基于DPO引物特异性检测小肠结肠炎耶尔森氏菌的PCR方法 被引量：11

1

作者 徐义刚 李丹丹 +2 位作者 刘忠梅 吴岩 李苏龙 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期507-510,520,共5页

目的 引入一种设计简易、特异性强、退火温度范围宽的双启动寡核苷酸引物（dual-priming oligonucleotide,DPO）设计,建立基于DPO引物特异性检测小肠结肠炎耶尔森氏菌的PCR方法.方法 以小肠结肠炎耶尔森氏菌16S 23SrRNA基因为靶基因,设... 目的 引入一种设计简易、特异性强、退火温度范围宽的双启动寡核苷酸引物（dual-priming oligonucleotide,DPO）设计,建立基于DPO引物特异性检测小肠结肠炎耶尔森氏菌的PCR方法.方法 以小肠结肠炎耶尔森氏菌16S 23SrRNA基因为靶基因,设计一对DPO引物,经过PCR反应体系优化,建立小肠结肠炎耶尔森氏菌DPO-PCR检测方法.测定了检测灵敏度,以常规PCR方法作为参照,分析DP＆PCR方法的特异性及退火温度.结果 建立的小肠结肠炎耶尔森氏菌DPO-PCR检测方法的灵敏度为1.43×102 CFU/mL;与常规PCR方法相比,DP＆PCR方法在49～69℃退火温度范围内均能保持高效率扩增;特异性强,所测试17种病原菌中,仅小肠结肠炎耶尔森氏菌为阳性结果,且无非特异性扩增.结论 DPO-PCR方法不需要对引物参数特别是退火温度进行优化,特异性强,为致病微生物的快速准确检测提供了新方法. 展开更多

关键词 小肠结肠炎耶尔森氏菌 16S-23S RRNA dpo-pcr

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基于DPO引物的空肠弯曲菌PCR检测方法的建立与初步应用 被引量：9

2

作者 徐义刚 李丹丹 +3 位作者 刘忠梅 吴岩 魏冬旭 李苏龙 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期293-296,共4页

为建立特异、快速检测空肠弯曲菌的方法，本研究针对其gyrA基因设计了一对双启动寡核苷酸引物（DPO），建立了空肠弯曲菌DPO-PCR检测方法。试验结果显示，该方法的检测下限为1．2×10^2cfu／mL，在48℃～68℃退火温度范围内均可高... 为建立特异、快速检测空肠弯曲菌的方法，本研究针对其gyrA基因设计了一对双启动寡核苷酸引物（DPO），建立了空肠弯曲菌DPO-PCR检测方法。试验结果显示，该方法的检测下限为1．2×10^2cfu／mL，在48℃～68℃退火温度范围内均可高效扩增靶基因片段，表明该方法退火温度范围宽，同时DPO引物特异性强，PCR反应过程中不会产生非特异性扩增。利用该方法对采集的184份样品进行检测，共计检出17份空肠弯曲菌阳性样品，经国标法（GB/T 4789．9-2008）复验，两者检测结果一致，显示了良好的实用性。该DPO-PCR方法设计简单、特异性强，为致病微生物的快速准确检测提供了新方法。 展开更多

关键词 空肠弯曲菌 GYRA基因 dpo-pcr

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应用DPO技术检测番茄斑萎病毒方法的建立 被引量：5

3

作者 刘忠梅 罗佳 +5 位作者 潘仲乐 刘洪义 李丹丹 韩政坤 魏冬旭 马微 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2017年第11期93-97,共5页

