人食管癌顺铂耐药细胞系的建立及耐药相关基因的筛选 被引量：9

1

作者 李敏 王志举 +2 位作者 付庆 赵国强 董子明 《中国卫生检验杂志》 CAS 2007年第1期18-20,共3页

目的:建立人食管癌顺铂耐药细胞系Ec9706/cDDP,并初步探讨其耐药机制。方法:采用顺铂(cDDP)中等浓度、间歇冲击作用方法历时9mon诱导人食管癌细胞系Ec9706,建立相应耐药细胞系,采用MTT法测定耐药细胞系对cD-DP的耐药指数,用RT-PCR半定... 目的:建立人食管癌顺铂耐药细胞系Ec9706/cDDP,并初步探讨其耐药机制。方法:采用顺铂(cDDP)中等浓度、间歇冲击作用方法历时9mon诱导人食管癌细胞系Ec9706,建立相应耐药细胞系,采用MTT法测定耐药细胞系对cD-DP的耐药指数,用RT-PCR半定量方法测定亲本细胞及耐药细胞耐药相关基因如DNA聚合酶(polβ)、多药耐药相关基因(MRP)、谷胱甘肽转移酶(GST)、二氢叶酸还原酶(DHFR)、拓扑异构酶(TPO)和多药耐药基因(mdr1)等基因的mRNA表达水平。结果:人食管癌顺铂耐药细胞系Ec9706/cDDP的耐药指数为15.7,该细胞系中polβ、DHFR、GST基因mRNA的表达比亲本细胞显著增加,TPO的表达降低,而mdr1、MRP表达的增加无显著统计学意义。结论:成功建立了人食管癌顺铂耐药细胞系Ec9706/cDDP,其耐药性的产生与polβ、GST、DHFR、TPO等基因的异常表达有关,而与mdr1、MRP表达的关系不密切。 展开更多

关键词 食管癌 耐药细胞系 耐药相关基因 DNA聚合酶beta

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绒癌耐药细胞系的建立及获得性耐药机制的研究 被引量：4

2

作者 崔竹梅 向阳 +1 位作者 杨秀玉 刘芝华 《现代妇产科进展》 CSCD 2001年第5期333-336,共4页

目的 :采用目前治疗绒癌最常用的药物诱导建立绒癌的耐药细胞系 ,比较不同药物引起耐药机制的差异。方法 :采用浓度梯度递增法和间歇诱导法 ,分别用 5 FU ,MTX ,VP 16诱导绒癌细胞系JEG 3,建立相应耐药细胞系 ,采用MTT法测定耐药细胞系... 目的 :采用目前治疗绒癌最常用的药物诱导建立绒癌的耐药细胞系 ,比较不同药物引起耐药机制的差异。方法 :采用浓度梯度递增法和间歇诱导法 ,分别用 5 FU ,MTX ,VP 16诱导绒癌细胞系JEG 3,建立相应耐药细胞系 ,采用MTT法测定耐药细胞系对5 FU、MTX、KSM、VP 16和Taxol的耐药指数 ,用RT PCR测定亲本细胞及各耐药细胞系耐药相关基因如肺耐药蛋白 (LRP)、多药耐药相关蛋白 (MRP)、谷胱甘肽转移酶 (GST π)、二氢叶酸还原酶 (DHFR)和多药耐药基因 (MDR 1)的mRNA表达 ,比较各种细胞生长曲线 ,细胞群体倍增时间。结果 :JEG 3细胞系在诱导耐药细胞前即有LRP、MRP、GST π、DHFR的共表达 ,诱导耐药后上述各基因的表达无明显变化。诱导耐药前JEG 3细胞无MDR1的表达 ,用VP 16、5 FU间歇诱导的方法诱导形成的耐药细胞系有MDR 1表达 ,且耐药指数增加。结论 :JEG 3耐药细胞系耐药性的产生与MRP、LRP、GST π、DHFR表达的关系不密切 ,而与MDR1的表达有关。 展开更多

关键词 绒毛膜癌 耐药细胞系 耐药相关基因

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耐甲氨蝶呤骨肉瘤细胞株耐药关系与形态变化分析

3

作者 王建军 周芳 卢红 《河南大学学报（医学版）》 CAS 2014年第3期158-160,共3页

目的探索原代细胞株与耐药细胞株在光学显微镜与电子显微镜下的形态学变化。方法用逐渐递增药物浓度冲击诱导法,逐渐建立耐药细胞株;MTT法测定细胞株的耐药指数;用光学显微镜与电子显微镜观察耐药株与云带细胞株形态学变化。结果耐药细... 目的探索原代细胞株与耐药细胞株在光学显微镜与电子显微镜下的形态学变化。方法用逐渐递增药物浓度冲击诱导法,逐渐建立耐药细胞株;MTT法测定细胞株的耐药指数;用光学显微镜与电子显微镜观察耐药株与云带细胞株形态学变化。结果耐药细胞株较原代细胞株的细胞体积增大,细胞分裂像减少,伪足突起减少;电子显微镜下伪足绒毛减少,细胞器有浓聚,高尔基体数量减少,细胞核染色体有核膜下浓聚。结论耐药细胞株细胞状态处于受抑制状态,生命能力下降。 展开更多

关键词 骨肉瘤 耐药细胞株 形态学

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人食管癌顺铂耐药细胞系Ec9706/cDDP的建立及其生物学特征 被引量：6

