逆转录病毒载体介导的猪瘟病毒E2基因的真核表达 被引量：8

1

作者 刘建玲 张彦明 +1 位作者 苏正元 许信刚 《中国病毒学》 CSCD 2006年第3期249-252,共4页

利用DNA重组技术将猪瘟病毒(Classicalswinefevervirus,CSFV)石门株囊膜蛋白E2基因插入逆转录病毒载体pBABE-puro中构建成重组逆转录病毒载体pBABE-puro-E2,该重组逆转录病毒载体与pVSVg质粒经磷酸钙共转染法将其转入293GP细胞中包装逆... 利用DNA重组技术将猪瘟病毒(Classicalswinefevervirus,CSFV)石门株囊膜蛋白E2基因插入逆转录病毒载体pBABE-puro中构建成重组逆转录病毒载体pBABE-puro-E2,该重组逆转录病毒载体与pVSVg质粒经磷酸钙共转染法将其转入293GP细胞中包装逆转录病毒假病毒。用包装的假病毒感染PK-15细胞,经嘌呤霉素筛选阳性细胞后进行流式细胞技术(FACS)分析,结果表明CSFVE2基因在PK-15细胞膜上成功表达。将表达E2蛋白的PK-15细胞腹腔免疫Balb/c小鼠,成功诱导小鼠产生了抗E2蛋白的抗体。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 e2囊膜蛋白 逆转录病毒载体 FACS

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猪瘟病毒E2基因在真核细胞中表达及抗E2蛋白单克隆抗体的制备 被引量：7

2

作者 许信刚 胡建和 +2 位作者 张彦明 张海棠 陈永耀 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期1318-1322,共5页

利用DNA重组技术将猪瘟病毒(CSFV)石门株囊膜蛋白E2基因插入逆转录病毒载体pBABE-puro中构建重组逆转录病毒载体pBABE-puro-E2,该重组逆转录病毒载体与pVSVg质粒经磷酸钙共转染法转入293T细胞中包装逆转录病毒假病毒。用包装的假病毒感... 利用DNA重组技术将猪瘟病毒(CSFV)石门株囊膜蛋白E2基因插入逆转录病毒载体pBABE-puro中构建重组逆转录病毒载体pBABE-puro-E2,该重组逆转录病毒载体与pVSVg质粒经磷酸钙共转染法转入293T细胞中包装逆转录病毒假病毒。用包装的假病毒感染SP2/0细胞,经嘌呤霉素筛选阳性细胞后进行流式细胞术(FACS)分析,结果表明CSFV E2基因在SP2/0细胞膜上成功表达。将表达E2蛋白的SP2/0细胞腹腔免疫BALB/c小鼠,成功诱导小鼠产生了抗E2蛋白的抗体。取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经克隆和筛选获得了4株稳定分泌抗猪瘟病毒E2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,所分泌的单抗可与CSFV产生特异性反应并具有中和活性。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 e2囊膜蛋白 逆转录病毒载体 假病毒 FACS 单克隆抗体

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猪瘟病毒DNA疫苗的构建及动物免疫试验 被引量：3

3

作者 许信刚 胡建和 张彦明 《中国农学通报》 CSCD 2005年第3期9-11,29,共4页

利用DNA重组技术将猪瘟病毒(CSFV)C株E2囊膜蛋白全长基因克隆到真核表达载体pcDNA4.0的CMV启动子下游,采用磷酸钙转染法将重组质粒转入293T细胞,流式细胞仪(FACS)检测293T细胞瞬时表达了E2囊膜蛋白。将构建的重组质粒肌肉注射BALB/c小鼠... 利用DNA重组技术将猪瘟病毒(CSFV)C株E2囊膜蛋白全长基因克隆到真核表达载体pcDNA4.0的CMV启动子下游,采用磷酸钙转染法将重组质粒转入293T细胞,流式细胞仪(FACS)检测293T细胞瞬时表达了E2囊膜蛋白。将构建的重组质粒肌肉注射BALB/c小鼠,用流式细胞仪和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测证明成功诱导小鼠产生了抗E2蛋白的抗体,为下一步利用DNA疫苗免疫小鼠研制抗猪瘟病毒单克隆抗体打下基础。 展开更多

