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MSC介导的尸删基因体外作用于人DBTRG胶质瘤细胞的实验研究
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作者 汤祥军 杨卓顺 +3 位作者 张力 黄宽明 戴龙君 涂汉军 《中华神经医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1189-1194,共6页
目的将人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因（PTEN）转染间充质干细胞（MSC），检测MSCPIEN细胞基因产物的表达及其培养上清对人DBTRG胶质瘤细胞的作用。方法原代培养人脐带MSC，将PTEN基因表达质粒pDsRed-PTEN转染MSC,培养... 目的将人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因（PTEN）转染间充质干细胞（MSC），检测MSCPIEN细胞基因产物的表达及其培养上清对人DBTRG胶质瘤细胞的作用。方法原代培养人脐带MSC，将PTEN基因表达质粒pDsRed-PTEN转染MSC,培养48h后荧光显微镜观察转染效果。将转染后MSCPTEN作为实验组，单纯MSC作为对照组。RT-PCR、Westem blotting、ELISA分别检测2组细胞删基因、蛋白及上清液中分泌性PTEN蛋白的表达：将体外培养的DBTRG细胞分为4组，分别加入MSC上清液和比例为25％、50％、100％的MSCPTEN上清液，继续培养24h，细胞活性／细胞毒性试剂盒（CalceinAM／EthD-1染色）观察4组细胞的活性；将体外培养的DBTRG细胞分为3组，分别加入MSC上清液和比例为25％、100％的MSCPTEN上清液．实时细胞记录仪（RTCA）检测DBTRG细胞的生长曲线。结果荧光显微镜下显示大量红色荧光位于MSCPTEN细胞胞内；RT-PCR、Westem blotting检测发现，实验组细胞PTEN基因、蛋白的表达高于对照组。ELISA检测显示实验组细胞上清液中PTEN含量[（1．514±0．389）ng／mL]高于对照组[（0．508±0．197）ng／mL]，差异有统计学意义（P〈0．05）；CalceinAM／EthD-1染色显示，25％、50％、100％MSCPTEN上清液组DBTRG细胞死亡数量较MSC上清液组明显增多．且随着MSCPTEN上清液比例的增加．死亡细胞的数量增多，差异均有统计学意义（P＜0．05）；RTCA检测显示，在加入不同上清液20h左右，与MSC上清液组比较，25％MSCPIEN上清液组DBTRG细胞指数明显下降，100％MSCPTEN上清液组DBTRG细胞指数显著下降。结论PTEN质粒转染MSC后MSCPTEN细胞能够稳定表达目的基因，其培养上清液明显促进人DBTRG胶质瘤细胞死亡、抑制肿瘤细胞生长，MSC介导的PTEN基因可能成为胶质瘤基因治疗的一种有效方法。 展开更多
关键词 间充质干细胞 人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因 dbtrg胶质瘤细胞
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