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肠艾美尔球虫纯种分离及18SrDNA部分序列测定 被引量:6
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作者 崔平 顾小龙 +1 位作者 方素芳 刘红彬 《中国动物检疫》 CAS 2010年第8期40-43,共4页
采用单卵囊分离技术,分离肠艾美尔球虫。根据GenBank中发表的肠艾美尔球虫18SrDNA序列,设计一对引物,建立PCR方法对其基因片段扩增并测序、比对。结果成功分离肠艾美尔球虫,PCR扩增出清晰条带,大小为528bp,最低能检出27个孢子化卵囊。... 采用单卵囊分离技术,分离肠艾美尔球虫。根据GenBank中发表的肠艾美尔球虫18SrDNA序列,设计一对引物,建立PCR方法对其基因片段扩增并测序、比对。结果成功分离肠艾美尔球虫,PCR扩增出清晰条带,大小为528bp,最低能检出27个孢子化卵囊。该序列测定结果与Genebank发表的肠艾美尔球虫18SrDNA比对,相似性达98.5%。 展开更多
关键词 肠艾美尔球虫 单卵囊分离 18S RDNA 测序
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3种兔球虫18S rDNA部分序列测定与系统发育分析 被引量:4
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作者 方素芳 顾小龙 崔平 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期819-821,共3页
采用单卵囊分离法从河北某兔场分离大型艾美耳球虫、黄艾美耳球虫及肠艾美耳球虫,接种无球虫兔后获得大量纯种卵囊,CTAB法提取孢子化卵囊基因组DNA。利用艾美耳属球虫18S rDNA保守引物,PCR扩增3种兔球虫18S rDNA片段,产物纯化后测序。将... 采用单卵囊分离法从河北某兔场分离大型艾美耳球虫、黄艾美耳球虫及肠艾美耳球虫,接种无球虫兔后获得大量纯种卵囊,CTAB法提取孢子化卵囊基因组DNA。利用艾美耳属球虫18S rDNA保守引物,PCR扩增3种兔球虫18S rDNA片段,产物纯化后测序。将3种球虫18S rDNA测序结果与GenBank中发布的兔球虫18S rDNA序列用DNAStar软件进行比对。使用MEGA4.0软件对兔球虫18S rDNA进行同源性比较,并绘制遗传进化树。结果表明,大型艾美耳球虫扩增出大小为1 521bp的18S rDNA片段;黄艾美耳球虫及肠艾美耳球虫均扩增出大小为1 520bp的18S rDNA片段。序列比对结果显示,3种河北株兔球虫与GenBank中相应的3种兔球虫18S rD-NA(EF694016、EF694011、EF694012)相似性分别为99.6%、99.6%和100%。3种河北株兔球虫序列和GenBank中兔球虫18S rDNA序列(EF694007-EF694017)位于一个单系集群。 展开更多
关键词 大型艾美耳球虫 黄艾美耳球虫 肠艾美耳球虫 18S rDNA 测序 遗传进化树
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兔斯氏艾美耳球虫、肠艾美耳球虫和大型艾美耳球虫PCR检测靶标的筛选与单一、多重直接PCR检测方法的建立
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作者 肖洁 罗跃军 +6 位作者 陈浩 蒲家艳 何维 熊常明 郝哥 任永军 杨光友 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期4327-4337,共11页
旨在建立快速、简便的兔斯氏艾美耳球虫、肠艾美耳球虫和大型艾美耳球虫直接PCR检测方法。首先克隆斯氏艾美耳球虫线粒体基因组mtDNA和3种兔球虫顶质体基因rpoB,结合GenBank中收录的其它兔球虫的相关序列进行比对分析,然后以种间差异明... 旨在建立快速、简便的兔斯氏艾美耳球虫、肠艾美耳球虫和大型艾美耳球虫直接PCR检测方法。首先克隆斯氏艾美耳球虫线粒体基因组mtDNA和3种兔球虫顶质体基因rpoB,结合GenBank中收录的其它兔球虫的相关序列进行比对分析,然后以种间差异明显的序列为靶基因在其超变区设计多对特异性引物,同时对引物浓度等条件进行优化,并评价PCR方法的敏感性和特异性。本研究首次测定了斯氏艾美耳球虫线粒体基因组全序列和3种兔球虫顶质体基因rpoB的序列,斯氏艾美耳球虫mtDNA全长6277 bp,包括3个蛋白质基因,与其它6种兔球虫mtDNA序列相似率为93.90%~97.45%;斯氏艾美耳球虫、肠艾美耳球虫和大型艾美耳球虫顶质体基因rpoB大小在500 bp左右,三者相似性达93.93%~95.30%。靶基因筛选结果表明3种兔球虫ITS与其它基因(rpoB和mtDNA)相比较具有种内保守和种间差异大的特点,更适合用于分子诊断;基于3种兔球虫ITS序列的引物中,Ps1、Pi2、Pm2在单一或多重检测时均具有良好的特异性和敏感性。本试验通过对艾美耳球虫PCR检测候选基因靶标(ITS、mtDNA和rpoB)进行序列分析,筛选ITS为兔球虫种间差异明显的检测靶标基因,在此基础上建立的单一直接PCR方法和多重直接PCR方法具有特异、敏感、操作简便的优点,可用于3种兔球虫的流行病学调查或兔球虫病临床诊断。 展开更多