关键词 DNA疫苗 T细胞 流式细胞仪 重组质粒 抗e 酶联免疫吸附试验(eLISA) 肌肉注射 猪瘟病毒 动物免疫 囊膜蛋白

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逆转录病毒载体介导的猪瘟病毒E2基因在真核细胞中表达及动物免疫试验初报 被引量：3

4

作者 许信刚 胡建和 张彦明 《中国农学通报》 CSCD 2005年第5期20-23,共4页

利用DNA重组技术将猪瘟病毒(CSFV)石门株囊膜蛋白E2基因插入逆转录病毒载体pBABE-puro中构建成重组逆转录病毒载体pBABE-puro-E2,该重组逆转录病毒表达载体与pVSVg质粒经磷酸钙共转染法将其转入293GP细胞中包装逆转录病毒假病毒。用包... 利用DNA重组技术将猪瘟病毒(CSFV)石门株囊膜蛋白E2基因插入逆转录病毒载体pBABE-puro中构建成重组逆转录病毒载体pBABE-puro-E2,该重组逆转录病毒表达载体与pVSVg质粒经磷酸钙共转染法将其转入293GP细胞中包装逆转录病毒假病毒。用包装的假病毒感染SP2/0细胞,经嘌呤霉素筛选阳性细胞后进行流式细胞技术(FACS)分析,结果表明CSFVE2基因在SP2/0细胞膜上成功表达。将表达E2蛋白的SP2/0细胞腹腔免疫BALB/c小鼠,用流式细胞仪检测证明,成功诱导小鼠产生了抗E2蛋白的抗体。为下一步利用细胞免疫小鼠研制抗猪瘟病毒单克隆抗体打下基础。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 e2基因 表达 试验初报 动物免疫 真核细胞 载体介导 重组逆转录病毒载体 BALB/c小鼠 DNA重组技术 流式细胞技术 e2蛋白 流式细胞仪 单克隆抗体 SP2 基因插入 囊膜蛋白 病毒感染 阳性细胞 CSFV 免疫小鼠 石门株

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丙型肝炎患者血清中的交叉中和抗体 被引量：1

5

作者 严石 童一民 +4 位作者 华显 魏萍 尹迪 赵平 戚中田 《中华实验和临床感染病杂志（电子版）》 CAS 2008年第3期131-137,共7页

目的分析HCV感染者血清中是否存在交叉反应性中和抗体。方法以分泌表达HCV包膜E2蛋白真核表达质粒转染的293T细胞培养上清液中的HCV E2蛋白作为检测抗原,建立检测HCV E2抗体的ELISA方法,检测48份HCV抗体阳性的慢性丙型肝炎患者血清,然... 目的分析HCV感染者血清中是否存在交叉反应性中和抗体。方法以分泌表达HCV包膜E2蛋白真核表达质粒转染的293T细胞培养上清液中的HCV E2蛋白作为检测抗原,建立检测HCV E2抗体的ELISA方法,检测48份HCV抗体阳性的慢性丙型肝炎患者血清,然后用免疫荧光分析血清与HCV全长包膜蛋白表达质粒转染的293T细胞的结合反应,再用5株HCV假病毒为模型分析阴性血清的病毒中和活性。结果48份抗-HCV阳性血清中,E2抗体阳性血清达36份,阳性率75%。免疫荧光分析的结果与ELISA检测一致。HCV E2抗体阳性血清对5株HCV假病毒的感染性均有不同程度的中和作用,中和活性与E2抗体水平相一致。结论丙型肝炎患者血清中存在交叉中和抗体,提示开发能诱导广泛交叉中和抗体的丙型肝炎疫苗或许具有可行性。 展开更多

关键词 丙型肝炎 中和抗体 e2蛋白

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丙型肝炎病毒包膜E2蛋白DNA疫苗诱导小鼠产生中和抗体研究 被引量：1

6

作者 尹迪 严石 +7 位作者 丁惠 华显 童一民 王永智 刘媛 徐凤花 赵平 戚中田 《中华实验和临床感染病杂志（电子版）》 CAS 2008年第1期24-32,共9页

