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Disruption of the 1-deoxy-D-xylulose-5-phosphate reductoisomerase (DXR) gene results in albino, dwarf and defects in trichome initiation and stomata closure in Arabidopsis 被引量:19
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作者 Shufan Xing Jin Miao +5 位作者 Shuang Li Genji Qin Si Tang Haoni Li Hongya Gu Li-Jia Qu 《Cell Research》 SCIE CAS CSCD 2010年第6期688-700,共13页
1-Deoxy-D-xylulose-5-phosphate reductoisomerase (DXR) is an important enzyme involved in the 2-C-methyi-D- erythritol-4-phosphate (MEP) pathway which provides the basic five-carbon units for isoprenoid biosynthesi... 1-Deoxy-D-xylulose-5-phosphate reductoisomerase (DXR) is an important enzyme involved in the 2-C-methyi-D- erythritol-4-phosphate (MEP) pathway which provides the basic five-carbon units for isoprenoid biosynthesis. To investigate the role of the MEP pathway in plant development and metabolism, we carried out detailed analyses on a dxr mutant (GK_215C01) and two DXR transgenic co-suppression fines, OX-DXR-L2 and OX-DXR-L7. We found that the dxr mutant was albino and dwarf. It never bolted, had significantly reduced number of trichomes and most of the stomata could not close normally in the leaves. The two co-suppression lines produced more yellow inflorescences and albino sepals with no trichomes. The transcription levels of genes involved in tricbome initiation were found to be strongly affected, including GLABRA1, TRANSPARENT TESTA GLABROUS 1, TRIPTYCHON and SPINDLY, expression of which is regulated by gibberellic acids (GAs). Exogenous application of GA3 could partially rescue the dwarf phenotype and the trichome initiation of dxr, whereas exogenous application of abscisic acid (ABA) could rescue the stomata closure defect, suggesting that lower levels of both GA and ABA contribute to the phenotype in the dxr mutants. We further found that genes involved in the biosynthetic pathways of GA and ABA were coordinately regulated. These results indicate that disruption of the plastidial MEP pathway leads to biosynthetic deficiency of photosynthetic pigments, GAs and ABA, and thus the developmental abnormalities, and that the flux from the cytoplasmic mevalonate pathway is not sufficient to rescue the deficiency caused by the blockage of the plastidial MEP pathway. These results reveal a critical role for the MEP biosynthetic pathway in controlling the biosynthesis of isoprenoids. 展开更多
