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基于转录组学的安格斯牛和中国西门塔尔牛脂肪沉积相关差异表达基因研究 被引量：5
1
作者 韩信嵘 吴慧光 +2 位作者 吴江鸿 王国富 高树新 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2020年第6期208-216,共9页
为探明安格斯牛和中国西门塔尔牛脂肪沉积的相关差异表达基因,以其背膘组织为研究对象,提取总RNA,建立测序文库后利用华大BGISEQ-500进行测序,经生物信息学分析筛选出差异表达基因,并对差异表达基因进行GO功能富集和KEGG通路分析,最后... 为探明安格斯牛和中国西门塔尔牛脂肪沉积的相关差异表达基因,以其背膘组织为研究对象,提取总RNA,建立测序文库后利用华大BGISEQ-500进行测序,经生物信息学分析筛选出差异表达基因,并对差异表达基因进行GO功能富集和KEGG通路分析,最后采用荧光定量qPCR(qRT-PCR)验证转录组测序数据的准确性。中国西门塔尔牛对安格斯牛转录组数据结果显示有1296个差异表达基因,其中上调基因802个,下调基因494个;对转录组数据的GO功能富集分析结果显示在生物过程、分子功能、细胞组分分别富集到2205,890,3149个条目,KEGG通路分析结果表明,差异基因显著富集在6个分支上。对其中与脂肪沉积相关的cAMP通路进行分析,筛选出与脂肪沉积相关的差异表达基因3个,分别为DKKL1、ACACB和PTGS2,并通过qRT-PCR对基因DKKL1、ACACB和PTGS2进行了验证,初步确定其为脂肪沉积的候选基因。通过对中国西门塔尔牛和安格斯牛的背膘组织测序获得的大量差异表达基因,为后续对脂肪沉积相关基因的筛选奠定了基础。 展开更多
关键词 牛 脂肪沉积 dkkl1 ACACB PTGS2 QRT-PCR
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弱精子症患者精子中DKKL1的表达 被引量：5
2
作者 颜秋霞 马义 +5 位作者 陈润强 周秀琴 乔静 冼英杰 冯玲 陈彩蓉 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期324-328,共5页
目的探讨精子顶体相关基因(DKKL1)在弱精子症患者精子中的表达特征及临床意义。方法收集正常男性和弱精子症患者精液,各取10μL精液用全自动计算机辅助精液分析系统(CASA)对精液进行常规分析。为了避免白细胞和生精细胞对结果的影响,剩... 目的探讨精子顶体相关基因(DKKL1)在弱精子症患者精子中的表达特征及临床意义。方法收集正常男性和弱精子症患者精液,各取10μL精液用全自动计算机辅助精液分析系统(CASA)对精液进行常规分析。为了避免白细胞和生精细胞对结果的影响,剩余精液采用4个梯度的Percoll法离心分离和纯化精子。Trizol法提取精子RNA,实时荧光定量PCR从基因水平检测DKKL1基因在正常人和弱精子症患者精子中的表达差异;最后采用Western blot方法从蛋白水平检测DKKL1蛋白在正常人和弱精子症患者精子中的表达差异。结果精液常规分析结果显示,弱精子症和正常人两组之间的年龄、精液体积、精子浓度和正常精子形态比例均没有统计学差异(P>0.05)。与正常对照组相比,弱精子症组PR和PR+NP精子的比例显著降低(P<0.01)。实时荧光定量PCR结果显示,与正常对照组相比,DKKL1 m RNA在弱精子症患者精子中的表达量降低11.1倍。此外,Western blot结果显示,弱精子症组DKKL1蛋白的表达量与正常对照组相比,降低了2.4倍,差异具有统计学意义(P<0.01),该结果与实时荧光定量PCR结果一致。结论 DKKL1在弱精子症患者精子中的表达水平明显下降,表明其与精子运动密切相关,是导致弱精子症发生的原因之一。 展开更多
关键词 dkkl1 男性不育 弱子精症
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乏氧激活人口腔鳞癌细胞DKKL1的表达 被引量：1
3
作者 王建秋 范如意 +1 位作者 谢其洋 闫风琴 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期2569-2571,共3页
目的探讨常氧和乏氧条件下人口腔鳞癌细胞Dickkopf样蛋白-1(DKKL1)的表达及可能的表观遗传学机制。方法取对数生长期人口腔鳞癌SAS细胞和OECM-1细胞,常氧或乏氧(1.0%O2)条件下培养18 h,采用实时荧光定量PCR方法检测DKKL1 mRNA水平的表达... 目的探讨常氧和乏氧条件下人口腔鳞癌细胞Dickkopf样蛋白-1(DKKL1)的表达及可能的表观遗传学机制。方法取对数生长期人口腔鳞癌SAS细胞和OECM-1细胞,常氧或乏氧(1.0%O2)条件下培养18 h,采用实时荧光定量PCR方法检测DKKL1 mRNA水平的表达,采用Western印迹方法检测其蛋白水平的表达;进一步采用染色质免疫沉淀(Ch IP)方法检测DKKL1基因启动子上H3K4乙酰化(H3K4ac)和二甲基化(H3K4me2)水平的变化。结果与常氧条件下相比,乏氧使DKKL1在SAS和OECM-1两种口腔鳞癌细胞中的表达均显著升高,其mRNA水平分别为常氧条件下的(4.0±0.4)倍(P<0.01)和(2.4±0.1)倍(P<0.01);Ch IP结果显示,乏氧增加了DKKL1基因启动子上H3K4ac水平,降低了H3K4me2水平。结论乏氧可激活口腔鳞癌细胞DKKL1的表达,该作用可能与乏氧调节DKKL1基因启动子上组蛋白H3K4的乙酰化和二甲基化修饰有关。 展开更多