目的探讨HCV包膜E2蛋白DNA疫苗诱导小鼠产生中和抗体的可行性。方法分别构建HCV E2蛋白全长表达质粒pcDNA3.1-1a746、截除疏水性羧基末端的表达质粒pcDNA3.1-1a661以及同时截除疏水性羧基末端和高变区1(HVR1)的表达质粒pcDNA3.1-1a661Δ... 目的探讨HCV包膜E2蛋白DNA疫苗诱导小鼠产生中和抗体的可行性。方法分别构建HCV E2蛋白全长表达质粒pcDNA3.1-1a746、截除疏水性羧基末端的表达质粒pcDNA3.1-1a661以及同时截除疏水性羧基末端和高变区1(HVR1)的表达质粒pcDNA3.1-1a661Δ,转染293T细胞,以Western blot和ELISA法检测细胞内和培养上清中的HCV E2蛋白,将3种表达质粒以及空载体分别肌注免疫BALB/c小鼠,检测小鼠血清的E2及HVR1抗体,以HCV假病毒模型分析小鼠血清的中和活性。结果3种E2表达质粒均能有效表达HCV E2蛋白,其中pcDNA3.1-1a746质粒的表达产物不能分泌,而pcDNA3.1-1a661和pcDNA3.1-1a661Δ均能分泌表达E2蛋白。分泌表达E2蛋白可显著增强小鼠的抗体应答,pcDNA3.1-1a661免疫血清对HCV假病毒颗粒(HCVpp)的中和活性明显高于pcDNA3.1-1a661Δ免疫血清。pcDNA3.1-1a661免疫血清中的HVR1抗体量仅占总E2抗体的一小部分,却是中和抗体的重要成分。结论表达E2蛋白的DNA疫苗能有效诱导HCV中和抗体的产生,HVR1不仅是重要的中和抗体表位,而且能增强E2蛋白其他抗原表位的抗体应答。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 包膜e2蛋白 DNA疫苗 高变区1 中和抗体

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丙型肝炎病毒E2蛋白DNA疫苗诱导小鼠产生中和抗体的研究

7

作者 邵圣文 周洪昌 +2 位作者 童一民 任艳丽 陈志辉 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期295-298,共4页

目的探讨丙型肝炎病毒(HCV)包膜E2蛋白DNA疫苗诱导小鼠产生中和抗体的可行性。方法构建截除疏水性羧基末端的HCV包膜蛋白表达质粒pCI-1b661以及同时截除疏水性羧基末端和高变区1(HVR1)的表达质粒pCI-1b661Δ,转染293T细胞,以Western blo... 目的探讨丙型肝炎病毒(HCV)包膜E2蛋白DNA疫苗诱导小鼠产生中和抗体的可行性。方法构建截除疏水性羧基末端的HCV包膜蛋白表达质粒pCI-1b661以及同时截除疏水性羧基末端和高变区1(HVR1)的表达质粒pCI-1b661Δ,转染293T细胞,以Western blot和ELISA检测细胞内和培养上清中的HCVE2蛋白,将两种表达质粒及空载体分别肌注免疫BALB/c小鼠,以ELISA检测小鼠血清中的HVR1抗体,以HCV假病毒颗粒(HCVpp)分析小鼠血清的中和活性。结果 2种表达质粒均能表达分泌性截短型E2蛋白。pCI-1b661免疫的8只小鼠血清中均可检测到HVR1抗体,而pCI-1b661Δ免疫血清中未检测到HVR1抗体。pCI-1b661和pCI-1b661Δ免疫血清对HCVpp的中和率分别为(78.5±13.8)%和(38.7±6.5)%,差异有显著性(P<0.01)。pCI-1b661免疫组小鼠血清的中和率与HVR1抗体水平呈正相关(r=0.967,P<0.01)。结论表达截短型E2蛋白的DNA疫苗能诱导产生HCV中和抗体,其主要成员为HVR1抗体。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 包膜e2蛋白 DNA疫苗 高变区1 中和抗体

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人源抗丙型肝炎病毒包膜蛋白E2单链抗体的研究 被引量：16

8

作者 钟彦伟 成军 +6 位作者 施双双 王刚 夏小兵 田小军 李莉 张玲霞 陈菊梅 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 2002年第2期109-112,共4页

