北大核心 2014年第5期360-363,共4页
目的探讨酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测浓缩脑脊液结核分枝杆菌早期分泌性抗原6000(6000early secretory antigenic target,ESAT-6)对结核性脑膜炎(tuberculous meningitis,TBM)的诊断价值。方法采用腰... 目的探讨酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测浓缩脑脊液结核分枝杆菌早期分泌性抗原6000(6000early secretory antigenic target,ESAT-6)对结核性脑膜炎(tuberculous meningitis,TBM)的诊断价值。方法采用腰椎穿刺抽取106份脑脊液,其中49份来自TBM患者,57份来自非TBM患者。应用Amicon Ultra-4超滤离心管离心浓缩脑脊液。采用ELISA法检测脑脊液中ESAT-6含量。结果浓缩脑脊液ESAT-6抗原检出敏感性显著高于脑脊液原液的检出率(87.50%比67.35%,P<0.05),而其特异性与脑脊液原液比较无统计学差异(92.16%比96.49%,P>0.05)。结论应用离心超滤技术浓缩脑脊液能显著提高ELISA法检测脑脊液ESAT-6抗原的检出率,提高TBM的诊断率。 展开更多
关键词 结核性脑膜炎 酶联免疫吸附试验 esat-6 诊断
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结核分枝杆菌分泌性抗原Ag85与ESAT-6在肾结核感染诊断中的应用分析 被引量：11
12
作者 满昌军 董香玉 +2 位作者 王啸 孙敏 韩晓芬 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第18期4660-4662,共3页
目的探讨结核分枝杆菌分泌性抗原Ag85复合体(Ag85)与早期分泌性抗原靶-6(ESAT-6)在肾结核感染诊断中的意义,为临床诊断肾结核提供有效的方法。方法选取就诊经病理诊断为肾结核患者31例作为肾结核组,原发性肾小球肾炎患者30例为非肾结核... 目的探讨结核分枝杆菌分泌性抗原Ag85复合体(Ag85)与早期分泌性抗原靶-6(ESAT-6)在肾结核感染诊断中的意义,为临床诊断肾结核提供有效的方法。方法选取就诊经病理诊断为肾结核患者31例作为肾结核组,原发性肾小球肾炎患者30例为非肾结核组,经检查患者无结核病史、结核菌素试验以及血结核抗体均为阴性;用免疫组化的方法检测Ag85、ESAT-6在肾组织中的表达。结果肾结核组的切片发现有棕黄色、褐色阳性物质沉积,而在非肾结核组的切片中,仅在4例切片中见到浅褐色的物质沉积于肾间质;而通过检测两组切片中Ag85、ESAT-6的光密度值,发现肾结核组中的Ag85、ESAT-6的光密度值显著高于非肾结核组,差异有统计学意义;肾结核患者中Ag85的表达与ESAT-6的表达呈正相关,另外,Ag85、ESAT-6这两种抗原对肾结核分枝杆菌的敏感度均较高达100.0%,而ESAT-6对肾结核的特异度较Ag85更高,差异有统计学意义。结论 Ag85、ESAT-6在肾结核患者肾组织中的表达增强,可作为检测肾结核的补充诊断指标。 展开更多
关键词 Ag85 esat-6 肾结核
原文传递
融合表达Ag85B-ESAT6的结核分枝杆菌真核表达载体的构建及其免疫原性 被引量：6
13
作者 师长宏 范雄林 +3 位作者 徐志凯 李元 柏银兰 薛莹 《第四军医大学学报》 北大核心 2004年第2期121-124,共4页
目的 :构建融合表达结核分枝杆菌 (Mycobacteriumtuberculosis,MTB)分泌蛋白Ag85B ESAT6真核表达载体 ,研究该重组载体在体外的表达和在小鼠体内诱生体液免疫应答的能力 .方法 :设计含不同酶切位点的Ag85B和ESAT6引物 ,采用PCR的方法从... 目的 :构建融合表达结核分枝杆菌 (Mycobacteriumtuberculosis,MTB)分泌蛋白Ag85B ESAT6真核表达载体 ,研究该重组载体在体外的表达和在小鼠体内诱生体液免疫应答的能力 .方法 :设计含不同酶切位点的Ag85B和ESAT6引物 ,采用PCR的方法从MTB毒株H37Rv DNA中分别扩增出相应大小的DNA片段 ,将片段分别与pGEM T easy载体连接后测序 .将测序正确的Ag85B和ESAT6按照不同的酶切位点克隆入真核表达载体pcDNA3,挑选出阳性克隆 ,分别命名为AZ pcD NA3 EF 和EZ pcDNA3 AF,将重组质粒电转CHO细胞 ,RT PCR检测融合蛋白mRNA的表达 ,间接免疫荧光测定CHO细胞内融合蛋白的表达 ;用重组质粒免疫BALB/c小鼠 ,ELISA测定特异性抗体的滴度 .结果 :PCR获得的Ag85B和ESAT6序列与GenBank报道的一致 .RT PCR可检测融合基因转录出mR NA ,转染重组质粒的CHO细胞内有较强的免疫荧光 ,AZ pcD NA3 EF 质粒免疫小鼠血清特异性抗体滴度为 1∶1 0 0 0 ,EZ pcD NA3 AF 质粒免疫小鼠血清特异性抗体滴度为 1∶1 5 0 0 .结论 :Ag85B和ESAT6融合基因真核表达载体构建成功 。 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 Ag$5B esat6 融合表达 遗传载体
