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平阳霉素对血管内皮细胞的生长抑制作用和细胞周期的影响 被引量:32
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作者 孔伟东 李彦豪 +2 位作者 曾庆乐 陈勇 何晓峰 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2003年第8期830-832,836,共4页
目的观察平阳霉素(PYM)对体外培养的人脐静脉血管内皮细胞株(ECV304)增殖和细胞周期的影响.方法采用MTT法检测不同浓度PYM(10-2~103μg/m1)作用不同时间(24、48、72 h)后对ECV304细胞的生长抑制率.利用流式细胞仪检测一定浓度PYM刺激... 目的观察平阳霉素(PYM)对体外培养的人脐静脉血管内皮细胞株(ECV304)增殖和细胞周期的影响.方法采用MTT法检测不同浓度PYM(10-2~103μg/m1)作用不同时间(24、48、72 h)后对ECV304细胞的生长抑制率.利用流式细胞仪检测一定浓度PYM刺激下细胞周期分布.结果10μg/ml浓度PYM作用24、48、72 h后的细胞生长抑制率分别为44.7%、59.7%、74.4%,药物抑制效应表现为剂量依赖性和时间依赖性.药物作用24、48、72 h的半数抑制浓度(IC50)分别为32.94、2.56、0.75μg/ml.1μg/ml浓度PYM作用ECV304细胞24 h,实验组S期细胞比例较对照组明显下降,G2-M期细胞比例明显增加(P<0.01),细胞被阻滞在G2-M期.结论PYM对ECV304细胞的增殖具有较强抑制作用,其机制与细胞周期阻滞作用有关. 展开更多
关键词 平阳霉素 ecv304细胞 细胞周期
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大豆异黄酮对大鼠血脂的影响及其体内外抗氧化作用研究 被引量:16
2
作者 逄晓云 沈金芳 贡沁燕 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2008年第1期62-67,共6页
目的:观察大豆异黄酮(SI)对高脂饮食大鼠血脂、血液及肝脏丙二醛(MDA)、超氧化物岐化酶(SOD)及肝脏脂肪病变的影响,以及其主要成分之一金雀异黄素对过氧化氢损伤的ECV304内皮细胞有无保护作用。方法:根据血清总胆固醇(TC)水平,50只雄性W... 目的:观察大豆异黄酮(SI)对高脂饮食大鼠血脂、血液及肝脏丙二醛(MDA)、超氧化物岐化酶(SOD)及肝脏脂肪病变的影响,以及其主要成分之一金雀异黄素对过氧化氢损伤的ECV304内皮细胞有无保护作用。方法:根据血清总胆固醇(TC)水平,50只雄性Wistar大鼠分为5组:正常对照、高脂饮食对照组和3个SI治疗组。3个SI治疗组分别每日灌胃给予SI30、60、120mg/kg,对照组则给予相应的溶媒,持续9周。治疗第2、4、9周末,测定血清TC、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)。治疗结束时,测定红细胞和肝匀浆SOD活力,血清和肝匀浆MDA含量,并观察肝脏病理变化。以MTT法观察与不同浓度的金雀异黄素体外孵育一定时间后的ECV304内皮细胞对抗过氧化氢氧化损伤的能力。结果:SI30、60、120mg/kg无改善血清TC、LDL、TG、HDL的作用,肝脏病理结果也与血脂结果相似。但是与高脂饮食对照组相比,大鼠红细胞及肝脏的SOD活力明显升高,而血清及肝脏MDA含量也有一定程度降低(P<0.01,P<0.05)。对于过氧化氢引起ECV304细胞损伤,金雀异黄素25、50、100μmol/L有剂量依赖性保护作用。结论:大豆异黄酮不能改善高脂饮食大鼠的血脂,不能抑制其肝脏脂肪病变。但其有一定体内外抗氧化作用。 展开更多
关键词 大豆异黄酮 金雀异黄素 血脂 丙二醛 超氧化物歧化酶 ecv304细胞 过氧化氢
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肿瘤坏死因子α和雷公藤内酯醇调节Raji细胞内VEGF的表达及基质胶中ECV304细胞血管形成作用的研究(英文) 被引量:11
3
作者 崔国惠 陈卫华 +2 位作者 薛克营 刘芳 陈燕 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2006年第5期1008-1012,共5页
