川贝母DNA检测试剂盒的研制与评价 被引量：13

1

作者 周亭亭 于文静 +2 位作者 李明成 王冰梅 张丽华 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期501-504,共4页

目的研制川贝母DNA检测试剂盒，确定试剂盒组成及操作程序，建立一种简便、快速鉴定川贝母的分子生物学检验方法。方法分别采用药典法（2010年版《中国药典》增补本）和试剂盒法提取川贝母基因组DNA，进行PCR反应和RFLP鉴定。结果采用... 目的研制川贝母DNA检测试剂盒，确定试剂盒组成及操作程序，建立一种简便、快速鉴定川贝母的分子生物学检验方法。方法分别采用药典法（2010年版《中国药典》增补本）和试剂盒法提取川贝母基因组DNA，进行PCR反应和RFLP鉴定。结果采用药典法提取出的川贝母基因组DNA的OD260／OD280值最高为（1．57±0．05），而采用试剂盒法所提DNA的OD260／00280值可达（1．73±0．10）；两法PCR结果均在300bp上方有单一明亮条带；RFLP鉴定图谱均在100～250bp之间出现2条清晰条带。结论试剂盒法较药典法更稳定，且核酸提取量及纯度都高于药典法，2种方法PCR及RFLP鉴定结果完全一致。川贝母DNA检测试剂盒特异性好、灵敏度高、稳定性强，适用于川贝母的快速检测。 展开更多

关键词 川贝母 dna检测试剂盒 聚合酶链式反应 限制性片段长度多态性分析 鉴定图谱

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鹿胎DNA检测试剂盒的研制与评价 被引量：11

2

作者 艾金霞 李明成 +4 位作者 夏薇 苑广信 高峰 高丽君 张丽华 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期306-311,共6页

目的研制一种鹿胎DNA检测试剂盒,对试剂盒的特异性、稳定性、敏感性和重复性进行评价,并对市售鹿胎药材进行质量考察。方法对经典鹿胎DNA提取及PCR鉴定方法进行改良,研制标准DNA检测试剂盒,用试剂盒对鹿胎正品、伪品进行DNA提取和PCR扩... 目的研制一种鹿胎DNA检测试剂盒,对试剂盒的特异性、稳定性、敏感性和重复性进行评价,并对市售鹿胎药材进行质量考察。方法对经典鹿胎DNA提取及PCR鉴定方法进行改良,研制标准DNA检测试剂盒,用试剂盒对鹿胎正品、伪品进行DNA提取和PCR扩增,紫外分光光度法测纯度,对市售鹿胎样品进行验证。结果鹿胎DNA检测试剂盒反复冻融处理20次后依然有效,可于-20℃保存1年;样品DNA原液稀释200倍仍可检测;22个鹿胎样品中15个为正品,7个为不合格品。试剂盒特异性为100%;批内、批间变异系数分别为2.32%和2.56%。结论鹿胎DNA检测试剂盒的核酸提取量及纯度满足鉴定需求,且特异性好、灵敏度高、稳定性强,适用于鹿胎与伪品的快速检测。 展开更多

