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EGF-IL-18在毕赤酵母中的表达
被引量：
1
1
作者
张欢
蔡小波
+2 位作者
施晓琴
王震
吕建新
《温州医学院学报》
CAS
2010年第4期322-325,共4页
目的:在甲醇营养型毕赤酵母表达系统中分泌表达人表皮生长因子受体干扰基序和白细胞介素-18(EGF-IL-18)融合蛋白。方法:PCR扩增EGF-IL-18基因,克隆到表达载体pPIC9K,重组质粒经线性化后用电转化导入毕赤酵母GS115,筛选重组子,经摇瓶培养...
目的:在甲醇营养型毕赤酵母表达系统中分泌表达人表皮生长因子受体干扰基序和白细胞介素-18(EGF-IL-18)融合蛋白。方法:PCR扩增EGF-IL-18基因,克隆到表达载体pPIC9K,重组质粒经线性化后用电转化导入毕赤酵母GS115,筛选重组子,经摇瓶培养,用甲醇诱导表达EGF-IL-18融合蛋白。结果:序列分析表明,克隆到pPIC9K载体中的EGF-IL-18基因与设计相符,SDS-PAGE电泳分析显示表达产物EGF-IL-18以可溶性分子存在于酵母培养基中,Western印记表明表达产物EGF-IL-18具有良好的抗原性。结论:重组蛋白EGF-IL-18在毕赤酵母GS115中成功分泌表达。
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关键词
重组融合蛋白质类
egf
-
il
-
18
克隆
分子
毕赤酵母
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职称材料
重组人EGF-IL-18融合蛋白的表达纯化及复性
被引量：
4
2
作者
潘建华
彭颖
+1 位作者
郑昭暻
吕建新
《细胞生物学杂志》
CSCD
2006年第5期711-716,共6页
融合基因EGF-IL-18与表达载体pET32a(+)连接构建融合型原核表达质粒pET32a(+)-EGF-IL-18。该基因在E.coliRosetta(DE3)中获得高效表达,SDS-PAGE分析表明表达产物大部分以包涵体形式存在。以2mol/L尿素和1%TritonX-100对包涵体进行反复...
融合基因EGF-IL-18与表达载体pET32a(+)连接构建融合型原核表达质粒pET32a(+)-EGF-IL-18。该基因在E.coliRosetta(DE3)中获得高效表达,SDS-PAGE分析表明表达产物大部分以包涵体形式存在。以2mol/L尿素和1%TritonX-100对包涵体进行反复洗涤后,利用离子交换柱层析对包涵体进行柱上复性,结果表明离子交换层析柱上复性不仅能够获得可溶性的EGF-IL-18融合蛋白,而且产物同时得到纯化,纯度大于90%。复性的EGF-IL-18经分子筛进一步纯化后,体外实验证明具有促进人外周血单个核细胞(PBMC)IFN-g基因表达的能力。该方法简单、高效,为进一步开展EGF-IL-18的动物实验及其大量纯化制备打下基础。
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关键词
egf
-
il
-
18
融合蛋白
包涵体
离子交换柱层析
柱上复性
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职称材料
用于肿瘤靶向治疗的EGF-IL-18融合蛋白在昆虫细胞中的表达及活性鉴定
被引量：
2
3
作者
孟哲峰
彭颖
+1 位作者
沈波
吕建新
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第2期113-115,117,共4页
目的 :制备能用于肿瘤靶向治疗的重组表皮生长因子受体干扰序列 白细胞介素 18(EGF-IL-18)融合蛋白 ,并鉴定其生物学活性。方法 :利用Bac-to-Bac表达系统在昆虫细胞Sf9中表达融合蛋白 ,用离子交换层析、疏水层析、凝胶过滤层析等方法纯...