关键词 口腔鳞癌 乏氧 Dickkopf样蛋白-1 组蛋白修饰
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中华鳖Dkkl1基因的分子特征及对外源性激素处理的响应
4
作者 汪泳昌 祝骏贤 +13 位作者 李建松 陈辰 纪利芹 洪孝友 刘晓莉 王亚坤 吴聪聪 余汶君 罗来福 陈海港 魏成清 朱新平 张俊杰 李伟 《南方水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期166-172,共7页
Dkkl1基因在哺乳动物睾丸发育和精子发生过程中扮演着重要角色,然而其在龟鳖类动物中的研究十分有限。为探索龟鳖类Dkkl1基因的潜在功能和作用机制,克隆了中华鳖(Pelodiscus sinensis)Dkkl1基因的cDNA片段,分析其序列特征、表达模式以... Dkkl1基因在哺乳动物睾丸发育和精子发生过程中扮演着重要角色,然而其在龟鳖类动物中的研究十分有限。为探索龟鳖类Dkkl1基因的潜在功能和作用机制,克隆了中华鳖(Pelodiscus sinensis)Dkkl1基因的cDNA片段,分析其序列特征、表达模式以及对外源性激素处理的响应。克隆获得的Dkkl 1基因cDN A序列长度为823 bp,其中3'-非编码区(UTR)为67 bp,5'UTR为90 bp,开放阅读框为666 bp,共编码222个氨基酸。中华鳖Dkkl1蛋白是一种稳定性较差、亲水性较强的碱性蛋白,其二级结构和三级结构主要以α-螺旋和无规则卷曲为主。氨基酸序列同源性比对结果显示其与中华草龟(Chinemys reevesii)Dkkl1蛋白的相似性较高(81%),与棱皮龟(Dermochelys coriacea)Dkkl1蛋白的同源性较低(70%)。通过RT-PCR和RT-qPCR分析发现,中华鳖Dkkl1 mRNA在3冬龄成体精巢中极显著性高表达(P<0.001),而在其余体组织中几乎不表达。并且随着年龄的增长,中华鳖精巢中Dkkl1基因的表达量逐渐上升,并在3冬龄时达到顶峰。此外,17β-雌二醇(E2)和17α-甲基睾酮(17α-MT)处理均可显著抑制成体中华鳖精巢中Dkkl1基因的表达(P<0.05)。研究表明,Dkkl1基因可能在中华鳖睾丸发育和精子发生过程中起着重要作用。 展开更多
关键词 中华鳖 dkkl1基因 睾丸发育 精子发生 生物信息学分析 外源性激素
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精子顶体相关基因DKKL1在正常人和男性不育患者睾丸组织中的表达差异 被引量：3
5
作者 颜秋霞 唐爱发 +2 位作者 来永庆 蔡志明 桂耀庭 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2014年第1期36-39,共4页
目的:研究精子顶体相关基因DKKL1在正常人和男性不育患者睾丸组织中的表达差异。方法:采用RT-PCR和Western Blot方法检测DKKL1基因在人多组织中的表达特征,并比较其在正常人和男性不育患者睾丸组织中的表达差异。采用免疫组化方法分析DK... 目的:研究精子顶体相关基因DKKL1在正常人和男性不育患者睾丸组织中的表达差异。方法:采用RT-PCR和Western Blot方法检测DKKL1基因在人多组织中的表达特征,并比较其在正常人和男性不育患者睾丸组织中的表达差异。采用免疫组化方法分析DKKL1蛋白在正常和男性不育患者睾丸组织中的表达差异。结果:人多组织RT-PCR和Western Blot结果显示DKKL1基因为睾丸组织特异性表达,与正常人睾丸组织比较,DKKL1基因在男性不育患者睾丸组织中表达减弱或消失。免疫组化结果显示DKKL1蛋白主要定位在正常男性睾丸的精母细胞和圆形精子细胞,而在唯支持细胞综合征(SCOS)和隐睾患者睾丸组织中不表达,在各种生精细胞阻滞患者的睾丸中观察到不同的表达特征。结论:DKKL1基因在男性不育患者睾丸组织中对精子发生可能具有重要作用,其表达降低或消失可能是男性不育症发生的重要原因之一。 展开更多
关键词 不育 男(雄)性 dkkl1基因 精子发生 睾丸 无精子症
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乳腺癌中DKKL1的表达、作用及机制探讨 被引量：2
6
作者 王丁 甘霖 +2 位作者 张国铎 刘莉 陈艳 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期696-707,共12页