为了探讨肿瘤坏死因子(TNF-α)和雷公藤内酯醇作用Raji细胞VEGF(血管内皮细胞生长因子)的表达及VEGF与ECV血管形成的关系,采用MTT法检测雷公藤内酯醇抑制Raji细胞增殖的影响;用ELISA法对Raji细胞上清的VEGF定量;用基质胶上的内皮细胞网... 为了探讨肿瘤坏死因子(TNF-α)和雷公藤内酯醇作用Raji细胞VEGF(血管内皮细胞生长因子)的表达及VEGF与ECV血管形成的关系,采用MTT法检测雷公藤内酯醇抑制Raji细胞增殖的影响;用ELISA法对Raji细胞上清的VEGF定量;用基质胶上的内皮细胞网络形成检测ECV304(人类脐静脉内皮细胞起源的细胞系)血管生成;用RT-PCR检测VEGFmRNA含量。结果表明:雷公藤内酯醇对Raji细胞增殖抑制作用呈时间和剂量依赖方式,最适合作用时间为24小时,24小时半数抑制浓度IC50为25nmol/L;Raji细胞上清VEGF的含量在TNF-α组明显高于空白对照组,雷公藤内酯醇处理组则明显低于空白对照组,两者比较有极显著差异(P<0.01);Raji细胞内VEGFmRNA主要为VEGF165和VEGF121,其含量在TNF-α处理组与空白对照组比较有增加,而雷公藤内酯醇抑制VEGFmRNA表达,并呈剂量依赖方式;Raji细胞上清、VEGF(10ng/ml)和TNF-α(10ng/ml)处理的Raji细胞上清在基质胶中作用ECV304细胞后可促进血管形成,而雷公藤内酯醇(25nmol/L)处理的Raji细胞上清和1640培养基作为的对照组加入基质胶中ECV304细胞未见血管形成。结论:在TNF-α、雷公藤内酯醇作用Raji细胞过程中,TNF-α促进VEGF的表达而雷公藤内酯醇则抑制其表达;TNF-α处理的Raji细胞上清在基质胶中促进血管形成,而雷公藤内酯醇则抑制血管形成。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子-α 雷公藤内酯醇 VEGF RAJI细胞 ecv304细胞 血管形成
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生脉成骨胶囊对血管内皮细胞增殖及分泌VEGF功能的影响 被引量:7
4
作者 樊粤光 赵长青 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第10期1228-1231,共4页
目的探讨生脉成骨胶囊兔血清对人脐静脉血管内皮细胞株(ECV304细胞)增殖及分泌血管内皮生长因子(VEGF)功能的影响。方法以MTT法测定体外培养的ECV304细胞增殖,采用ELISA法检测培养液上清中VEGF浓度,应用透射电镜技术观察药物血清作用12... 目的探讨生脉成骨胶囊兔血清对人脐静脉血管内皮细胞株(ECV304细胞)增殖及分泌血管内皮生长因子(VEGF)功能的影响。方法以MTT法测定体外培养的ECV304细胞增殖,采用ELISA法检测培养液上清中VEGF浓度,应用透射电镜技术观察药物血清作用12h后细胞显微结构。结果不同剂量生脉成骨胶囊兔血清在作用12h和36h后对ECV304细胞增殖无促进作用,中剂量和高剂量兔血清在36h表现出抑制ECV304细胞增殖的作用(P<0.01),低剂量兔血清作用1h后可显著促进ECV304细胞分泌VEGF(P<0.01)。结论生脉成骨胶囊兔血清对ECV304细胞增殖无促进作用,低剂量生脉成骨胶囊兔血清可促进ECV304细胞分泌VEGF,提示这可能是生脉成骨胶囊促进血管生成的主要作用机制之一。 展开更多
关键词 生脉成骨胶囊 血管内皮生长因子 内皮 血管 细胞增殖 ecv304细胞
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创伤弧菌溶细胞素融合蛋白重组、表达与细胞毒活性鉴定 被引量:7
5
作者 桂静 肖美英 +3 位作者 楼永良 胡蝶 严杰 朱晔晶 《细胞生物学杂志》 CSCD 2008年第1期89-94,共6页
研究重组创伤弧菌溶细胞素融合蛋白(rVvhA)诱导人脐静脉内皮细胞(human umbili-cal vein endothelial cells,human ECV304)凋亡的作用。诱导含pET-28a(+)vvhA重组质粒的BL21大肠杆菌表达创伤弧菌溶细胞素融合蛋白,应用Ni2+亲和层析方法... 研究重组创伤弧菌溶细胞素融合蛋白(rVvhA)诱导人脐静脉内皮细胞(human umbili-cal vein endothelial cells,human ECV304)凋亡的作用。诱导含pET-28a(+)vvhA重组质粒的BL21大肠杆菌表达创伤弧菌溶细胞素融合蛋白,应用Ni2+亲和层析方法对rVvhA进行纯化;利用分步稀释加透析相结合的方法进行蛋白质复性;绵羊红细胞裂解试验对复性后的rVvhA进行溶血活性初步测定;MTT法检测rVvhA对人ECV304细胞的体外毒性作用;应用Hochest33342/PI活细胞荧光双染及流式细胞术分析rVvhA对人ECV304细胞诱导凋亡的影响。结果显示,用Ni2+-NTAHisBand亲和层析柱纯化rVvhA纯度达88.6%左右;复性后的rVvhA有一定的溶血活性,其溶血活性具有时间-剂量依赖性;MTT结果显示rVvhA具有降低人ECV304细胞的存活率活性;浓度为2.0HU/mlrVvhA作用人ECV30412h后,其诱导凋亡的活性高于对照组和浓度为0.5HU/mlrVvhA处理组,具有剂量依赖性;浓度为2.0HU/mlrVvhA处理组加用40μmol/Lcaspase全酶抑制剂(Z-VAD-FMK)后凋亡率较2.0HU/mlrVvhA处理组有一定程度降低。rVvhA对人ECV304细胞具有诱导凋亡的生物学活性,推测诱导调亡途径可能与caspase家族有关。 展开更多
关键词 创伤弧菌 溶细胞素 rVvhA ecv304细胞 细胞凋亡 CASPASE
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旋覆花内酯抑制炎性因子介导的内皮细胞与单核细胞的黏附 被引量:7
6
