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猪瘟病毒E2基因真核表达质粒的构建及基因疫苗的研究 被引量:50
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作者 余兴龙 涂长春 +5 位作者 李红卫 陈创夫 李作生 马正海 孙明 殷震 《中国病毒学》 CSCD 2000年第3期264-271,共8页
构建了猪瘟病毒 (classicalswinefevervirus,CSFV)主要保护性抗原E2基因 4种不同的真核表达质粒。小鼠免疫试验表明 ,E2基因上不同的功能区对基因疫苗的免疫应答有很大影响 ,有信号肽序列的E2基因可诱导产生特异性免疫反应 ,且无跨膜区... 构建了猪瘟病毒 (classicalswinefevervirus,CSFV)主要保护性抗原E2基因 4种不同的真核表达质粒。小鼠免疫试验表明 ,E2基因上不同的功能区对基因疫苗的免疫应答有很大影响 ,有信号肽序列的E2基因可诱导产生特异性免疫反应 ,且无跨膜区序列的E2基因所诱导的免疫应答反应比有跨膜区序列的强 ,而无信号肽序列的E2基因则不能诱导产生CSFV特异性的免疫反应。攻毒保护试验表明 ,免疫家兔最少可抵抗 10个最小感染剂量 (MID)的猪瘟兔化弱毒苗 (Hogcholeralap inizedvirus,HCLV)的攻击 ;免疫猪可抵抗致死剂量的CSFV石门株强毒的攻击。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 e2基因 真核表达质粒 基因疫苗
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异源猪瘟病毒C株E2基因保护性抗原编码区的序列分析与比较 被引量:13
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作者 李红卫 涂长春 +4 位作者 吕宗吉 孙明 金扩世 余兴龙 殷震 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第2期112-114,共3页
应用RT-PCR扩增了我国南京、成都、吉林3个兽医生物制品厂提供的猪瘟病毒兔化弱毒株(C株)的E2基因保护性抗原编码区,然后将其克隆到pGEM-T载体中,用Sanger′s双脱氧法对重组质粒中的插入片段进行了序列分析... 应用RT-PCR扩增了我国南京、成都、吉林3个兽医生物制品厂提供的猪瘟病毒兔化弱毒株(C株)的E2基因保护性抗原编码区,然后将其克隆到pGEM-T载体中,用Sanger′s双脱氧法对重组质粒中的插入片段进行了序列分析。将测得的这3个厂生产的C株的核苷酸序列及其推导的氨基酸序列与作者实验室测得的国内石门株和国外测得的C株相同区域进行同源性比较,发现不同来源的C株及石门株之间存在不同程度的差异,核苷酸同源性为93.6%~99.6%,氨基酸同源性为90.6%~98.9%。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 免化弱毒株 e2基因 序列分析
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猪瘟病毒E2基因的定点突变、在大肠杆菌中的高效表达及表达产物的免疫原性 被引量:14
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作者 余兴龙 涂长春 +3 位作者 徐兴然 张茂林 陈义祥 刘伯华 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期439-443,共5页
用重组PCR技术对猪瘟病毒石门株E2基因进行了定点突变 ,然后将突变后的基因克隆至表达载体质粒pET 2 8a(+ )中 ,构建成重组质粒pETE2。将pETE2转入受体菌BL2 1(DE3 )plysS中 ,在IPTG的诱导下 ,重组转化菌可高效表达目的基因 ,表达量平... 用重组PCR技术对猪瘟病毒石门株E2基因进行了定点突变 ,然后将突变后的基因克隆至表达载体质粒pET 2 8a(+ )中 ,构建成重组质粒pETE2。将pETE2转入受体菌BL2 1(DE3 )plysS中 ,在IPTG的诱导下 ,重组转化菌可高效表达目的基因 ,表达量平均可达菌体蛋白总量的 2 8%。免疫印迹和间接ELISA表明所表达的蛋白是CSFV特异性的。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 e2基因 定点突变 大肠杆菌 表达产物 免疫原性