目的 研制抗丙型肝炎病毒包膜蛋白Ｅ２（ＨＣＶ Ｅ２）的人源噬菌体单链抗体，并探讨其临床价值。方法 以重组的ＨＣＶ Ｅ２为固相抗原，利用亲和筛选的原理，从噬菌体抗体库中经过５轮“吸附－洗脱－扩增”的筛选过程及酶联免疫吸附试... 目的 研制抗丙型肝炎病毒包膜蛋白Ｅ２（ＨＣＶ Ｅ２）的人源噬菌体单链抗体，并探讨其临床价值。方法 以重组的ＨＣＶ Ｅ２为固相抗原，利用亲和筛选的原理，从噬菌体抗体库中经过５轮“吸附－洗脱－扩增”的筛选过程及酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）和ＤＮＡ序列分析，获得ＨＣＶ　Ｅ２的人源单链抗体；用该抗体对１０例石蜡包埋的丙型肝炎患者肝组织进行免疫组织化学鉴定。结果 ＥＬＩＳＡ结果表明，制备的ＨＣＶ Ｅ２人源单链抗体（吸光度值Ａ４５０为 １．８８）能与ＨＣＶ Ｅ２抗原特异性结台；免疫组织化学结果表明，该抗体能够特异性识别丙型肝炎患者肝组织ＨＣＶ Ｅ２抗原，与正常肝组织及乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）抗原均无交叉反应。结论 此法制备的单链抗体亲和性好，特异性强，且制备方法简便，周期短，为ＨＣＶ Ｅ２病原的检测提供了新的有效的试剂。 展开更多

关键词 人源抗丙型肝炎病毒 包膜蛋白e2 单链抗体 研究 免疫组织化学

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丙型肝炎病毒包膜蛋白E2人源单链可变区抗体的筛选与鉴定 被引量：3

9

作者 钟彦伟 成军 +2 位作者 施双双 王刚 陈菊梅 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期53-54,共2页

采用噬菌体表面展示技术 ,以重组的HCV结构蛋白E2为固相包被抗原 ,从半合成的噬菌体单链可变区抗体库中经过 3轮“吸附 洗脱 扩增”筛选过程 ,获得抗原特异性和结合活性较强的HCVE2人源单链可变区抗体 (ScFv)片段 ,片段为 771bp,阳性克... 采用噬菌体表面展示技术 ,以重组的HCV结构蛋白E2为固相包被抗原 ,从半合成的噬菌体单链可变区抗体库中经过 3轮“吸附 洗脱 扩增”筛选过程 ,获得抗原特异性和结合活性较强的HCVE2人源单链可变区抗体 (ScFv)片段 ,片段为 771bp,阳性克隆 ,对其进行免疫学检测 ,并对HCVE2特异性ScFv的编码基因序列进行测定分析。结果筛选得到的HCVE2ScFv片段 (771bp) 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 包膜蛋白e2 人源单链可变区抗体 筛选 鉴定

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我国丙型肝炎病毒囊膜蛋白E_2高变区1的序列特征 被引量：4

10

作者 方芳 潘卫 +2 位作者 戚中田 宋艳斌 朱诗应 《中国病毒学》 CSCD 1998年第1期34-39,共6页

对２３例国内献血员、血透析及肝炎病人血清用反转录巢式ＰＣＲ技术扩增了ＨＣＶＲＮＡ囊膜蛋白２基因的ｃＤＮＡ片段，并进行了序列测定。结果表明２３例病人ＨＣＶＥ２／ＮＳ１Ｎ末端的核苷酸及氨基酸序列呈现多样性，高变区１（ＨＶ... 对２３例国内献血员、血透析及肝炎病人血清用反转录巢式ＰＣＲ技术扩增了ＨＣＶＲＮＡ囊膜蛋白２基因的ｃＤＮＡ片段，并进行了序列测定。结果表明２３例病人ＨＣＶＥ２／ＮＳ１Ｎ末端的核苷酸及氨基酸序列呈现多样性，高变区１（ＨＶＲ１）位于核苷酸第１４５９～１５５９位，氨基酸第３８４～４１０位；我国ＨＣＶ株ＨＶＲ１２７个氨基酸中有１５个位置氨基酸相对稳定，氨基酸组成与分布均与Ｓｅｋｉｙａ报道的１６６个ＨＣＶ株的不同。结果提示，研究我国ＨＣＶ株ＨＶＲ１的序列特征有助于ＨＣＶ的流行病学研究，对研制适用于我国的抗体诊断试剂盒及进行疫苗研究均有重要的意义。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 囊膜蛋白e2 高变区 序列

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牛病毒性腹泻病毒囊膜蛋白E2基因不同高可变区缺失型核酸疫苗的构建 被引量：2