作者 李睿 刘彬 +2 位作者 郑斌 韩梅 温进坤 《细胞生物学杂志》 CSCD 2008年第6期755-760,共6页
为了观察旋覆花内酯(1-O-acetylbritannilactone,ABL)乙酰化衍生物ABLO2对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)/干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)刺激的内皮细胞ECV304活化及其与RAW264.7单核/巨噬细胞相互作用的影响,采用Western印迹检测... 为了观察旋覆花内酯(1-O-acetylbritannilactone,ABL)乙酰化衍生物ABLO2对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)/干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)刺激的内皮细胞ECV304活化及其与RAW264.7单核/巨噬细胞相互作用的影响,采用Western印迹检测核因子-κB(nuclearfactor-κB,NF-κB)活化以及NF-κB依赖的黏附分子的表达水平,应用电泳迁移率改变分析(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)检查ABLO2预处理及LPS/IFN-γ诱导对NF-κB与DNA结合活性的影响。结果显示,ABLO2显著抑制LPS/IFN-γ诱导的NF-κB核转位和DNA结合活性,同时ABLO2降低NF-κB抑制蛋白(IκB)激酶(IκBkinases,IKK)的活性,抑制IκB的磷酸化及降解;ABLO2还通过减少血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、基质金属蛋白酶-9(metalloproteinase-9,MMP-9)、黏蛋白-c(tenascin-c)的表达,进而减弱单核细胞与内皮细胞之间的黏附作用。研究结果表明,ABLO2通过抑制IKK活性及IκB降解而抑制NF-κB活化,进而起到抑制NF-κB依赖的黏附分子表达及细胞黏附作用。 展开更多
关键词 旋覆花内酯乙酰化衍生物ABLO2 ecv304细胞 核因子-ΚB 黏附分子 细胞黏附
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VEGF反义RNA促骨髓瘤细胞凋亡及抑制内皮细胞形成血管作用的体外研究 被引量:4
7
作者 黄豪博 战榕 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2008年第2期312-316,共5页
本研究探讨血管内皮细胞生长因子(VEGF)反义RNA对人多发性骨髓瘤细胞系U266增殖、凋亡及内皮细胞ECV304体外血管形成的影响和以VEGF反义RNA进行多发性骨髓瘤(MM)基因治疗的可行性。将VEGF121反向克隆入真核表达质粒pIRES2-EGFP构建重组... 本研究探讨血管内皮细胞生长因子(VEGF)反义RNA对人多发性骨髓瘤细胞系U266增殖、凋亡及内皮细胞ECV304体外血管形成的影响和以VEGF反义RNA进行多发性骨髓瘤(MM)基因治疗的可行性。将VEGF121反向克隆入真核表达质粒pIRES2-EGFP构建重组质粒AS-VEGF,酶切、测序鉴定。用此真核表达重组质粒转染人骨髓瘤细胞系U266,G418筛选获得阳性克隆。RT-PCR、Western blot法分别检测阳性克隆中VEGF mRNA和蛋白的表达;利用MTT法、流式细胞术检测转染细胞增殖、凋亡的变化;利用基质胶中内皮细胞ECV304的网络形成检测血管形成。结果表明:获得了携带反义VEGF基因的真核表达重组质粒AS-VEGF;VEGF121反义RNA部分阻断了U266细胞中VEGF的表达,转染重组质粒的U266细胞VEGF mRNA和蛋白表达都较对照组细胞有明显减少,细胞的增殖受到抑制,凋亡增加。转染重组质粒的细胞培养上清在基质胶中作用ECV304细胞后的血管形成较对照组亦有明显减少。结论:VEGF反义RNA可以下调VEGF表达,从而抑制骨髓瘤细胞系U266增殖,增加其凋亡并抑制血管形成。 展开更多
关键词 VEGF 反义RNA 骨髓瘤细胞 U266细胞 内皮细胞 细胞凋亡 ecv304细胞 血管形成
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Artemin在软骨肉瘤中的表达及其对内皮细胞增殖和迁移的影响 被引量:6
8
作者 胡军 丰育来 周中 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期62-67,共6页