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中国猪瘟兔化弱毒株(C-株)兔脾组织毒主要保护性抗原E2(gp55)基因序列分析 被引量:11
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作者 韩雪清 李红卫 +11 位作者 刘湘涛 李小兵 马军武 涂长春 胡弘博 殷震 蒋帅 刘伯华 赵启祖 李健强 李忠润 谢庆阁 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期52-57,共6页
利用反转录 (RT)及套式PCR(N PCR)方法扩增了中国猪瘟兔化弱毒株 (C 株 )兔脾组织毒主要保护性抗原E2 (gp55)基因 ,成功地将其克隆并测定了核苷酸序列 ,与国内外已发表的猪瘟病毒 (HCV)E2基因序列比较的结果是 :C 株兔脾毒与C 株细胞 (S... 利用反转录 (RT)及套式PCR(N PCR)方法扩增了中国猪瘟兔化弱毒株 (C 株 )兔脾组织毒主要保护性抗原E2 (gp55)基因 ,成功地将其克隆并测定了核苷酸序列 ,与国内外已发表的猪瘟病毒 (HCV)E2基因序列比较的结果是 :C 株兔脾毒与C 株细胞 (SK6)毒、C 株疫苗 (犊牛睾丸细胞 ,HCLV C)毒、HCV SM株 (石门 )毒、Brescia株 (荷兰 )毒、Alfort株 (德国 )毒的E2核苷酸序列同源性分别为 98 87%、98 34 %、94 58%、91 0 0 %、80 78% ;氨基酸同源性分别为 98 95%、97 37%、94 2 2 %、91 60 %、89 2 3%。对C 株兔脾毒与C 株细胞毒、经典强毒及国内流行野毒E2上的A、B、C三个中和性抗原区的氨基酸组成进行了比较 ,其结果为 :C 株兔脾毒与C 株细胞毒的差异很小甚至没有差异 ,而与流行野毒及经典强毒在B、C区有较大的差异。我国经典强毒石门毒与国内80年代和 90年代流行毒之间有明显的差异 ,表明我国猪瘟流行毒株发生了变化。 展开更多
关键词 猪瘟 兔化弱毒株 兔脾组织毒e2基因 序列分析
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急、慢性猪瘟病毒分离株和疫苗株E2基因的序列分析 被引量:10
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作者 刘伯华 刘湘涛 +3 位作者 韩雪清 赵启祖 李明晖 谢庆阁 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期568-575,共8页
利用反转录 (RT)及套式PCR(N -PCR)扩增并测定了 6株具有不同表症近期甘肃省猪瘟流行野毒及C -株细胞疫苗毒的主要免疫原E2基因的核苷酸序列。序列分析比较结果表明 ,6株流行野毒与C -株疫苗毒的核苷酸同源性为 82 %~ 84 % ,流行野毒... 利用反转录 (RT)及套式PCR(N -PCR)扩增并测定了 6株具有不同表症近期甘肃省猪瘟流行野毒及C -株细胞疫苗毒的主要免疫原E2基因的核苷酸序列。序列分析比较结果表明 ,6株流行野毒与C -株疫苗毒的核苷酸同源性为 82 %~ 84 % ,流行野毒之间的核苷酸同源性在 89%~99%之间 ,并且明显可分为二个组群 ,病毒株所属组群与其临床症状有一定的相关性。流行野毒与C -株毒在中和抗原决定簇上有部分氨基酸存在性质差异 ,可能影响C -株毒对流行野毒的中和滴度。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 e2基因 序列分析 分离株 疫苗株
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我国近期猪瘟分子流行病学动态 被引量:15
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作者 孙世琪 靳野 +8 位作者 郭慧琛 尚佑军 魏旭文 马军武 韩雪清 邱伯根 梁原祥 刘湘涛 谢庆阁 《动物医学进展》 CSCD 2004年第6期69-71,共3页
