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荧光原位杂交技术的发展与应用 被引量:33
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作者 王玲 宁顺斌 +1 位作者 宋运淳 吕应堂 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 2000年第11期1101-1107,共7页
The techniques of in situ hybridization (ISH) are widely adopted for analyzing the genetic make_up and RNA expression patterns of individual cells. There are four main criterions for evaluating this technique, includi... The techniques of in situ hybridization (ISH) are widely adopted for analyzing the genetic make_up and RNA expression patterns of individual cells. There are four main criterions for evaluating this technique, including detection sensitivity, resolution, capacity and specificity. This review focuses on a number of advances made over the last years in the fluorescence in situ hybridization (FISH). These advances can be catagorized into several branches as follows: (1) Multicolor_FISH (mFISH), including conventional mFISH, combinatorial FISH, ratio labelling FISH, multicolor chromosome painting and comparative genomic hybridization (CGH); (2) Extended DNA fiber_FISH (EDF_FISH), including quantitative DNA fiber mapping (QDFM), molecular combing (MC) and dynamic molecular combing (DMC); (3) In situ PCR_based FISH; (4) Bacterial (or yeast) artificial chromosome_FISH (BAC_FISH or YAC_FISH); (5) Tyramide signal amplification_FISH (TSA_FISH); (6) Polypeptide nucleic acid_FISH (PNA_FISH) and (7) padlock_FISH. 展开更多
关键词 荧光原位杂交 多色荧光原位杂交 dna纤维 分辨率
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小麦根尖细胞同步化诱导和DNA纤维的制备 被引量:8
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作者 王晓娜 杜伟莉 +1 位作者 张改生 牛娜 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期1326-1329,共4页
为了简易快速地获得大量小麦(Triticum aestivumL.)中期染色体和DNA纤维,以普通小麦根尖为材料,采用羟基脲(hydroxyurea,简称HU),氟乐(trifluralin)结合的双阻断法进行了染色体中期同步化诱导。结果表明,染色体有丝分裂中... 为了简易快速地获得大量小麦(Triticum aestivumL.)中期染色体和DNA纤维,以普通小麦根尖为材料,采用羟基脲(hydroxyurea,简称HU),氟乐(trifluralin)结合的双阻断法进行了染色体中期同步化诱导。结果表明,染色体有丝分裂中期指数(metaphaseindex)达70%~80%;以同材料小麦黄化苗提取小麦细胞核,成功制备出小麦DNA纤维。这为研究细胞有丝分裂的调控、染色体形态结构、易位染色体检测和易位染色体片段的精确测量与定位等提供了新的技术支撑。 展开更多
关键词 小麦 同步化 dna纤维
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利用粗线期染色体和DNA纤维的FISH分析水稻端粒序列(英文) 被引量:3
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作者 李宗芸 覃瑞 +2 位作者 金危危 熊志勇 宋运淳 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第8期832-836,共5页
利用粗线期染色体和DNA纤维的荧光原位杂交(FISH)技术分析了水稻广陆矮四号(Oryzasativassp.indicacv.GuangluaiNo.4)的端粒序列。粗线期染色体荧光原位杂交结果表明,大多数染色体的末端都有端粒串联重复,但信号的强度在不同染色体上是... 利用粗线期染色体和DNA纤维的荧光原位杂交(FISH)技术分析了水稻广陆矮四号(Oryzasativassp.indicacv.GuangluaiNo.4)的端粒序列。粗线期染色体荧光原位杂交结果表明,大多数染色体的末端都有端粒串联重复,但信号的强度在不同染色体上是不同的。伸展DNA纤维荧光原位杂交结果显示,端粒最长的线状信号长度为6.55μm,最短的为1.82μm,依据2.51kb/μm的标准,它们分别相当于16.44kb和4.56kb。端粒的平均信号长度为3.62±1.32μm,相当于9.09±3.31kb。由此可以估计,最长的、最短的和平均长度的端粒拷贝数约为2349、651和1298±473。 展开更多
