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阿胶中动物源性DNA提取方法的改进及驴源性成分鉴定
被引量：
14
1
作者
陈思秀
张馨方
+6 位作者
刘玟妍
王天添
赵云冬
王艳双
高丽君
李明成
孙丽媛
《中国药学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第22期1840-1845,共6页
目的从高温熬制的阿胶制品中提取微量动物源性DNA,建立并优化聚合酶链反应(PCR)方法快速鉴定阿胶中驴源性成分,建立分子生物学鉴定阿胶品质新方法。方法应用DNA纯化柱替代十二烷基硫酸钠-蛋白酶K(SDS-PK)方法中酚、氯仿等毒性较大的有...
目的从高温熬制的阿胶制品中提取微量动物源性DNA,建立并优化聚合酶链反应(PCR)方法快速鉴定阿胶中驴源性成分,建立分子生物学鉴定阿胶品质新方法。方法应用DNA纯化柱替代十二烷基硫酸钠-蛋白酶K(SDS-PK)方法中酚、氯仿等毒性较大的有机溶剂提取阿胶中驴源性基因组DNA,并对SDS-PK方法进行优化。结果提取驴源性基因组DNA最佳阿胶样本量为0.20 g,水浴消化1 h再进行DNA纯化柱处理可快速获得高质量阿胶基因组DNA,纯度均在1.70~1.80之间,可达到(187.8±0.56)ng·μL^-1。应用特异性引物进行PCR扩增、克隆、测序,与Gen Bank已登记的驴物种(MG931481.1)相似性为100%。结论本实验能在90 min内从深加工的阿胶及阿胶制品中提出动物源性基因组DNA片段,提取的DNA纯度和浓度能满足阿胶分子生物学鉴定的要求,建立的PCR方法可快速鉴定阿胶中驴源性成分;克隆得到驴特异性基因片段可作为鉴定阿胶真伪的标准化阳性对照,预期将广泛应用到阿胶及相关制品的质量监督工作中。
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关键词
阿胶
dna
提取
dna
纯化柱
聚合酶链反应
驴源性
原文传递
治疗用质粒DNA的纯化工艺
被引量：
5
2
作者
丛艳昭
鲁承
+9 位作者
金宁一
申镇维
梁晓枫
金洪涛
白靓
牟伟锋
于长勇
常巧呈
齐楷
金明杰
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2008年第10期899-902,共4页
目的探索适合大规模生产治疗用质粒DNA的纯化工艺。方法采用中空纤维柱收菌、碱裂解,再应用中空纤维柱浓缩质粒,经分子筛、亲和、离子交换等层析分离纯化质粒DNA,并应用凝胶电泳、PCR、核酸蛋白检测仪、BCA蛋白检测试剂盒和内毒素检测...
目的探索适合大规模生产治疗用质粒DNA的纯化工艺。方法采用中空纤维柱收菌、碱裂解,再应用中空纤维柱浓缩质粒,经分子筛、亲和、离子交换等层析分离纯化质粒DNA,并应用凝胶电泳、PCR、核酸蛋白检测仪、BCA蛋白检测试剂盒和内毒素检测试剂盒对所纯化的质粒DNA进行全面检定。结果所获得的超螺旋质粒DNA达到样品总质粒的91.2%;质粒DNA总纯度为1.8;内毒素含量小于10EU/mg;几乎检测不到蛋白质残留,未检出基因组DNA残留。各项指标均符合有关质量标准。结论所采用的纯化工艺省时省力,制备的质粒DNA纯度高,适用于大规模生产治疗用质粒DNA。
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关键词
质粒
dna
纯化
中空纤维柱
层析
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职称材料
质粒纯化利用离子交换柱的再生方法
被引量：
1
3
作者
董敏
王小竹
+1 位作者
李继红
王恒
《基础医学与临床》
CSCD
北大核心
2005年第6期561-563,共3页
目的为提高质粒大量提取纯化柱的使用率,降低实验成本。方法用0.5molLHCl和0.5molLNaOH溶液处理已使用过的一次性纯化柱,使之再生,继而被重复利用。结果再生纯化柱所提纯的质粒DNA经PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳分析证实DNA纯度高,无不同质...