4

作者 李敏 王志举 +1 位作者 李文涛 董子明 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2006年第34期3257-3260,共4页

目的:建立人食管癌顺铂耐药细胞系Ec9706/cDDP,探讨其生物学特征.方法:采用顺铂(cDDP)中等浓度、间歇作用方法历时9mo建立耐药细胞系Ec9706/cDDP,采用MTT法测定其对cDDP的耐药指数,观察冻存、撤药对耐药性的影响,比较耐药与亲本细胞生... 目的:建立人食管癌顺铂耐药细胞系Ec9706/cDDP,探讨其生物学特征.方法:采用顺铂(cDDP)中等浓度、间歇作用方法历时9mo建立耐药细胞系Ec9706/cDDP,采用MTT法测定其对cDDP的耐药指数,观察冻存、撤药对耐药性的影响,比较耐药与亲本细胞生长曲线、群体倍增时间及贴壁率的不同,流式细胞仪测细胞周期,软琼脂实验测细胞的恶性增殖能力,罗丹明实验测其对药物的摄入、排出能力.结果:人食管癌顺铂耐药细胞系Ec9706/cDDP的耐药指数为15.7,冻存对耐药性影响不大,撤药培养可使耐药性降低,耐药细胞群体倍增时间延长(29.79±0.48hvs25.79±0.45h,P<0.05),生长缓慢,G0/G1、S期细胞比例增加(63.18%±5.21%vs52.81%±4.36%,P<0.05;36.49%±3.93%vs26.70%±2.62%,P<0.05),G2期细胞减少(0.33%±0.02%vs20.49%±3.71%,P<0.05),克隆形成率明显高于亲本细胞(69%vs24%,P<0.05),对罗丹明的摄入减少,排出增多.结论:成功建立了人食管癌顺铂耐药细胞系Ec9706/cDDP,且耐药性较稳定. 展开更多

关键词 食管癌 耐药细胞系 顺铂 细胞周期 四甲基偶氮唑蓝 流式细胞术

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Expression of cyclooxygenase-2 mRNA in drug-sensitive cell and drug-resistant strains of ovarian cancer cell lines

5

作者 Xiaoyan Li Zehua Wang 《Journal of Nanjing Medical University》 2006年第1期52-54,共3页

Objective： To investigate the expression of cyclooxygenase-2 （COX-2） mRNA in drug-sensitive cell and drugresistant clones of ovarian cancer cell lines. Methods： RT-PCR and immunocytochemistry were used to investig... Objective： To investigate the expression of cyclooxygenase-2 （COX-2） mRNA in drug-sensitive cell and drugresistant clones of ovarian cancer cell lines. Methods： RT-PCR and immunocytochemistry were used to investigate the expression of cyclooxygenase-2 in 3 clones drug-sensitive and 5 clones drug-resistant ovarian cancer cell. Results： Strong COX-2 mRNA expressions were detected in 3 clones of drug-sensitive cell and weak expressions were detected in 5 clones of drug-resistant cell. The protein expression of COX-2 in drug-sensitive cell was strongly positive reaction in immunocytochemistry stain and there was a weak positive reaction in 5 clones of drug-resistant cell. Conclusion： The expression of COX-2 mRNA in drug-sensitive cell strains is much higher than that in drugresistant strains of ovarian cancer cell lines, providing a basis of the chemoprevention for ovarian cancer. 展开更多

关键词 ovarian cancer cell lines drug-sensitive cell strains drug-resistant strains cyclooxygelmse-2

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Shh和Gli-1在人乳腺癌MCF-7耐药细胞株中的表达及意义 被引量：2

6

作者 刘瑞娟 臧传鑫 +2 位作者 孙月 韩娜娜 孙长岗 《临床肿瘤学杂志》 CAS 2016年第4期289-292,共4页

目的研究Shh和Gli-1在人乳腺癌耐药株中的表达情况,探讨Hedgehog信号通路与乳腺癌耐药的关系。方法高浓度间歇诱导法建立人乳腺癌耐药细胞株MCF-7/PTX,MTT法检测紫杉醇(PTX)对MCF-7与MCF-7/PTX细胞的半数抑制浓度(IC_(50))。实时定量PCR... 目的研究Shh和Gli-1在人乳腺癌耐药株中的表达情况,探讨Hedgehog信号通路与乳腺癌耐药的关系。方法高浓度间歇诱导法建立人乳腺癌耐药细胞株MCF-7/PTX,MTT法检测紫杉醇(PTX)对MCF-7与MCF-7/PTX细胞的半数抑制浓度(IC_(50))。实时定量PCR(QPCR)检测MCF-7、MCF-7/PTX细胞中Shh、Gli-1 mRNA的表达。Western blotting检测MCF-7、MCF-7/PTX细胞中Shh、Gli-1蛋白的表达。结果 PTX对MCF-7细胞的IC_(50)为(0.10±0.02)mg/L,对MCF-7/PTX细胞的IC_(50)为(5.30±0.01)mg/L;耐药指数为53.0。Shh mRNA在MCF-7、MCF-7/PTX细胞中的表达量分别为0.78±0.12和1.45±0.56(P<0.01);Gli-1 mRNA在MCF-7、MCF-7/PTX细胞中的表达量分别为1.86±0.02和3.56±0.26(P<0.01)。Shh蛋白在MCF-7、MCF-7/PTX细胞中的表达量分别为0.58±0.06和1.03±0.22(P<0.01);Gli-1蛋白在MCF-7、MCF-7/PTX细胞中的表达量分别为1.17±0.12和2.78±0.09(P<0.01)。结论人乳腺癌耐药细胞株MCF-7/PTX高表达Shh、Gli-1,化疗药物可能通过上调Hedgehog信号通路相关蛋白及基因介导乳腺癌耐药,针对该信号通路的靶向治疗将是克服乳腺癌耐药的一个新的选择。 展开更多