关键词 端粒序列 dna纤维 粗线期染色体 荧光原位杂交
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DNA纤维经醋酸处理后脱嘌呤的拉曼谱带分析 被引量:3
4
作者 余多慰 柯惟中 +1 位作者 赵含英 朱景宁 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期1-4,共4页
鲱鱼精DNA纤维经醋酸处理 ,0.5h内以B型构象为主 ,这是酸溶液溶解DNA纤维的结果 ;DNA纤维在醋酸中浸润17h后 ,A、B型构象都存在 ,以A型居多 ;在拉曼光谱分析中 ,由于存在醋酸脱嘌呤的干扰 ,所以主链构象仅依磷酸脱氧核糖核酸主链—OPO... 鲱鱼精DNA纤维经醋酸处理 ,0.5h内以B型构象为主 ,这是酸溶液溶解DNA纤维的结果 ;DNA纤维在醋酸中浸润17h后 ,A、B型构象都存在 ,以A型居多 ;在拉曼光谱分析中 ,由于存在醋酸脱嘌呤的干扰 ,所以主链构象仅依磷酸脱氧核糖核酸主链—OPO—特征模得出的结论为准 ;DNA经酸处理后 ,拉曼图谱中表征N9R糖苷键的诸峰均减色明显 ,有些甚至消失 ,这表明了脱嘌呤变化 ;在该过程中 ,碱基质子化作用也极为显著 ,它与脱嘌呤变化的共同作用导致N3、N7、N9 原子两侧各键的电子云有不同程度减色 ,它们均导致了DNA双链之间氢键的断裂 ,使有关特征峰表现出相应的变化 ,但醋酸处理DNA并不导致DNA单链的断裂。 展开更多
关键词 拉曼光谱 dna纤维 醋酸 脱嘌呤 酸处理 氢键
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莲藕DNA纤维的制备方法
5
作者 刁英 《渝西学院学报(自然科学版)》 2004年第4期66-67,共2页
建立了一种高效制备莲藕伸展DNA纤维的方法 。
关键词 莲藕 dna纤维 方法
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大麦45S和5SrDNA定位及5SrDNA伸展纤维的FISH分析 被引量:14
6
作者 赵丽娟 李立家 +2 位作者 覃瑞 熊怀阳 宋运淳 《武汉植物学研究》 CSCD 北大核心 2005年第1期15-19,共5页
用荧光原位杂交技术对45S和5SrDNA在大麦(HordeumvulgareL.)有丝分裂中期染色体进行了确定分析,较强的45SrDNA信号共有2对,分别分布在大麦的第1染色体的短臂和第2染色体的长臂。而5SrDNA则只有1对杂交信号,位于第3染色体的长臂,但信号... 用荧光原位杂交技术对45S和5SrDNA在大麦(HordeumvulgareL.)有丝分裂中期染色体进行了确定分析,较强的45SrDNA信号共有2对,分别分布在大麦的第1染色体的短臂和第2染色体的长臂。而5SrDNA则只有1对杂交信号,位于第3染色体的长臂,但信号较弱。用伸展DNA纤维的荧光原位杂交(Fiber-FISH)技术测定了5SrDNA在大麦的基因组中的拷贝数,计算出5SrDNA的拷贝数约为408~416。对大麦品种中rDNA位点数目的可变性进行了讨论。 展开更多
关键词 大麦 Rdna FISH定位 dna纤维荧光原位杂交
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荧光原位杂交技术的研究进展及其在染色体识别应用中的展望 被引量:8
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作者 卢军 李乐玉 +1 位作者 朱利泉 王小佳 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第3期911-913,共3页
荧光原位杂交技术是一门新兴的分子细胞遗传学技术,主要介绍了该技术的产生过程、基本原理、探针类型和标记方法以及发展历史,并对该技术在染色体识别中的应用作出展望。
关键词 dna纤维-FISH 多彩色荧光原位杂交 染色体识别
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玉米DNA纤维的制备及端粒DNA的Fiber-FISH
8
作者 赵丽娟 刘良科 李立家 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第6期2251-2252,2258,共3页
[目的]建立了一种快速制备DNA纤维的方法,用端粒DNA在玉米纤维上进行物理定位。[方法]采用刀切法从玉米嫩叶中提取细胞核。以端粒DNA为探针,在玉米DNA纤维上进行伸展DNA纤维的荧光原位杂交(Fiber-FISH),研究端粒DNA重复序列在玉米染... [目的]建立了一种快速制备DNA纤维的方法,用端粒DNA在玉米纤维上进行物理定位。[方法]采用刀切法从玉米嫩叶中提取细胞核。以端粒DNA为探针,在玉米DNA纤维上进行伸展DNA纤维的荧光原位杂交(Fiber-FISH),研究端粒DNA重复序列在玉米染色体上的拷贝数。[结果]用刀切法提取玉米细胞核,提高了核的完整性,并改善了DNA纤维的制备效果。玉米细胞核裂解的最佳时间为8-9 min。玉米的Fiber-FISH试验结果表明,杂交信号为伸展的念珠状长链,玉米各条染色体端粒DNA的长度为7-103μm,各染色体端粒重复序列的拷贝数存在显著差异(为15~230 kb)。[结论]玉米各染色体中端粒的长度可能不同,而且随着玉米生长及环境的变化,各条染色体端粒DNA长度的变化也不一致。 展开更多
关键词 玉米 端粒dna纤维荧光原位杂交 拷贝数