关键词 鹿胎 dna提取 dna检测试剂盒 性能评价

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鸡肿瘤病快速鉴别诊断试剂盒及其应用研究 被引量：10

3

作者 韦平 何秀苗 +5 位作者 王桂军 李康然 蒋玲艳 李莉萍 阳秀英 慕朝师 《广西科学》 CAS 2005年第1期62-67,共6页

建立快速鉴别诊断鸡肿瘤病的聚合酶链式反应技术并研制成配套的诊断试剂盒。应用该试剂盒及其配套的操作程序 ,在 2 0 0 0年 5月～ 2 0 0 4年 7月检测来源于广西 6个地区 2 0 2个禽群共 6 85羽病、死鸡和火鸡的肿瘤和可疑肿瘤组织病料... 建立快速鉴别诊断鸡肿瘤病的聚合酶链式反应技术并研制成配套的诊断试剂盒。应用该试剂盒及其配套的操作程序 ,在 2 0 0 0年 5月～ 2 0 0 4年 7月检测来源于广西 6个地区 2 0 2个禽群共 6 85羽病、死鸡和火鸡的肿瘤和可疑肿瘤组织病料以及来源于安徽省不同地区的 4 6个鸡群的疑似肿瘤病、死鸡 30 5羽 ;同时 ,检测广西、安徽、山东、河南主要养鸡地区临床表现为生长缓慢、消瘦、贫血、疫苗免疫应答不佳、发病率和死亡率偏高等疑为免疫抑制状态的 15 4个鸡群中的 6 4 4羽病、死鸡。结果 ,在肿瘤和可疑肿瘤病料的检测中 ,马立克氏病、网状内皮增生症和禽白血病的阳性率分别为 5 7.17%、11.84 %和 5 .4 7% ,其中二重、三重混合感染总检测率为 16 .2 5 %。在疑似免疫抑制性疾病病料的检测中 ,3种鸡肿瘤病的阳性率分别为 2 8.2 6 %、7.4 5 %和 4 .19% ,其中二重、三重肿瘤病以及与其它免疫抑制性疾病的混合感染率达 35 .92 %。建立的鸡肿瘤病快速鉴别诊断程序及试剂盒 ,操作简便快捷、结果准确可靠、保存方便、检测成本低 ,适用于临床鸡肿瘤病的鉴别诊断 ,对鸡肿瘤病的流行病学调查、免疫抑制病检测以及兽医检疫有重要价值。 展开更多

关键词 鸡肿瘤病 鉴别诊断 聚合酶链式反应 核酸探针 试剂盒 免疫抑制性疾病 混合感染 应用

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中药材鹿心分子鉴定方法及检测试剂的研究 被引量：6

4

作者 王艳双 姜海瀛 +5 位作者 刘美琳 高丽君 李明成 孙丽媛 张丽华 艾金霞 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期544-551,共8页

目的建立中药材鹿心DNA指纹鉴定方法,研发鹿心DNA检测试剂盒。方法以梅花鹿和马鹿mtDNA Cytb基因作为靶基因,设计小片段特异性引物,研制鹿心DNA提取及PCR检测试剂;应用分子克隆及测序技术,克隆鹿心对照药材;并对试剂的特异性、重现性、... 目的建立中药材鹿心DNA指纹鉴定方法,研发鹿心DNA检测试剂盒。方法以梅花鹿和马鹿mtDNA Cytb基因作为靶基因,设计小片段特异性引物,研制鹿心DNA提取及PCR检测试剂;应用分子克隆及测序技术,克隆鹿心对照药材;并对试剂的特异性、重现性、稳定性及灵敏度进行考察;对市售鹿心样品进行真伪鉴定。结果自主研发的试剂提取鹿心的DNA浓度纯度均达到PCR的要求;在退火温度为63℃时引物的特异性最强;克隆测序后的鹿心DNA序列与鹿心mtDNA Cytb特异指纹区段序列一致;自主研发的试剂重现性、稳定性良好,灵敏度达到0.5%;对市售30个鹿心样品进行检测,伪品率为40%。结论建立的鹿心DNA指纹鉴定方法特异、准确、可靠,研制的鹿心DNA检测试剂盒操作简便、结果稳定。 展开更多

关键词 鹿心 dna指纹鉴定 dna检测试剂盒 分子克隆 测序技术

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食用肉类中5种动物源性成分多重PCR检测方法及检测试剂盒的研制

5

作者 孙文 王晗 孟黎明 《现代食品》 2024年第11期152-154,共3页

目的:建立一种同步检测肉类中鹿、牛、羊、猪、马动物源性成分的多重聚合酶链式反应检测方法,并研发快速检测的多重PCR试剂盒。方法:将牛、羊、猪、马的Cyt b基因以及梅花鹿、马鹿的COX 1基因作为设计引物的靶序列,设计特异性引物,优化... 目的:建立一种同步检测肉类中鹿、牛、羊、猪、马动物源性成分的多重聚合酶链式反应检测方法,并研发快速检测的多重PCR试剂盒。方法:将牛、羊、猪、马的Cyt b基因以及梅花鹿、马鹿的COX 1基因作为设计引物的靶序列,设计特异性引物,优化PCR体系,建立5种动物源性成分的多重PCR鉴定方法。结果:在同一反应体系中,可同步扩增鹿肉(173 bp)、牛肉(148 bp)、猪肉(261 bp)、羊肉(100 bp)以及马肉(424 bp)的特异性条带。结论:本研究开发的多重PCR检测试剂盒可同步检测肉类中5种动物源性成分。 展开更多