为了准确、高效地检出番茄斑萎病毒(tomato spotted wilt virus,TSWV),利用双启动寡核苷酸引物(DPO)技术,以TSWV外壳蛋白(CP)基因为靶基因,设计了一对DPO引物,对PCR反应体系中的引物、d NTPs、Taq DNA聚合酶用量进行优化,建立了TSWV的DP... 为了准确、高效地检出番茄斑萎病毒(tomato spotted wilt virus,TSWV),利用双启动寡核苷酸引物(DPO)技术,以TSWV外壳蛋白(CP)基因为靶基因,设计了一对DPO引物,对PCR反应体系中的引物、d NTPs、Taq DNA聚合酶用量进行优化,建立了TSWV的DPO-PCR检测方法,并对其灵敏度、特异性以及退火温度敏感性进行了评价。结果表明,应用DPO引物建立的PCR技术能够成功地扩增出TSWV的208 bp特异性条带,与预期目标相符。经过优化后,DPO-PCR反应体系(25μL)为:DNA模板1μL,10×Buffer(含Mg2+)2.5μL,d NTPs(每种2.5 mmol/L)2.0μL,Taq DNA聚合酶(5 U/μL)0.2μL,上、下游DPO引物(20μmol/L)各1.0μL,以去离子水补充至25μL。利用该检测方法,在49.8~70.0℃的退火温度范围内,均可实现目标基因片段的高效扩增,说明其对退火温度不敏感;利用病毒RNA进行检测,该方法的灵敏度为7.5 ng;通过对TSWV、番茄环斑病毒、烟草环斑病毒和番茄黑环病毒的检测表明,仅TSWV呈现阳性反应,说明该方法特异性强。所建立的DPO-PCR检测方法能够准确、高效地检测TSWV,可用于进出境种苗检疫筛查及田间病害诊断。 展开更多

关键词 番茄斑萎病毒 双启动寡核苷酸引物 dpo—pcr 检测

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金黄色葡萄球菌DPO-PCR快速检测方法的建立与应用 被引量：4

4

作者 李丹丹 徐义刚 +3 位作者 邱索平 王昱 高会江 高慎阳 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期419-423,共5页

为建立检测金黄色葡萄球菌（SA）的PCR方法,以SA Sa442基因为靶基因设计了一对双启动寡核苷酸引物（DPO）,建立了SA的DPO-PCR快速检测方法。结果显示,在45~65℃退火温度范围内均能高效地扩增出目的基因,表明DPO引物对退火温度不敏感,该... 为建立检测金黄色葡萄球菌（SA）的PCR方法,以SA Sa442基因为靶基因设计了一对双启动寡核苷酸引物（DPO）,建立了SA的DPO-PCR快速检测方法。结果显示,在45~65℃退火温度范围内均能高效地扩增出目的基因,表明DPO引物对退火温度不敏感,该方法的灵敏度为2.27×102cfu/m L,同时DPO引物特异性强,与其他菌株无非特异性扩增反应。利用该方法和行标法分别对采集的175份样品进行检测,均共计检出13份SA阳性样品,两者符合率为100%。作者建立的DPO-PCR方法设计简单、特异性强,具有良好的实用性,为快速准确检测SA提供新的检测手段。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌 Sa442基因 dpo-pcr

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牛细小病毒DPO-PCR检测方法的建立 被引量：4

5

作者 王孟孟 李振雪 +6 位作者 汤婷婷 王瑞翀 王丽 徐义刚 唐丽杰 李一经 乔薪瑗 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期269-273,共5页

为建立牛细小病毒的快速检测方法,以牛细小病毒VP2基因为靶基因,设计了1对双启动寡核苷酸(dual-priming oligonucleotide,DPO)引物,建立了牛细小病毒DPO-PCR快速检测方法。退火温度不敏感试验、特异性试验和灵敏度试验的结果显示,与常规... 为建立牛细小病毒的快速检测方法,以牛细小病毒VP2基因为靶基因,设计了1对双启动寡核苷酸(dual-priming oligonucleotide,DPO)引物,建立了牛细小病毒DPO-PCR快速检测方法。退火温度不敏感试验、特异性试验和灵敏度试验的结果显示,与常规PCR方法相比,DPO-PCR方法在41～65℃退火温度范围内均能够高效地扩增出目的基因,表明DPO引物对退火温度不敏感;该方法的最低检出量为3.94×10~3copies/uL;通过对牛细小病毒、牛轮状病毒、牛病毒性腹泻病毒、牛呼吸道合胞体病毒进行检测,只有牛细小病毒的检测结果为阳性,且无非特异性扩增。结果表明,建立的DPO-PCR方法同传统PCR方法相比,特异性强、灵敏度高,为牛细小病毒的快速检测提供了一种新方法。 展开更多