目的为提高质粒大量提取纯化柱的使用率,降低实验成本。方法用0.5molLHCl和0.5molLNaOH溶液处理已使用过的一次性纯化柱,使之再生,继而被重复利用。结果再生纯化柱所提纯的质粒DNA经PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳分析证实DNA纯度高,无不同质粒间污染。结论此方法操作简便、快捷,具有较高的实用价值。
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关键词
再生方法
离子交换
mol/L
NAOH溶液
凝胶电泳分析
PCR扩增
质粒
dna
提取纯化
实验成本
重复利用
实用价值
使用率
HCL
一次性
琼脂糖
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职称材料
对腐败血液DNA三种提取方法的比较
被引量：
1
4
作者
廖忠意
《贵州警官职业学院学报》
2016年第4期59-62,共4页
对新鲜的血液或者血痕,采用直接扩增和chelex-100直接处理提取DNA,一般都能获得完整、均衡的DNA分型,但在日常检案过程中,陈旧血痕、载体潮湿、委托方送检的样本由于保存不当导致血液和少量血痕检材腐败的情况也比较常见。这类检材DNA...
对新鲜的血液或者血痕,采用直接扩增和chelex-100直接处理提取DNA,一般都能获得完整、均衡的DNA分型,但在日常检案过程中,陈旧血痕、载体潮湿、委托方送检的样本由于保存不当导致血液和少量血痕检材腐败的情况也比较常见。这类检材DNA采用普通的chelex-100直接提取很难获得比较完整的DNA分型。结合一列检案,分别用chelex-100、磁珠法、微量DNA提取试剂盒三种方法专门针对腐败血液进行比较分析。
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关键词
chelex-100
磁珠法
微量
dna
提取试剂盒
纯化柱
下载PDF
职称材料
题名
阿胶中动物源性DNA提取方法的改进及驴源性成分鉴定
被引量：
14
1
作者
陈思秀
张馨方
刘玟妍
王天添
赵云冬
王艳双
高丽君
李明成
孙丽媛
机构
北华大学医学技术学院
北华大学医学院
吉林省中药DNA指纹检测技术科技创新中心
出处
《中国药学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第22期1840-1845,共6页
基金
吉林省科技发展计划项目资助(20180201023YY,20190301014NY,20190303093SF,20170307001YY)
吉林省科技创新中心建设项目资助(20190902018TC)
+1 种基金
北华大学研究生创新计划资助(北华研创合字[2018]038)
国家级大学生创新创业训练项目资助(201811923006)
文摘
目的从高温熬制的阿胶制品中提取微量动物源性DNA,建立并优化聚合酶链反应(PCR)方法快速鉴定阿胶中驴源性成分,建立分子生物学鉴定阿胶品质新方法。方法应用DNA纯化柱替代十二烷基硫酸钠-蛋白酶K(SDS-PK)方法中酚、氯仿等毒性较大的有机溶剂提取阿胶中驴源性基因组DNA,并对SDS-PK方法进行优化。结果提取驴源性基因组DNA最佳阿胶样本量为0.20 g,水浴消化1 h再进行DNA纯化柱处理可快速获得高质量阿胶基因组DNA,纯度均在1.70~1.80之间,可达到(187.8±0.56)ng·μL^-1。应用特异性引物进行PCR扩增、克隆、测序,与Gen Bank已登记的驴物种(MG931481.1)相似性为100%。结论本实验能在90 min内从深加工的阿胶及阿胶制品中提出动物源性基因组DNA片段,提取的DNA纯度和浓度能满足阿胶分子生物学鉴定的要求,建立的PCR方法可快速鉴定阿胶中驴源性成分;克隆得到驴特异性基因片段可作为鉴定阿胶真伪的标准化阳性对照,预期将广泛应用到阿胶及相关制品的质量监督工作中。
关键词
阿胶
dna
提取
dna
纯化柱
聚合酶链反应
驴源性
Keywords
Colla
Corii
Asini
dna
extraction
dna
purification
column
PCR
donkey-derived
分类号
R284 [医药卫生—中药学]
原文传递
题名
治疗用质粒DNA的纯化工艺
被引量：
5
2
作者
丛艳昭
鲁承
金宁一
申镇维
梁晓枫
金洪涛
白靓
牟伟锋
于长勇
常巧呈
齐楷
金明杰
机构
军事医学科学院军事兽医研究所
延边大学农学院动物医学系
通化市人民医院
出处
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2008年第10期899-902,共4页
基金
"863"重大项目(2006AA02Z447).
