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牛疱疹病毒Ⅰ型感染对牛胚气管细胞Toll样受体2表达的影响 被引量:3
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作者 周伟光 徐丽媛 +1 位作者 张志飞 呼凤丽 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期322-327,共6页
为研究牛疱疹病毒Ⅰ型(BH V-1)对体外非免疫细胞——牛胚气管细胞(EBTr)表达Toll样受体2(TL R 2)的影响,了解TLR2在BHV-1感染时介导的天然免疫反应机制,本试验将EBTr细胞分为BHV-1感染组和对照组,分别收集培养后第6、12、18、24及48小... 为研究牛疱疹病毒Ⅰ型(BH V-1)对体外非免疫细胞——牛胚气管细胞(EBTr)表达Toll样受体2(TL R 2)的影响,了解TLR2在BHV-1感染时介导的天然免疫反应机制,本试验将EBTr细胞分为BHV-1感染组和对照组,分别收集培养后第6、12、18、24及48小时的细胞总RN A和总蛋白,通过荧光定量PCR和W estern-blot技术,检测感染BHV-1后TLR2在基因和蛋白水平的动态变化。结果显示,在第6和12小时,感染组TLR2 m RNA和蛋白的相对表达量均低于对照组;在第48小时,感染组TLR2 m RNA和蛋白的相对表达量均显著高于对照组(P<0.01)。结果表明,BHV-1感染EBTr细胞会影响TLR2 m RNA和蛋白的表达,提示TLR2参与宿主细胞对BHV-1的识别,触发天然免疫,这为探索BHV-1感染的免疫机制提供了依据。 展开更多
关键词 牛疱疹病毒Ⅰ型 牛胚气管细胞 TOLL样受体2 荧光定量PCR WESTERN-BLOT
原文传递
靶向TLR2基因的siRNA对牛疱疹病毒Ⅰ型增殖规律的影响 被引量:2
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作者 周伟光 呼凤丽 +1 位作者 徐丽媛 张志飞 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1524-1530,共7页
为研究牛胚胎气管(EBTr)细胞Toll样受体2(TLR2)在牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-1)感染的天然免疫反应中的作用,本研究利用小分子干扰RNA(si RNA)技术,以TLR2为靶向设计并合成了3条si RNA干扰序列,用SYBR GreenⅠ定量PCR方法筛选出最佳的s... 为研究牛胚胎气管(EBTr)细胞Toll样受体2(TLR2)在牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-1)感染的天然免疫反应中的作用,本研究利用小分子干扰RNA(si RNA)技术,以TLR2为靶向设计并合成了3条si RNA干扰序列,用SYBR GreenⅠ定量PCR方法筛选出最佳的si RNA-TLR2干扰片段,继而转染EBTr细胞使其TLR2沉默后感染BHV-1,用Taq Man定量PCR方法检测BHV-1不同时间点的增殖变化。结果显示,与对照组相比转染后第48小时si TLR2A、si TLR2B和si TLR2C在EBTr细胞中分别对TLR2 m RNA表达量下调了35.05%、69.20%和84.85%,筛选出的si TLR2C片段在第12~72小时可以显著抑制TLR2 m RNA的表达(P〈0.05),用该片段转染EBTr细胞再感染BHV-1后第6~72小时,si RNA-TLR2组BHV-1 DNA拷贝数显著低于对照组BHV-1 DNA拷贝数(P〈0.05)。本试验成功筛选出了特异性抑制EBTr细胞TLR2基因的si RNA片段,并证明抑制TLR2的表达可降低BHV-1的增殖能力。 展开更多
关键词 牛疱疹病毒Ⅰ型 SIRNA ebtr细胞 TLR2 定量PCR
原文传递
靶向TLR9基因siRNA的筛选及其对BHV-1增殖规律的影响
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作者 呼凤丽 徐丽媛 +1 位作者 张志飞 周伟光 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第2期303-310,共8页
为研究牛胚胎气管(bovine embryonic tracheal,EBTr)细胞Toll样受体9(Toll-like receptors 9,TLR9)在牛疱疹病毒Ⅰ型(bovine herpesvirus type 1,BHV-1)感染的天然免疫反应中的作用,本试验利用小分子干扰RNA(siRNA)技术,以TLR9为靶向分... 为研究牛胚胎气管(bovine embryonic tracheal,EBTr)细胞Toll样受体9(Toll-like receptors 9,TLR9)在牛疱疹病毒Ⅰ型(bovine herpesvirus type 1,BHV-1)感染的天然免疫反应中的作用,本试验利用小分子干扰RNA(siRNA)技术,以TLR9为靶向分别设计并合成3条siRNA干扰序列,用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR技术检测应用siRNA-TLR9干扰后TLR9基因的表达变化,筛选出最佳的siRNA-TLR9干扰序列,继而转染EBTr细胞使其TLR9基因沉默后感染BHV-1,用TaqMan实时荧光定量PCR方法检测BHV-1不同时间点的增殖变化。结果显示,转染48h后,与阴性对照组相比,siRNA-TLR9A、siRNA-TLR9B和siRNA-TLR9C分别对TLR9mRNA表达量下调了60.90%、24.05%和40.75%。筛选出siRNA-TLR9A片段在12~72h可以显著抑制TLR9mRNA表达(P<0.05)。用该片段转染EBTr细胞再感染BHV-1后,6~72hsiRNA-TLR9A组BHV-1DNA拷贝数低于对照组。本试验成功筛选出了特异性的抑制EBTr细胞TLR9基因的siRNA序列,并证明抑制TLR9的表达可降低BHV-1的增殖能力。 展开更多
关键词 小分子干扰RNA 牛胚胎气管细胞 TOLL样受体9 牛疱疹病毒Ⅰ型 实时荧光定量PCR
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BHV-1在牛胚气管细胞中的增殖规律研究
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作者 徐丽媛 张志飞 +1 位作者 周伟光 呼凤丽 《动物医学进展》 北大核心 2016年第9期21-25,共5页
为研究牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-1)在牛胚气管细胞(EBTr)中的生长特性和增殖规律,参考文献设计合成特异性引物和探针,建立了TaqMan实时荧光定量PCR方法,检测BHV-1感染EBTr细胞6、12、24、48、72、96、120、144h后病毒的增殖规律,并观察对应... 为研究牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-1)在牛胚气管细胞(EBTr)中的生长特性和增殖规律,参考文献设计合成特异性引物和探针,建立了TaqMan实时荧光定量PCR方法,检测BHV-1感染EBTr细胞6、12、24、48、72、96、120、144h后病毒的增殖规律,并观察对应时间点的细胞病变(CPE)。结果显示,用100TCID_(50)的BHV-1感染EBTr细胞,48h后开始出现细胞病变,72h细胞病变明显,120h细胞大部分变圆,开始脱落,144h细胞大面积脱落、崩解。实时荧光定量PCR检测结果表明,BHV-1感染EBTr在6h^24h内,病毒缓慢增殖,48h^96h,病毒增殖速度加快,拷贝数呈对数增长,120h^144h,BHV-1的含量仍然呈现升高的趋势,但增长速度变慢。结果证明,BHV-1能够在EBTr中产生CPE,而且CPE程度与病毒DNA增殖规律一致,该结果可以为深入研究BHV-1对EBTr细胞的致病机理提供基础资料。 展开更多
关键词 牛疱疹病毒Ⅰ型 牛胚气管细胞 增殖规律 实时荧光定量PCR
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