关键词 MEP pathway dxr trichome development stomata closure GA ABA
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枇杷DXR基因的克隆及其在果实成熟过程中的表达分析 被引量:10
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作者 张玲 林顺权 +2 位作者 胡又厘 郑婷婷 杨向晖 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期563-566,I0004,共5页
【目的】为了解枇杷(Eriobotrya japonica Lindl.)1-脱氧木酮糖-5-磷酸(DXP)还原异构酶基因(DXR)的序列特点及其在果实成熟过程的表达特性,【方法】以不同类型枇杷品种‘早钟6号’(红肉)和‘白玉’(白肉)不同成熟阶段的果肉和果皮为试材... 【目的】为了解枇杷(Eriobotrya japonica Lindl.)1-脱氧木酮糖-5-磷酸(DXP)还原异构酶基因(DXR)的序列特点及其在果实成熟过程的表达特性,【方法】以不同类型枇杷品种‘早钟6号’(红肉)和‘白玉’(白肉)不同成熟阶段的果肉和果皮为试材,采用RT-PCR结合RACE法和qRT-PCR方法对DXR基因进行了克隆,并对其在枇杷果实成熟过程中的表达进行了分析,【结果】枇杷DXR基因的cDNA序列全长1 743 bp,编码473个氨基酸,蛋白质相对分子质量(Mw)为51 299.8 Da,等电点(pI)为6.52(GenBank登录号:JX089590)。qRT-PCR分析表明,在枇杷果实成熟过程中,DXR在不同类型枇杷的不同时期表达不尽相同:在果皮中,‘早钟6号’品种的DXR基因在果实成熟的各个阶段的表现为表达量较为稳定,而在‘白玉’品种中,DXR基因的表达存在较为明显的先增加后降低的过程,其表达量在褪绿期达到最高。而在果肉中,无论是‘早钟6号’还是‘白玉’品种,DXR基因的表达从果实成熟过程中的未转色期到黄熟期表现为持续下降;到成熟期时,‘早钟6号’品种的DXR基因存在明显的上调现象,而在‘白玉’品种中则无此明显变化,【结论】DXR基因对于枇杷类胡萝卜素的合成没有限制作用,至少作用不明显。 展开更多
关键词 枇杷 果实 dxr 基因克隆 实时荧光定量PCR
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使用DxR Clinician软件对内科住院医师规范化培训临床思维能力评估初探 被引量:10
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作者 来蕾 陈柳莹 许轶洲 《中国毕业后医学教育》 2020年第5期469-472,共4页
目的通过临床思维训练软件DxR Clinician的训练及考核,培养住院医师正确的临床思维。方法选择在杭州市第一人民医院经过临床轮转2年或2年以上的内科住院医师25人,采用DxR Clinician软件,选择软件平台内符合该院实际情况的内科5大亚专科... 目的通过临床思维训练软件DxR Clinician的训练及考核,培养住院医师正确的临床思维。方法选择在杭州市第一人民医院经过临床轮转2年或2年以上的内科住院医师25人,采用DxR Clinician软件,选择软件平台内符合该院实际情况的内科5大亚专科病例进行为期5个周期的考核,对得分情况进行统计分析;在首次考核前和末次考核后进行相关问卷调查。结果该院住院医师临床思维能力评估不理想,尤其是正确决策方面(包括诊断表现、临床思维表现)欠佳;问卷调查结果显示,使用DxR Clinician软件考核后,住院医师对临床思维能力训练的重要性认知有所提高。结论使用DxR Clinician软件对住院医师进行临床思维能力的训练及考核能反映住院医师在正确决策(包括诊断表现和临床思维表现)存在不足,可结合该软件开发住院医师规范化培训新的教学模式。 展开更多
关键词 住院医师规范化培训 内科 dxr Clinician软件 临床思维 教学模式
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不同温度LED光萎凋对铁观音MEP上游关键基因和香气的影响 被引量:10
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作者 游芳宁 邓慧莉 +5 位作者 胡娟 姚知灵 武帅强 秦艺嘉 汤铜华 孙云 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期346-356,共11页