关键词 乳腺癌 耐药细胞株 HEDGEHOG信号通路 SHH Gli-1

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TopoⅡ与胶质瘤替莫唑胺化疗耐药性的关系

7

作者 杨吉安 郭振涛 +4 位作者 喻军华 刘宝辉 吴立权 田道锋 陈谦学 《中国神经肿瘤杂志》 2012年第1期6-9,共4页

背景与目的:TopoⅡ与替莫唑胺(temozolomide,TMZ)治疗胶质瘤后产生化疗耐药的关系依然未清楚,本文探讨拓扑异构酶Ⅱ(topoⅡ)与胶质瘤细胞替莫唑胺化疗耐药性的关系。方法:替莫唑胺诱导构建耐药细胞株U251/TR,CCK-8法检测该细胞株的耐药... 背景与目的:TopoⅡ与替莫唑胺(temozolomide,TMZ)治疗胶质瘤后产生化疗耐药的关系依然未清楚,本文探讨拓扑异构酶Ⅱ(topoⅡ)与胶质瘤细胞替莫唑胺化疗耐药性的关系。方法:替莫唑胺诱导构建耐药细胞株U251/TR,CCK-8法检测该细胞株的耐药性,RT-PCR法检测topoⅡ在U251和U251/TR中的表达变化。采用siRNA技术沉默耐药细胞株中topoⅡ的表达后,检测其对化疗药物敏感性变化。结果:成功构建TMZ耐药细胞株U251/TR,该细胞系对替莫唑胺有耐药性,其topoⅡ的表达明显升高,沉默topoⅡ的表达后,耐药性成功逆转。结论:TopoⅡ与替莫唑胺化疗耐药性有关。 展开更多

关键词 topoⅡ 替莫唑胺 耐药细胞株

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穿琥宁对大肠癌HCT-8/5-FU耐药细胞株逆转作用的研究 被引量：14

8

作者 韩英 布利民 +2 位作者 纪欣 刘春艳 王志红 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期404-407,共4页

目的:探讨中药制剂穿琥宁对HCT-8/5-FU多药耐药细胞株的影响。方法:观察0.4,1.2和2.4mg·mL-1穿琥宁作用下的HCT-8/5-FU多药耐药细胞株生长曲线,MTT法检测上述浓度下的细胞抑制率。MTT法、流式细胞仪PI染色法检测穿琥宁与化疗药物5... 目的:探讨中药制剂穿琥宁对HCT-8/5-FU多药耐药细胞株的影响。方法:观察0.4,1.2和2.4mg·mL-1穿琥宁作用下的HCT-8/5-FU多药耐药细胞株生长曲线,MTT法检测上述浓度下的细胞抑制率。MTT法、流式细胞仪PI染色法检测穿琥宁与化疗药物5-氟尿嘧啶(5-FU)、顺铂(DDP)和阿霉素(ADM)联合作用下,对HCT-8-5-FU耐药细胞的毒性作用和凋亡率。流式细胞仪罗丹明染色法和PI染色法探讨穿琥宁的作用机制。结果:0.4mg·mL-1穿琥宁生长曲线与正常对照组无明显差别,1.2mg·mL-1穿琥宁对细胞生长有轻度抑制作用,2.4mg·mL-1浓度有一定抑制,但细胞仍可生长。MTT法检测0.4,1.2,2.4mg·mL-1穿琥宁作用下,HCT-8/5-FU耐药细胞株的抑制率分别为7.2%,13.2%,21%。1.2mg·mL-1穿琥宁与5-FU,DDP,AMD联合作用,与这3种化疗药物单独作用比较细胞凋亡率分别为54.2%/26.4%;42.6%/13.6%;30.8%/14.2%,差异显著(P<0.01)。罗丹明染色法提示穿琥宁的作用机制可能与影响P-170的活性有关。但穿琥宁本身并不诱导凋亡,对细胞周期也无影响。结论:低浓度穿琥宁对HCT-8/5-FU细胞无明显抑制作用;与5-FU,ADM,DDP联合作用,可增加上述化疗药物的毒性作用,使肿瘤细胞的凋亡率增高,其机制可能与抑制P-170功能有关。 展开更多

关键词 HCT-8/5-FU耐药细胞株 穿琥宁 大肠癌 P-170蛋白

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异搏定与它莫西芬联合逆转高三尖杉酯碱耐药的体外研究 被引量：13

9

作者 韩俊领 严文伟 +7 位作者 钱其军 韩明哲 邱录贵 施红 李成文 李新 齐静 冯四洲 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1997年第3期143-146,共4页