目的:探讨Artemin在软骨肉瘤中的表达水平及其对内皮细胞增殖与迁移的作用及其机制。方法:收集2015年5月至2019年4月南京中医药大学连云港附属医院手术切除的40例软骨肉瘤患者的肿瘤组织标本,分为低(Ⅰ级)、高级别(Ⅱ、Ⅲ级)软骨肉瘤各2... 目的:探讨Artemin在软骨肉瘤中的表达水平及其对内皮细胞增殖与迁移的作用及其机制。方法:收集2015年5月至2019年4月南京中医药大学连云港附属医院手术切除的40例软骨肉瘤患者的肿瘤组织标本,分为低(Ⅰ级)、高级别(Ⅱ、Ⅲ级)软骨肉瘤各20例;对照组为20例因车祸等意外伤截肢患者的正常软骨组织标本。用免疫组化法检测肿瘤组织中Artemin、血管内皮生细胞长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、Ki-67表达水平和CD31^+血管密度。用10 ng/ml的Artemin处理SW1353细胞后,用ELISA实验检测细胞培养上清中VEGF、基质细胞衍生因子-1(stromal cell derived factor-1,SDF-1)、基质金属蛋白酶2(matric metalloproteinase 2,MMP2)和MMP9的含量变化,用Transwell迁移实验和MTT细胞增殖实验分别检测Artemin处理的软骨肉瘤细胞对ECV304细胞增殖和迁移的影响。结果:低级别组软骨肉瘤组织中Artemin和Ki-67表达水平均显著高于对照组(均P<0.01),高级别组软骨肉瘤组织中Artemin表达水平和Ki-67表达率显著高于低级别组(均P<0.01)。Artemin表达与软骨肉瘤组织中VEGF水平和血管密度呈正相关(均P<0.01);Artemin促进软骨肉瘤细胞分泌VEGF,而对SDF-1、MMP2和MMP9分泌无显著的影响;Artemin通过促进软骨肉瘤细胞分泌VEGF,诱导ECV304细胞增殖和迁移(均P<0.01)。结论:Artemin在软骨肉瘤组织中高表达且与VEGF水平和血管密度呈正相关,Artemin能够增强软骨肉瘤细胞诱导血管生成功能。 展开更多
关键词 软骨肉瘤 SW1353细胞 ecv304细胞 ARTEMIN 血管内皮生长因子 血管生成 增殖 迁移
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氨甲喋呤对映体对ECV304细胞抑制作用及其机制 被引量:5
9
作者 郭立方 王荣 +4 位作者 贾正平 施有琴 谢华 张娟红 武晓玉 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期213-216,共4页
目的探讨氨甲喋呤[(±)MTX]及其对映体[(+)MTX、(-)MTX]对ECV304细胞的生长抑制作用并探讨其机制。方法采用培养的ECV304细胞,应用MTT比色法分析其活性;用光学显微镜观察细胞的形态学变化;碘化丙啶(PI)单染流式细胞术检测细胞周期... 目的探讨氨甲喋呤[(±)MTX]及其对映体[(+)MTX、(-)MTX]对ECV304细胞的生长抑制作用并探讨其机制。方法采用培养的ECV304细胞,应用MTT比色法分析其活性;用光学显微镜观察细胞的形态学变化;碘化丙啶(PI)单染流式细胞术检测细胞周期。结果在0.1~150μmol·L-1范围内,(+)MTX、(-)MTX和(±)MTX作用于ECV304细胞24、48、72h,均抑制细胞ECV304增殖,但抑制强度依次为(+)MTX>(±)MTX>(-)MTX,倒置显微镜观察不同浓度(±)MTX、(+)MTX和(-)MTX作用ECV304细胞不同时间后,出现细胞体积变小、核固缩等形态学改变。用10μmol·L-1的(+)MTX、(-)MTX和(±)MTX作用ECV304细胞48h后,PI单染流式细胞术检测ECV304细胞周期的影响,表明MTX消旋体及单一体干扰ECV304细胞DNA合成。结论(+)MTX和(-)MTX对ECV304细胞的抗增殖作用具有化学结构的立体选择性,(+)MTX的抗ECV304细胞增殖作用明显强于(-)MTX。 展开更多
关键词 氨甲喋呤 对映体药物 ecv304细胞 四甲基偶氮唑蓝比色法 流式细胞术 细胞抑制 机制
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刺激ECV304细胞增殖的新基因EOLA1的克隆和功能研究 被引量:5
10
作者 梁自文 杨宗城 +2 位作者 刘月明 陈渝 罗向东 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期518-523,共6页
目的扩增内皮细胞受内毒素刺激后上调表达的新序列标签ST55(GenBank No.BM121646)全长cDNA序列并研究其结构和生物学功能。方法应用快速扩增cDNA末端技术延伸ST55获得其全长cDNA序列,以Northern杂交检测其组织分布,通过酵母双杂交筛选... 目的扩增内皮细胞受内毒素刺激后上调表达的新序列标签ST55(GenBank No.BM121646)全长cDNA序列并研究其结构和生物学功能。方法应用快速扩增cDNA末端技术延伸ST55获得其全长cDNA序列,以Northern杂交检测其组织分布,通过酵母双杂交筛选其胞内相互作用蛋白,在ECV304细胞中稳定转染目的基因并强制表达后观察细胞生长变化。结果获得1个全长为1404碱基的cDNA序列,作为人类新mRNA被GenBank接受(AY074889),命名为内皮高表达脂多糖相关因子1(endothelial-overexpressedlipopolysaccharide-associatedfactor1,EOLA1)。生物信息学分析显示EOLA1基因含5个外显子,定位于染色体Xq27.4,编码蛋白质由158个氨基酸组成,分子量为1789。Northern印迹显示EOLA1在人各组织和癌细胞系有不同的表达;以EOLA1cDNA作为诱铒,进行酵母双杂交筛选人肝cDNA文库,鉴定了金属硫蛋白2A(metallothionein2A,MT2A)为其相互作用蛋白并采用免疫共沉淀验证了这一结果。高表达EOLA1显著促进了ECV304细胞增殖。结论EOLA1是人内皮活化相关新基因,EOLA1与MT2A的相互作用可能在炎症反应中细胞内保护方面发挥作用。 展开更多