关键词 牛细小病毒 dpo-pcr 快速检测

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创伤弧菌DPO-PCR检测方法的建立 被引量：4

6

作者 李丹丹 徐义刚 +2 位作者 王昱 高会江 高慎阳 《食品科技》 CAS 北大核心 2015年第11期287-291,共5页

为建立检测创伤弧菌（VV）的快速检测方法,以VV vvhA基因为靶基因设计了一对双启动寡核苷酸引物（DPO）,建立了DPO-PCR快速检测VV的方法。结果显示,退火温度范围在49~69℃内都能有效地扩增出目的基因,表明该检测方法对退火温度不敏感;该... 为建立检测创伤弧菌（VV）的快速检测方法,以VV vvhA基因为靶基因设计了一对双启动寡核苷酸引物（DPO）,建立了DPO-PCR快速检测VV的方法。结果显示,退火温度范围在49~69℃内都能有效地扩增出目的基因,表明该检测方法对退火温度不敏感;该DPO引物仅与VV的扩增反应呈阳性,而与其他菌株无非特异性扩增反应,表明该方法特异性强;该方法的灵敏度为99 cfu/m L。利用该检测方法对采集的210份样品进行检测,共计检出4份VV阳性样品,与行标法（SN/T 1870—2007）检测结果一致,显示了良好的实用性。该DPO-PCR方法设计简单、特异性强,具有良好的实用性。 展开更多

关键词 创伤弧菌 vvhA基因 dpo-pcr

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肠致病性大肠杆菌DPO-PCR快速检测方法的建立 被引量：4

7

作者 李丹丹 徐义刚 +3 位作者 陈文慧 邱索平 高慎阳 李一经 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期541-544,共4页

为建立肠致病性大肠杆菌（EPEC）的快速检测方法,本研究以EPEC bfp A基因为靶基因设计了一对双启动寡核苷酸引物（DPO）,建立了EPEC的DPO-PCR快速检测方法。结果显示,退火温度在45℃~65℃范围内均能够高效地扩增出目的基因,表明DPO引物... 为建立肠致病性大肠杆菌（EPEC）的快速检测方法,本研究以EPEC bfp A基因为靶基因设计了一对双启动寡核苷酸引物（DPO）,建立了EPEC的DPO-PCR快速检测方法。结果显示,退火温度在45℃~65℃范围内均能够高效地扩增出目的基因,表明DPO引物对退火温度不敏感。该方法对其他菌株的扩增结果均为阴性,特异性强;其灵敏度为97 cfu/m L。利用该方法和国标法分别对采集的230份临床样品进行检测,均共计检出5份EPEC阳性样品,两者符合率为100%。本研究建立的DPO-PCR方法设计简单、特异性强、灵敏度高,具有良好的实用性,为快速准确检测EPEC提供新的检测手段。 展开更多

关键词 肠致病性大肠杆菌 bfpA基因 dpo-pcr

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副溶血弧菌DPO-PCR检测方法的建立 被引量：2

8

作者 李丹丹 徐义刚 +3 位作者 王昱 邱索平 高会江 高慎阳 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期133-136,共4页

以副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus,VP）toxR基因为靶基因设计了一对双启动寡核苷酸（DPO）引物,建立了DPO-PCR快速检测VP的方法.结果显示,退火温度在49～69℃都能有效地扩增出目的基因,表明该检测方法对退火温度不敏感;该DPO引物... 以副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus,VP）toxR基因为靶基因设计了一对双启动寡核苷酸（DPO）引物,建立了DPO-PCR快速检测VP的方法.结果显示,退火温度在49～69℃都能有效地扩增出目的基因,表明该检测方法对退火温度不敏感;该DPO引物仅与VP的扩增反应呈阳性,而与其他菌株无非特异性扩增反应,表明该方法特异性强;该方法的灵敏度为121 CFU/mL.利用该检测方法对采集的550份样品进行检测,共计检出19份VP阳性样品,与行标法（SN/T 1870-2007）检测结果一致,实用性良好.该DPO-PCR方法设计简单、特异性强,具有良好的实用性. 展开更多

关键词 副溶血弧菌 toxR基因 dpo-pcr

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油菜茎基溃疡病菌DPO-PCR检测方法的建立 被引量：2

9

作者 龙阳 袁俊杰 +4 位作者 候翠丽 卢乃会 杨卓瑜 马新华 魏霜 《植物检疫》 北大核心 2017年第4期42-45,共4页

根据油菜茎基溃疡病菌ITS基因序列,设计特异性DPO引物,建立检测油菜茎基溃疡病菌的DPO-PCR检测方法,并对其特异性、灵敏性进行评价。结果显示与常规PCR检测方法相比,DPO-PCR反应对退火温度不敏感,具有更强的特异性。利用该方法对10批油... 根据油菜茎基溃疡病菌ITS基因序列,设计特异性DPO引物,建立检测油菜茎基溃疡病菌的DPO-PCR检测方法,并对其特异性、灵敏性进行评价。结果显示与常规PCR检测方法相比,DPO-PCR反应对退火温度不敏感,具有更强的特异性。利用该方法对10批油菜籽样品进行检测,共检出5批阳性样品,检测结果与常规PCR一致,为油菜茎基溃疡病菌的检测提供了新方法。 展开更多