【目的】萜类化合物是乌龙茶挥发性芳香物质的重要组分,2-C-甲基-D-赤藓醇-4-磷酸途径(MEP)上游关键基因直接参与调控萜类化合物前体物质的合成。而乌龙茶香气的形成与萎凋工序密切相关,光照和温度是影响萎凋的重要因子,探讨LED光与温... 【目的】萜类化合物是乌龙茶挥发性芳香物质的重要组分,2-C-甲基-D-赤藓醇-4-磷酸途径(MEP)上游关键基因直接参与调控萜类化合物前体物质的合成。而乌龙茶香气的形成与萎凋工序密切相关,光照和温度是影响萎凋的重要因子,探讨LED光与温度在乌龙茶萎凋过程中对香气的影响,为提高乌龙茶萎凋叶香气品质提供参考。【方法】基于转录组数据,根据KEGG筛选出响应光照的MEP上游关键基因(DXS、DXR、HDS、HDR)。对一芽三叶铁观音鲜叶进行LED白光和不同温度(20℃(L20)、25℃(L25)、30℃(L30)、35℃(L35)和40℃(L40))萎凋处理,黑暗下温度(20℃(D20)、25℃(D25)、30℃(D30)、35℃(D35)和40℃(D40))萎凋处理;分别测定铁观音萎凋叶的香气组分和MEP上游关键基因的相对表达量。【结果】L30处理萎凋叶各基因表达量达到最大值,萜类基因(DXS、DXR、HDS、HDR)表达量分别为XY组(对照)的4.31、5.28、11.77、1.59倍,为D30处理的2.24、2.39、1.86和1.60倍。D30组各基因表达量为黑暗处理组最大,依次为XY组的1.92、2.21、6.34和0.99倍。L20处理萎凋叶的α-法呢烯芳樟醇氧化物(Ⅰ、Ⅱ)含量最高,较XY依次提高了15.05%、4.92%和15.13%;L30处理萎凋叶的橙花叔醇、芳樟醇和香叶醇含量最高,较XY组依次提高了3.71%、6.14%和15.28%;LED组铁观音萎凋叶主要香气组分含量均高于相对应的温度处理组。通过主成分分析法建立数学模型,对萎凋叶香气组分进行评估,得出L20组萎凋叶得分最高,L30组萎凋叶次之;与香气分析得出结果一致。【结论】铁观音萎凋叶基因表达量与香气含量的变化趋势不存在同步性;L30处理萎凋叶基因表达量、主要萜类香气物质含量和主成分分析得分均较高,这与铁观音生产上的萎凋温度相一致。萎凋温度过高(40℃)不利于萎凋叶萜类关键基因的表达和萜类化合物的形成。 展开更多
关键词 铁观音 萎凋 LED 温度 香气 DXS dxr HDS HDR 萜类化合物
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阳春砂HMGR和DXR在烟草中单独及共同过量表达调控萜类化合物的生物合成 被引量:5
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作者 王焕 魏洁书 +3 位作者 杨锦芬 詹若挺 陈蔚文 叶圆 《世界科学技术-中医药现代化》 北大核心 2014年第7期1513-1527,共15页
目的:HMGR和DXR分别是萜类生物合成途径——MVA和MEP途径的关键酶,本研究探讨阳春砂AvHMGR和AvDXR在转基因烟草中的过量表达对不同萜类化合物生物合成的影响。方法:采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术分析AvHMGR和AvDXR的表达水平,应用... 目的:HMGR和DXR分别是萜类生物合成途径——MVA和MEP途径的关键酶,本研究探讨阳春砂AvHMGR和AvDXR在转基因烟草中的过量表达对不同萜类化合物生物合成的影响。方法:采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术分析AvHMGR和AvDXR的表达水平,应用专一底物法测定HMGR和DXR的酶活性,利用气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术检测不同萜类化合物的变化。结果:AvHMGR或AvDXR单独过量表达抑制了HMGR和DXR的活性,提高了五针松烯、新植二烯、薄荷烯和甾醇的含量;而AvHMGR和AvDXR共同过量表达对不同植株中酶活性的影响有差异,提高了甾醇和植醇的含量,但抑制了新植二烯的积累。结论:AvHMGR和AvDXR单独或共同过量表达对烟草中不同萜类化合物的合成调控存在差异,同时也证明了MVA和MEP途径并不完全独立,而是有着相互交流,本研究为利用阳春砂AvHMGR和AvDXR进行萜类化合物的代谢调控提供了依据。 展开更多
关键词 阳春砂 HMGR dxr 过量表达 萜类化合物 生物合成 转基因烟草
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山鸡椒1-脱氧木酮糖-5-磷酸还原异构酶DXR基因的克隆和SNP分析 被引量:5
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作者 刘英冠 吴庆珂 +4 位作者 何关顺 汪阳东 杨素素 陈益存 高暝 《林业科学研究》 CSCD 北大核心 2015年第1期93-100,共8页