11

作者 史慧君 胡新艳 +6 位作者 郭妍婷 陈俊贞 李泽宇 董文丽 贺渊秀 王万顺 付强 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第23期109-113,117,155,共7页

为了构建牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)囊膜蛋白E2基因高可变区(hyper variable region,HVR)缺失型核酸疫苗,为BVDV防控提供新的方法,试验依据GenBank中BVDV基因组序列设计引物,以BVDV新疆分离株TC cDNA为模板,扩... 为了构建牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)囊膜蛋白E2基因高可变区(hyper variable region,HVR)缺失型核酸疫苗,为BVDV防控提供新的方法,试验依据GenBank中BVDV基因组序列设计引物,以BVDV新疆分离株TC cDNA为模板,扩增E2基因并测序,使用生物信息学软件分析E2蛋白的跨膜区和HVR区域等;采用常规PCR和搭桥PCR等方法扩增E2基因的不同缺失型HVR区域,并将其插入到真核表达载体pVAX1中,构建成真核表达质粒;分别于0,2,4周时免疫Balb/c小鼠,并在首次免疫后0,14,28,42天采集血清,通过ELISA法测定IgG水平。结果表明:成功扩增出BVDV TC株E2基因,大小为1122 bp;E2基因与BVDV 1b毒株HP-KY-PK13(登录号KT355592.1)及BVDV 1b毒株3156(登录号JN704144.1)的E2基因具有较高的同源性,E2 HVR1区域位于E2基因N端,HVR2区域位于E2基因中间部位;成功构建了E2基因不同的HVR缺失型真核表达质粒pVAX1-E2 HVR1△1-20、△1-64、△21-40、△41-64和pVAX1-E2 HVR2△140-216;与免疫pVAX1相比,E2基因不同HVR缺失质粒及野生型E2质粒诱导的IgG抗体水平显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01);而在首次免疫42天时,用pVAX1-E2 HVR1△41-64免疫诱导的IgG抗体水平最高,约为pVAX1-E2的3.9倍。说明用pVAX1-E2 HVR1△41-64制备的核酸疫苗能诱导动物产生较高水平的IgG。 展开更多

关键词 牛病毒性腹泻病毒 囊膜蛋白e2 高可变区域 核酸疫苗 真核表达载体

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丙型肝炎病毒蛋白作用于细胞信号转导途径的研究进展 被引量：1

12

作者 薛梅 代解杰 夏雪山 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2009年第6期470-474,共5页

细胞信号转导异常往往与人类疾病的发生、发展密切相关。一些病毒致病和感染机制即为病毒抗原蛋白作用宿主细胞信号转导途径,导致宿主细胞内信号转导发生紊乱。丙型肝炎病毒(HCV)是引发慢性丙型肝炎,导致肝硬化和肝细胞癌发生的主要病原... 细胞信号转导异常往往与人类疾病的发生、发展密切相关。一些病毒致病和感染机制即为病毒抗原蛋白作用宿主细胞信号转导途径,导致宿主细胞内信号转导发生紊乱。丙型肝炎病毒(HCV)是引发慢性丙型肝炎,导致肝硬化和肝细胞癌发生的主要病原体,但目前HCV的致病机制与宿主内持续感染机制尚不清楚。HCV致病机制可能与HCV表达的蛋白质干扰宿主细胞信号转导途径而导致异常的细胞信号转导有关。研究HCV蛋白对宿主细胞信号转导途径的影响不仅有助于阐明其致病机制,还能为新药设计和寻找新的治疗方法提供新思路和新靶点。本文主要综述了近年来国内外有关HCV蛋白作用细胞信号转导途径的研究进展。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 细胞信号转导 核心蛋白 包膜蛋白e2 非结构蛋白NS3 非结构蛋白NS5A

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融合His标签的HCV包膜糖蛋白E2的真核表达及意义 被引量：1

13

作者 杜德伟 贾战生 +5 位作者 秦鸿雁 孙强 刘秋平 聂青和 周永兴 韩骅 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第10期904-906,共3页