关键词 斯氏艾美耳球虫 肠艾美耳球虫 大型艾美耳球虫 ITS 直接PCR
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肠艾美尔球虫单卵囊分离及ITS-1序列测定 被引量:3
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作者 方素芳 顾小龙 崔平 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第1期307-308,312,共3页
[目的]建立一种有效的鉴定球虫种类分子生物学方法。[方法]采用单卵囊分离技术,分离肠艾美尔球虫,提取卵囊基因组DNA。根据GenBank中发表的艾美尔属球虫18SrDNA和5.8SrDNA序列,设计特异性引物,扩增内转录间隔区1(ITS-1),PCR产物直接测序... [目的]建立一种有效的鉴定球虫种类分子生物学方法。[方法]采用单卵囊分离技术,分离肠艾美尔球虫,提取卵囊基因组DNA。根据GenBank中发表的艾美尔属球虫18SrDNA和5.8SrDNA序列,设计特异性引物,扩增内转录间隔区1(ITS-1),PCR产物直接测序。[结果]成功分离出肠艾美尔球虫,PCR扩增出434bp清晰条带,且最低能检测出27个孢子化卵囊。[结论]该研究结果为球虫虫种及虫株的准确鉴定奠定了基础。 展开更多
关键词 肠艾美尔球虫 单卵囊分离 ITS-1序列 PCR 测定
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3种兔球虫ITS-1序列测定与系统发育分析 被引量:2
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作者 顾小龙 刘红彬 +2 位作者 崔平 索勋 方素芳 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期984-987,共4页
从河北省兔场分别单卵囊分离孢子化大型艾美耳球虫卵囊、黄艾美耳球虫卵囊及肠艾美耳球虫卵囊,接种无球虫兔后获得纯种卵囊,CTAB法提取孢子化卵囊基因组DNA。利用艾美耳属球虫18SrDNA和5.8SrDNA保守引物,PCR扩增3种兔球虫ITS-1片段,产... 从河北省兔场分别单卵囊分离孢子化大型艾美耳球虫卵囊、黄艾美耳球虫卵囊及肠艾美耳球虫卵囊,接种无球虫兔后获得纯种卵囊,CTAB法提取孢子化卵囊基因组DNA。利用艾美耳属球虫18SrDNA和5.8SrDNA保守引物,PCR扩增3种兔球虫ITS-1片段,产物纯化后测序。将3种球虫ITS-1测序结果与GenBank发布的兔球虫ITS-1序列进行比对和遗传距离比较,绘制系统发育树。结果表明,大型艾美耳球虫、黄艾美耳球虫及肠艾美耳球虫河北株分别扩增出424、455、434bp的ITS-1片段。大型艾美耳球虫、黄艾美耳球虫及肠艾美耳球虫河北株与GenBank中发布的同种兔球虫ITS-1序列相似性分别为97.4%、97.9%和96.9%。系统发育树显示兔球虫ITS-1序列形成1个单系群,该单系群根据寄生部位分为2个姊妹群。 展开更多
关键词 大型艾美耳球虫 黄艾美耳球虫 肠艾美耳球虫 ITS-1 rDNA 测序 系统发育分析
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肠艾美耳球虫河北株18S rDNA部分序列测定及系统发育分析 被引量:1
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作者 方素芳 崔平 +1 位作者 顾小龙 索勋 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期31-34,共4页
从河北某兔场单卵囊分离肠艾美耳球虫并接种无球虫兔进行增殖,CTAB法提取肠艾美耳球虫卵囊基因组DNA。利用艾美耳属球虫18SrDNA保守引物,PCR扩增肠艾美耳球虫18SrDNA片段,产物纯化后测序。测得的序列用DNAstar软件分析并与GenBank公布... 从河北某兔场单卵囊分离肠艾美耳球虫并接种无球虫兔进行增殖,CTAB法提取肠艾美耳球虫卵囊基因组DNA。利用艾美耳属球虫18SrDNA保守引物,PCR扩增肠艾美耳球虫18SrDNA片段,产物纯化后测序。测得的序列用DNAstar软件分析并与GenBank公布的11种兔球虫(EF694007-EF694017)的相应序列进行同源性分析,并绘制系统进化树。结果表明,扩增出的18SrDNA片段大小为1 521bp。序列分析显示,肠艾美耳球虫河北株18SrDNA与GenBank公布的11种兔球虫相应序列同源性为92.6%~99.9%,肠艾美耳球虫河北株与国外肠艾美耳球虫(EF694012)18SrDNA相似性达99.9%。系统发育进化树显示,肠艾美耳球虫河北株与肠艾美耳球虫(EF694012)亲缘关系最近。 展开更多