在转录组测序结果分析基础上,以山鸡椒c DNA为模板,克隆得到山鸡椒1-脱氧木酮糖-5-磷酸还原异构酶DXR基因c DNA全长,以山鸡椒基因组DNA为模板,设计引物、扩增拼接后获得山鸡椒DXR基因全长,命名为Lc DXR。序列分析表明,Lc DXR c DNA全长... 在转录组测序结果分析基础上,以山鸡椒c DNA为模板,克隆得到山鸡椒1-脱氧木酮糖-5-磷酸还原异构酶DXR基因c DNA全长,以山鸡椒基因组DNA为模板,设计引物、扩增拼接后获得山鸡椒DXR基因全长,命名为Lc DXR。序列分析表明,Lc DXR c DNA全长为1 501 bp,5’非编码区长34 bp,3’非编码区长53 bp,开放阅读框长1 413 bp,预测编码含有470个氨基酸残基的蛋白质,等电点为6.62,分子量为51.12 k D。Lc DXR基因全长为12 601bp,其中外显子12个,内含子11个。对来自10个种源的Lc DXR基因编码区单核苷酸变异位点进行分析表明:在c DNA区间内共发现10个SNP(single nucleotide polymorphism)位点,其中有4个单核苷酸变异导致了所编码的氨基酸的改变,为了分析氨基酸突变导致的蛋白质精细结构的变化,利用Swiss-PDB Viewer模拟4个突变位点氨基酸残基的替换。其中江西安远(AY)的突变Lys119Thr引起了氢键的变化,推测可能对酶的活性产生影响。研究结果为深入研究山鸡椒脱氧木酮糖5-磷酸还原异构酶的活性和功能奠定了基础,同时为山鸡椒遗传育种提供理论依据。 展开更多
关键词 山鸡椒 dxr 基因克隆 SNPS
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土沉香萜类合成相关DXS和DXR基因鉴定、进化和表达分析 被引量:1
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作者 陈国德 饶丹丹 +1 位作者 韩豫 陈彧 《分子植物育种》 CAS 北大核心 2024年第13期4240-4246,共7页
沉香精油是名贵树木沉香的香味来源,而沉香精油中的主要成分是萜类物质。挖掘沉香中萜类物质合成基因,有助于阐明沉香精油积累的分子机制。本研究聚焦萜类合成关键基因DXS和DXR,通过鉴定保守结构域,并鉴定含有相关保守结构域的基因,最... 沉香精油是名贵树木沉香的香味来源,而沉香精油中的主要成分是萜类物质。挖掘沉香中萜类物质合成基因,有助于阐明沉香精油积累的分子机制。本研究聚焦萜类合成关键基因DXS和DXR,通过鉴定保守结构域,并鉴定含有相关保守结构域的基因,最终通过系统发育分析,从土沉香中鉴定到相关基因。结构域鉴定结果表明,DXS和DXR基因的蛋白序列均含有3个保守结构域。聚类分析表明,包含DXS的Transket_pyr结构域的基因可分为6个枝,而包含DXR的XP_redisom_C结构域的基因仅为1枝。通过与参考基因组拟南芥的DXS和DXR比对,从土沉香中鉴定到了2个DXS基因和一个DXR基因。表达分析结果表明,DXS基因在沉香树干、叶、花和花苞中高表达,而DXR基因在各组织中均高表达,该结果表明DXS基因更有可能是沉香中萜类物质合成的关键基因。本研究中鉴定的DXS和DXR基因将为调控土沉香中沉香精油含量提供基础,相关研究结果将对沉香精油成分调控产生理论价值。 展开更多
关键词 沉香 精油 萜类物质 DXS dxr
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DxR Clinician模拟教学在血液科临床实践中的应用初探 被引量:4
8
作者 李冰 修冰 +4 位作者 杨军 陈毓华 吴继光 刘琦 李颖 《中国高等医学教育》 2022年第12期94-96,共3页
通过在血液科实施DxR Clinician(简称:DxR)模拟教学,了解医学生对其认可程度,评价其在血液内科实习中的教学效果。选择在同济大学附属同济医院的14级和15级74名实习学生为研究对象,该研究为前瞻性研究,从初期结果看,大部分学生对DxR模... 通过在血液科实施DxR Clinician(简称:DxR)模拟教学,了解医学生对其认可程度,评价其在血液内科实习中的教学效果。选择在同济大学附属同济医院的14级和15级74名实习学生为研究对象,该研究为前瞻性研究,从初期结果看,大部分学生对DxR模拟教学给予了肯定的评价,其作为一种教学方法的补充是可行的,但仍需要干预性验证。 展开更多
关键词 dxr Clinician 模拟教学 血液内科 临床实习 教学方式 教学改革 效果评估
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DXR调控番茄叶绿体发育、花色与果实着色机制初探
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作者 马星云 范冰丽 +4 位作者 唐光彩 贾芝琪 李营 薛东齐 张世文 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期1241-1255,共15页
在植物的生长发育过程中,类胡萝卜素对叶、花、果的着色有着重要影响,是果实发育过程中的主要色素物质。1–脱氧–D–木酮糖–5–磷酸还原异构酶基因(DXR)参与了类胡萝卜素的合成,构建番茄DXR基因编辑株系和超量表达株系,发现基因编辑... 在植物的生长发育过程中,类胡萝卜素对叶、花、果的着色有着重要影响,是果实发育过程中的主要色素物质。1–脱氧–D–木酮糖–5–磷酸还原异构酶基因(DXR)参与了类胡萝卜素的合成,构建番茄DXR基因编辑株系和超量表达株系,发现基因编辑株系叶片呈现黄色甚至白色,叶片的叶绿素含量和最大PSⅡ的光能转换效率显著降低,细胞叶绿体发育受到影响,类囊体数量减少;花瓣边缘白化,红熟期果实颜色变为橙色甚至黄色,果实番茄红素、类黄酮等含量有不同程度降低。而超量表达株系与野生型对照相比无明显差异,但可溶性固形物含量明显增多。通过转录组测序发现,SlDXR与类黄酮生物合成、类胡萝卜素生物合成等途径相关。推测SlDXR可能通过调控萜类化合物的合成来影响番茄果实着色。 展开更多