利用反转录聚合酶链式反应 (RT PCR)及测序技术 ,测定 2 0 0 2年分离于我国甘肃、湖南、海南、青海等省的 9株猪瘟野毒的E2基因序列 ,并与C 株疫苗毒进行同源性比较 ,绘制CSFV系统发生树。结果表明 ,近期分离于我国的 9株野毒与C 株核... 利用反转录聚合酶链式反应 (RT PCR)及测序技术 ,测定 2 0 0 2年分离于我国甘肃、湖南、海南、青海等省的 9株猪瘟野毒的E2基因序列 ,并与C 株疫苗毒进行同源性比较 ,绘制CSFV系统发生树。结果表明 ,近期分离于我国的 9株野毒与C 株核苷酸序列间的同源性在80 .7%~ 99.1 %,氨基酸同源性在 89.3%~98.9%。9株野毒分属于 2个不同的组群 ,其中 5株与我国经典的石门强毒和C 株疫苗毒同属于Subgroups1 .1 ,另 4株属于与C 株有较大差异的Subgroup2 .1。 展开更多
关键词 中国 猪瘟 分子流行病学 动态分析
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表达猪瘟病毒E2基因和gfp报道基因的伪狂犬病病毒双基因转移载体的构建 被引量:9
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作者 潘兹书 张楚瑜 +1 位作者 陈玉栋 闵平 《武汉大学学报(理学版)》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期466-470,共5页
将以PRVgG为启动子 ,SV4 0polyA为加尾信号的CSFVE2表达盒克隆于包含伪狂犬病病毒 (PRV)tk基因和gH基因片段的重组质粒pTK2 .5 ,替换掉tk基因的SalⅠ与XhoⅠ酶切位点之间的序列 ,构建了携带CSFVE2基因的转移载体pTKE2 免疫荧光检测证... 将以PRVgG为启动子 ,SV4 0polyA为加尾信号的CSFVE2表达盒克隆于包含伪狂犬病病毒 (PRV)tk基因和gH基因片段的重组质粒pTK2 .5 ,替换掉tk基因的SalⅠ与XhoⅠ酶切位点之间的序列 ,构建了携带CSFVE2基因的转移载体pTKE2 免疫荧光检测证实 ,转染BHK2 1细胞的pTKE2在感染PRV的情况下 ,能表达E2蛋白 采用特异性引物PCR方法扩增gfp表达盒 ,对酶切位点进行改造 ,将其克隆到pTKE2的SalⅠ位点 ,构建了用PRVgG启动子和HCMVIE启动子分别控制E2基因和gfp基因表达、两基因取向相反的双基因转移载体pTKE2 .GFP 将双基因转移载体pTKE2 .GFP转染BHK2 1细胞中 ,12h后在荧光显微镜下观察到呈绿色荧光的GFP表达 。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒 转移载体 绿色荧光蛋白 e2基因
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猪瘟病毒云南毒株E2基因片段序列测定及分析 被引量:9
8
作者 尹革芬 朱建波 +3 位作者 姚俊 高华峰 信爱国 张念祖 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期167-169,共3页
用RT_nPCR方法 ,选择猪瘟病毒 2 0 0 0年云南部分地方流行毒株E2基因主要保护性抗原决定簇编码区片段进行扩增和cDNA序列分析 ,并与中国标准强毒石门株进行比较。结果显示 ,云南地方毒株之间核苷酸及氨基酸序列同源性均大于90 % ;但与... 用RT_nPCR方法 ,选择猪瘟病毒 2 0 0 0年云南部分地方流行毒株E2基因主要保护性抗原决定簇编码区片段进行扩增和cDNA序列分析 ,并与中国标准强毒石门株进行比较。结果显示 ,云南地方毒株之间核苷酸及氨基酸序列同源性均大于90 % ;但与中国标准强毒石门株差异较大 ,其核苷酸及氨基酸同源性均小于 80 %。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 e2基因 序列分析
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表达猪瘟病毒E2蛋白的重组腺病毒的构建及其在兔体内的免疫原性分析 被引量:13
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作者 孙元 祁巧芬 +7 位作者 梁冰冰 成丹 李娜 于墨洋 王宇飞 刘霓虹 朱庆虎 仇华吉 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1734-1739,共6页