目的：降低逆转剂的毒副作用，提高耐药的逆转效果。方法：用异搏定（ＶＥＲ）和它莫西芬（ＴＡＭ）单独或联合体外逆转高三尖杉酯碱（ＨＨＴ）耐药，药敏试验采用半固体琼脂集落培养法。结果：ＶＥＲ和ＴＡＭ单独或联合均不能增强ＨＨ... 目的：降低逆转剂的毒副作用，提高耐药的逆转效果。方法：用异搏定（ＶＥＲ）和它莫西芬（ＴＡＭ）单独或联合体外逆转高三尖杉酯碱（ＨＨＴ）耐药，药敏试验采用半固体琼脂集落培养法。结果：ＶＥＲ和ＴＡＭ单独或联合均不能增强ＨＨＴ对Ｋ５６２敏感细胞的杀伤；而在ＨＨＴ耐药细胞株（Ｋ５６２／Ｈ２０）中，无细胞毒性剂量４μｍｏｌ／Ｌ和８μｍｏｌ／Ｌ的ＶＥＲ或ＴＡＭ均能明显逆转Ｋ５６２／Ｈ２０细胞对ＨＨＴ的耐药，ＩＣ５０由４４６．８±０．０８μｇ／Ｌ分别下降为４５．１±０．０２，２２．４±０．０３或８５．１±０．０３，２６．４±０．０２μｇ／Ｌ。采用临床可达到血药浓度的２μｍｏｌ／ＬＶＥＲ与４和８μｍｏｌ／ＬＴＡＭ联合，耐药细胞的ＩＣ５０分别降为３０．４±０．０２和４．３±０．０４μｇ／Ｌ，后者的ＩＣ５０与敏感株相近。以恒定浓度比ＶＥＲ与ＴＡＭ联合（１∶４）逆转ＨＨＴ耐药，联合指数值均＜１，有明显的协同作用。结论：单独使用ＶＥＲ或ＴＡＭ仅能部分逆转耐药，两者联合有明显的协同作用。 展开更多

关键词 异搏定 它莫西芬 逆转 高三尖杉酯碱 耐药性

原文传递

沉默多药耐药基因逆转大肠癌耐药细胞株LoVo/5-氟尿嘧啶细胞耐药性研究 被引量：1

10

作者 王尧 陈艳红 陈宏 《中华实用诊断与治疗杂志》 2015年第12期1170-1172,共3页

目的探讨沉默多药耐药基因(multi-drug resistance 1,MDR1)对大肠癌耐药细胞株LoVo/5-氟尿嘧啶(fluorouracil,Fu)细胞耐药性的逆转作用。方法将MDR1逆转的大肠癌耐药细胞株LoVo/5-Fu细胞分为EASYshRNA-MDR1(实验组)、shRNA-control(对... 目的探讨沉默多药耐药基因(multi-drug resistance 1,MDR1)对大肠癌耐药细胞株LoVo/5-氟尿嘧啶(fluorouracil,Fu)细胞耐药性的逆转作用。方法将MDR1逆转的大肠癌耐药细胞株LoVo/5-Fu细胞分为EASYshRNA-MDR1(实验组)、shRNA-control(对照质粒组)和normal(未转染组),3组采用MTT法检测细胞对氟尿嘧啶的敏感性,采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,采用RT-PCR法检测细胞MDR1mRNA表达水平,采用ELISA法检测细胞P-糖蛋白水平,比较3组半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)、耐药指数(resistance index,RI)、MDR1mRNA和P糖蛋白表达水平、对氟尿嘧啶的敏感性相对逆转率和细胞凋亡率。结果实验组IC50[(2.197±0.245)g/L]、RI(4.980)、MDR1 mRNA表达水平[(7.380±1.501)×107拷贝/μg]、P-糖蛋白表达水平[(46.569±4.200)%]低于未转染组[(7.283±0.461)g/L、15.221、(8.891±1.362)×108拷贝/μg、(97.810±1.921)%]和对照质粒组[(7.012±0.027)g/L、14.928、(7.346±1.201)×108拷贝/μg、(95.301±2.334)%](P<0.05),对5-Fu的敏感性相对逆转率(72.2%)、细胞凋亡率[(20.904±0.493)%]高于未转染组[0、(6.215±0.721)%]和对照质粒组[3.2%、(6.580±0.188)%](P<0.05);未转染组与对照质粒组各指标比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 RNA干扰可明显抑制P-糖蛋白表达,降低LoVo/5-Fu细胞对药物的耐药性,通过促进细胞凋亡和在mRNA环节中表达而降低耐药性。 展开更多