关键词 ecv304细胞 细胞增殖 EOLA1基因 基因克隆 炎症反应
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Rho激酶在烧伤大鼠血清诱导的血管内皮细胞骨架变化中的作用 被引量:2
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作者 郑惠珍 赵克森 黄巧冰 《中华烧伤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期181-184,共4页
目的 观察烧伤血清刺激下血管内皮细胞骨架的变化及Rho信号转导通路所起的作用。 方法 常规培养人脐静脉血管内皮细胞系ECV304,随机分为空白对照组、实验对照组、烧伤组、Y -27632组、烧伤+Y -27632组、Y- 27632+烧伤组、溶血磷脂酸(... 目的 观察烧伤血清刺激下血管内皮细胞骨架的变化及Rho信号转导通路所起的作用。 方法 常规培养人脐静脉血管内皮细胞系ECV304,随机分为空白对照组、实验对照组、烧伤组、Y -27632组、烧伤+Y -27632组、Y- 27632+烧伤组、溶血磷脂酸(LPA)组和LPA+Y- 27632组,分别用正常大鼠血清、烧伤大鼠血清、30μmol/LRho激酶抑制剂Y -27632、13μmol/LRhoA激动剂LPA单独刺激或联合刺激。采用HE染色于光镜下观察各组内皮细胞形态。于荧光倒置相差显微镜下观察内皮细胞骨架变化,除Y -27632组外,各组均在刺激后6、7、8h3个时相点进行观察。用流式细胞仪检测实验对照组、烧伤组、Y -27632组、烧伤+Y- 27632组、LPA组和LPA+Y 27632组刺激6h的肌动蛋白含量。 结果 空白对照组、实验对照组细胞呈梭形或多边形,生长良好;丝状肌动蛋白主要分布在细胞周边,形成周边肌动蛋白丝带,细胞生长融合为单层后呈网状结构;球状肌动蛋白集中在细胞中央。烧伤组烧伤血清刺激6h,细胞贴壁差,丝状肌动蛋白重组,应力纤维形成,周边肌动蛋白丝带模糊;球状肌动蛋白松散,胞浆中可见散在分布的絮状球状肌动蛋白,且这些反应随着刺激时间延长而增强。烧伤+Y- 27632组或Y -27632+烧伤组细胞生长、贴壁良好,丝状肌动蛋白的分布与空白对照组。 展开更多
关键词 内皮细胞骨架 RHO激酶 血清诱导 肌动蛋白骨架重组 血管内皮细胞系 流式细胞仪检测 肌动蛋白丝 信号转导通路 烧伤血清 ecv304 内皮细胞形态 显微镜下观察 蛋白含量 对照组 大鼠血清 细胞生长 溶血磷脂酸 激酶抑制剂 LPA
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肌肽对ECV304细胞缺氧损伤的保护作用 被引量:4
12
作者 白剑 张俊 +5 位作者 迟戈 刘丽娜 樊淼 刘海东 李伟伟 杨菁 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期52-54,共3页
目的研究肌肽对缺氧所致人体内皮细胞系ECV304细胞损伤的影响。方法建立缺氧条件下ECV304细胞损伤模型,用MTT法观察肌肽对缺氧损伤的ECV304细胞活性的影响,测定细胞培养基中乳酸脱氨酶(LDH)活力,并对细胞骨架进行考马斯亮蓝R-250染色观... 目的研究肌肽对缺氧所致人体内皮细胞系ECV304细胞损伤的影响。方法建立缺氧条件下ECV304细胞损伤模型,用MTT法观察肌肽对缺氧损伤的ECV304细胞活性的影响,测定细胞培养基中乳酸脱氨酶(LDH)活力,并对细胞骨架进行考马斯亮蓝R-250染色观测其细胞结构。结果浓度为10~20 mmol/L肌肽孵育ECV304细胞6 h后,可以抑制缺氧12 h和24 h引起的ECV304细胞活性下降,同时减少LDH的释放,保持细胞骨架完整。结论肌肽对缺氧所致的ECV304细胞伤具有保护作用。 展开更多
关键词 肌肽 细胞骨架 ecv304细胞 缺氧
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PTEN抑制人脐静脉内皮细胞ECV304的增殖和VEGF的表达 被引量:4
13
作者 颜晓燕 成志勇 +5 位作者 李琳 梁丽青 魏占惠 王亚丽 司淼 高连彬 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期508-513,共6页