关键词 番茄 dxr 基因编辑 叶绿素 番茄红素 果实颜色
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DxR Clinician教学在全科专业规培学员临床思维能力培养中的作用 被引量:3
10
作者 宋浩明 曾小云 +4 位作者 王琛 李冰 刘琦 焦锐 李颖 《卫生职业教育》 2023年第22期85-88,共4页
于2022年1月31日至2023年2月28日,将同济大学附属同济医院的30名全科专业住院医师规范化培训学员以随机数字表法分为试验组和对照组,每组均为15人。试验组应用DxR Clinician(简称DxR)系统进行9次虚拟诊疗课程;对照组以CBL(基于病例的学... 于2022年1月31日至2023年2月28日,将同济大学附属同济医院的30名全科专业住院医师规范化培训学员以随机数字表法分为试验组和对照组,每组均为15人。试验组应用DxR Clinician(简称DxR)系统进行9次虚拟诊疗课程;对照组以CBL(基于病例的学习)病例讨论形式进行9次相应主题的讨论课。应用满意度调查表了解两组规培学员对各自授课方式的满意度情况,同时应用年度考核成绩评估教学效果。实践表明,应用DxR系统的教学形式有助于提高全科规培学员的临床思维能力和自主学习能力,值得在全科医师规范化培训中广泛推广。 展开更多
关键词 dxr Clinician 全科医学 住院医师规范化培训 临床思维能力
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DxR Clinician结合SP在医学生临床思维教学中的应用
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作者 陈喜 阮国竹 胡海岩 《科教导刊》 2024年第17期147-149,共3页
目的:探讨DxR Clinician虚拟教学结合标准化病人的教学方法在医学生临床思维教学中的应用效果。方法:选取海南医学院2020级临床新医科(1)班和(2)班,分为试验组和对照组,分别采用基于DxR Clinician虚拟教学结合标准化病人教学法和标准化... 目的:探讨DxR Clinician虚拟教学结合标准化病人的教学方法在医学生临床思维教学中的应用效果。方法:选取海南医学院2020级临床新医科(1)班和(2)班,分为试验组和对照组,分别采用基于DxR Clinician虚拟教学结合标准化病人教学法和标准化病人教学法,通过临床思维能力、医患沟通能力、心理状态来评价教学效果。结果:试验组学生的临床思维能力、医患沟通能力得分高于对照组;自我感知心理状态得分低于对照组。结论:DxR Clinician虚拟教学结合标准化病人教学方法,适用于三年级临床医学本科生诊断学教学,可有效地培养学生的问诊、临床思维能力,提升医患沟通能力、减轻学生医患沟通时的心理压力,值得在以后的教学中进一步推广使用。 展开更多
关键词 dxr Clinician 虚拟教学 标准化病人 临床思维
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DxR Clinician软件在神经内科护理实践中学生临床思维培养的应用评价
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作者 张元菊 朱菊训 范树腾 《卫生职业教育》 2024年第17期92-96,共5页
目的分析和探讨DxR Clinician软件在神经内科中护生临床思维培养的应用。方法选取神经内科86名实习护生作为研究对象,随机分为对照组和观察组。观察组实施DxR Clinician软件教学模式,对照组实施传统带教模式。分析两组护生的评判性思维... 目的分析和探讨DxR Clinician软件在神经内科中护生临床思维培养的应用。方法选取神经内科86名实习护生作为研究对象,随机分为对照组和观察组。观察组实施DxR Clinician软件教学模式,对照组实施传统带教模式。分析两组护生的评判性思维、临床决策能力、理论和操作考试成绩及满意度。结果观察组护生评判性思维的5个维度(创新能力、总结能力、认知能力、分析能力、自信能力)与对照组护生有显著差异;两组护生临床决策能力的4个方面(发现问题、决断方案能力、实施决策能力和评价反馈能力)有显著差异;观察组护生的理论和操作考试成绩高于对照组;两组护生对教学工作的满意度有差异。结论DxR Clinician软件让护生通过扮演临床护士进行角色职业训练,提高护生的评判性思维和临床决策能力;同时,应用此软件给护生带来身临其境的学习体验,提高了其临床知识储备量和满意度。 展开更多
关键词 dxr Clinician软件 临床思维 虚拟教学 评判性思维 临床决策能力 神经内科护理实践
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DXR+OSCE教学模式对提高本科护生临床综合能力的效果研究 被引量:3