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检测脑脊液单核细胞内结核分支杆菌早期分泌性抗原对结核性脑膜炎的诊断价值 被引量：10
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作者 杨璟 《实用医院临床杂志》 2014年第1期84-86,共3页
目的探讨脑脊液单核细胞内结核分支杆菌早期分泌性抗原(early secretory antigenic target 6,ESAT-6)检测对结核性脑膜炎(tuberculous meningitis,TBM)的诊断价值。方法选择我院2011年1月至2012年12月期间神经内科收治的经结核性脑膜炎... 目的探讨脑脊液单核细胞内结核分支杆菌早期分泌性抗原(early secretory antigenic target 6,ESAT-6)检测对结核性脑膜炎(tuberculous meningitis,TBM)的诊断价值。方法选择我院2011年1月至2012年12月期间神经内科收治的经结核性脑膜炎诊断金标准确诊的46例TBM患者(结核性脑膜炎组)和40例非TBM患者(对照组)为研究对象,对两组患者的脑脊液分别行细胞学和生化检查,并检测患者脑脊液单核细胞内的ESAT-6抗原。结果结脑组患者脑脊液细胞100%呈混合性细胞学反应,对照组患者45%呈混合性细胞学反应,差异具有统计学意义(χ2=5.72,P<0.05);白细胞计数、葡萄糖和氯化物计量结脑组患者明显高于对照组(P<0.01),而脑脊液蛋白含量差异无统计学意义(P>0.05)。ESAT-6抗原检测诊断TBM的灵敏度为91.30%,特异度92.5%,假阳性率7.5%,假阴性率8.70%,阳性预测值93.33%,阴性预测值90.24%%。结论脑脊液单核细胞内ESAT-6检测对TBM具有较高的诊断价值,该辅助诊断方法值得临床推广及应用。 展开更多
关键词 结核性脑膜炎 脑脊液单核细胞 esat-6 诊断
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表达结核分枝杆菌ESAT6-CFP10融合蛋白DNA疫苗免疫原性 被引量：6
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作者 张海 师长宏 +3 位作者 王丽梅 薛莹 柏银兰 徐志凯 《第四军医大学学报》 北大核心 2007年第6期489-492,共4页
目的:研究表达结核分枝杆菌ESAT6-CFP10融合蛋白DNA疫苗在小鼠体内诱导的体液和细胞免疫应答以及对结核分枝杆菌(MTB)感染小鼠的保护能力.方法:以100μg重组质粒pcDNA-e6c10接种BALB/c小鼠腓前肌,共免疫3次.末次免疫结束2wk后,检测免疫... 目的:研究表达结核分枝杆菌ESAT6-CFP10融合蛋白DNA疫苗在小鼠体内诱导的体液和细胞免疫应答以及对结核分枝杆菌(MTB)感染小鼠的保护能力.方法:以100μg重组质粒pcDNA-e6c10接种BALB/c小鼠腓前肌,共免疫3次.末次免疫结束2wk后,检测免疫小鼠特异性抗体滴度、淋巴细胞增殖指数、CTL杀伤效应以及诱导IFN-γ和IL-2水平.另一部分免疫的BALB/c小鼠以1×105MTB毒株H37Rv经尾静脉进行攻击,4wk后计数脾脏细菌负荷数,观察免疫小鼠对MTB抵抗作用.结果:表达ESAT6-CFP10融合蛋白DNA疫苗免疫小鼠血清特异性抗体滴度为1∶800.淋巴细胞刺激增殖指数为2.42±0.13,显著高于生理盐水对照组;免疫小鼠诱导IFN-γ含量(2449±12)ng/L与卡介苗(BCG)组无明显差异,IL-2含量(198±16)ng/L不及BCG免疫组,但显著高于生理盐水对照组;同时融合蛋白诱导的CTL杀伤率为42%.与生理盐水免疫组(细菌负荷6.51±0.13)相比较,DNA疫苗免疫的BALB/c小鼠对攻击感染后MTB在脾脏中增殖有较明显抵抗作用(细菌负荷4.51±0.23,P<0.05),但与BCG免疫组相比脾脏细菌负荷无明显减少.结论:表达ESAT6-CFP10融合蛋白DNA疫苗能在结核病预防中有一定免疫治疗作用. 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 疫苗 DNA esat6 CFP10 融合蛋白 免疫原性
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结核分枝杆菌ESAT-6抗原适体的筛选与亲和性分析 被引量：10