关键词 多重PCR 线粒体dna 动物源性成分 试剂盒

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基于mt DNA cyt b基因兔睾丸鉴定方法的建立及检测试剂盒的研制 被引量：4

6

作者 王艳双 姜海瀛 +5 位作者 李坦诚 艾金霞 高丽君 李明成 张丽华 孙丽媛 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期1376-1383,共8页

目的:建立兔睾丸DNA指纹鉴定方法,研发出兔睾丸DNA检测试剂盒。方法:以穴兔线粒体DNA(mt DNA)细胞色素b(cyt b)基因作为靶基因,设计兔睾丸特异性引物,利用现代DNA指纹技术,研制兔睾丸DNA提取及检测试剂,并对试剂的特异性、重复性及稳定... 目的:建立兔睾丸DNA指纹鉴定方法,研发出兔睾丸DNA检测试剂盒。方法:以穴兔线粒体DNA(mt DNA)细胞色素b(cyt b)基因作为靶基因,设计兔睾丸特异性引物,利用现代DNA指纹技术,研制兔睾丸DNA提取及检测试剂,并对试剂的特异性、重复性及稳定性进行考察;应用分子克隆及测序技术,克隆兔睾丸DNA检测的标准品;进而建立兔睾丸DNA指纹鉴定方法,制定质量标准,开发出兔睾丸DNA检测试剂盒。结果:自主研发的试剂提取的兔睾丸DNA结构完整性较好,DNA浓度与纯度均较高;59℃时引物的特异性最强;兔睾丸正品均在326 bp处出现1条特异性扩增条带,而阴性及空白对照均未出现扩增条带;克隆测序后的兔睾丸DNA序列与穴兔mt DNA特异指纹区段同源性100%。结论:本研究建立的兔睾丸DNA指纹鉴定方法特异、准确、可靠,研发的DNA检测试剂盒操作简便,结果稳定,适于普及推广使用。 展开更多

关键词 兔睾丸 线粒体dna细胞色素b基因 dna指纹技术 PCR技术 分子克隆 基因测序 dna检测试剂盒

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中药材川贝母标准品特异DNA指纹片段的克隆及鉴定 被引量：5

7

作者 李萧涵 李明成 +3 位作者 周亭亭 于文静 张丽华 王冰梅 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期616-619,共4页

目的建立一种能够有效保存川贝母标准品DNA指纹片段的方法。方法采用自主研制的川贝母DNA检测试剂盒提取基因组DNA,体外进行川贝母特异DNA片段克隆,与载体结合并导入生物宿主细胞,通过宿主细胞自我复制产生大量川贝母特异DNA克隆,继而... 目的建立一种能够有效保存川贝母标准品DNA指纹片段的方法。方法采用自主研制的川贝母DNA检测试剂盒提取基因组DNA,体外进行川贝母特异DNA片段克隆,与载体结合并导入生物宿主细胞,通过宿主细胞自我复制产生大量川贝母特异DNA克隆,继而采用质粒提取试剂盒将质粒提取出来,应用PCR及酶切方法检查并鉴定插入片段是否正确。将携带正品川贝母特异DNA序列的菌落置-80℃冰柜保存,分别以1个月、2个月、3个月和6个月为时间点进行复苏,进行稳定性考察。结果转入细胞内的川贝母DNA克隆经PCR扩增后,所得到的琼脂糖凝胶电泳图谱条带清晰,并且进行多次实验结果均一致。4个时间点复苏后的菌落进行PCR扩增后,其琼脂糖凝胶电泳检测图谱中,条带明亮且清晰。结论采用分子克隆技术保存川贝母特异基因片段的方法是可行且有效的,并且稳定性良好,可作为建立中药DNA指纹鉴定数据库的有效依据,方法简单明了,且结果可靠。 展开更多