目的:探讨与张力蛋白同源的10号染色体缺失的磷酸酶基因(phosphatase and tensin hemology deleted on chromo-some ten gene,PTEN)对人脐静脉内皮细胞ECV304细胞增殖、凋亡,及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VE... 目的:探讨与张力蛋白同源的10号染色体缺失的磷酸酶基因(phosphatase and tensin hemology deleted on chromo-some ten gene,PTEN)对人脐静脉内皮细胞ECV304细胞增殖、凋亡,及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及其受体1(VEGF receptor 1,VEGFR1)的影响。方法:将携带有野生型PTEN及绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因的腺病毒Ad-PTEN-GFP及空载体腺病毒Ad-GFP感染ECV304细胞,MTT实验、Hoechst3342染色法及流式细胞术检测ECV304细胞的增殖和凋亡。实时荧光定量PCR法检测Ad-PTEN-GFP感染后ECV304细胞中PTEN、VEGF和VEG-FR1 mRNA表达水平,ELISA检测ECV304细胞培养上清中VEGF的水平。鸡胚尿囊膜(chick chorioallantoic membrane,CAM)血管生长实验检测PTEN对鸡胚血管生长的影响。结果:与Ad-GFP相比,Ad-PTEN-GFP感染能明显抑制ECV304细胞的增殖,诱导细胞凋亡,5 d时增殖抑制率可达(50.38±5.42)%、细胞凋亡率达(73.3±5.3)%。当感染复数为100时,Ad-PTEN-GFP组ECV304细胞的VEGF及VEGFR1 mRNA表达水平分别为未感染组的(13.40±1.32)%及(46.12±5.20)%。同时,Ad-PTEN-GFP感染能够明显抑制CAM体内血管生长[血管指数(57.6±3.37)%vs(92.2±4.37)%,P<0.05]。结论:PTEN能显著抑制人脐静脉内皮细胞ECV304的增殖、促进其凋亡,其机制可能与抑制VEGF和VEGFR1表达,抑制血管新生有关。 展开更多
关键词 PTEN基因 血管内皮细胞生长因子(VEGF) 血管内皮细胞生长因子受体1(VEGFR1) 血管新生 ecv304细胞
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抑制ECV304细胞内EOLA1基因表达后效应观察 被引量:4
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作者 梁自文 杨宗城 +2 位作者 陈建 罗小凤 王兴明 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期293-297,共5页
目的观察抑制人脐静脉内皮细胞系ECV304细胞内内皮高表达脂多糖相关因子1(endothe-lial-overexpressed lipopolysaccharide-associated factor 1,EOLA1)基因表达后细胞生长的变化。方法构建EGFP-EOLA1融合蛋白表达载体pEGFP-N2/EOLA1... 目的观察抑制人脐静脉内皮细胞系ECV304细胞内内皮高表达脂多糖相关因子1(endothe-lial-overexpressed lipopolysaccharide-associated factor 1,EOLA1)基因表达后细胞生长的变化。方法构建EGFP-EOLA1融合蛋白表达载体pEGFP-N2/EOLA1,转染ECV304细胞,G418压力筛选获得稳定表达株;设计靶点特异性的寡核苷酸,连接到经BamHⅠ和HindⅢ酶切线性化的pSlincer3.1/H1质粒上。转染重组质粒到稳定表达EGFP-EOLA1融合蛋白的ECV304细胞,检测靶基因的抑制情况,观察EOLA1表达被抑制后细胞生长的改变。结果抑制EOLA1表达后ECV304细胞生长明显减慢。结论EOLA1基因在细胞内参与了细胞生长的调控。 展开更多
关键词 内皮高表达脂多糖相关因子1基因 ecv304细胞 RNA干扰 细胞生长
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碱性成纤维细胞成长因子对ECV304细胞迁移的影响(英文) 被引量:3
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作者 梁光波 张国平 金惠铭 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期16-20,共5页
目的观察不同浓度的碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对体外培养中划痕损伤后ECV304细胞迁移的影响。方法在体外细胞划痕损伤模型中应用显微电视电脑图像处理系统定量测定不同浓度(0、5、10、15μg/L)bFGF引起的ECV304细胞迁移的变化,用光... 目的观察不同浓度的碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对体外培养中划痕损伤后ECV304细胞迁移的影响。方法在体外细胞划痕损伤模型中应用显微电视电脑图像处理系统定量测定不同浓度(0、5、10、15μg/L)bFGF引起的ECV304细胞迁移的变化,用光镜与扫描电镜观察bFGF引起的迁移细胞的形态变化。结果与不加bFGF的对照组比较,低浓度(5μg/L)时bFGF对ECV304细胞的迁移呈促进作用;高浓度时(15μg/L)呈抑制作用。迁移细胞表面有众多丝状伪足。结论bFGF对体外培养的ECV304细胞的迁移有双相调节作用,低浓度时(5μg/L)促进细胞迁移,高浓度时(15μg/L)抑制细胞迁移。迁移细胞表面伪足丰富,以丝状伪足为主。 展开更多