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作者 尚娜娜 武玉洁 《中国高等医学教育》 2023年第10期23-24,共2页
目的:探讨采用DXR+OSCE教学模式对提高本科护生临床综合能力的效果研究。方法:采取整群抽样法抽取2017级与2018级的全体本科护生共840人。2017级作为对照组,采取传统教学模式;2018级作为试验组,采用DXR+OSCE教学模式;两级教学后进行相... 目的:探讨采用DXR+OSCE教学模式对提高本科护生临床综合能力的效果研究。方法:采取整群抽样法抽取2017级与2018级的全体本科护生共840人。2017级作为对照组,采取传统教学模式;2018级作为试验组,采用DXR+OSCE教学模式;两级教学后进行相同的考核,比较考核结果;并对试验组教学前后发放调查问卷。结果:试验组考核成绩明显高于对照组(P<0.05);问卷调查结果显示该教学模式能提高护生的思维能力、护患沟通能力。结论:DXR+OSCE教学模式能有效地提高本科护生的临床综合能力。 展开更多
关键词 dxr OSCE 本科护生 临床综合能力 批判性思维 沟通能力
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基于OBE理念的内科学课程考核评价模式探索 被引量:2
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作者 袁敦禄 杨晴 +3 位作者 李家青 聂静雯 周竹 李青 《继续医学教育》 2024年第1期29-32,共4页
随着医学教育改革深入进展,传统的内科学课程考核方式已不能满足当前医学人才培养的需求。目前内科学课程考核模式存在考核内容与学习成果联系不紧密,考核模式相对单一的困境。为克服以上短板,文章设计基于成果导向教育(outcomes-based ... 随着医学教育改革深入进展,传统的内科学课程考核方式已不能满足当前医学人才培养的需求。目前内科学课程考核模式存在考核内容与学习成果联系不紧密,考核模式相对单一的困境。为克服以上短板,文章设计基于成果导向教育(outcomes-based education,OBE)理念的内科学考核评价模式,融入“DxR Clinician临床思维训练测评”和“临床操作技能直接观察评估(direct observation of procedural skills,DOPS)”“客观结构化临床考试(objective structure clinical examination,OSCE)”“迷你临床演练评估(mini-clinical evaluation exercise,Mini-CEX)”等多种考核手段,建立考核标准化模块,这既符合新医科教学理念,又满足高层次临床医学教育特点,有利于加强理论与实践的结合,推进医学思维知识体系的构建,提升学生的综合素质,是一次对课程考核模式改革有益的教学尝试。 展开更多
关键词 成果导向教育 内科学 课程考核模式 dxr Clinician临床思维训练测评 临床操作技能直接观察评估 迷你临床演练评估
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杜仲1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶基因cDNA全长克隆与序列分析 被引量:3
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作者 刘攀峰 杜红岩 +2 位作者 乌云塔娜 黄海燕 朱高浦 《林业科学研究》 CSCD 北大核心 2012年第2期195-200,共6页
以杜仲叶片cDNA为模板,采用反转录RCR及RACE技术分离出DXR基因cDNA全长。序列分析结果表明该基因序列全长1 814 bp,共编码478个氨基酸,推导的蛋白质分子量为51.71 kD,理论等电点5.79,命名为EuD-XR。推导的EuDXR蛋白质序列具有植物DXR酶... 以杜仲叶片cDNA为模板,采用反转录RCR及RACE技术分离出DXR基因cDNA全长。序列分析结果表明该基因序列全长1 814 bp,共编码478个氨基酸,推导的蛋白质分子量为51.71 kD,理论等电点5.79,命名为EuD-XR。推导的EuDXR蛋白质序列具有植物DXR酶的5个典型基序,并预测出26个潜在的功能位点。系统进化树分析表明EuDXR蛋白与玉米、水稻亲缘关系最近,其次为橡胶、拟南芥、烟草。 展开更多
关键词 杜仲 dxr 基因 序列分析
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刚地弓形虫DXR基因的克隆表达与生物学特性分析 被引量:3
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作者 章莹 宗红英 +1 位作者 何立 蔡国斌 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1091-1095,共5页