为了构建猪瘟重组腺病毒载体疫苗,通过细菌内同源重组法构建了含有猪瘟病毒E2基因的重组腺病毒rAdV-E2。测定其一步生长曲线,同时用间接免疫荧光试验和Western blotting检测外源基因表达,然后用rAdV-E2免疫家兔,免疫后6周用猪瘟兔化弱... 为了构建猪瘟重组腺病毒载体疫苗,通过细菌内同源重组法构建了含有猪瘟病毒E2基因的重组腺病毒rAdV-E2。测定其一步生长曲线,同时用间接免疫荧光试验和Western blotting检测外源基因表达,然后用rAdV-E2免疫家兔,免疫后6周用猪瘟兔化弱毒疫苗株(C株)进行攻击,攻毒后3 d取其脾脏,用实时荧光定量RT-PCR检测C株病毒RNA。结果表明,该重组腺病毒传至第10代时,毒价可达1.0×1010 TCID50/mL;外源基因可在其中得到稳定表达;rAdV-E2接种兔免疫后2周产生猪瘟特异性抗体,免疫后5 w抗体达到峰值,攻毒后rAdV-E2接种兔和C株接种兔均未出现定型热反应,从其脾脏也未检测到C株病毒RNA,而野生型腺病毒接种兔均出现了定型热反应,并且从其脾脏检测大量C株病毒RNA,其含量达到了103拷贝/μL以上。由此表明,rAdV-E2可望开发为猪瘟候选疫苗。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 e2基因 重组腺病毒 免疫原性 家兔
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系统发生分析发现牛病毒性腹泻病病毒新基因亚型 被引量:10
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作者 徐兴然 肖昌 +3 位作者 梁龙 余兴龙 张青婵 涂长春 《中国病毒学》 CSCD 2005年第6期626-631,共6页
本研究对我国首次分离获得的牛源牛病毒性腹泻病毒(BVDV)毒株Changchun 184(CC-184)和猪源牛病毒 性腹泻病毒ZM-95进行了遗传衍化关系研究。选择主要抗原E2基因为研究对象,首先应用RT-PCR及套式PCR 克隆得到CC-184和ZM-95的E2片段,通过... 本研究对我国首次分离获得的牛源牛病毒性腹泻病毒(BVDV)毒株Changchun 184(CC-184)和猪源牛病毒 性腹泻病毒ZM-95进行了遗传衍化关系研究。选择主要抗原E2基因为研究对象,首先应用RT-PCR及套式PCR 克隆得到CC-184和ZM-95的E2片段,通过序列测定发现CC-184和ZM-95 E2基因长度分别为1,122bp和1, 125bp,各自编码374和375个氨基酸残基。核酸序列同源性比较和系统发生分析表明2株病毒均属于BVDV-1, CC-184与Osloss亲缘关系最近,都属于已有的b基因亚型,其E2基因同源性达91.8%。而ZM-95的E2基因有 一个特征性的变异区,包含一个密码子序列插入,这一变异区编码了一段有别于其他瘟病毒的五肽氨基酸序列 HYKKK。结果还表明ZM-95与BVDV-1现有的5个基因亚型的亲缘关系均较远,E2基因同源性最高(与Oregon c24v)只有72.4%。而BVDV-1亚型内毒株间的同源性大于85%,亚型间的同源性在69%~75%之间,充分说明 ZM-95是BVDV-1中一个新发现的基因亚型。通常认为猪源BVDV来源于牛,应该与牛源BVDV有十分近的遗 传关系,但是本研究发现ZM-95与其他已知牛源BVDV较低的基因同源性说明猪源BVDV还具有独立的遗传衍 化与传播来源的可能性。 展开更多
关键词 猪源 BVDV e2 基因 系统发生 新基因亚型
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猪瘟病毒E2基因在Pichia pastoris中的表达及其免疫活性的初步研究 被引量:9
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作者 韩雪清 刘湘涛 +2 位作者 张涌 谢庆阁 田波 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期208-211,共4页
将猪瘟病毒的E2基因克隆入酵母分泌型表达载体pPIC9K中 ,酶切线性化后电穿孔导入Pichiapastoris进行整合 ,经G418筛选得到高拷贝转化子 ,甲醇诱导表达。SDS PAGE和Westernblot结果证实了酵母培养上清液中含有E2蛋白。免疫活性研究证明P .