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甘蓝染色体及伸长DNA纤维制备技术的研究 被引量:2
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作者 荣小营 朱利泉 +1 位作者 王永 王小佳 《西南大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期1-7,共7页
以甘蓝根尖、花药、黄化苗等为材料,初步建立了甘蓝有丝分裂前中期染色体、减数分裂粗线期染色体以及伸长DNA纤维等3种具有不同空间分辨率的靶DNA载体的制备技术.结果表明:通过变温处理可以有效提高前中期染色体分裂相比率;采用0.002 mo... 以甘蓝根尖、花药、黄化苗等为材料,初步建立了甘蓝有丝分裂前中期染色体、减数分裂粗线期染色体以及伸长DNA纤维等3种具有不同空间分辨率的靶DNA载体的制备技术.结果表明:通过变温处理可以有效提高前中期染色体分裂相比率;采用0.002 mol/L 8-羟基喹啉20℃预处理1 h、2%纤维素酶和2%果胶酶混合液37℃酶解约2 h、0.075 mol/L氯化钾25℃低渗30 min,制备的前中期染色体效果最佳;2%纤维素酶和2%果胶酶混合液37℃酶解约3 h,可获得伸展良好、背景干净的粗线期染色体;分子梳理法与移动界面法相比,前者制备的伸长DNA纤维效果较好.此方法的建立为荧光原位杂交技术在甘蓝相关研究领域的应用打下了坚实的基础. 展开更多
关键词 甘蓝 染色体 伸长dna纤维 制片
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苹果细菌人工染色体双色DNA纤维荧光原位杂交体系的建立及应用 被引量:1
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作者 王三红 章镇 +1 位作者 蔡斌华 渠慎春 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期2205-2213,共9页
【目的】建立苹果DNA纤维荧光原位杂交(Fiber FISH)技术体系,从而为利用该技术确定苹果基因组DNA序列间的位置关系、构建精细物理图谱等方面的应用奠定基础。【方法】以‘Florina’苹果幼叶为试材,通过液氮研磨,尼龙膜过滤和TritonX-10... 【目的】建立苹果DNA纤维荧光原位杂交(Fiber FISH)技术体系,从而为利用该技术确定苹果基因组DNA序列间的位置关系、构建精细物理图谱等方面的应用奠定基础。【方法】以‘Florina’苹果幼叶为试材,通过液氮研磨,尼龙膜过滤和TritonX-100去除叶绿素等步骤提取细胞核。细胞核经碱裂解,采用盖玻片拉伸方法制备DNA纤维。比较细胞核不同裂解时间和在5种不同包被类型的载玻片上DNA纤维拉伸的效果。用碱裂解方法提取来自苹果‘Florina’自交不亲和S9基因座的4个细菌人工染色体(Bacterium Artificial Chromosome)BAC 34G16、BAC 45M19、BAC 70J19和BAC 69A4。提取的质粒经PEG纯化,用地高辛或生物素标记探针。探针与DNA纤维制片经过80℃变性、37℃杂交2—3 d和洗片,采用"三明治"方法进行信号放大和检测,在荧光显微镜下观察试验结果。【结果】建立了以苹果幼叶为材料,液氮研磨提取细胞核,碱裂解细胞核和盖玻片拉伸制备DNA纤维的试验方法。提取的细胞核纯净、结构完整,细胞核浓度>5×103个/μL。试验结果表明,细胞核裂解4 min,在多聚赖氨酸包被的载玻片上制备的DNA纤维平直、伸展均匀,纤维量多、细长,效果好。经原位杂交和信号检测,获得了清晰的、具有Fiber FISH典型特征的"念珠状"杂交信号。对已知大小和位置关系的两个BAC克隆BAC 34G16和BAC 45M19进行杂交信号测量和分析,得出BAC克隆大小(Y,Kb)与信号长度(X,μm)的相关方程为Y=3.47X(R2=0.9215),其斜率即为该试验技术体系Fiber FISH的分辨率3.47 kb·μm-1。试验对未知大小和位置关系的两个BAC克隆BAC 70J19和BAC 69A4成功地进行了鉴定,它们大小分别为(112.1±18.4)kb和(133.2±16.3)kb,之间有(90.2±7.3)kb的重叠区域。【结论】建立了以苹果幼叶提取细胞核,制备DNA纤维和原位杂交的方法,获得了高分辨率的苹果DNA纤维原位杂交试验技术体系。 展开更多
关键词 苹果 细菌人工染色体 dna纤维荧光原位杂交
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小鼠富集着丝粒DNA在小鼠减数分裂粗线期染色体上的原位杂交
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作者 易宁 林亚康 +2 位作者 桑一军 倪祖梅 施履吉 《实验生物学报》 CSCD 1994年第4期515-521,共7页
本工作用Hoechst 33258及着丝粒特异抗体间接免疫荧光法显示的小鼠粗线期染色体主缢痕区,与以小鼠富集着丝粒(SFA)DNA为探针在粗线期染色体上的原位杂交主缢痕区作了比较。发现SFA DNA探针不仅杂交于全部常染色体联会复合体上的着丝粒区... 本工作用Hoechst 33258及着丝粒特异抗体间接免疫荧光法显示的小鼠粗线期染色体主缢痕区,与以小鼠富集着丝粒(SFA)DNA为探针在粗线期染色体上的原位杂交主缢痕区作了比较。发现SFA DNA探针不仅杂交于全部常染色体联会复合体上的着丝粒区,并且杂交于着丝粒周围的异染色质区;而且,也杂交于X,Y染色体的着丝粒区。由此结论:此富集SFA DNA中含有全套常染色体及X,Y染色体的SFA DNA。 展开更多
关键词 富集着丝粒 着丝粒 dna 粗线期 染色体 原位杂交
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