关键词 川贝母 分子克隆 指纹特征

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人参DNA检测试剂盒的研制与评价 被引量：2

8

作者 周雨晴 李明 +3 位作者 王雪松 夏薇 李明成 张丽华 《中国药学杂志》 CSCD 北大核心 2016年第21期1866-1870,共5页

目的研制一种集人参DNA提取与聚合酶链式反应（PCR）鉴定于一体的快速DNA检测试剂盒。方法对经典人参DNA提取及PCR鉴定方法进行改良，确定试剂盒的组成与反应条件，并评价其性能指标。用试剂盒对人参正品、伪品进行DNA提取和PCR扩增，... 目的研制一种集人参DNA提取与聚合酶链式反应（PCR）鉴定于一体的快速DNA检测试剂盒。方法对经典人参DNA提取及PCR鉴定方法进行改良，确定试剂盒的组成与反应条件，并评价其性能指标。用试剂盒对人参正品、伪品进行DNA提取和PCR扩增，紫外分光光度法测纯度，并对市售人参样品进行验证。结果提取的DNA纯度为（1．73±0．13）；正品人参PCR鉴定结果在150—200bp处有单一明亮条带。试剂盒特异性为100％；批内、批间变异系数分别为2．38％和2．62％；样品DNA原液稀释200倍仍可检测；反复冻融20次对检测效果无影响，可于-20℃保存1年；10个市售样品中8个为正品，2个为伪品。结论人参DNA检测试剂盒提取的核酸浓度与纯度满足鉴定需求，且特异性好、灵敏度高、稳定性强，适用于人参及其伪品的快速检测。 展开更多

关键词 人参 dna提取 聚合酶链式反应:dna检测试剂盒:性能评价

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基于PCR指纹技术鹿鞭鉴定方法的建立及检测试剂盒的研制 被引量：2

9

作者 王雪松 艾金霞 +5 位作者 薛晗 孙丽媛 王艳双 周亭亭 李明成 张丽华 《吉林医药学院学报》 2021年第1期1-5,共5页

目的建立鹿鞭及其伪品指纹鉴定方法,开发鹿鞭DNA检测试剂盒。方法采用改良的SDS方法从鹿鞭及牛鞭基因组中提取DNA。以鹿鞭线粒体细胞色素b作为靶基因,设计鹿鞭特异性引物,利用现代DNA指纹技术,研制了鹿鞭DNA提取和检测试剂,建立鹿鞭指... 目的建立鹿鞭及其伪品指纹鉴定方法,开发鹿鞭DNA检测试剂盒。方法采用改良的SDS方法从鹿鞭及牛鞭基因组中提取DNA。以鹿鞭线粒体细胞色素b作为靶基因,设计鹿鞭特异性引物,利用现代DNA指纹技术,研制了鹿鞭DNA提取和检测试剂,建立鹿鞭指纹鉴定方法,开发出鹿鞭DNA检测试剂盒。结果利用PCR指纹技术提取的鹿鞭基因组DNA为21000 bp,纯度为1.80±0.10之间;应用特异性引物可准确鉴别鹿鞭及牛鞭样品,鹿鞭特异性扩增产物DNA分子片段为307 bp,而牛鞭及阴性对照无扩增条带;自主研发鹿鞭DNA检测试剂盒经反复冻融依然有效,多次进行特异性、稳定性和重现性试验,结果完全一致。结论鹿鞭DNA检测试剂盒可作为鹿鞭鉴定的有效方法,该方法客观、准确、方便,可有效区分鹿鞭及其伪品。 展开更多

关键词 鹿鞭 牛鞭 细胞色素B dna检测试剂盒 PCR指纹技术

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龟甲DNA检测试剂盒的研制与评价 被引量：1

10

作者 曲莉 王淼 +3 位作者 邓莹 张丽华 牛佳牧 李明成 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期668-672,共5页