关键词 猪瘟病毒 e2基因 毕赤酵母 表达 免疫活性
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猪瘟病毒保护性抗原E2基因的克隆及在原核细胞中的表达 被引量:7
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作者 李红卫 涂长春 +5 位作者 余兴龙 金扩世 吕宗吉 李茂祥 章金钢 殷震 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期146-152,共7页
应用RTPCR分两段扩增猪瘟病毒(HCV)石门株E2基因,然后对其进行了克隆。利用两个片段重叠部分的单一BglⅡ位点,将它们连接成为完整的E2基因,并克隆到pUC19质粒中,获得重组质粒pHCE2。另设计一对引物,... 应用RTPCR分两段扩增猪瘟病毒(HCV)石门株E2基因,然后对其进行了克隆。利用两个片段重叠部分的单一BglⅡ位点,将它们连接成为完整的E2基因,并克隆到pUC19质粒中,获得重组质粒pHCE2。另设计一对引物,以pHCE2为模板扩增出不含信号肽的E2基因,然后将其克隆到表达载体质粒pBV220和pET28a(+)中,获得重组质粒pBVE2和pETE2,用酶切、PCR和序列分析鉴定E2基因插入位置、方向和读码框架的正确性。经Westernblot和直接ELISA检测表明重组质粒pBVE2和pETE2转化、诱导的受体菌均能表达E2抗原。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 e2基因 克隆 表达 原核细胞 猪瘟 诊断
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性类固醇激素E_2、MT对尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)雌、雄生长差异的影响 被引量:11
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作者 马细兰 张勇 +1 位作者 陈勇智 周立斌 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期1487-1493,共7页
性类固醇激素对动物生长有一定的影响,但其对鱼类雌、雄生长差异的影响机理尚不清楚。为进一步了解动物雌雄生长差异的内在原因,本文通过在体注射和荧光定量PCR方法,比较了性类固醇激素(E_2、MT)对尼罗罗非鱼雌鱼和雄鱼的生长及对垂体G... 性类固醇激素对动物生长有一定的影响,但其对鱼类雌、雄生长差异的影响机理尚不清楚。为进一步了解动物雌雄生长差异的内在原因,本文通过在体注射和荧光定量PCR方法,比较了性类固醇激素(E_2、MT)对尼罗罗非鱼雌鱼和雄鱼的生长及对垂体GH、肝脏GHR1、IGF-I m RNA表达的影响。结果表明:性类固醇激素E2和MT对尼罗罗非鱼的生长及生长轴相关基因的表达均有显著的影响,并且这种影响存在明显的性别二态性。E_2明显促进雌鱼的生长但不显著影响雄鱼的生长,MT显著促进雄鱼和雌鱼的生长;E2可使雌鱼垂体GH和肝脏GHR1、IGF-I的m RNA水平显著升高(P<0.05),但降低雄鱼垂体GH和肝脏GHR1的m RNA表达;MT显著提高雄鱼垂体GH和肝脏GHR1、IGF-I m RNA水平(P<0.05),但降低雌鱼垂体GH的m RNA表达,促进雌鱼肝脏GHR1 m RNA的表达,但对雄鱼肝脏GHR1的促进作用明显大于雌鱼(P<0.05)。上述结果表明,性类固醇激素对不同性别尼罗罗非鱼的生长及生长轴相关基因的m RNA表达有不同的影响,表现出明显的性别二态性,提示不同性别鱼体内性类固醇激素水平的不同可能是导致尼罗罗非鱼雌雄生长二态性的另一内在原因。 展开更多
关键词 尼罗罗非鱼 e2 MT 雌雄生长差异 基因表达
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广西流行的猪瘟病毒株E2基因序列测定及分析 被引量:8
14
作者 廖素环 罗廷荣 +6 位作者 吴显实 刘芳 陆芹章 黄伟坚 温荣辉 秦爱珍 余克伦 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2005年第3期196-199,共4页