目的:研究Dickkopf样蛋白1(dickkopf-like protein 1,DKKL1)基因在乳腺癌组织和细胞系中的表达水平,探讨DKKL1基因过表达对人乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞增殖、迁移的影响及其分子作用机制。方法:采用实时荧光定量PCR检测乳腺癌细胞系... 目的:研究Dickkopf样蛋白1(dickkopf-like protein 1,DKKL1)基因在乳腺癌组织和细胞系中的表达水平,探讨DKKL1基因过表达对人乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞增殖、迁移的影响及其分子作用机制。方法:采用实时荧光定量PCR检测乳腺癌细胞系、80例人乳腺癌和癌旁组织以及20例正常乳腺组织中DKKL1 mRNA的表达水平;免疫组织化学法检测人乳腺癌组织中DKKL1蛋白的表达水平并分析与患者临床病理特征的相关性。选取表达水平最低的MDA-MB-231和MCF-7细胞,分别转染空载体pcDNA3.1(+)-Flag质粒(作为对照组)和重组pcDNA3.1(+)-Flag-DKKL1质粒(作为实验组)后,采用蛋白质印迹法验证DKKL1蛋白是否过表达;然后分别采用CCK-8法、软琼脂克隆形成实验、吖啶橙/溴化乙锭双染实验和Transwell小室迁移实验检测MDA-MB-231和MCF-7细胞增殖和迁移的变化;并采用蛋白质印迹和实时荧光定量PCR法分别检测DKKL1过表达对上皮-间质转化及下游靶分子表达和Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)通路的影响。结果:人乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MCF-7、BT549、MDA-MB-468、T47D和ZR-75-1中DKKL1 mRNA表达水平均明显低于正常乳腺上皮细胞MCF-10A(P值均<0.001)。与20例正常乳腺组织和80例配对癌旁组织相比,人乳腺癌组织中DKKL1 mRNA和蛋白表达均明显下调(P值均<0.01);DKKL1蛋白表达与乳腺癌的淋巴结转移、组织学分级及TNM分期具有明显相关性(P值均<0.05)。DKKL1过表达质粒转染后,乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞中DKKL1蛋白的表达水平明显上调,而细胞增殖、克隆形成、凋亡和迁移能力均被明显抑制(P值均<0.001)。DKKL1过表达可上调上皮标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)mRNA及蛋白表达水平,同时下调波形蛋白(Vimentin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、Snail、BMI-1、KLF4和CD44 mRNA及蛋白的表达水平(P值均<0.001)。DKKL1过表达后活化的β-catenin蛋白、磷酸化的糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase 3β 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 dkkl1基因 细胞增殖 细胞运动 WNT/Β-CATENIN信号通路
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精子顶体相关蛋白Dkkll在小鼠睾丸组织中的表达研究
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作者 颜秋霞 郭晓燕 +3 位作者 陈彩蓉 李介华 蔡志明 唐爱发 《中国男科学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期3-7,共5页
目的：研究顶体相关蛋白Dkkl1在小鼠睾丸组织发育过程中的表达特征。方法将4d、9d、18d、35d、54d和6月龄小鼠睾丸组织cDNA探针与Affymetrix全基因组芯片进行杂交，筛选出差异表达的Dkkl1基因。采用RT-PCR方法检测Dkkl1基因在小鼠不同... 目的：研究顶体相关蛋白Dkkl1在小鼠睾丸组织发育过程中的表达特征。方法将4d、9d、18d、35d、54d和6月龄小鼠睾丸组织cDNA探针与Affymetrix全基因组芯片进行杂交，筛选出差异表达的Dkkl1基因。采用RT-PCR方法检测Dkkl1基因在小鼠不同日龄和不同组织中的表达情况，采用免疫组化方法检测Dkkl1蛋白在小鼠睾丸组织中的定位。结果对Affymetrix全基因组芯片杂交结果分析后，筛选得到1个差异表达杂交点，通过在NCBI网站与小鼠全基因组序列Blast分析可知该差异表达基因是Dkkl1基因。RT-PCR结果表明Dkkl1 mRNA呈小鼠睾丸特异性表达，在出生31d小鼠睾丸开始高表达，在成年前达到高峰。Dkkl1蛋白主要定位在睾丸精母细胞和圆形精子细胞。结论 Dkkl1基因存在发育的表达调控，为小鼠年龄依赖性表达基因，其表达与小鼠精子发生的过程有很强的一致性，且具有睾丸特异性表达的特征，因此我们推测该基因可能在精子发生中具有关键作用。 展开更多
关键词 基因芯片 dkkl1基因 精子发生
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