关键词 成纤维细胞生长因子2 ecv304细胞 细胞运动 丝状伪足
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血管内皮细胞(ECV304)表达的HLA-G1对NK细胞杀伤活性的抑制作用 被引量:3
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作者 张彩娥 韩军艳 +4 位作者 杨惠军 吴雄文 黄亚非 梁智辉 龚非力 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期676-678,共3页
目的:证实HLA-G1分子能够抑制NK细胞对同种血管内皮细胞系的杀伤作用。方法:采用脂质体介导的DNA转染技术,以构建的真核表达质粒pcDNA3-HLA-G1转染人脐静脉内皮细胞系ECV304,再用免疫荧光法检测表达的HLA-G1分子。并用MTT比色法检测HLA... 目的:证实HLA-G1分子能够抑制NK细胞对同种血管内皮细胞系的杀伤作用。方法:采用脂质体介导的DNA转染技术,以构建的真核表达质粒pcDNA3-HLA-G1转染人脐静脉内皮细胞系ECV304,再用免疫荧光法检测表达的HLA-G1分子。并用MTT比色法检测HLA-G1对NK细胞杀伤活性的影响。结果:ECV304细胞上可稳定表达HLA-G1。NK细胞对空质粒pcDNA3转染的ECV304细胞的杀伤率为(50.6±18.1)%;而对pcDNA3-HLA-G1转染的ECV304细胞的杀伤率为(29.7±11.4)%,两者差异具有显著意义(P<0.01)。结论:HLA-G1分子可明显抑制NK细胞对同种血管内皮细胞的杀伤效应。 展开更多
关键词 HLA—G1 ecv304 NK细胞 杀伤抑制
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黄癸素对ECV304细胞的增殖、迁移和小管形成的影响 被引量:3
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作者 祁蕙 林菁 《中药药理与临床》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期41-44,共4页
目的:探讨黄癸素(HB)在体外对血管生成的影响。方法:MTT法测定黄癸素对ECV304增殖的影响,划痕法检测黄癸素对ECV304细胞迁移的影响,二维培养观察黄癸素对ECV304细胞小管样结构形成的影响。结果:MTT法测得黄癸素对ECV304细胞24、48、72... 目的:探讨黄癸素(HB)在体外对血管生成的影响。方法:MTT法测定黄癸素对ECV304增殖的影响,划痕法检测黄癸素对ECV304细胞迁移的影响,二维培养观察黄癸素对ECV304细胞小管样结构形成的影响。结果:MTT法测得黄癸素对ECV304细胞24、48、72小时的IC50分别为40.61、7.15和2.40mg/L;划痕法测得黄癸素浓度为1.25、2.5、5mg/L时的迁移抑制率分别为39%、53%和79%;与阴性对照组比较,经黄癸素处理的ECV304细胞小管数目均显著减少,且管腔不完整,浓度为20、30、40mg/L时小管形成抑制率分别为26.99%、39.26%和65.64%。结论:黄癸素可直接抑制ECV304细胞的增殖、迁移和小管样结构的形成,抑制血管新生,从而可能对肿瘤血管的形成起到间接抑制作用。 展开更多
关键词 黄癸素 ecv304细胞 细胞增殖 细胞迁移 小管形成
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RNA干扰技术沉默Smad4基因表达对ECV304细胞增殖和迁移的影响 被引量:2
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作者 曹阳 黄晓园 +4 位作者 马全富 杨漾 庄亮 马丁 周剑峰 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1019-1022,共4页
目的:探讨利用RNA干扰技术下调Smad 4基因表达对人脐静脉内皮细胞增殖和迁移能力的影响,初步了解Smad 4在血管生成中的作用。方法:设计并合成靶向人Smad4基因的小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)片段siRNA1和siRNA2,脂质体介... 目的:探讨利用RNA干扰技术下调Smad 4基因表达对人脐静脉内皮细胞增殖和迁移能力的影响,初步了解Smad 4在血管生成中的作用。方法:设计并合成靶向人Smad4基因的小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)片段siRNA1和siRNA2,脂质体介导转染入人脐静脉内皮细胞株ECV304。应用实时定量RT-PCR和Western印迹法检测转染前后Smad4基因表达水平;应用细胞周期分析和羧乙基锗倍半氧化物(6-carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester,CFSE)-流式细胞仪检测ECV304细胞转染前后细胞增殖能力的变化;通过单层细胞划痕实验观察细胞转染前后迁移能力的变化。结果:从2条siRNA中成功筛选出1条siRNA,于RNA和蛋白水平可明显下调Smad4基因的表达;ECV304细胞转染Smad4的siRNA后,细胞的增殖和迁移能力明显增强。结论:利用RNA干扰技术能够筛选出高效的特异阻断Smad4基因表达的siRNA;Smad4基因表达下调能够明显促进血管内皮细胞的增殖和迁移。 展开更多