关键词 油菜茎基溃疡病菌 dpo-pcr 检测

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肠侵袭性大肠杆菌DPO-PCR检测方法的建立与应用 被引量：1

10

作者 李丹丹 徐义刚 +3 位作者 邱索平 王昱 高会江 高慎阳 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期826-830,共5页

目的为建立肠侵袭性大肠杆菌（EIEC）的DPO-PCR快速检测方法。方法本研究以EIECipaH基因为靶基因设计了一对双启动寡核苷酸（DPO）引物,建立了EIEC DPO-PCR检测方法。结果退火温度范围在47℃~67℃内都能有效地扩增出目的基因,表明该检... 目的为建立肠侵袭性大肠杆菌（EIEC）的DPO-PCR快速检测方法。方法本研究以EIECipaH基因为靶基因设计了一对双启动寡核苷酸（DPO）引物,建立了EIEC DPO-PCR检测方法。结果退火温度范围在47℃~67℃内都能有效地扩增出目的基因,表明该检测方法对退火温度不敏感;该DPO引物仅与EIEC的扩增反应呈阳性,而与其他菌株无非特异性扩增反应,表明该方法特异性强;该方法的灵敏度为1.17×102 cfu/mL。利用该检测方法对采集的230份样品进行检测,共计检出3份EIEC阳性样品,与国标法（GB 4789.6-2003）检测结果一致,显示了良好的实用性。结论该DPO-PCR方法设计简单、特异性强,具有良好的实用性。 展开更多

关键词 肠侵袭性大肠杆菌 IPAH基因 dpo-pcr

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基于双启动引物PCR方法检测溶藻弧菌的研究 被引量：1

11

作者 李丹丹 徐义刚 +3 位作者 邱索平 王昱 高会江 高慎阳 《食品工业》 CAS 北大核心 2016年第8期277-280,共4页

为建立检测溶藻弧菌（VA）的快速检测方法,试验以VA Collagenase基因为靶基因设计了一对双启动寡核苷酸引物（DPO）,建立了DPO-PCR快速检测VA的方法。结果显示,退火温度范围在48℃-68℃内都能有效地扩增出目的基因,表明该检测方法对退... 为建立检测溶藻弧菌（VA）的快速检测方法,试验以VA Collagenase基因为靶基因设计了一对双启动寡核苷酸引物（DPO）,建立了DPO-PCR快速检测VA的方法。结果显示,退火温度范围在48℃-68℃内都能有效地扩增出目的基因,表明该检测方法对退火温度不敏感;该DPO引物仅与VA的扩增反应呈阳性,而与其他菌株无非特异性扩增反应,表明该方法特异性强;该方法的灵敏度为1.14×10^2 CFU/m L。利用该检测方法对采集的550份样品进行检测,共计检出4份VA阳性样品,与商检行业标准（SN/T 1870—2007）检测结果一致,显示了良好的实用性。该DPOPCR方法设计简单、特异性强,具有良好的实用性。 展开更多

关键词 溶藻弧菌 Collagenase基因 dpo-pcr

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两种向日葵检疫性真菌病害的多重DPO-PCR检测方法 被引量：9

12

作者 张娜 乾义柯 +4 位作者 魏霜 梁巧玲 鄞杰平 刘中勇 陈卫民 《植物检疫》 北大核心 2015年第6期35-38,共4页

本研究根据向日葵白锈病菌大亚基核糖体RNA基因序列,向日葵黑茎病菌的ITS-5.8S r RNA基因序列,分别设计特异性DPO(dual priming oligonucleotide)引物,建立同时检测这两种检疫性病菌的多重DPO-PCR检测方法,并对其特异性和灵敏度进行评... 本研究根据向日葵白锈病菌大亚基核糖体RNA基因序列,向日葵黑茎病菌的ITS-5.8S r RNA基因序列,分别设计特异性DPO(dual priming oligonucleotide)引物,建立同时检测这两种检疫性病菌的多重DPO-PCR检测方法,并对其特异性和灵敏度进行评价。结果表明,所设计的DPO引物特异性强,仅向日葵白锈病菌和向日葵黑茎病菌可分别扩增出307 bp与388 bp的特异性条带,其他参照菌株及阴性对照均无条带;检测体系对混合模板中向日葵白锈病菌和向日葵黑茎病菌的DNA灵敏度均达0.05 ng/μL;且该检测方法对退火温度不敏感,适用范围广。该方法能够准确、快速的检测向日葵白锈病菌和向日葵黑茎病菌,适合于口岸实验室的快速检测。 展开更多