目的对刚地弓形虫1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构化酶(TgDXR)基因进行克隆、表达、纯化和生物学特性分析。方法收集、纯化RH株弓形虫速殖子,提取cDNA和基因组DNA;PCR扩增TgDXR的基因片段;构建成熟TgDXR/pET-24b重组原核表达载体;经双... 目的对刚地弓形虫1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构化酶(TgDXR)基因进行克隆、表达、纯化和生物学特性分析。方法收集、纯化RH株弓形虫速殖子,提取cDNA和基因组DNA;PCR扩增TgDXR的基因片段;构建成熟TgDXR/pET-24b重组原核表达载体;经双酶切、PCR及测序鉴定阳性克隆;在大肠杆菌BL21中用IPTG诱导表达。亲和层析纯化重组TgDXR蛋白,并对该蛋白的生物学特性和酶的动力学活性进行分析。结果从弓形虫RH株的cDNA和基因组DNA中分别扩增出长度为1 542bp和5 464bp的TgDXR片段,成功构建重组质粒;SDS-PAGE结果表明,目的基因在大肠杆菌中高效表达。重组蛋白的相对分子量约50kDa。酶活性实验显示,Mg2+、Mn2+是最佳金属螯合离子,反应最佳pH值为7.5,该酶活性抑制剂膦胺霉素(Fosmidomycin)对该酶蛋白的IC50为0.52μmol/L。结论 RH株刚地弓形虫TgDXR可在原核表达系统中高效表达,该重组蛋白具有生物学活性,并有望作为弓形虫特异性药物靶标。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 dxr 克隆表达 膦胺霉素
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延迟性异种移植排斥反应的病理特征及IgG的作用 被引量:4
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作者 黄平 姚榛祥 +3 位作者 杨光伦 魏正强 杜成友 董蒲江 《中华外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期395-397,T002,共4页
目的 利用小鼠→大鼠心脏移植模型 ,探讨延迟性异种移植排斥反应 (DXR)的病理特征及IgG的作用。 方法 将移植大鼠随机分成 4组 :对照组 (A组 ,n =6 ) ;环孢素A(CsA)组 (B组 ,n=6 ) ,CsA每 2日用药 1次 ,每次 2 0mg/kg ,自移植当日 (d... 目的 利用小鼠→大鼠心脏移植模型 ,探讨延迟性异种移植排斥反应 (DXR)的病理特征及IgG的作用。 方法 将移植大鼠随机分成 4组 :对照组 (A组 ,n =6 ) ;环孢素A(CsA)组 (B组 ,n=6 ) ,CsA每 2日用药 1次 ,每次 2 0mg/kg ,自移植当日 (day 0 )起使用 ;环磷酰胺 (CyP)组 (C组 ,n =6 ) ,移植前 1d给予CyP 40mg/kg ,自移植后第 1天起每 2日用药 1次 ,每次 2 0mg/kg ;CsA加CyP组 (D组 ,n =5 )。血清IgG水平用ELISA法测定 ;C3 、IgG和CD6 8用免疫组织化学法检测。 结果 发生DXR时移植心脏表现为血管内血栓形成 ,大量巨噬细胞浸润及心肌凝固性坏死 ,无补体C3 沉积。单用CsA或CyP不能显著延长移植到大鼠的小鼠心脏存活时间 ,亦不能显著降低受体血清IgG水平。联合应用CsA和CyP可使移植心脏存活 (4 80± 1 48)d ,与A组比较差异有显著性意义 (P <0 0 5 ) ;且使DXR时受体血清IgG水平降低 ,差异有显著性意义 (P <0 0 5 ) ;移植物中IgG沉积在 4组间差异无显著性意义 (P >0 0 5 )。 结论 DXR时移植物中有大量巨噬细胞浸润和IgG沉积。CsA和CyP联合应用可抑制受体血清IgG水平升高 ,延长移植到大鼠的小鼠心脏存活时间 ,但不能防止DXR的发生。 展开更多
关键词 异种移植 移植物排斥 心脏移植 病理学 dxr
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磷胺霉素处理对丹参毛状根合成丹参酮类化合物的影响 被引量:2
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作者 张夏楠 王志霜 +1 位作者 高伟 黄璐琦 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第24期4263-4266,共4页
使用萜类物质合成MEP途径中关键酶DXR的有效抑制剂磷胺霉素(100μmol·L-1)处理丹参毛状根,在处理后2,4,6,8,10,16,21 d收获毛状根,检测处理组和对照组毛状根中SmDXR基因的mRNA水平以及丹参酮类物质含量的变化情况。结果发现,随着... 使用萜类物质合成MEP途径中关键酶DXR的有效抑制剂磷胺霉素(100μmol·L-1)处理丹参毛状根,在处理后2,4,6,8,10,16,21 d收获毛状根,检测处理组和对照组毛状根中SmDXR基因的mRNA水平以及丹参酮类物质含量的变化情况。结果发现,随着磷胺霉素处理时间延长,丹参毛状根颜色与对照组相比明显变浅;毛状根中SmDXR基因的mRNA水平呈抛物线型变化,在处理后第6天达到最高值,随后逐渐降低;检测了4种丹参酮类化合物含量,其中丹参酮Ⅰ的含量变化不显著,而二氢丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮ⅡA的含量随处理时间延长而逐渐降低,第21天时对照组毛状根中总丹参酮含量是处理组的5.63倍。上述结果表明,丹参DXR基因对于MEP途径丹参酮类化合物的积累具有重要作用,抑制SmDXR基因表达将对该途径次生代谢产物积累产生显著影响。 展开更多