目的对广西流行的猪瘟病毒E2基因进行序列测定及分析。方法应用PCR对15株猪瘟病毒E2基因进行扩增、克隆及测序,利用DNAstar分析软件对所测定的15株毒株与兔化弱毒(HCLV)、石门(Shimen)毒株的相应基因片段进行同源性分析。结果得到长度为... 目的对广西流行的猪瘟病毒E2基因进行序列测定及分析。方法应用PCR对15株猪瘟病毒E2基因进行扩增、克隆及测序,利用DNAstar分析软件对所测定的15株毒株与兔化弱毒(HCLV)、石门(Shimen)毒株的相应基因片段进行同源性分析。结果得到长度为1092nt猪瘟病毒E2基因,编码364个氨基酸残基的目的基因片段。广西株与HCLV、Shimen株的核苷酸同源性分别为81.5%~82.8%和82.8%~84.3%,推导的氨基酸同源性分别为87.1%~88.8%和88.5%~89.9%,广西毒株之间核苷酸与推导的氨基酸同源性分别为92.3%~99.9%和94.8%~100%。广西15株猪瘟病毒E2蛋白上的全部半胱氨酸(Cys)位点均未改变,推测其E2蛋白的抗原结构保持很高的稳定性。但广西毒株中与特定单克隆抗体结合的724、725、729、734和738位的氨基酸发生了变异,这些变异可能导致不完全免疫保护。把所测定的广西15株与国内外已发表的19株病毒相应序列进行比较,建立系统发育树,所比较的34株猪瘟病毒被分为两个群,广西毒株皆属于基因群Ⅱ。结论成功进行了广西流行猪瘟病毒E2基因序列分析,为进一步探讨猪瘟病毒E2蛋白的抗原结构提供了依据。 展开更多
关键词 基因序列测定 流行 病毒株 氨基酸同源性 猪瘟病毒 e2基因 核苷酸同源性 e2蛋白 基因序列分析 基因片段 抗原结构 同源性分析 氨基酸残基 单克隆抗体 系统发育树 方法应用 兔化弱毒 分析软件 HCLV 半胱氨酸 免疫保护 PCR
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共表达猪瘟病毒E2基因和猪白细胞介素2基因的重组腺病毒的构建及其免疫原性研究 被引量:10
15
作者 何雷 张彦明 +7 位作者 徐彦召 唐青海 王静 杨小云 代晨 向华 常鹏祥 林鸷 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期385-391,共7页
为研制猪瘟活载体疫苗,构建共表达猪瘟病毒E2基因和猪白细胞介素2基因的重组腺病毒并研究其免疫原性。应用PCR方法从pMD19-T-E2质粒和pMD19-T-pIL2质粒中分别扩增E2基因和pIL-2基因,将扩增的全长E2基因和pIL-2的编码区基因序列通过柔性... 为研制猪瘟活载体疫苗,构建共表达猪瘟病毒E2基因和猪白细胞介素2基因的重组腺病毒并研究其免疫原性。应用PCR方法从pMD19-T-E2质粒和pMD19-T-pIL2质粒中分别扩增E2基因和pIL-2基因,将扩增的全长E2基因和pIL-2的编码区基因序列通过柔性接头序列(5个甘氨酸密码子)串联,插入腺病毒穿梭载体AdTrack中,在受体菌中与骨架载体AdEasy同源重组。重组质粒AdEasy-E2-pIL-2转染HEK293细胞,包装出重组腺病毒rAd-E2-pIL-2。用rAd-E2-pIL-2免疫家兔,经兔体交互免疫试验评定其免疫效果。结果显示,经RT-PCR和West-ern blot检测,成功构建了rAd-E2-pIL-2,重组病毒滴度达108.12PFU/mL。rAd-E2-pIL-2接种家兔后刺激接种兔产生猪瘟病毒特异性抗体,淋巴细胞转化试验结果显示猪瘟病毒诱导兔淋巴细胞特异性增殖,攻毒后rAd-E2-pIL-2接种兔和猪瘟病毒C株接种兔均未出现定型热反应。研究结果表明,rAd-E2-pIL-2免疫兔可以预防猪瘟病毒C株接种引发的体温反应,rAd-E2-pIL-2可望成为猪瘟候选疫苗。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 e2基因 猪白细胞介素2 重组腺病毒 细胞因子佐剂
原文传递
2014-2015年河南省猪瘟野毒E2、E0基因变异分析 被引量:9
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作者 李栋梁 王新港 +7 位作者 郭天准 常洪涛 崔丹丹 赵军 杨霞 李永涛 陈陆 王川庆 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期1212-1219,共8页