关键词 多药耐药基因 大肠癌耐药细胞株 耐药性

原文传递

白藜芦醇对膀胱癌耐药细胞株BIU-87/ADM自噬影响的实验研究 被引量：1

11

作者 郭树平 钟振洲 刘金星 《药品评价》 CAS 2018年第19期31-33,共3页

目的:探讨白藜芦醇对膀胱癌耐药细胞株BIU-87/ADM自噬的影响。方法:分别建立浓度为12.5μmol/L、25.0μmol/L、50.0μmol/L与100μmol/L的白藜芦醇制备品,并以未加药人膀胱癌BIU-87/ADM细胞作为对照。通过CCK-8法检测对照组及不同浓度... 目的:探讨白藜芦醇对膀胱癌耐药细胞株BIU-87/ADM自噬的影响。方法:分别建立浓度为12.5μmol/L、25.0μmol/L、50.0μmol/L与100μmol/L的白藜芦醇制备品,并以未加药人膀胱癌BIU-87/ADM细胞作为对照。通过CCK-8法检测对照组及不同浓度梯度白藜芦醇对膀胱癌耐药细胞株BIU-87/ADM增殖的影响,应用RT-PCR法测定白藜芦醇处理前后膀胱癌耐药细胞株BIU-87/ADM LC-3和Beclin 1 mRNA的表达水平,并以Wester blot检测白藜芦醇作用后LC-3Ⅱ蛋白的表达水平。结果:加入白藜芦醇试验组BIU-87/ADM细胞24h与48h生长抑制率均明显高于对照组,其48h生长抑制率明显高于24h生长抑制率,具有统计学意义(P<0.05),白藜芦醇浓度越高其细胞生长抑制率越高。加入白藜芦醇试验组BIU-87/ADM细胞的细胞凋亡率明显高于对照组,具有统计学意义(P<0.05),白藜芦醇浓度越高其细胞凋亡率越高。白藜芦醇干预后LC3-Ⅱ与Beclin 1 mRNA表达明显减弱,而白藜芦醇浓度越高其表达减弱程度越明显。结论:白藜芦醇能够明显减少耐药细胞株BIU-87/ADM保护性自噬,抑制膀胱癌耐药细胞增殖,促进耐药细胞凋亡。 展开更多

关键词 膀胱癌 耐药细胞株BIU-87/ADM 自噬 白藜芦醇

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CIK细胞联合多西紫杉醇对肺腺癌耐药细胞SPC-A1/DTX的体内外杀伤作用的实验研究 被引量：8

12

作者 刘鹏英 陈龙邦 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1079-1083,共5页

目的:探讨正常人细胞因子诱导的杀伤(Cytokine induced-killer,CIK)细胞联合多西紫杉醇对肺腺癌多西紫杉醇耐药细胞SPC-A1/DTX的体内外杀伤作用。方法:取健康人外周血单个核细胞,经IFN-γ、IL-2、抗CD3单抗联合诱导CIK细胞,用四甲基偶... 目的:探讨正常人细胞因子诱导的杀伤(Cytokine induced-killer,CIK)细胞联合多西紫杉醇对肺腺癌多西紫杉醇耐药细胞SPC-A1/DTX的体内外杀伤作用。方法:取健康人外周血单个核细胞,经IFN-γ、IL-2、抗CD3单抗联合诱导CIK细胞,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定多西紫杉醇、CIK细胞及两者联合对耐药细胞SPC-A1/DTX体外的细胞毒活性。用肺腺癌耐药细胞SPC-A1/DTX建立裸鼠皮下移植瘤模型,2周后腹腔给予生理盐水(对照组)、多西紫杉醇(单纯化疗组)、CIK细胞和CIK细胞联合多西紫杉醇(联合治疗组),观察它们对裸鼠移植瘤生长的抑制作用。结果:体外实验表明,SPC-A1/DTX对多西紫杉醇的耐受性(IC50为110.5μg/ml)较亲代敏感株SPC-A1(IC50为8.5μg/ml)增加了13倍。CIK细胞对人肺腺癌多西紫杉醇耐药细胞SPC-A1/DTX的杀伤活性,明显高于其亲代敏感株SPC-A1(P<0.05)。经CIK细胞作用后的SPC-A1/DTX细胞,仅10μg/ml的DTX即可使CIK:SPC-A1/DTX效靶比为5:1组中的联合杀伤率比单纯加DTX(同等剂量)组增加6.1倍,比单纯加CIK(相同效靶比)细胞杀伤率增加1.4倍,联合杀伤率的大小随效靶细胞比值和DTX浓度的升高呈依赖性增加。体内实验表明,CIK细胞联合多西紫杉醇可明显抑制裸鼠皮下肺腺癌耐药细胞移植瘤的生长,联合治疗组肿瘤生长缓慢,肿瘤组织坏死、淋巴细胞浸润明显。结论:CIK细胞联合多西紫杉醇能够显著抑制体内外肺腺癌多药耐药细胞SPC-A1/DTX的生长,为临床上应用CIK细胞联合化疗治疗放、化疗等无效的中晚期耐药肺癌患者提供了实验依据。 展开更多

关键词 肺癌 多药耐药 过继性细胞免疫治疗 细胞因子诱导的杀伤细胞 肺腺癌耐药细胞系SPC-A1/DTX

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人大肠癌HCT-8/5-FU耐药细胞株的建立及P-gp测定 被引量：5

13

作者 布立民 孙淑红 +3 位作者 华建平 韩英 赖靖 鲍文漪 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2006年第21期2082-2086,共5页

目的：建立人大肠癌多药耐药细胞株HCT-8/5- FU及并对其耐药机制进行探讨．方法：先采用较大剂量间歇诱导法进行筛选,再采用浓度梯度递增法作用,历时7mo,至HCT8细胞可长期在5-FU浓度为2．0mg/L的细胞培养液中稳定生长．电镜、HE染色观察... 目的：建立人大肠癌多药耐药细胞株HCT-8/5- FU及并对其耐药机制进行探讨．方法：先采用较大剂量间歇诱导法进行筛选,再采用浓度梯度递增法作用,历时7mo,至HCT8细胞可长期在5-FU浓度为2．0mg/L的细胞培养液中稳定生长．电镜、HE染色观察2种细胞形态结构差异．体外细胞毒性实验观察他对5-FU ADM,DDP的耐药性．绘制亲本细胞和耐药细胞的体外生长曲线．罗丹明染色法检测其两种细胞P-gp功能表达．结果：HCT-8细胞株经7mo诱导,可在5-FU 2．0 g/L的培养液中稳定增殖,具有多药耐药性,命名为HCT-8/5-FU,该细胞株对5-FU的耐药指数为16．6,并对ADM,DDP有交叉耐药性．该细胞株体外群体倍增时间与亲本细胞差别不显著．HE染色观察耐药细胞胞体较亲本细胞大,细胞核不规则,可见双核、多形核,细胞形态不规则,呈多角形、细长形改变,可见巨核细胞．透射电镜下耐药细胞胞质内线粒体、内质网、溶酶体增多．流式细胞仪罗丹明染色法观察荧光强度曲线左移,提示耐药细胞有过度P-gp表达．结论：成功建立HCT-8/5-FU多药耐药细胞株．先采用较大剂量间歇诱导进行筛选,再采用浓度梯度递增法作用是诱导大肠癌耐药细胞株的较好方式．HCT-8/5-FU细胞株的耐药机制与P-糖蛋白表达有关． 展开更多