关键词 肠艾美耳球虫 18S RDNA 测序 遗传进化树
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Isolation of the Single Oocyst and Sequencing of ITS-1 of Eimeria intestinalis
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作者 方素芳 顾小龙 崔平 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2010年第9期91-93,共3页
[Objective] The aim was to establish a molecular biological method for identifying coccidium species.[Method]First,the pure species of Eimeria intestinalis was isolated by using single-oocyst isolation technique.Then,... [Objective] The aim was to establish a molecular biological method for identifying coccidium species.[Method]First,the pure species of Eimeria intestinalis was isolated by using single-oocyst isolation technique.Then,according to the 18s rDNA and 5.8s rDNA sequences of Eimeria coccidia published in GenBank,a pair of specific primers was designed and synthesized to amplify the internal transcribed spacer 1(ITS-1).Finally,the PCR products were sent for sequencing.[Result]The pure species of E.intestinalis was isolated and the result of agarose gel electrophoresis showed that the PCR product was 434 bp,and at least 27-sporulated oocysts could be detected.[Conclusion]The research will provide a basis for accurate identification of coccidium species and strains. 展开更多
关键词 e.intestinalis Single-oocyst isolation ITS-1 PCR Sequence
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兔肠艾美耳球虫广西株分离鉴定及致病性研究
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作者 曾莉 廖贵城 +6 位作者 刘丽丹 刘园 黄仕凤 王新秋 黄仪娟 林瑞庆 翁亚彪 《中国养兔》 2018年第1期4-7,10,共5页
采用单卵囊分离技术,从广西壮族自治区玉林市某兔场兔球虫混合感染样品中获得1株球虫,用其接种无球虫兔进行增殖,根据其形态、大小等特征和PCR鉴定确定其种类,并对其生物学特性和致病性进行研究。结果显示,该虫株寄生于小肠中后段,卵囊... 采用单卵囊分离技术,从广西壮族自治区玉林市某兔场兔球虫混合感染样品中获得1株球虫,用其接种无球虫兔进行增殖,根据其形态、大小等特征和PCR鉴定确定其种类,并对其生物学特性和致病性进行研究。结果显示,该虫株寄生于小肠中后段,卵囊呈梨形,孢子化后有卵囊残体,潜隐期为198h,孢子化时间为36h。通过随机测定100个孢子化卵囊后发现,孢子化卵囊的大小为(26.7~34.5)μm×(16.9~24.1)μm,形状指数1.41~1.55。对照相关文献并进行PCR鉴定,确定该虫株为纯种肠艾美耳球虫。当兔感染3×103个/只以上该虫株孢子化卵囊后,出现精神沉郁,排出干粪或稀粪等球虫病临床症状或死亡,且增重显著低于空白对照组。感染3×103个/只该虫株孢子化卵囊后第11天剖检,小肠中后段可见明显的肠壁增厚,褶皱增多并伴有出血;病理切片可见空肠黏膜充血、出血,浆液渗出,黏膜层见大量典型虫体。结果表明该虫株具有强致病性。 展开更多
关键词 肠艾美耳球虫 分离鉴定 生物学特性 致病性
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