关键词 向日葵白锈病菌 向日葵黑茎病菌 多重dpo-pcr 检测

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应用DPO-PCR方法特异性检测志贺氏菌 被引量：9

13

作者 徐义刚 李丹丹 +3 位作者 刘忠梅 吴岩 李苏龙 魏冬旭 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第3期28-32,共5页

本研究利用一种高特异性PCR引物设计方法——双启动寡核苷酸引物（dual-primingoligonucleotide，DPO），以志贺氏菌属侵袭性质粒抗原（ipaH）基因为靶基因，设计DPO引物，建立了特异性检测志贺氏菌属的DPO—PCR方法。结果显不，所建立... 本研究利用一种高特异性PCR引物设计方法——双启动寡核苷酸引物（dual-primingoligonucleotide，DPO），以志贺氏菌属侵袭性质粒抗原（ipaH）基因为靶基因，设计DPO引物，建立了特异性检测志贺氏菌属的DPO—PCR方法。结果显不，所建立的DPO-PCR方法检测灵敏度为1．65×10^2CFU／mL；与常规PCR引物相比，DPO引物设计简易，简化了PCR引物设计；DPO引物退火温度范围宽，在50-70℃退火温度内均可对靶基因进行高效扩增；DPO引物结构特殊，具有比常规PCR引物更高的特异性，反应中无非特异性扩增产生。实践检测结果显示，利用该方法对133份冻／鲜肉类、果蔬类、鲜牛奶、鸡蛋和熟食样本进行检测，共检出15份志贺氏菌阳性样本，经国标法（GB／T4789．5-2012）复检，两者检测结果一致，显示出良好的实用性和可靠性，为志贺氏菌快速、准确的检测提供了新手段。 展开更多

关键词 志贺氏菌 侵袭性质粒抗原(ipaH)基因 dpo—pcr方法

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应用DPO-PCR技术检测肠出血性大肠杆菌O157∶H7 被引量：11

14

作者 徐义刚 李丹丹 +2 位作者 崔丽春 刘忠梅 李苏龙 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第8期160-164,共5页

利用双启动寡核苷酸引物(dual-priming oligonucleotide,DPO)聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术检测肠出血性大肠杆菌O157∶H7。根据DPO引物设计原则,以肠出血性大肠杆菌O157∶H7 rfbE基因为靶基因设计一对DPO引物,经... 利用双启动寡核苷酸引物(dual-priming oligonucleotide,DPO)聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术检测肠出血性大肠杆菌O157∶H7。根据DPO引物设计原则,以肠出血性大肠杆菌O157∶H7 rfbE基因为靶基因设计一对DPO引物,经过反应体系的优化,建立了肠出血性大肠杆菌O157∶H7 DPO-PCR检测方法,其检测灵敏度约为94 CFU/mL。与常规PCR方法相比,所建立的DPO-PCR方法对退火温度不敏感,在引物设计和实验过程中不需要对引物及其退火温度反复优化,同时基于DPO引物的特殊结构又增强了其特异性。DPO-PCR方法设计简易、特异性强,为致病性微生物的快速准确检测提供了新途径。 展开更多

关键词 肠出血性大肠杆菌O157∶H7 rfbE基因 双启动寡核苷酸引物聚合酶链式反应

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基于双启动引物特异性检测单核细胞增生李斯特氏菌的PCR方法 被引量：7

15

作者 徐义刚 李丹丹 +4 位作者 张柏棋 刘忠梅 魏冬旭 刘新亮 李苏龙 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期86-89,共4页

