目的构建反义DNA甲基化酶3b(DNM T 3b)基因片断真核表达载体,为研究DNM T 3b基因功能提供工具。方法根据DNM T 3b基因cDNA序列中编码序列设计PCR引物,在上下游引物5′端分别添加X baⅠ和K pnⅠ酶切位点,RT-PCR从胆管癌细胞QBC-939中获得...目的构建反义DNA甲基化酶3b(DNM T 3b)基因片断真核表达载体,为研究DNM T 3b基因功能提供工具。方法根据DNM T 3b基因cDNA序列中编码序列设计PCR引物,在上下游引物5′端分别添加X baⅠ和K pnⅠ酶切位点,RT-PCR从胆管癌细胞QBC-939中获得485bp的DNA片断;将该片断反向插入真核表达载体pcDNA 3.1(+)的多克隆位点,构建反义DNM T 3b基因片断真核表达载体,并用PCR、酶切法和DNA测序鉴定。结果PCR鉴定得到467bp特异条带,双酶切鉴定得到471bp片断和5.4kb载体片断,DNA测序说明插入片断序列正确。结论本研究构建的反义DNM T 3b基因片断真核表达载体可为进一步研究DNM T 3b基因功能提供实验工具。展开更多
文摘目的构建反义DNA甲基化酶3b(DNM T 3b)基因片断真核表达载体,为研究DNM T 3b基因功能提供工具。方法根据DNM T 3b基因cDNA序列中编码序列设计PCR引物,在上下游引物5′端分别添加X baⅠ和K pnⅠ酶切位点,RT-PCR从胆管癌细胞QBC-939中获得485bp的DNA片断;将该片断反向插入真核表达载体pcDNA 3.1(+)的多克隆位点,构建反义DNM T 3b基因片断真核表达载体,并用PCR、酶切法和DNA测序鉴定。结果PCR鉴定得到467bp特异条带,双酶切鉴定得到471bp片断和5.4kb载体片断,DNA测序说明插入片断序列正确。结论本研究构建的反义DNM T 3b基因片断真核表达载体可为进一步研究DNM T 3b基因功能提供实验工具。