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作者 马占忠 秦莲花 +1 位作者 王玉炯 胡忠义 《中华临床医师杂志（电子版）》 CAS 2007年第5期45-48,共4页
目的通过建立指数级富集配体的系统进化技术(SELEX),筛选结核分枝杆菌ESAT-6抗原适体的方法,获得ESAT-6的高亲和性适体,为结核病诊断和治疗试剂的开发奠定基础。方法体外构建一个长度为78个碱基的随机单链DNA(ssDNA)文库,以微孔板为筛... 目的通过建立指数级富集配体的系统进化技术(SELEX),筛选结核分枝杆菌ESAT-6抗原适体的方法,获得ESAT-6的高亲和性适体,为结核病诊断和治疗试剂的开发奠定基础。方法体外构建一个长度为78个碱基的随机单链DNA(ssDNA)文库,以微孔板为筛选介质,SELEX技术筛选获得ESAT-6的适体库,将适体库克隆、测序,用DNAMAN软件对其结构进行分析,利用生物素-链亲和素-辣根过氧化物酶显色系统测定亲和力,找出高亲和性适体。结果经过13轮筛选,ssDNA文库与ESAT-6亲和力从0.257提高到1.163,且12轮后A值趋于平衡,克隆、测序获得ESAT-6的高亲和性适体,其中适体A10亲和力最高,达到1.515,且与CFP10-ESAT6融合蛋白无交叉反应。二级结构显示,口袋和茎环结构可能是适体与ESAT-6结合的结构基础。结论成功建立了SELEX筛选技术,并初步获得了ESAT-6的高亲和性适体。 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 esat-6 指数级富集配体的系统进化技术 适体
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结核分枝杆菌Ag85B与ESAT6融合蛋白的表达、纯化及抗原活性的初步研究 被引量：6
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作者 刘建利 师长宏 +3 位作者 靳亚平 张海 赵勇 赵雷 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期449-452,共4页
目的将结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B与ESAT6在大肠杆菌中融合表达,并对其进行纯化、鉴定和免疫学特性的初步研究。方法采用PCR方法从MTB毒株H37Rv基因组DNA中扩增Ag85B和ESAT6基因,并在两基因中引入48bp的柔性linker结构,以确保两蛋白的... 目的将结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B与ESAT6在大肠杆菌中融合表达,并对其进行纯化、鉴定和免疫学特性的初步研究。方法采用PCR方法从MTB毒株H37Rv基因组DNA中扩增Ag85B和ESAT6基因,并在两基因中引入48bp的柔性linker结构,以确保两蛋白的正确折叠。将各目的片段克隆至pMD18-T载体中进行测序。将测序正确的目的基因片段双酶切后亚克隆至原核表达载体pPro-EXHTa,得到重组质粒pPROEXHTa-Ag85B-ESAT6,并转化入大肠杆菌DH5α。经IPTG诱导后进行融合表达,并分别用抗Ag85B和抗ESAT6的mAb进行Western blot分析鉴定。通过镍柱对融合蛋白进行纯化。在PBS中通过透析恢复重组蛋白的天然结构,将复性融合蛋白与8例临床可疑结核病人血清进行ELISA测定。结果PCR法扩增获得的各目的基因片段与GenBank报道的一致。构建的融合蛋白原核表达载体在大肠杆菌中表达后,经SDS-PAGE分析显示重组质粒在原核系统中得到了表达。融合蛋白能够分别与抗Ag85B和抗ESAT6的mAb反应。该融合蛋白主要以包涵体的形式存在,镍柱亲和层析纯化后得到了高纯度的Ag85B-ESAT6融合蛋白,并能够与结核病人血清发生反应。结论结核分枝杆菌融合蛋白Ag85B-ESAT6在大肠杆菌中得到了高效表达,为进一步研究其免疫原性和保护性提供了基础。 展开更多
关键词 AG85B esat6 柔性链 融合蛋白 原核表达 纯化
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牛结核分枝杆菌CFP10-ESAT6融合蛋白的原核表达及其在牛结核病检测中的应用 被引量：8
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作者 徐贤坤 熊毅 +2 位作者 龙剑明 刘棋 曾宪垠 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期796-802,共7页