关键词 磷胺霉素 丹参 dxr 丹参酮
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苏云金芽胞杆菌dxr1基因的转录受SigH控制 被引量:1
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作者 李娜 温继龙 +3 位作者 宋福平 张杰 段江燕 彭琦 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期200-210,共11页
【目的】萜类化合物广泛分布在生物界,是重要的生命物质。目前发现有两条萜类化合物的生物合成途径,即甲羟戊酸(MVA)途径和2-甲基-D-赤藓糖醇-4-磷酸(MEP)途径。MEP代谢途径中的关键酶1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构化酶(DXR,EC1.1.1.2... 【目的】萜类化合物广泛分布在生物界,是重要的生命物质。目前发现有两条萜类化合物的生物合成途径,即甲羟戊酸(MVA)途径和2-甲基-D-赤藓糖醇-4-磷酸(MEP)途径。MEP代谢途径中的关键酶1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构化酶(DXR,EC1.1.1.267)催化1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸生成MEP。枯草芽胞杆菌中dxr基因编码DXR酶,而在苏云金芽胞杆菌(Bacillusthuringiensis,Bt)中有2个基因(dxr1和dxr2)编码DXR酶。通过分析BtHD73菌株的dxr1基因的转录活性和dxr1突变体表型,明确dxr1基因的转录调控机制和功能。【方法】通过5?RACE分析dxr1的转录起始位点;β-半乳糖苷酶活性测定分析dxr1基因启动子(Pdxr1)的转录活性;采用同源重组技术分别敲除BtHD73菌株的dxr1和dxr2基因;利用总蛋白定量确定Cry1Ac蛋白产量;利用DXR检测试剂盒检测Bt菌株的DXR活性。【结果】dxr1基因的转录起始位点位于起始密码子上游39 bp处的G碱基;与出发菌株HD73相比,Pdxr1在sig H突变体中的转录活性明显降低;dxr1或dxr2基因的缺失对菌体生长、芽胞形成率和Cry1Ac蛋白产量无显著影响,但使DXR活性下降。【结论】Bt中dxr1基因的转录受Sig H控制,dxr1基因的缺失影响DXR的活性。 展开更多
关键词 苏云金芽胞杆菌 MEP代谢途径 dxr dxr基因 转录调控
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协调性异种心脏移植排斥反应病理变化的动态研究
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作者 唐华 姚榛祥 刘盛春 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期721-724,共4页
目的建立小鼠→大鼠异种心脏移植延迟性异种移植排斥反应(delayed xenograft rejection,DXR)动物模型,动态观察移植心脏组织病理和免疫病理变化,探讨DXR发生机制。方法袖套法建立小鼠→大鼠颈部异位异种心脏移植模型,设立未移植小鼠心... 目的建立小鼠→大鼠异种心脏移植延迟性异种移植排斥反应(delayed xenograft rejection,DXR)动物模型,动态观察移植心脏组织病理和免疫病理变化,探讨DXR发生机制。方法袖套法建立小鼠→大鼠颈部异位异种心脏移植模型,设立未移植小鼠心脏为对照组(n=4),余组分别在移植术后3、8、16、24 h(每时相点n=4)供心仍跳动时取心,另一组(n=16)在供心停跳时取心并以此决定移植心脏存活时间。各组标本作HE染色和SABC法检测补体C3、IgM、IgG、E-selectin和巨噬细胞标记物CD68表达,结果行半定量评价。结果移植心脏HE染色表现为血管内皮损伤、血栓形成、心肌实质损伤、间质出血、炎症细胞浸润等排斥反应随移植术后时间逐渐加重趋势,完全排斥时部分心肌凝固性坏死及溶解、广泛间质出血、血管结构崩解及血管内血栓形成、严重炎症细胞浸润。移植术后供心平均存活时间(49.3±16.2)h。移植心脏免疫组化检测示:移植后任何时段均无C3沉积;从移植后3 h开始即有显著IgM沉积,且IgG沉积也逐渐增加;移植后3 h即有E-selectin表达,且表达逐渐增强,排斥时达高峰;从移植后3 h开始在浸润的炎症细胞中有逐渐增加的CD68阳性细胞。结论小鼠→大鼠异种心脏移植可作为DXR研究动物模型。内皮细胞激活、IgM和IgG抗体、巨噬细胞浸润参与DXR发生,但其发生不依赖于补体参与。 展开更多
关键词 异种移植 心脏 动物模型 dxr
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