以单核细胞增生李斯特氏菌iap基因为靶基因，利用一新型PCR引物设计方法——双启动引物（Dual-primingoligonucleotide，DPO），建立了特异性检测单核细胞增生李斯特氏菌的DPO—PCR方法，测试了DPO—PCR方法退火温度不敏感性、特异性及... 以单核细胞增生李斯特氏菌iap基因为靶基因，利用一新型PCR引物设计方法——双启动引物（Dual-primingoligonucleotide，DPO），建立了特异性检测单核细胞增生李斯特氏菌的DPO—PCR方法，测试了DPO—PCR方法退火温度不敏感性、特异性及灵敏度，并在实践检测中进行了初步应用。结果显示：该方法检测单核细胞增生李斯特氏菌的灵敏度为1．51×10^2CFU／mL；退火温度不敏感性测试中，与常规PCR引物相比，DPO引物在48～68℃退火温度范围内均能够高效率地扩增靶基因；特异性测试中，DPO—PCR方法能特异地检测出目标菌，与其他菌株无非特异性扩增反应，比常规PCR方法显示出更强的特异性。实践应用证明，利用DPO—PCR方法对130份样本进行检测，共计检出9份单核细胞增生李斯特氏菌阳性样本，经国标法（GB／T4789．30—2008）复检，两者检测结果一致，显示出良好的实用性，为单核细胞增生李斯特氏菌的快速准确检测提供了新方法。 展开更多

关键词 单核细胞增生李斯特氏菌 iap基因 dpo-pcr方法

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双重DPO-PCR检测副溶血弧菌和霍乱弧菌 被引量：7

16

作者 魏霜 马新华 +4 位作者 汪天杰 龙阳 纪强 任娇 吴希阳 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2016年第22期80-83,共4页

根据副溶血弧菌collagenase基因和霍乱弧菌omp W基因,分别设计特异性DPO(dual priming oligonucleotide)引物,建立一种快速检测这两种弧菌的多重DPO-PCR方法,并对其特异性和灵敏度进行了评价。结果显示,设计的DPO引物特异性较强,副溶血... 根据副溶血弧菌collagenase基因和霍乱弧菌omp W基因,分别设计特异性DPO(dual priming oligonucleotide)引物,建立一种快速检测这两种弧菌的多重DPO-PCR方法,并对其特异性和灵敏度进行了评价。结果显示,设计的DPO引物特异性较强,副溶血弧菌和霍乱弧菌DNA可分别扩增出307 bp与463 bp的特异性条带,检测灵敏度均达0.1 ng/μL。该检测方法对退火温度不敏感。利用该方法对69株疑似弧菌菌株进行鉴定,结果与生理生化鉴定结果一致。该方法特异性强、灵敏度高,适合于对食品、水产品等中副溶血弧菌和霍乱弧菌的进行快速筛检。 展开更多

关键词 副溶血弧菌 霍乱弧菌 多重dpo—pcr

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产肠毒性大肠杆菌DPO-PCR检测方法的建立与应用 被引量：6

17

作者 徐义刚 李丹丹 +2 位作者 刘忠梅 崔丽春 李苏龙 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期75-80,共6页

双启动寡核苷酸引物（dual-priming oligonucleotide，DPO）是一种新型的引物设计方法，具有设计简易、特异性强以及退火温度范围宽的特点。以产肠毒性大肠杆菌LT基因为靶基因，设计了一对DPO引物，经过对TaqDNA聚合酶、Mg2＋、dNTP反... 双启动寡核苷酸引物（dual-priming oligonucleotide，DPO）是一种新型的引物设计方法，具有设计简易、特异性强以及退火温度范围宽的特点。以产肠毒性大肠杆菌LT基因为靶基因，设计了一对DPO引物，经过对TaqDNA聚合酶、Mg2＋、dNTP反应体系因子的优化，建立了产肠毒性大肠杆菌DPO-PCR检测方法，测定了该方法的灵敏度、特异性以及退火温度不敏感性。结果显示，该方法检测灵敏度为1．24×10^2CFU／ml，在45℃～65℃退火温度范围内，均可实现靶基因的高效扩增。该方法特异性强，测试菌株中4株产肠毒性大肠杆菌均为阳性结果，其余菌株为阴性结果，且无非特异性扩增发生。与常规PCR方法相比，DPO—PCR方法不需要对引物参数特别是退火温度反复优化，同时DPO引物的特殊结构又增强了检测特异性，为致病性微生物的快速准确检测提供了新方法。 展开更多

关键词 产肠毒性大肠杆菌 LT基因dpo-pcr

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向日葵黄萎病病原菌轮枝菌的多重DPO-PCR检测方法 被引量：4