目的　构建HCV包膜糖蛋白E2与His标签融合的真核表达载体并在CHO细胞中表达 ,为研究HCV包膜糖蛋白的功能奠定基础。方法　利用PCR技术从HCV基因组序列中扩增出编码HCV包膜糖蛋白E2的基因 ,将其插入原核表达载体pET2 8(a)载体中 ,构建pET... 目的　构建HCV包膜糖蛋白E2与His标签融合的真核表达载体并在CHO细胞中表达 ,为研究HCV包膜糖蛋白的功能奠定基础。方法　利用PCR技术从HCV基因组序列中扩增出编码HCV包膜糖蛋白E2的基因 ,将其插入原核表达载体pET2 8(a)载体中 ,构建pET2 8(a) HCVE2 ,从pET2 8(a) HCVE2上获得His HCVE2融合基因 ,插入pcDNA3 1,构建表达HCV包膜糖蛋白E2与His标签融合蛋白的真核表达载体pcDNA3 1 His E2。用脂质体介导法将pcDNA3 1 His E2转染CHO细胞 ,通过间接免疫荧光、Westernblot检测融合蛋白在CHO细胞内的表达。结果　转染HCVE2与His融合基因的真核表达载体的CHO细胞内有融合蛋白的表达。结论　与His标签融合的HCV包膜糖蛋白E2能够在CHO细胞内表达。 展开更多

关键词 肝炎病毒 丙型 包膜糖蛋白e2 融合基因 真核表达

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HCV核心和截短的包膜蛋白E2基因在昆虫细胞中的表达及其抗原性 被引量：1

14

作者 朱诗应 赵平 +2 位作者 任浩 赵兰娟 戚中田 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第9期962-965,共4页

目的 :构建含 HCV全长核心基因和截短的包膜蛋白 E2基因的重组杆状病毒表达载体 ,研究其表达和抗原性。 方法 :以含 HCV全长 c DNA克隆的 p GEM- HCJ4质粒为模板 ,PCR扩增全长的 HCV核心抗原基因和截短的 E2基因片段 ,插入转座载体 p Fa... 目的 :构建含 HCV全长核心基因和截短的包膜蛋白 E2基因的重组杆状病毒表达载体 ,研究其表达和抗原性。 方法 :以含 HCV全长 c DNA克隆的 p GEM- HCJ4质粒为模板 ,PCR扩增全长的 HCV核心抗原基因和截短的 E2基因片段 ,插入转座载体 p Fast Bac HTa构建重组转座质粒 p FB- CE2 t,转化 DH10 Bac大肠杆菌 ,获得重组杆状病毒穿梭质粒 Bacmid- CE2 t,以之转染昆虫 Sf9细胞进行外源基因的表达 ,并对其抗原性进行 EL ISA检测。 结果 :SDS- PAGE和 Western blot分析表明Bacmid- CE2 t在 Sf9细胞表达了 HCV C- E2蛋白 ,并能利用细胞内蛋白酶将其裂解为单独的 C蛋白和截短的 E2蛋白。纯化后的蛋白能分别与 HCV C蛋白、E2蛋白单抗以及慢性丙型肝炎患者血清反应。 结论 :HCV核心蛋白和截短的 展开更多

关键词 肝炎病毒 丙型 核心蛋白 截短的e2蛋白 昆虫Sf 9细胞

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牛病毒性腹泻病毒E2基因生物信息学分析及可溶性表达 被引量：1

15

作者 赵洪哲 李新培 +4 位作者 范峻豪 宋前进 张静 关平原 温永俊 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2020年第1期63-67,共5页

为了获得牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)E2基因的最佳可溶性蛋白,本试验根据GenBank已公布的BVDV E2基因序列,利用DNAStar等软件进行生物信息学分析,截取抗原性和亲水性较高的序列进行稀有密码子优化,串联信号肽... 为了获得牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)E2基因的最佳可溶性蛋白,本试验根据GenBank已公布的BVDV E2基因序列,利用DNAStar等软件进行生物信息学分析,截取抗原性和亲水性较高的序列进行稀有密码子优化,串联信号肽序列后合成并连接到原核表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pET-32a-Opti-E2;转化至E.coli BL21(DE3)宿主菌,经SDS-PAGE和Western blot分析,成功获得大小为43 kDa的BVDV E2基因的最佳可溶性蛋白,且该蛋白特异性较好。本试验E2蛋白的成功表达可为后续ELISA方法的建立和亚单位疫苗的开发奠定基础。 展开更多

关键词 牛病毒性腹泻病毒 囊膜结构蛋白e2 原核表达

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HCV包膜蛋白E2的B细胞抗原模拟表位的筛选、重组表达与抗原性鉴定 被引量：1