关键词 肿瘤 实验性 RNA干扰 细胞增殖 基因表达 基因 SMAD4 细胞 ecv304
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三七总皂苷促血管内皮细胞增殖的实验研究 被引量:3
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作者 王潇 尹利明 +1 位作者 钱煦岱 周郁鸿 《医学研究杂志》 2013年第4期157-160,共4页
目的探讨三七总皂苷(panax notoginseng saponins,PNS)对人脐静脉内皮细胞ECV304增殖的影响。方法用不同浓度三七总皂苷对ECV304细胞进行干预培养,采用四唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;荧光定量聚合酶链反应法(real-time quantitative polyme... 目的探讨三七总皂苷(panax notoginseng saponins,PNS)对人脐静脉内皮细胞ECV304增殖的影响。方法用不同浓度三七总皂苷对ECV304细胞进行干预培养,采用四唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;荧光定量聚合酶链反应法(real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测VEGF、KDR mRNA的表达;Western blot法检测增殖相关蛋白ERK1/2和pERK1/2蛋白的表达。结果三七总皂苷在一定浓度范围(100、200、400、800mg/L)能够促进ECV304细胞增殖(P<0.05),呈明显的剂量依赖性,48h后作用最明显,细胞增殖率分别达112.44%±5.64%、117.20%±11.05%、134.34%±0.40%、141.45%±5.49%;与对照组比较,PNS组ECV304细胞VEGF、KDR mRNA表达量,增殖相关蛋白pERK1/2的表达均明显提高(P<0.05)。结论三七总皂苷能够促进ECV304细胞增殖,其机制可能与上调VEGF、KDR和pERK1/2有关。 展开更多
关键词 ecv304细胞 三七总皂苷 增殖
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人AWP1重组腺病毒的构建及其在人血管内皮细胞中的表达和定位 被引量:2
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作者 曹永宽 莫永炎 +4 位作者 刘志峰 薛刚 王培红 姜勇 田伏洲 《中国普外基础与临床杂志》 CAS 2009年第12期987-990,共4页
目的构建人flag-AWP1(associated with protein kinase C related kinase1)基因的重组腺病毒载体作为AWP1的转基因工具,研究AWP1在人血管内皮细胞ECV304中的表达与定位。方法将flag-AWP1基因亚克隆到腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV,经酶切... 目的构建人flag-AWP1(associated with protein kinase C related kinase1)基因的重组腺病毒载体作为AWP1的转基因工具,研究AWP1在人血管内皮细胞ECV304中的表达与定位。方法将flag-AWP1基因亚克隆到腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV,经酶切鉴定正确后PmeⅠ线性化,转化至带有骨架质粒pAdEasy-1的大肠杆菌BJ5183中进行重组;经PacⅠ酶切鉴定和PCR鉴定、线性化后,用Lipofectamine转染293细胞进行包装、反复感染以获取高滴度重组病毒上清。再用获得的重组腺病毒Ad-flag-AWP1感染ECV304细胞,激光扫描共焦显微镜下观察AWP1在ECV304细胞中的表达与定位。结果包装病毒颗粒的PCR分析显示,成功获得了重组腺病毒Ad-flag-AWP1,该重组腺病毒能够高效感染ECV304细胞,并在激光扫描共焦显微镜下观察到AWP1在细胞内成功表达,且定位于细胞膜内侧。结论成功构建了flag-AWP1的重组腺病毒基因转染载体,AWP1在ECV304细胞中的表达与定位提示AWP1可能具有细胞信号转导因子的潜能,尚需进一步研究。 展开更多
关键词 AWP1 重组腺病毒 ecv304细胞 载体构建 细胞信号转导
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