研制一种集DNA提取与PCR鉴定为一体的龟甲检测试剂盒,考察试剂盒的特异性、敏感性、重复性及稳定性。通过优化DNA提取和PCR检测方法,将所需试剂组合成试剂盒,用其提取龟甲正品及伪品mtDNA,进行PCR鉴定。试剂盒提取龟甲正品及伪品mtDNA的... 研制一种集DNA提取与PCR鉴定为一体的龟甲检测试剂盒,考察试剂盒的特异性、敏感性、重复性及稳定性。通过优化DNA提取和PCR检测方法,将所需试剂组合成试剂盒,用其提取龟甲正品及伪品mtDNA,进行PCR鉴定。试剂盒提取龟甲正品及伪品mtDNA的OD260/OD280为1.80±0.05,正品龟甲在335bp和410bp出现两条清晰条带,伪品龟甲则无条带出现,试剂盒特异性为100%,检测限为0.025 g,经反复冻融20次后依然有效,3次重复性检测均重现相同结果。龟甲DNA检测试剂盒特异性强、灵敏度高、稳定性好,适用于龟甲药材的快速检测。 展开更多

关键词 龟甲 dna检测试剂盒 复合PCR

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鹿胎阳性质控品DNA检测试剂盒的开发与应用 被引量：1

11

作者 崔琳 艾金霞 +8 位作者 段思琪 刘琳 李亚茹 邵博宇 杨畅 高丽君 孙丽媛 李明成 苑广信 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期232-237,共6页

目的研发鹿胎DNA阳性质控品,组装检测试剂盒。方法提取鹿胎及其伪品DNA,设计通用鹿引物并进行PCR扩增,克隆种属特异性目的片段,构建鹿胎DNA阳性质控品并组装DNA检测试剂盒,进行试剂盒性能实验并应用于市售鹿胎样品检测。结果应用美国国... 目的研发鹿胎DNA阳性质控品,组装检测试剂盒。方法提取鹿胎及其伪品DNA,设计通用鹿引物并进行PCR扩增,克隆种属特异性目的片段,构建鹿胎DNA阳性质控品并组装DNA检测试剂盒,进行试剂盒性能实验并应用于市售鹿胎样品检测。结果应用美国国家生物技术信息中心(NCBI)分析测序比对结果,正确率为100%,在526 bp处可见明显条带,与目的片段相符,可作为鹿胎阳性质控品。阳性质控品灵敏性最低检测限为10 ng·μL-1,经多次反复冻融的试剂盒,仍可确保PCR检测结果的稳定性。试剂盒应用于对市售鹿胎及伪品的检测,PCR检测结果与预期相符。结论构建鹿胎阳性质控品作为电泳分析时的阳性对照,结果更加准确稳定,适用于对鹿胎及伪品的快速鉴定,保障对鹿胎质量的有效监管。 展开更多

关键词 鹿胎 阳性质控品 dna检测试剂盒 分子生物学 鉴别真伪

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常见食用肉中狐源性成分DNA检测试剂盒的研制与应用 被引量：1

12

作者 艾金霞 惠赫童 +8 位作者 高丽君 孙丽媛 李明成 夏薇 苑广信 张丽华 段思琪 李盈诺 陈堃 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期979-983,共5页

目的研制狐源性成分DNA提取和检测试剂盒。方法对经典DNA提取方法进行改良,研制了狐源性成分DNA提取和检测试剂,开发了狐源性成分DNA检测试剂盒,并对试剂盒检测参数进行评价。应用该试剂盒对狐肉与42种市售食用肉制品混合样品进行检验... 目的研制狐源性成分DNA提取和检测试剂盒。方法对经典DNA提取方法进行改良,研制了狐源性成分DNA提取和检测试剂,开发了狐源性成分DNA检测试剂盒,并对试剂盒检测参数进行评价。应用该试剂盒对狐肉与42种市售食用肉制品混合样品进行检验。结果狐肉DNA检测试剂盒反复冻融处理5、10和20次后依然有效,可于-20℃保存1年。狐肉与42种常见食用肉类混合样品均可检出狐源性成分,试剂盒特异性为100%;样品DNA最低检测限为0. 1 ng/μL。结论狐源性成分DNA检测试剂盒适用于常见食用肉中狐源性成分快速检测,且特异性好、灵敏度高、稳定性强。 展开更多

关键词 狐源性成分 聚合酶链式反应 dna检测试剂盒 常见食用肉 食品安全

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