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下调EMS1/cortactin对人高转移潜能肝癌细胞株迁移和内吞的影响 被引量：2
1
作者 周家名 陈莉 +3 位作者 叶蕴瑶 孙树刚 王桂兰 吴圆圆 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1235-1238,1242,共5页
目的观察下调人高转移潜能肝癌细胞株(MHCC-97H)中EMS1/cortactin对细胞迁移和内吞的影响,探讨EMS1/cortac-tin在细胞内可能存在的功能。方法构建靶向EMS1的shRNA真核表达质粒(EMS1-PSilencer4.1-GFP-shRNA,EMS1-shR-NA);通过Lipofectam... 目的观察下调人高转移潜能肝癌细胞株(MHCC-97H)中EMS1/cortactin对细胞迁移和内吞的影响,探讨EMS1/cortac-tin在细胞内可能存在的功能。方法构建靶向EMS1的shRNA真核表达质粒(EMS1-PSilencer4.1-GFP-shRNA,EMS1-shR-NA);通过Lipofectamine 2000处理后将EMS1-shRNA转染MHCC-97H细胞,免疫荧光显微镜下观察转染效率;采用RT-qPCR和Westen blot分别检测EMS1 mRNA和cortactin蛋白表达水平;利用划痕、Transwell小室实验、转铁蛋白(transferrin,Tfn)内吞实验分别研究细胞迁移和内吞作用。结果成功构建EMS1-shRNA。免疫荧光显微镜下见转染细胞中明显的绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP),荧光强度在48 h达到峰值,其转染效率达84.76%。与未处理组相比,转染EMS1-shRNA细胞中EMS1 mRNA水平下降至19.00%,cortactin蛋白水平下降至36.74%、细胞相对迁移距离下降至55.52%、相对穿膜细胞数下降至27.79%、细胞内吞荧光标记Tfn水平显著减弱(P均<0.05)。结论下调EMS1/cortactin后,MHCC-97H细胞迁移、内吞能力明显下降,提示EMS1/cortactin与原发性肝癌(primary human heptatocellular,HCC)转移的生物学行为有关。 展开更多
关键词 MHCC-97H细胞 ems1 cortactin 核酸干扰 迁移 内吞
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沉默EMS1/cortactin基因对肝癌HepG2细胞迁移、侵袭和细胞周期的影响 被引量：2
2
作者 周家名 陈莉 +2 位作者 王桂兰 秦婧 吴圆圆 《基础医学与临床》 CSCD 2016年第12期1664-1669,共6页
目的研究原发性肝癌(HCC)Hep G2细胞中EMS1/cortactin的表达与定位,探讨其功能特性。方法 RTq PCR、免疫荧光法检测EMS1基因和cortactin(EMS1编码蛋白)表达,共聚焦显微镜观察cortactin定位,并以人正常肝细胞L02为对照。将靶向EMS1的质粒... 目的研究原发性肝癌(HCC)Hep G2细胞中EMS1/cortactin的表达与定位,探讨其功能特性。方法 RTq PCR、免疫荧光法检测EMS1基因和cortactin(EMS1编码蛋白)表达,共聚焦显微镜观察cortactin定位,并以人正常肝细胞L02为对照。将靶向EMS1的质粒EMS1-shRNA转染Hep G2,并以CCK8法、流式细胞周期检测、划痕和Transwell小室实验检测细胞增殖、周期、迁移和侵袭能力。结果 Hep G2中EMS1 mRNA水平为LO2的10.5倍;cortactin在Hep G2中高表达,并聚集于细胞膜下皮质区,L02中cortactin弥散分布在胞质中。与未处理组相比,转染EMS1-shRNA组Hep G2中EMS1 mRNA水平下降68.00%,cortactin水平下降52.80%,细胞增殖能力下降9.50%,S期比例下降37.89%,迁移能力下降45.40%,侵袭能力下降64.91%(均P<0.05)。结论 EMS1/cortactin主要与Hep G2细胞迁移和侵袭相关。 展开更多
关键词 ems1/cortactin 定位 迁移 侵袭 RNA干扰
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