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耻垢分枝杆菌宿主整合因子(IHF)对DNA拓扑结构的影响 被引量:2
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作者 陈媛媛 张先恩 毕利军 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2017年第12期1110-1117,共8页
结核分枝杆菌(Mycobaterium tuberculosis)是结核病的病原菌,每年导致数百万人死亡.对于分枝杆菌基本生物学特性的研究有助于新的药物及治疗手段的研发.耻垢分枝杆菌(M.smegmatis)是分枝杆菌属中的一种非致病菌,与结核分枝杆菌亲缘关系... 结核分枝杆菌(Mycobaterium tuberculosis)是结核病的病原菌,每年导致数百万人死亡.对于分枝杆菌基本生物学特性的研究有助于新的药物及治疗手段的研发.耻垢分枝杆菌(M.smegmatis)是分枝杆菌属中的一种非致病菌,与结核分枝杆菌亲缘关系较近,是实验室常用的研究分枝杆菌的模式菌种.分枝杆菌主要编码三种染色质蛋白,类组蛋白HU、Lsr2和宿主整合因子IHF.为研究IHF在染色体包装中的作用,我们在大肠杆菌中表达、纯化了耻垢分枝杆菌IHF蛋白(MsIHF),并对其影响DNA拓扑结构的性质进行了系统分析.体外研究的结果表明,MsIHF以同二聚体的形式存在,其对负超螺旋DNA具有一定的结合偏好性,同时,该蛋白可以有效地固定DNA负超螺旋.进一步的研究表明,MsIHF可以调控拓扑异构酶的活性.MsIHF的结合明显地抑制拓扑异构酶Ⅰ的松弛活性,而与此相反,该蛋白可以轻微地促进旋转酶引入DNA负超螺旋的能力.以上结果提示,MsIHF可能通过调控拓扑异构酶的活性影响染色体DNA的结构,进而调控其包装. 展开更多
关键词 分枝杆菌 宿主整合因子 dna结合蛋白 dna超螺旋 dna拓扑异构酶
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芝田硫化叶菌ssh7a和ssh7b基因在大肠杆菌中的表达及重组蛋白的性质 被引量:2
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作者 陈绪林 唐玉秋 黄力 《微生物学报》 CSCD 北大核心 2000年第4期359-364,共6页
极端嗜热古菌———芝田硫化叶菌DNA结合蛋白Ssh7a和Ssh7b的编码基因 (ssh7a和ssh7b)在大肠杆菌中得到表达 ,表达量均达到细胞蛋白总量的 1 0 %~ 1 5%。重组蛋白通过一个包括热处理步骤的简单纯化程序得到纯化。重组Ssh7a和Ssh7b与松... 极端嗜热古菌———芝田硫化叶菌DNA结合蛋白Ssh7a和Ssh7b的编码基因 (ssh7a和ssh7b)在大肠杆菌中得到表达 ,表达量均达到细胞蛋白总量的 1 0 %~ 1 5%。重组蛋白通过一个包括热处理步骤的简单纯化程序得到纯化。重组Ssh7a和Ssh7b与松弛及负超螺旋DNA的结合与天然Ssh7蛋白无异 ,与天然Ssh7相似 ,Ssh7a在与DNA结合时能够固定负超螺旋 ,每固定一个负超螺旋约需 2 2个Ssh7a分子。这些结果表明天然Ssh7蛋白中的两个同源多肽与DNA结合时无明显差异。另外 ,Ssh7的甲基化与否似乎不影响该蛋白对DNA的亲和力及固定DNA超螺旋的能力。 展开更多
关键词 硫化叶菌 dna结合蛋白 基因表达 dna超螺旋
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产毒性大肠杆菌CFA/Ⅰ基因表达与DNA超螺旋状态的关系 被引量:2
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作者 张臻峰 于春风 +6 位作者 万庆 王晓琛 黄熙泰 叶长芸 余秀均 吴继民 徐建国 《南开大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期7-12,共6页
将CFA/I结构基因(cfaABCE)克隆到载体pJRD184上构建了质粒pJGX15A,并将其转入大肠杆菌topA野生株E.coli HB101和topA缺陷株E.coli DM800中.Western blot测定的结果表明,在CFA/I的正调控基因cfaD基因缺失时,两株重组菌株都能够表达CFA... 将CFA/I结构基因(cfaABCE)克隆到载体pJRD184上构建了质粒pJGX15A,并将其转入大肠杆菌topA野生株E.coli HB101和topA缺陷株E.coli DM800中.Western blot测定的结果表明,在CFA/I的正调控基因cfaD基因缺失时,两株重组菌株都能够表达CFA/I抗原.分别抽提两个重组菌株对数前期和对数中期的质粒pJGX15A DNA,并对其进行氯喹琼脂糖凝胶电泳分析,结果显示E.coli DM800细胞中质粒pJGX15A的负超螺旋水平比野生型细胞E.coliHB101中的较低.同时,菌落免疫酶斑分析的结果显示DM800受体菌中CFA/I的表达水平比HB101受体菌中的表达水平高.实验结果表明,CFA/I结构基因的表达与DNA负超螺旋水平有明显的负相关性,与负超螺旋促进基因表达的看法不同. 展开更多
关键词 产毒性大肠杆菌 CFA/I基因 dna超螺旋
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Ssh10b2与其同源蛋白Ssh10b在细胞含量及固定DNA超螺旋的能力上存在明显差异