为了解河南省猪瘟病毒近2年的分子特征及变异情况,本试验使RT-PCR方法从猪瘟病料中获得了5株猪瘟病毒的E2基因全序列和其中10株E0基因全序列,并对猪瘟病毒阳性样品的E2和E0基因进行测序及变异分析。结果显示:扩增的河南省5株猪瘟病毒的E... 为了解河南省猪瘟病毒近2年的分子特征及变异情况,本试验使RT-PCR方法从猪瘟病料中获得了5株猪瘟病毒的E2基因全序列和其中10株E0基因全序列,并对猪瘟病毒阳性样品的E2和E0基因进行测序及变异分析。结果显示:扩增的河南省5株猪瘟病毒的E2基因,其中4株猪瘟病毒E2基因与石门株E2基因相比存在14个氨基酸的变化,1株和石门株E2基因存在4个氨基酸变化。与Shimen株相比,河南省猪瘟病毒的E2基因有1个糖基化位点的突变。扩增的10株猪瘟病毒的E0基因,发现河南省的猪瘟病毒之间E0基因同源性高,且其E0基因从密码子程度上一直在向远离经典毒株Shimen株和疫苗株HCLV的方向发展。对E2基因和E0基因进行进化分析发现河南省猪瘟病毒承受净化选择压力。以E2基因为基础进行分型,发现河南省共同存在猪瘟病毒1.1型和2.1b型;提示河南省猪瘟病毒变异种类更加多样化。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 e2基因 e0基因 变异分析
原文传递
广西猪瘟流行毒与C-株疫苗毒gp55(E_2)主要抗原区DNA序列差异的比较 被引量:8
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作者 张永国 刘湘涛 +2 位作者 韩雪清 张彦明 薛青红 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2002年第1期79-84,共6页
采用反转录 PCR(RT- PCR)和套式 PCR(nest Polym erase Chain Reaction,n PCR)扩增出 3株广西省近期 (1999~ 2 0 0 0年 )猪瘟流行野毒的 E2 基因 ,将其分别克隆于 PMD- 18T载体上并进行了核苷酸序列测定 ,根据 C株及 Brescia和 Alfort... 采用反转录 PCR(RT- PCR)和套式 PCR(nest Polym erase Chain Reaction,n PCR)扩增出 3株广西省近期 (1999~ 2 0 0 0年 )猪瘟流行野毒的 E2 基因 ,将其分别克隆于 PMD- 18T载体上并进行了核苷酸序列测定 ,根据 C株及 Brescia和 Alfort株确定起始氨基酸三联体的正确位置后进行氨基酸序列推导 ,同时进行了同源性比较及 E2 糖蛋白结构的分析。结果表明 ,所测 3株 HCV E2 基因的长度均为 1170 bp,编码的氨基酸序列均包括完整信号肽序列和部分跨膜序列 ,共由 384个氨基酸组成。3株流行毒的 E2 基因核苷酸序列同源性为 90 .10 %~ 98.5 4%,相应的氨基酸序列同源性为 89.5 9%~ 97.92 %。这 3株流行毒与 C-株兔脾组织毒 (疫苗种毒 ) E2 基因的核苷酸序列同源性为 82 .87%~ 83.99%,相应的氨基酸序列同源性为 86 .98%~ 90 .10 %,表明近期猪瘟流行毒与 C-株疫苗毒的 gp5 5蛋白之间存在一定的差异。 展开更多
关键词 猪瘟 e2基因 糖蛋白 流行毒 疫苗毒 抗原 DNA序列分析 比较研究 广西
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牛病毒性腹泻病病毒Changchun184株E2基因的克隆及在大肠杆中的高效表达 被引量:9
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作者 徐兴然 涂长春 +5 位作者 余兴龙 肖昌 张青婵 张丽颖 查云峰 史子学 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期98-101,共4页