16

作者 史宣玲 曹凤 +3 位作者 季阳 杜勇 侯利华 王海涛 《中国输血杂志》 CAS CSCD 2002年第1期5-8,共4页

目的　采用蛋白质 /多肽递呈技术对HCV包膜蛋白E2进行模拟表位研究。方法　通过使用E2蛋白结合血清中的抗 E2 ,筛选M1 3噬菌体构建的随机肽库 ,寻找E2区蛋白的模拟表位 ;用大肠杆菌硫氧还蛋白作为骨架 ,在其活性部位以“内融合”形式... 目的　采用蛋白质 /多肽递呈技术对HCV包膜蛋白E2进行模拟表位研究。方法　通过使用E2蛋白结合血清中的抗 E2 ,筛选M1 3噬菌体构建的随机肽库 ,寻找E2区蛋白的模拟表位 ;用大肠杆菌硫氧还蛋白作为骨架 ,在其活性部位以“内融合”形式重组表达该模拟表位 ,用HCV感染者血清验证重组蛋白的抗原性。结果　寻找到一个E2区蛋白的模拟表位 ,可能为E2蛋白的构象性表位。结论　本实验为研究HCV外膜蛋白E2抗原表位水平的特异诊断试剂的研制。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 包膜蛋白e2 抗原表位 随机肽库 重组表达 丙型肝炎 B细胞抗原 抗原性鉴定

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基因免疫诱导小鼠产生抗丙型肝炎病毒E2糖蛋白抗体

17

作者 吴朝栋 陶其敏 《北京医科大学学报》 CSCD 1998年第5期395-396,412,共3页

目的：通过基因免疫诱导ＢＡＬＢ／ｃ小鼠产生抗Ⅲ型中国株ＨＣＶ来源Ｅ２糖蛋白的体液免疫应答。方法：质粒ｐ３Ｗ１４在ＮＩＨ３Ｔ３细胞中能够表达Ｅ２糖蛋白，纯化该质粒并用于ＢＡＬＢ／ｃ小鼠直接肌注，于加强注射后不同时相采血... 目的：通过基因免疫诱导ＢＡＬＢ／ｃ小鼠产生抗Ⅲ型中国株ＨＣＶ来源Ｅ２糖蛋白的体液免疫应答。方法：质粒ｐ３Ｗ１４在ＮＩＨ３Ｔ３细胞中能够表达Ｅ２糖蛋白，纯化该质粒并用于ＢＡＬＢ／ｃ小鼠直接肌注，于加强注射后不同时相采血，以重组的Ｅ２糖蛋白检测特异性抗Ｅ２抗体。结果：接种ｐ３Ｗ１４质粒的小鼠中可检出抗Ｅ２抗体（５／６），抗体滴度１∶１５～１∶１２０。结论：采用含Ｅ２／ＮＳ１基因的质粒ＤＮＡ免疫，成功地诱导小鼠产生抗Ⅲ型株来源的Ｅ２抗体。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 e2糖蛋白 抗体 基因免疫

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丙型肝炎病毒E2蛋白的高效表达及其临床应用

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作者 谢尧 陶其敏 《北京医科大学学报》 CSCD 1999年第5期408-411,共4页

目的：在大肠杆菌中表达丙型肝炎病毒（ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃｖｉｒｕｓ，ＨＣＶ）Ｅ２ 包膜蛋白，并对其进行初步纯化。用纯化的包膜蛋白检测ＨＣＶＲＮＡ 阳性血清中Ｅ２ 抗体，研究其检测Ｅ２ 抗体的敏感性和特异性。方法：将ＨＣ... 目的：在大肠杆菌中表达丙型肝炎病毒（ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃｖｉｒｕｓ，ＨＣＶ）Ｅ２ 包膜蛋白，并对其进行初步纯化。用纯化的包膜蛋白检测ＨＣＶＲＮＡ 阳性血清中Ｅ２ 抗体，研究其检测Ｅ２ 抗体的敏感性和特异性。方法：将ＨＣＶＥ２ 蛋白基因克隆到原核表达载体中，并转化大肠杆菌。用ＩＰＴＧ 诱导细菌表达Ｅ２ 蛋白，经离子交换层析纯化蛋白。用纯化的包膜蛋白包被微孔板，经ＥＬＩＳＡ方法检测ＨＣＶＲＮＡ阳性血清中的Ｅ２ 抗体。结果：在大肠杆菌表达了相对分子质量为４５ ０００ 的可溶性Ｅ２ 蛋白，占细菌总蛋白量的２１％ ，纯化后，蛋白纯度为８５％ 。用其检测ＨＣＶ 患者血清１７１ 例，Ｅ２ 抗体的检出率为６３％ 。在Ｅ２ 抗体阳性的血清中，部分为抗ＨＣＶ 阴性。结论：Ｅ２ 蛋白的表达及初步纯化的成功，可能用于临床检测。各基因型ＨＣＶＥ２ 包膜蛋白的抗体之间有交叉反应，在目前的抗ＨＣＶ 诊断试剂中加入可溶性、非融合Ｅ２ 包膜蛋白，可以改善抗ＨＣＶ 诊断试剂的特异性和敏感性。 展开更多