采用重组PCR技术从牛结核分枝杆菌AN5基因组DNA中扩增CFP10-ESAT6融合基因,并将其定向克隆至原核表达载体pET-32a,构建了原核表达质粒pET-CFP10/ESAT6。重组子经酶切及测序鉴定后转化至大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导后经SDS-PAGE电泳鉴定... 采用重组PCR技术从牛结核分枝杆菌AN5基因组DNA中扩增CFP10-ESAT6融合基因,并将其定向克隆至原核表达载体pET-32a,构建了原核表达质粒pET-CFP10/ESAT6。重组子经酶切及测序鉴定后转化至大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导后经SDS-PAGE电泳鉴定,获得约42 ku带有6×His蛋白标签的rHIS-CFP10/ESAT6融合蛋白,表达量约占菌体总蛋白的40%。用HIS蛋白纯化柱纯化该蛋白,Western-blot分析显示,该融合蛋白能与抗牛结核分枝杆菌阳性血清发生特异性反应。将重组的该融合蛋白用于刺激单次皮内变态反应阳性牛全血,可以产生高水平的IFN-γ,其特异性优于结核菌素。结果表明,获得的重组融合蛋白rHIS-CFP10/ESAT6为牛结核病的诊断奠定了基础。 展开更多
关键词 牛结核病 融合蛋白 CFP-10 esat-6
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结核分枝杆菌RD-1区编码蛋白的结构和功能 被引量：8
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作者 李浩 徐俊杰 陈薇 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1260-1266,共7页
RD-1(region of difference-1)被认为在结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)的致病机理中起着关键的作用.RD-1基因全长9.5kb,开放读码框从Rv3871～Rv3879c,分别编码9种不同的蛋白质.RD-1区在卡介苗(bacillusCalmette-Guerin,B... RD-1(region of difference-1)被认为在结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)的致病机理中起着关键的作用.RD-1基因全长9.5kb,开放读码框从Rv3871～Rv3879c,分别编码9种不同的蛋白质.RD-1区在卡介苗(bacillusCalmette-Guerin,BCG)中是缺失的.研究结果显示,RD-1区是结核分枝杆菌的主要毒力因素之一,同时RD-1区参与了一种新的分泌系统ESX-1,这种分泌系统能够促进某些特定蛋白的分泌.ESX-1分泌的两种主要蛋白质CFP-10(culture filtrateprotein of10ku)和ESAT-6(early secreted antigenic target of6ku)能够形成牢固的1∶1的复合体,这两种蛋白质能够协同分泌而且能够引起T细胞反应,并可能作为理想的靶抗原在结核的预防和诊断中发挥作用. 展开更多
关键词 结核分枝杆菌(MTB) RD-1区 CFP-10 esat-6
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复合抗原ESAT-6/CFP-10/Rv0315在活动性肺结核辅助诊断中的价值 被引量：9
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作者 陈翠翠 叶娟 +3 位作者 赵俊伟 张舒林 孙战强 汤兵祥 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2014年第2期211-214,共4页
目的:评价结核分枝杆菌复合抗原ESAT-6/CFP-10/Rv0315在活动性肺结核诊断中的应用价值。方法:选取初治肺结核病患者70例和健康体检者34例作为结核组和健康对照组,分离PBMCs,分别用复合抗原ESAT-6/CFP-10/Rv0315、ESAT-6肽段库和CFP-10... 目的:评价结核分枝杆菌复合抗原ESAT-6/CFP-10/Rv0315在活动性肺结核诊断中的应用价值。方法:选取初治肺结核病患者70例和健康体检者34例作为结核组和健康对照组,分离PBMCs,分别用复合抗原ESAT-6/CFP-10/Rv0315、ESAT-6肽段库和CFP-10肽段库作为抗原进行ELISPOT实验,检测斑点形成细胞数。结果:复合抗原ESAT-6/CFP-10/Rv0315、ESAT-6肽段库和CFP-10肽段库检测结核分枝杆菌感染的阳性率依次为85.7%(60/70)、77.1%(54/70)、72.9%(51/70),特异性依次为82.4%(28/34)、85.3%(29/34)、88.2%(30/34)。结论:复合抗原ESAT-6/CFP-10/Rv0315作为抗原建立的ELISPOT检测方法在活动性肺结核的辅助诊断中有较高的应用价值。 展开更多
关键词 肺结核 结核分枝杆菌 esat-6 CFP-10 Rv0315
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