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作者 郭荣 薛宏 +3 位作者 霍笑风 徐冬一 胡晋川 黄力 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期323-327,T0001,共6页
极端嗜热古菌———芝田硫化叶菌(Sulfolobus shibatae)基因组含一对亲缘关系较远的同源基因,ssh10b和ssh10b2。这对同源基因编码的蛋白(Ssh10b和Ssh10b2)属于古菌Sac10b DNA结合蛋白家族。关于Ssh10b以及与其极为相似的硫矿硫化叶菌(S.... 极端嗜热古菌———芝田硫化叶菌(Sulfolobus shibatae)基因组含一对亲缘关系较远的同源基因,ssh10b和ssh10b2。这对同源基因编码的蛋白(Ssh10b和Ssh10b2)属于古菌Sac10b DNA结合蛋白家族。关于Ssh10b以及与其极为相似的硫矿硫化叶菌(S.solfataricus)Sso10b、嗜酸热硫化叶菌(S.acidocaldarius)Sac10b蛋白已有较多研究,推测这些蛋白可能在染色体组织和包装、DNA重组、基因表达调控等方面起作用。克隆并在大肠杆菌中表达了ssh10b2基因,纯化了重组Ssh10b2蛋白。免疫印迹定量分析表明,ssh10b2在芝田硫化叶菌中有表达,但其细胞含量仅相当于Ssh10b的约十分之一。重组Ssh10b2对双链DNA的亲和力低于Ssh10b。此外,Ssh10b2和Ssh10b在与双链DNA结合时表现出相似的凝胶阻滞模式。有意思的是,Ssh10b2固定DNA负超螺旋的能力明显低于Ssh10b。这些结果提示,Ssh10b和Ssh10b2可能具有不同的生理作用。 展开更多
关键词 极端嗜热古菌 芝田硫化叶菌 Sac10b家族 Ssh10b2 dna超螺旋
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基于原子力显微镜研究p53蛋白与PBR322 DNA的相互作用
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作者 陈洋 王艳伟 杨光参 《山东科学》 CAS 2017年第4期106-111,123,共7页
肿瘤(癌症)是由于细胞在复制过程中,DNA损伤不能修复导致细胞凋亡或者细胞无限增殖而形成的。DNA在细胞中转录和翻译都会涉及蛋白与DNA的结合,肿瘤抑制蛋白也是参与这一过程的关键蛋白之一。然而,众多研究发现,肿瘤抑制蛋白p53具有识别... 肿瘤(癌症)是由于细胞在复制过程中,DNA损伤不能修复导致细胞凋亡或者细胞无限增殖而形成的。DNA在细胞中转录和翻译都会涉及蛋白与DNA的结合,肿瘤抑制蛋白也是参与这一过程的关键蛋白之一。然而,众多研究发现,肿瘤抑制蛋白p53具有识别和修复损伤DNA的效果,对于细胞的凋亡、基因的保护和避免癌症发生有着重要的意义。有研究表明,金属镁离子和锌离子可以增强p53蛋白的结构稳定性和p53-DNA的亲和力。因此,我们基于原子力显微镜(AFM),直观地呈现出p53蛋白与PBR322环状DNA相互作用的图像,同时发现p53蛋白可以使环状DNA自身形成聚集或者相交。但是,对于长度相当的5 000bp的线状DNA几乎没有这样的效果,而对于20 000bp DNA不会出现这样的现象。然而,在高浓度镁离子环境下,环状DNA会扭转成为麻花状,即形成超螺旋结构。这一现象,可为p53蛋白功能和作用机理研究提供指导,也为癌症治疗、癌症药物开发以及癌症检测方法提供启发。 展开更多
关键词 P53蛋白 金属镁离子 PBR322环状dna 相互作用 dna超螺旋
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小分子药物与DNA分子作用的AFM研究 被引量:2
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作者 曹黎黎 朱单 +3 位作者 田田 王海涛 黄宁平 肖忠党 《电子显微学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期147-152,共6页
本文运用原子力显微镜(AFM)研究小分子药物作用于环状双链DNA分子所引起的DNA结构和构象变化。不同浓度药物与DNA分子作用前后的AFM图像显示:长春新碱作用于DNA分子,通过嵌入DNA双螺旋结构的临近碱基对之间,使DNA分子缠绕形成螺旋圈;随... 本文运用原子力显微镜(AFM)研究小分子药物作用于环状双链DNA分子所引起的DNA结构和构象变化。不同浓度药物与DNA分子作用前后的AFM图像显示:长春新碱作用于DNA分子,通过嵌入DNA双螺旋结构的临近碱基对之间,使DNA分子缠绕形成螺旋圈;随药物浓度升高,DNA链被切割成片段,且长度不断减小;至浓度达到一定值,长春新碱化学结构改变,而不与DNA片段发生作用。阿司匹林与DNA分子作用,通过大沟或小沟的碱基对边缘作用叠加在DNA链上,使DNA链的某些部位变构,空间自由度受限而缠绕,随药物浓度升高,缠绕收缩加剧直至形成棒状细丝状,甚至断裂。5-羟色胺作用于DNA分子,DNA链变构缠绕;随药物浓度升高,缠绕程度增强,甚至缠绕成粗棒,其DNA链结构改变与阿司匹林作用下产生的变化基本一致,推测其作用也为插入到大小沟槽中。 展开更多
关键词 原子力显微镜 长春新碱 阿司匹林 5-羟色胺 dna构象变化
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