关键词 丙型肝炎 HCV e2蛋白 高效表达 临床应用

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丙型肝炎病毒基因组部分E2／NS1蛋白基因在大肠杆菌中的表达

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作者 曾经瑗 毕胜利 +2 位作者 李景源 赵洪兰 刘崇柏 《中华实验和临床病毒学杂志》 CSCD 1995年第4期303-306,共4页

在大肠杆菌中表达了丙型肝炎病毒基因组的部分Ｅ２／ＮＳ１蛋白（氨基酸３６４－５１２）。表达蛋白经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，主要表达带的分子量在～４３０００左右。表达蛋白用于检测已用Ｃ３３ｃ及Ｑ２２检测过的血清，发现Ｅ２ＮＳ... 在大肠杆菌中表达了丙型肝炎病毒基因组的部分Ｅ２／ＮＳ１蛋白（氨基酸３６４－５１２）。表达蛋白经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，主要表达带的分子量在～４３０００左右。表达蛋白用于检测已用Ｃ３３ｃ及Ｑ２２检测过的血清，发现Ｅ２ＮＳ１引抗体阳性率占Ｃ３３ｃ及Ｑ２２抗体阳性血清的２０％，尚没有发现单独Ｅ２／ＮＳ１抗体阳性的血清。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 基因 外膜蛋白 e2/NS1 大肠杆菌

原文传递

融合铁蛋白的猪瘟病毒囊膜蛋白E2的表达及鉴定

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作者 魏珍珍 曾振 +5 位作者 杜梦潭 刘兴健 张志芳 胡小元 李轶女 易咏竹 《生物技术进展》 2020年第4期386-392,共7页

目前,传统的灭活猪瘟疫苗及弱毒(减毒)猪瘟疫苗存在免疫保护期短、毒力返强等缺点,而蛋白源性亚单位疫苗可以很好的解决上述问题。铁蛋白24个亚基可以自组装成稳定的多聚体纳米颗粒,成为理想的抗原呈递载体和疫苗开发平台。基于此,将铁... 目前,传统的灭活猪瘟疫苗及弱毒(减毒)猪瘟疫苗存在免疫保护期短、毒力返强等缺点,而蛋白源性亚单位疫苗可以很好的解决上述问题。铁蛋白24个亚基可以自组装成稳定的多聚体纳米颗粒,成为理想的抗原呈递载体和疫苗开发平台。基于此,将铁蛋白与具有较强免疫原性的猪瘟病毒囊膜蛋白E2(具有高保守性的保护性抗原)结合,构建融合基因E2-Fe,将该基因克隆到pET28a原核表达载体中,转化至大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导条件的探索及其高效表达,再将表达的融合蛋白进行镍柱纯化、质谱分析、Western-blotting验证及电镜检测。结果显示,融合基因E2-Fe已成功克隆到pET-28a载体上,0.50%乳糖诱导6 h为融合蛋白E2-Fe表达的最优条件;质谱分析与Western-blotting均显示融合蛋白的大小约为51 kD,与理论值相符;电镜观察到的纳米颗粒直径约为20 nm。结果表明,融合铁蛋白的猪瘟病毒囊膜蛋白E2在大肠杆菌中得到高效表达,经镍柱纯化后可获得数量可观的自组装纳米颗粒抗原,为研究新的猪瘟疫苗拓宽了研究思路。 展开更多

关键词 猪瘟病毒囊膜蛋白e2 纳米颗粒抗原 铁蛋白

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