文摘
目的探索适合大规模生产治疗用质粒DNA的纯化工艺。方法采用中空纤维柱收菌、碱裂解,再应用中空纤维柱浓缩质粒,经分子筛、亲和、离子交换等层析分离纯化质粒DNA,并应用凝胶电泳、PCR、核酸蛋白检测仪、BCA蛋白检测试剂盒和内毒素检测试剂盒对所纯化的质粒DNA进行全面检定。结果所获得的超螺旋质粒DNA达到样品总质粒的91.2%;质粒DNA总纯度为1.8;内毒素含量小于10EU/mg;几乎检测不到蛋白质残留,未检出基因组DNA残留。各项指标均符合有关质量标准。结论所采用的纯化工艺省时省力,制备的质粒DNA纯度高,适用于大规模生产治疗用质粒DNA。
关键词
质粒
dna
纯化
中空纤维柱
层析
Keywords
Plasmid
dna
purification
Hollow
fiber
column
Chromatography
分类号
R392.33 [医药卫生—免疫学]
下载PDF
职称材料
题名
质粒纯化利用离子交换柱的再生方法
被引量：
1
3
作者
董敏
王小竹
李继红
王恒
机构
中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所病原学研究室
河北北方学院细胞生物系
出处
《基础医学与临床》
CSCD
北大核心
2005年第6期561-563,共3页
文摘
目的为提高质粒大量提取纯化柱的使用率,降低实验成本。方法用0.5molLHCl和0.5molLNaOH溶液处理已使用过的一次性纯化柱,使之再生,继而被重复利用。结果再生纯化柱所提纯的质粒DNA经PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳分析证实DNA纯度高,无不同质粒间污染。结论此方法操作简便、快捷,具有较高的实用价值。
关键词
再生方法
离子交换
mol/L
NAOH溶液
凝胶电泳分析
PCR扩增
质粒
dna
提取纯化
实验成本
重复利用
实用价值
使用率
HCL
一次性
琼脂糖
Keywords
plasmid
dna
purification
column
regeneration
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
对腐败血液DNA三种提取方法的比较
被引量：
1
4
作者
廖忠意
机构
贵州警官职业学院司法鉴定中心
出处
《贵州警官职业学院学报》
2016年第4期59-62,共4页
文摘
对新鲜的血液或者血痕,采用直接扩增和chelex-100直接处理提取DNA,一般都能获得完整、均衡的DNA分型,但在日常检案过程中,陈旧血痕、载体潮湿、委托方送检的样本由于保存不当导致血液和少量血痕检材腐败的情况也比较常见。这类检材DNA采用普通的chelex-100直接提取很难获得比较完整的DNA分型。结合一列检案,分别用chelex-100、磁珠法、微量DNA提取试剂盒三种方法专门针对腐败血液进行比较分析。
关键词
chelex-100
磁珠法
微量
dna
提取试剂盒
纯化柱
Keywords
chelex-100
paramagnetic
particle
method
trace
dna
extraction
kit
purification
column
分类号
D918.2 [政治法律—法学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
阿胶中动物源性DNA提取方法的改进及驴源性成分鉴定
陈思秀
张馨方
刘玟妍
王天添
赵云冬
王艳双
高丽君
李明成
孙丽媛
《中国药学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019
14
原文传递
2
治疗用质粒DNA的纯化工艺
丛艳昭
鲁承
金宁一
申镇维
梁晓枫
金洪涛
白靓
牟伟锋
于长勇
常巧呈
齐楷
金明杰
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2008
5
下载PDF
职称材料
3
质粒纯化利用离子交换柱的再生方法
董敏
王小竹
李继红
王恒
《基础医学与临床》
CSCD
北大核心
2005
1
下载PDF
职称材料
4
对腐败血液DNA三种提取方法的比较
廖忠意
《贵州警官职业学院学报》
2016
1
下载PDF
职称材料
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