18

作者 乾义柯 张娜 +2 位作者 魏霜 陆平 易建平 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期115-120,共6页

为建立可同时快速检测引起向日葵黄萎病害的2种检疫性病原菌大丽轮枝菌Verticillium dahliae Kleb.和黑白轮枝菌V.albo-atrum Reinke et Berthold的方法,根据2种病原菌的β-tubulin基因分别设计特异性DPO引物,建立多重DPO-PCR检测方法,... 为建立可同时快速检测引起向日葵黄萎病害的2种检疫性病原菌大丽轮枝菌Verticillium dahliae Kleb.和黑白轮枝菌V.albo-atrum Reinke et Berthold的方法,根据2种病原菌的β-tubulin基因分别设计特异性DPO引物,建立多重DPO-PCR检测方法,并对其特异性和灵敏度进行评价。结果表明,所设计的DPO引物特异性强,仅大丽轮枝菌和黑白轮枝菌可分别扩增出225 bp与151 bp的特异性条带,其它向日葵病害的7种病原菌及阴性对照均无目的条带;反应体系中引物终浓度为0.2μmol/L、退火温度为60℃时,30个扩增循环的检测灵敏度均可达0.05 ng菌丝DNA量;在45~65℃退火温度范围内均可高效扩增靶基因片段,表明该方法退火温度范围宽。所建立的检测方法能够准确、高效地检测引起向日葵黄萎病的大丽轮枝菌和黑白轮枝菌,可用于向日葵种子带菌筛查及田间病害诊断检测。 展开更多

关键词 向日葵黄萎病 黑白轮枝菌 大丽轮枝菌 多重dpo-pcr

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霍乱弧菌DPO-PCR特异性检测方法的建立与应用 被引量：3

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作者 徐义刚 李丹丹 +3 位作者 吴岩 刘忠梅 魏冬旭 李苏龙 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期1284-1288,共5页

采用一种新型的引物设计方法——双启动寡核苷酸引物(dual-priming oligonucleotide,DPO),以霍乱弧菌mdh基因为靶序列,建立了霍乱弧菌DPO-PCR特异性检测方法,分析了DPO引物退火温度不敏感性、检测灵敏度及特异性,并对检测方法进行了初... 采用一种新型的引物设计方法——双启动寡核苷酸引物(dual-priming oligonucleotide,DPO),以霍乱弧菌mdh基因为靶序列,建立了霍乱弧菌DPO-PCR特异性检测方法,分析了DPO引物退火温度不敏感性、检测灵敏度及特异性,并对检测方法进行了初步应用。灵敏度结果显示,DPO-PCR方法对霍乱弧菌的最低检出限为1.07×102 CFU/mL。退火温度不敏感性试验中,与常规PCR引物相比,DPO引物在45～65℃退火温度均能够高效扩增出靶基因片段。特异性结果显示,DPO-PCR方法的特异性比常规PCR方法强,不产生任何非特异性扩增。利用建立的霍乱弧菌DPO-PCR检测方法对采集的550份样本进行检测,检出43份霍乱弧菌阳性样本,经行业标准法(SN/T2425-2010)复检,检测结果相同,表明所建立的DPO-PCR检测方法具有良好的实用性,为霍乱弧菌的快速准确检测提供了新途径。 展开更多

关键词 霍乱弧菌 mdh基因 dpo-pcr方法

原文传递

多重DPO-PCR检测转基因玉米MON810和MIR604体系建立

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作者 周陆宁 张锐 +1 位作者 麦晨 魏霜 《现代农业科技》 2018年第17期1-2,共2页

针对转基因玉米MON810和MIR604品系插入位点序列,分别设计品系特异性DPO引物,建立转基因玉米MON810和MIR604品系检测的多重DPO-PCR方法。结果表明,设计的DPO引物特异性强,灵敏度达0.5 ng/μL,并且对退火温度不敏感。该检测方法特异性强... 针对转基因玉米MON810和MIR604品系插入位点序列,分别设计品系特异性DPO引物,建立转基因玉米MON810和MIR604品系检测的多重DPO-PCR方法。结果表明,设计的DPO引物特异性强,灵敏度达0.5 ng/μL,并且对退火温度不敏感。该检测方法特异性强、灵敏度高,适合于对转基因玉米MON810和MIR604品系进行快速检测。 展开更多

关键词 转基因玉米 MON810 MIR604 多重dpo-pcr

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