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非洲马瘟病毒VP7和NS2双重荧光RT-PCR检测技术的建立与应用
被引量:
3
1
作者
高志强
张鹤晓
+6 位作者
乔彩霞
蒲静
张伟
谷强
刘环
张利峰
马贵平
《中国动物检疫》
CAS
2013年第4期34-38,共5页
利用DNAMAN软件对非洲马瘟病毒不同基因型代表株的序列进行分析,选择其高度保守的VP7和NS2基因设计合成引物和探针。人工分别合成包含有扩增区域的VP7和NS2核苷酸片段进行双向(T7和SP6)体外转录制备双链RNA(dsRNA)。使用制备的dsRNA在...
利用DNAMAN软件对非洲马瘟病毒不同基因型代表株的序列进行分析,选择其高度保守的VP7和NS2基因设计合成引物和探针。人工分别合成包含有扩增区域的VP7和NS2核苷酸片段进行双向(T7和SP6)体外转录制备双链RNA(dsRNA)。使用制备的dsRNA在对荧光定量RT-PCR的反应条件优化的基础上,建立了适用于非洲马瘟病毒检测的双重通用荧光定量RT-PCR检测技术。应用建立的方法对非洲马瘟病毒核酸,马流感病毒核酸,马流产沙门氏菌核酸,马链球菌兽疫亚种核酸,东、西部马脑脊髓炎病毒核酸进行检测,结果显示该检测技术可以有效检测非洲马瘟病毒核酸,而对其它病原核酸检测结果为阴性,证实本技术的特异性强、可靠性好。对已知拷贝数的dsRNA检测结果表明,所建立的TaqMan荧光定量RT-PCR灵敏度可达1.0×102拷贝/反应,相比于基于凝胶电泳常规RT-PCR方法,其灵敏度高10倍;而且双基因的检测设计思路更能保证病毒核酸的有效检测,防止漏检。在对248份临床样品的检测中,进一步证实了该方法快速、灵敏且重复性好,可满足非洲马瘟病毒快速诊断的需要。
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关键词
非洲马瘟病毒
VP7和NS2
双重通用荧光
rt-pcr
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职称材料
题名
非洲马瘟病毒VP7和NS2双重荧光RT-PCR检测技术的建立与应用
被引量:
3
1
作者
高志强
张鹤晓
乔彩霞
蒲静
张伟
谷强
刘环
张利峰
马贵平
机构
北京出入境检验检疫局检验检疫技术中心
出处
《中国动物检疫》
CAS
2013年第4期34-38,共5页
基金
质检公益性行业科研专项"马重大外来虫媒病抗体
核酸快速检测技术研究"(201010033)
文摘
利用DNAMAN软件对非洲马瘟病毒不同基因型代表株的序列进行分析,选择其高度保守的VP7和NS2基因设计合成引物和探针。人工分别合成包含有扩增区域的VP7和NS2核苷酸片段进行双向(T7和SP6)体外转录制备双链RNA(dsRNA)。使用制备的dsRNA在对荧光定量RT-PCR的反应条件优化的基础上,建立了适用于非洲马瘟病毒检测的双重通用荧光定量RT-PCR检测技术。应用建立的方法对非洲马瘟病毒核酸,马流感病毒核酸,马流产沙门氏菌核酸,马链球菌兽疫亚种核酸,东、西部马脑脊髓炎病毒核酸进行检测,结果显示该检测技术可以有效检测非洲马瘟病毒核酸,而对其它病原核酸检测结果为阴性,证实本技术的特异性强、可靠性好。对已知拷贝数的dsRNA检测结果表明,所建立的TaqMan荧光定量RT-PCR灵敏度可达1.0×102拷贝/反应,相比于基于凝胶电泳常规RT-PCR方法,其灵敏度高10倍;而且双基因的检测设计思路更能保证病毒核酸的有效检测,防止漏检。在对248份临床样品的检测中,进一步证实了该方法快速、灵敏且重复性好,可满足非洲马瘟病毒快速诊断的需要。
关键词
非洲马瘟病毒
VP7和NS2
双重通用荧光
rt-pcr
Keywords
African
horse
sickness
virus
VP7
and
NS2
duplex
universal
real
-
time
rt-pcr
分类号
S852.652 [农业科学—基础兽医学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
非洲马瘟病毒VP7和NS2双重荧光RT-PCR检测技术的建立与应用
高志强
张鹤晓
乔彩霞
蒲静
张伟
谷强
刘环
张利峰
马贵平
《中国动物检疫》
CAS
2013
3
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