根据GenBank已发表的多个BVDV_1序列的比较分析结果设计引物 ,应用RT_PCR及套式PCR克隆得到包含Changchun184 (CC_184 )株E2基因的片段F2 /R2 ,克隆、测序分析结果表明该片段大小为 1391bp ,软件分析结果表明CC_184株E2基因长度为 112 2... 根据GenBank已发表的多个BVDV_1序列的比较分析结果设计引物 ,应用RT_PCR及套式PCR克隆得到包含Changchun184 (CC_184 )株E2基因的片段F2 /R2 ,克隆、测序分析结果表明该片段大小为 1391bp ,软件分析结果表明CC_184株E2基因长度为 112 2bp(GenBankaccessionnumber:AF5 2 6 380 )。通过基因操作构建得到表达完整E2蛋白和去除E2蛋白C_端疏水区的重组质粒 pET2 8a_BE2和 pET2 8a_BE2m ,转化大肠杆菌并诱导目的蛋白表达 ,SDS_PAGE检测结果表明重组菌能表达目的蛋白 ,其表达量分别占菌体总蛋白的 6 2 5 %和 35 7%。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病病毒 e2基因 克隆 表达
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福建地区猪瘟病毒流行株基因分型及E2基因遗传变异分析 被引量:10
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作者 魏春华 刘建奎 +3 位作者 戴爱玲 曾宇坤 李晓华 杨小燕 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期2009-2013,共5页
为了解福建地区2013—2014年猪瘟病毒(CSFV)流行毒株的分子生物学特性与变异规律,采集了福建地区多个猪场的40份疑似猪瘟样品,应用RT-PCR技术对E2基因的主要抗原编码区进行扩增及序列分析,其中31份为猪瘟阳性。序列分析结果表明,31株CSF... 为了解福建地区2013—2014年猪瘟病毒(CSFV)流行毒株的分子生物学特性与变异规律,采集了福建地区多个猪场的40份疑似猪瘟样品,应用RT-PCR技术对E2基因的主要抗原编码区进行扩增及序列分析,其中31份为猪瘟阳性。序列分析结果表明,31株CSFV流行毒株之间核苷酸与氨基酸的同源性分别为78.5%~100.0%和82.2%~100.0%,与国内外分离株的核苷酸同源性为81.1%~98.9%,氨基酸同源性为79.8%~95.6%;遗传进化树分析表明,31株CSFV属于1.1和2.1亚群,其中23株为1.1亚型,8株为2.1b和2.1c亚群,没有发现2.2和2.3亚群毒株。氨基酸序列分析表明,流行株在免疫逃逸相关位点705,713,729和734位氨基酸发生变异,FJ02毒株B细胞表位关键位点771位氨基酸发生变异,表明福建地区CSFV流行毒株呈现遗传变异多样性。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 e2基因 RT-PCR 遗传变异
原文传递
猪瘟兔化弱毒株E2基因的原核表达及间接ELISA的初步建立 被引量:8
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作者 范学政 王琴 +2 位作者 陈振海 宁宜宝 王在时 《中国病毒学》 CSCD 2005年第3期253-256,共4页
猪瘟病毒E2蛋白C端含有一段30多个疏水性氨基酸组成的跨膜区域(Transmembraneregion,TMR),用RTPCR和巢式PCR分别扩增了含不同长度TMR的猪瘟兔化弱毒E2基因,并克隆入pGEX4T1的MCS中,构建了原核表达载体pGEXTE2339(无TMR)、pGEXTE2355(1T... 猪瘟病毒E2蛋白C端含有一段30多个疏水性氨基酸组成的跨膜区域(Transmembraneregion,TMR),用RTPCR和巢式PCR分别扩增了含不同长度TMR的猪瘟兔化弱毒E2基因,并克隆入pGEX4T1的MCS中,构建了原核表达载体pGEXTE2339(无TMR)、pGEXTE2355(1TMR)、pGEXTE2375(3TMR)。因E2基因含有大量大肠杆菌稀有密码子,选择了BL21CodonPlus(DE3)RP作为表达受体菌,结果表明pGEXTE2339、pGEXTE2355以包涵体的形式正确表达了目的蛋白,而pGEXTE2375没有明显表达。并利用pGEXTE2339、pGEXTE2355表达的融合蛋白初步建立了间接ELISA方法。 展开更多
关键词 猪瘟免化弱毒 e2基因 原核表达 间接eLISA
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