关键词 肿瘤细胞 细胞培养 大肠癌 耐药细胞株 多药耐药 P-糖蛋白

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Hedgehog信号通路相关蛋白在人胰腺癌SW1990耐药株中的表达及意义 被引量：4

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作者 姚捷 安勇 +7 位作者 卫积书 李强 吴峻立 蒋奎荣 戴存才 钱祝银 徐泽宽 苗毅 《外科理论与实践》 2012年第3期248-251,共4页

目的:探讨Hedgehog信号通路蛋白在人胰腺癌吉西他滨耐药细胞株SW1990中的表达,为克服胰腺癌获得性耐药提供实验基础。方法:采用浓度梯度递增法建立人胰腺癌SW1990耐药株,采用噻唑蓝法测定SW1990亲代与耐药细胞IC50。实时荧光定量PCR检... 目的:探讨Hedgehog信号通路蛋白在人胰腺癌吉西他滨耐药细胞株SW1990中的表达,为克服胰腺癌获得性耐药提供实验基础。方法:采用浓度梯度递增法建立人胰腺癌SW1990耐药株,采用噻唑蓝法测定SW1990亲代与耐药细胞IC50。实时荧光定量PCR检测亲代与耐药细胞mRNA中hedgehog信号通路成员Shh、SMO、Gli-1的表达差异。Western印迹法检测亲代与耐药细胞中上述蛋白质的表达。结果:人胰腺癌耐药株SW1990的IC50从亲代的(3.1±0.2)μmol/L提高到(232.2±12.3)μmol/L。荧光定量PCR结果显示耐药株中Shh、Gli-1的表达提高了(12.07±1.71)倍和(4.15±0.42)倍。亲代SW1990中未检测到SMO表达,而耐药细胞中却可以检测到SMO的表达。Western印迹结果同样显示,人胰腺癌SW1990耐药细胞株中高表达上述蛋白质。结论:人胰腺癌耐药株中高表达部分hedgehog信号通路蛋白。针对hedgehog信号通路的靶向治疗可能为克服胰腺癌耐药提供新的理论基础。 展开更多

关键词 胰腺癌 耐药细胞株 HEDGEHOG信号通路

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反义RelA下调白血病耐药细胞株HL-60/E6 bcl-x_L mRNA 被引量：3

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作者 曹文静 张瑶珍 +3 位作者 张东华 邹萍 李登举 唐锦治 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2001年第4期294-297,共4页

为了探讨NF κB对白血病耐药细胞株HL 6 0 E6bcl x基因转录的影响 ,首先在体外采用间歇小剂量表阿霉素 (6ng ml)作用于HL 6 0细胞的方法 ,建立了性能稳定的广谱耐药细胞株HL 6 0 E6。然后用RT PCR方法检测 5 μmol L硫代修饰反义R... 为了探讨NF κB对白血病耐药细胞株HL 6 0 E6bcl x基因转录的影响 ,首先在体外采用间歇小剂量表阿霉素 (6ng ml)作用于HL 6 0细胞的方法 ,建立了性能稳定的广谱耐药细胞株HL 6 0 E6。然后用RT PCR方法检测 5 μmol L硫代修饰反义RelA作用于HL 6 0 E6细胞后bcl x基因mRNA水平的变化。同时应用免疫荧光技术和流式细胞术分别对HL 6 0 E6细胞中NF κB RelA的功能状态及脂质体作为寡核苷酸载体的转染效率进行评估。结果表明 ,在HL 6 0 E6细胞中RelA表达于胞核 ,NF κB处于持续活化状态。脂质体介导的寡核苷酸 (ODN)的转染效率明显高于裸ODN组 ,在 4 ,6和12小时时有显著差异 (P <0 .0 1)。反义RelA作用于HL 6 0 E6细胞后 ,bcl xL mRNA水平下降呈时间依赖性 ,8小时抑制达到最高峰 ,15小时后逐渐恢复 ,而对照组bcl xL mRNA水平变化不明显。分析结果认为 ,NF κB对bcl x有转录调节作用 ,反义技术封闭RelA亚基可以减弱NF κB对bcl xL 基因的转录激活 ,进而推测NF κB可能是白血病细胞耐药的一个重要因子。 展开更多

关键词 HL-60细胞系 E6细胞系 反义RelA bcl-xLmRNA 白血病耐药细胞株 免疫荧光技术

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雷公藤红素逆转宫颈癌细胞顺铂耐药性实验研究 被引量：4

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作者 孙菊萍 姜凯 《浙江中西医结合杂志》 2016年第7期622-626,共5页