目的 :制备能用于肿瘤靶向治疗的重组表皮生长因子受体干扰序列 白细胞介素 18(EGF-IL-18)融合蛋白 ,并鉴定其生物学活性。方法 :利用Bac-to-Bac表达系统在昆虫细胞Sf9中表达融合蛋白 ,用离子交换层析、疏水层析、凝胶过滤层析等方法纯化表达产物 ,并以IFN-γ诱导实验和EGFR竞争结合实验初步评价融合蛋白的生物活性。结果 :经SDS-PAGE和Westernblot检测 ,Sf9细胞中表达的重组蛋白与预期的EGF-IL-18融合蛋白分子量一致 ,纯化后融合蛋白具有较高纯度和良好的免疫原性。IFN -γ诱导实验和EGFR竞争结合实验显示 ,该融合蛋白具有肿瘤导向性和抗肿瘤活性。结论 :成功表达并纯化了具有肿瘤导向性的抗肿瘤蛋白———EGF-IL-18融合蛋白 ,该蛋白具有较好的肿瘤导向性和抗肿瘤活性 。
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关键词
表皮生长因子-白细胞介素
18
融合蛋白
昆虫细胞
肿瘤靶向治疗
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职称材料
题名
EGF-IL-18在毕赤酵母中的表达
被引量：
1
1
作者
张欢
蔡小波
施晓琴
王震
吕建新
机构
温州医学院浙江省医学遗传学重点实验室
出处
《温州医学院学报》
CAS
2010年第4期322-325,共4页
基金
浙江省科技厅重大科技专项
优先主题计划资助项目(2009C13038)
浙江省教育厅2008年度大学生科技创新活动计划立项资助项目
文摘
目的:在甲醇营养型毕赤酵母表达系统中分泌表达人表皮生长因子受体干扰基序和白细胞介素-18(EGF-IL-18)融合蛋白。方法:PCR扩增EGF-IL-18基因,克隆到表达载体pPIC9K,重组质粒经线性化后用电转化导入毕赤酵母GS115,筛选重组子,经摇瓶培养,用甲醇诱导表达EGF-IL-18融合蛋白。结果:序列分析表明,克隆到pPIC9K载体中的EGF-IL-18基因与设计相符,SDS-PAGE电泳分析显示表达产物EGF-IL-18以可溶性分子存在于酵母培养基中,Western印记表明表达产物EGF-IL-18具有良好的抗原性。结论:重组蛋白EGF-IL-18在毕赤酵母GS115中成功分泌表达。
关键词
重组融合蛋白质类
egf
-
il
-
18
克隆
分子
毕赤酵母
Keywords
recombinant
fusion protein
egf
-
il
-
18
cloning molecular
pichia pastoris
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
重组人EGF-IL-18融合蛋白的表达纯化及复性
被引量：
4
2
作者
潘建华
彭颖
郑昭暻
吕建新
机构
温州医学院细胞与分子医学研究所
出处
《细胞生物学杂志》
CSCD
2006年第5期711-716,共6页
基金
浙江省自然科学基金(No.302769)
浙江省医药卫生重点科技项目(No.2001ZD007)资助~~
文摘
融合基因EGF-IL-18与表达载体pET32a(+)连接构建融合型原核表达质粒pET32a(+)-EGF-IL-18。该基因在E.coliRosetta(DE3)中获得高效表达,SDS-PAGE分析表明表达产物大部分以包涵体形式存在。以2mol/L尿素和1%TritonX-100对包涵体进行反复洗涤后,利用离子交换柱层析对包涵体进行柱上复性,结果表明离子交换层析柱上复性不仅能够获得可溶性的EGF-IL-18融合蛋白,而且产物同时得到纯化,纯度大于90%。复性的EGF-IL-18经分子筛进一步纯化后,体外实验证明具有促进人外周血单个核细胞(PBMC)IFN-g基因表达的能力。该方法简单、高效,为进一步开展EGF-IL-18的动物实验及其大量纯化制备打下基础。
关键词
egf
-
il
-
18
融合蛋白
包涵体
离子交换柱层析
柱上复性
Keywords
egf
-
il
-
18
fusion protein
inclusion body
ion-exchange chromatography
on-column refolding
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
用于肿瘤靶向治疗的EGF-IL-18融合蛋白在昆虫细胞中的表达及活性鉴定
被引量：
2
3
作者
孟哲峰
彭颖
沈波
吕建新
机构
温州医学院附属台州医院
温州医学院细胞与分子医学研究所
出处
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第2期113-115,117,共4页
基金
浙江省医药卫生重点科技项目 (2 0 0 1ZD0 0 7)
文摘
目的 :制备能用于肿瘤靶向治疗的重组表皮生长因子受体干扰序列 白细胞介素 18(EGF-IL-18)融合蛋白 ,并鉴定其生物学活性。方法 :利用Bac-to-Bac表达系统在昆虫细胞Sf9中表达融合蛋白 ,用离子交换层析、疏水层析、凝胶过滤层析等方法纯化表达产物 ,并以IFN-γ诱导实验和EGFR竞争结合实验初步评价融合蛋白的生物活性。结果 :经SDS-PAGE和Westernblot检测 ,Sf9细胞中表达的重组蛋白与预期的EGF-IL-18融合蛋白分子量一致 ,纯化后融合蛋白具有较高纯度和良好的免疫原性。IFN -γ诱导实验和EGFR竞争结合实验显示 ,该融合蛋白具有肿瘤导向性和抗肿瘤活性。结论 :成功表达并纯化了具有肿瘤导向性的抗肿瘤蛋白———EGF-IL-18融合蛋白 ,该蛋白具有较好的肿瘤导向性和抗肿瘤活性 。
关键词
表皮生长因子-白细胞介素
18
融合蛋白
昆虫细胞
肿瘤靶向治疗
Keywords
egf
-
il
-
18
fusion proteins
Insect cells
Targeting therapy
分类号
R392 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
EGF-IL-18在毕赤酵母中的表达
张欢
蔡小波
施晓琴
王震
吕建新
《温州医学院学报》
CAS
2010
1
下载PDF
职称材料
2
重组人EGF-IL-18融合蛋白的表达纯化及复性
潘建华
彭颖
郑昭暻
吕建新
《细胞生物学杂志》
CSCD
2006
4
下载PDF
职称材料
3
用于肿瘤靶向治疗的EGF-IL-18融合蛋白在昆虫细胞中的表达及活性鉴定
孟哲峰
彭颖
沈波
吕建新
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2005
2
下载PDF
职称材料
已选择
0
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