目的研究中药活性成分雷公藤红素逆转耐药宫颈癌细胞株Hela/R对顺铂的耐药性,并探讨其机制。方法采用顺铂梯度暴露法构建顺铂耐药宫颈癌细胞株Hela/R;采用MTT法检测雷公藤红素是否能增强顺铂对Hela/R的杀伤活性;Western blot试验检测常... 目的研究中药活性成分雷公藤红素逆转耐药宫颈癌细胞株Hela/R对顺铂的耐药性,并探讨其机制。方法采用顺铂梯度暴露法构建顺铂耐药宫颈癌细胞株Hela/R;采用MTT法检测雷公藤红素是否能增强顺铂对Hela/R的杀伤活性;Western blot试验检测常规Hela细胞及Hela/R细胞抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-w及Bcl-xl表达水平;流式细胞术检测雷公藤红素联合顺铂对Hela/R细胞的凋亡诱导效应及对线粒体膜电位的影响。结果 1、2、4、8、16、32、64μmol/L顺铂对Hela及Hela/R细胞的细胞活力抑制率分别为:(18.6±1.5)%(Hela),(1.9±1.0)%(Hela/R);(23.9±2.4)%(Hela),(3.1±1.2)%(Hela/R);(47.8±3.9)%(Hela),(6.8±1.5)%(Hela/R);(63.4±5.4)%(Hela),(11.6±1.8)%(Hela/R);(72.7±5.9)%(Hela),(20.4±2.0)%(Hela/R),(85.7±6.7)%(Hela),(41.2±3.3)%(Hela/R);(91.8±7.9)%(Hela),(55.8±4.3)%(Hela/R),两组比较,P均<0.05。2μmol/L雷公藤红素对Hela/R细胞的细胞活力抑制率为(6.6±1.1)%;2μmol/L雷公藤红素分别加10、20、40μmol/L顺铂组Hela/R细胞的细胞活力抑制率优于单用10、20、40μmol/L顺铂组[(57.2±3.9)%比(12.4±1.2)%、(71.4±5.1)%比(27.8±1.9)%、(84.8±6.8)%比(45.2±3.1)%,P<0.05]。Hela/R细胞Bcl-w/β-actin表达水平高于Hela细胞[(70.9±4.9)比(22.1±1.3),P<0.05],Bcl-2/β-actin与Bcl-xl/β-actin表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,雷公藤红素可明显抑制Hela/R细胞Bcl-w/β-actin的表达[(29.3±2.6)比(68.9±4.5),P<0.05]。雷公藤红素增强顺铂对Hela/R细胞线粒体膜电位的损伤,促进细胞色素C的释放,而诱导Hela/R细胞发生凋亡。结论雷公藤红素体外能提高顺铂对耐药宫颈癌细胞的杀伤活性,其机制可能为通过抑制Bcl-w表达,提高促凋亡蛋白的活性,进而促进耐药宫颈癌细胞发生线粒体途径的凋亡。 展开更多

关键词 耐药宫颈癌细胞株 顺铂 Hela/R 雷公藤红素 BCL-W 线粒体 凋亡

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人骨肉瘤耐药细胞系MG-63/PTX的建立及多药耐药机制研究 被引量：1

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作者 纪振钢 李钊 +8 位作者 韩忠孝 裘秀春 胡运生 陈翔 马保安 周勇 马琼 赵艳立 范清宇 《中国骨肿瘤骨病》 2011年第3期270-276,共7页

目的建立人骨肉瘤细胞多药耐药亚系,探讨骨肉瘤细胞多药耐药的发生机制。方法采用紫杉醇大剂量间断冲击培养法,诱导建立紫杉醇耐药骨肉瘤细胞系(MG-63/PTX),并运用MTT法检测6种药物敏感性变化及细胞生长规律变化,流式细胞仪分析亲本细... 目的建立人骨肉瘤细胞多药耐药亚系,探讨骨肉瘤细胞多药耐药的发生机制。方法采用紫杉醇大剂量间断冲击培养法,诱导建立紫杉醇耐药骨肉瘤细胞系(MG-63/PTX),并运用MTT法检测6种药物敏感性变化及细胞生长规律变化,流式细胞仪分析亲本细胞系和耐药细胞系的细胞膜表面P-gp蛋白表达率、罗丹明123排出情况,RT-PCR检测细胞内耐药基因的变化,免疫细胞化学法检测细胞内P-gp蛋白的表达,Westernblotting法检测细胞内P-gp蛋白的表达。结果历时12个月建成人骨肉瘤耐药细胞系MG-63/PTX,能在含PTX1μg/mL的培养基中稳定生长并传代,其对PTX的耐药指数为69.8,并与卡铂、顺铂、表柔比星、甲氨蝶呤、阿霉素等多种化疗药物存在不同程度的交叉耐药性;罗丹明123排出实验显示MG-63/PTX内罗丹明含量明显低于亲本细胞;RT-PCR结果显示在MG-63/PTX细胞系中存在MDR1、MRP1、LRP、ABCG2基因的表达,而在MG-63细胞系中无MDR1基因的表达。免疫细胞化学、流式细胞仪及Western blotting实验均显示在MG-63/PTX中存在P-gp的表达。结论 MDR1/P-gp在多药耐药的特性上起着至关重要的作用,而且骨肉瘤多药耐药细胞亚系为进一步研究骨肉瘤耐药特征及逆转方法打下基础。 展开更多

关键词 骨肉瘤 耐药细胞系 多药耐药

原文传递

EGCG逆转人食管癌耐药细胞株Eca109/DDP多药耐药的实验研究

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作者 李映辉 《中国医药指南》 2013年第21期414-415,共2页

目的研究EGCG逆转人食管癌耐药株Eca109/DDP多药耐药的作用。方法采用MTT法测定药物的耐药逆转情况;Westernblot检测耐药相关蛋白的表达。结果 EGCG显著提高了DDP对耐药株Eca109/DDP的杀伤作用,EGCG可降低Eca109/DDP耐药相关蛋白的表达... 目的研究EGCG逆转人食管癌耐药株Eca109/DDP多药耐药的作用。方法采用MTT法测定药物的耐药逆转情况;Westernblot检测耐药相关蛋白的表达。结果 EGCG显著提高了DDP对耐药株Eca109/DDP的杀伤作用,EGCG可降低Eca109/DDP耐药相关蛋白的表达。结论 EGCG具有药物增敏和逆转食管癌耐药的作用。 展开更多

关键词 食管癌 耐药细胞株 EGCG 逆转耐药

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胃肠道间质瘤伊马替尼耐药细胞株的建立及细胞凋亡的实验研究

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作者 顾彬彬 叶丽萍 +3 位作者 方从诚 王俊 王超 吴坚芬 《医学研究杂志》 2017年第6期117-120,共4页

目的体外构建胃肠道间质瘤耐药细胞株GIST-882-IM,鉴定其生物学特性。方法采用首剂大剂量冲击和逐步增加剂量相结合的方法诱导胃肠道间质瘤细胞GIST-882对Imatinib耐药,建立耐药细胞株,CCK8法绘制细胞生长曲线,计算细胞的倍增时间及半... 目的体外构建胃肠道间质瘤耐药细胞株GIST-882-IM,鉴定其生物学特性。方法采用首剂大剂量冲击和逐步增加剂量相结合的方法诱导胃肠道间质瘤细胞GIST-882对Imatinib耐药,建立耐药细胞株,CCK8法绘制细胞生长曲线,计算细胞的倍增时间及半抑制浓度IC_(50),流式细胞仪检测GIST-882及耐药株GIST-882-IM细胞凋亡及细胞周期。结果耐药株GIST-882-IM的倍增时间为58.95±1.56h,高于细胞株GIST-882 49.49±0.69h,GIST-882-IM IC_(50)=1.869±0.103μmol,GIST-882 IC_(50)=0.054±0.001μmol,其耐药指数为34.62(P<0.01)。耐药细胞株GIST-882-IM相对于GIST-882,凋亡受到抑制,24、48、72h其细胞凋亡率分别为1.97%±0.38%、2.87%±0.38%、4.40%±0.36%,GIST-882凋亡率分别为6.07%±0.96%、11.17%±0.64%、16.97%±0.12%。细胞周期分析,耐药细胞株的G_0/G_1期增加,S期、G_2/M期减少。结论成功构建GIST882 Imatinib耐药细胞株,耐药细胞与非耐药细胞的生物学特性不同。这为下一步研究伊马替尼耐药机制和筛选伊马替尼耐药的替代靶向药物奠定基础。 展开更多

关键词 耐药细胞株 细胞生长曲线 耐药指数 细胞凋亡

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沉默HMGA2基因表达逆转急性髓细胞白血病耐药细胞株HL-60/DNR对柔红霉素耐药性的研究 被引量：1

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作者 于宝丹 郑润辉 李海明 《中国医药指南》 2020年第17期1-3,共3页

目的分析HMGA2基因对急性髓细胞白血病(AML)耐药细胞株HL-60/DNR对柔红霉素(DNR)耐药性的影响及机制。方法荧光定量PCR和western blot检测HMGA2的表达。通过转染HMGA2 siRNA(si-HMGA2)沉默HMGA2。CCK8实验检测DNR对HL-60/DNR细胞的抑制... 目的分析HMGA2基因对急性髓细胞白血病(AML)耐药细胞株HL-60/DNR对柔红霉素(DNR)耐药性的影响及机制。方法荧光定量PCR和western blot检测HMGA2的表达。通过转染HMGA2 siRNA(si-HMGA2)沉默HMGA2。CCK8实验检测DNR对HL-60/DNR细胞的抑制率。β-半乳糖苷酶活性检测试剂盒检测β-半乳糖苷酶活性。结果与野生型HL-60相比,HL-60/DNR中HMGA2 mRNA和蛋白的表达水平明显提高。DNR对cell组和si-NC组HL-60/DNR细胞的抑制率无明显差异。与si-NC组相比,DNR对si-HMGA2组HL-60/DNR细胞的抑制率显著提高。DNR对cell组、si-NC组和si-HMGA2组HL-60/DNR细胞的IC50分别为4.46μg/mL、4.67μg/mL和0.98μg/mL。cell组和si-NC组的β-半乳糖苷酶活性无明显差异;与si-NC组相比,si-HMGA2组HL-60/DNR细胞的β-半乳糖苷酶活性显著提高。结论HMGA2在耐药细胞HL-60/DNR中高表达,沉默HMGA2可以逆转HL-60/DNR的DNR耐药性并加速细胞的衰老。 展开更多

关键词 急性髓细胞白血病 沉默HMGA2基因 耐药细胞株HL-60/DNR 柔红霉素

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