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Cry2Ab及Cry1Ac杀虫蛋白对棉铃虫中肠蛋白酶活性的影响 被引量:8
1
作者 魏纪珍 梁革梅 +3 位作者 高希武 高珍 张万娜 郭予元 《应用昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期839-846,共8页
为明确Cry2Ab和Cry1Ac 2种Bt杀虫蛋白单用与混用对棉铃虫Helicoverpa armigera(Hübner)中肠主要蛋白酶活性的影响,本文测定了取食含不同Bt蛋白人工饲料后棉铃虫中肠总蛋白酶、类胰蛋白酶和类胰凝乳蛋白酶活性的差异。结果发现:Cry... 为明确Cry2Ab和Cry1Ac 2种Bt杀虫蛋白单用与混用对棉铃虫Helicoverpa armigera(Hübner)中肠主要蛋白酶活性的影响,本文测定了取食含不同Bt蛋白人工饲料后棉铃虫中肠总蛋白酶、类胰蛋白酶和类胰凝乳蛋白酶活性的差异。结果发现:Cry2Ab处理12 h后对棉铃虫中肠总蛋白酶影响不大;对类胰蛋白酶的影响最大,除最高浓度处理外,其他浓度处理后棉铃虫类胰蛋白酶的活性明显高于对照;但对类胰凝乳蛋白酶活性的影响呈倒"V"字型,只有6.67μg/g Cry2Ab处理后的棉铃虫酶活力显著高于对照,其他浓度处理与对照差异不显著或略低于对照;随着取食含Cry2Ab饲料时间的增加,棉铃虫中肠类胰蛋白酶和类胰凝乳蛋白酶的活性比对照显著增加;与对照相比,处理36 h后类胰蛋白酶活性最高可增加到6.43倍。Cry1Ac处理棉铃虫12 h后总蛋白酶、类胰蛋白酶和类胰凝乳蛋白酶活性都明显增加,而且与处理浓度呈正相关;但是24 h后,处理后棉铃虫的总蛋白酶和类胰凝乳蛋白酶活性明显降低,只有类胰蛋白酶活性仍高于对照,但活性增长倍数低于12 h时的处理。Cry2Ab和Cry1Ac 2种蛋白混用处理棉铃虫后,2种酶的酶活力基本低于Cry1Ac和Cry2Ab单用的酶活力之和;只有2种蛋白浓度均为2.22μg/g混用时,处理12 h后类胰蛋白酶和类胰凝乳蛋白酶的活性高于2种蛋白单用时酶活力之和,且都显著的高于对照。 展开更多
关键词 棉铃虫 cry1AC cry2ab 总酶 类胰凝乳蛋白酶 类胰蛋白酶
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红树林沉积物Bt菌株的分离与cry基因型的鉴定 被引量:7
2
作者 林毅 方光伟 《生态毒理学报》 CAS CSCD 2010年第6期889-893,共5页
从收集自泉州洛江红树林保护区的400个沉积物土壤样品中,分离到18株苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt).利用PCR-RFLP体系对Bt菌株杀虫晶体蛋白的基因型进行了鉴定,发现15株Bt含有cry1基因,4株含有cry2基因,有3株分别含有cry7、... 从收集自泉州洛江红树林保护区的400个沉积物土壤样品中,分离到18株苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt).利用PCR-RFLP体系对Bt菌株杀虫晶体蛋白的基因型进行了鉴定,发现15株Bt含有cry1基因,4株含有cry2基因,有3株分别含有cry7、cry8、cry9基因.克隆了一个新型的cry2Ab基因,其编码蛋白与现有Cry2Ab型杀虫晶体蛋白的最高同源性为95%. 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 红树林沉积物 cry基因鉴定 cry2ab
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取食Cry2Ab蛋白后棉铃虫幼虫中肠组织的病理变化 被引量:3
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作者 高珍 梁革梅 +1 位作者 魏纪珍 张丽丽 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期934-944,共11页
为了明确Cry2Ab杀虫蛋白的作用机制,利用透射电镜观察了棉铃虫Helicoverpa armigera(Hübner)3龄末幼虫取食含Cry2Ab蛋白(8μg/g)饲料后中肠的组织病理变化,并与分别取食含Cry1Ac蛋白(0.97μg/g)饲料和正常饲料的棉铃虫进行了比较... 为了明确Cry2Ab杀虫蛋白的作用机制,利用透射电镜观察了棉铃虫Helicoverpa armigera(Hübner)3龄末幼虫取食含Cry2Ab蛋白(8μg/g)饲料后中肠的组织病理变化,并与分别取食含Cry1Ac蛋白(0.97μg/g)饲料和正常饲料的棉铃虫进行了比较。结果表明:棉铃虫取食Cry2Ab蛋白后中肠细胞及其细胞器均发生了明显的病变,主要表现为:中肠杯状细胞的杯腔肿胀或拉长,部分柱状细胞被杯状细胞挤压出来,微绒毛脱落,细胞核皱缩,质膜和核膜不清晰,染色质凝聚,线粒体拉伸变形,内质网肿胀断裂;并且随着取食时间的延长病变越来越明显。与取食Cry1Ac蛋白的棉铃虫相比,Cry2Ab引起棉铃虫中肠组织发生病变的速度较慢。本研究可为Cry2Ab作为转基因棉花的重要杀虫蛋白在将来更好地发挥作用提供理论依据。 展开更多
关键词 棉铃虫 杀虫蛋白 cry2ab cry1AC 中肠组织 病理变化
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Cry1Ia和Cry2Ab融合蛋白的表达 被引量:2
4
作者 郭小琴 钱红梅 +3 位作者 郭俊佩 史宗勇 高建华 王兴春 《山西农业大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2019年第3期101-105,共5页
[目的]苏云金芽孢杆菌表达的杀虫蛋白Cry1Ia和Cry2Ab对鳞翅目和鞘翅目昆虫具有较好的杀虫活性。为充分利用已有Cry蛋白,本文构建了两者的融合蛋白,并对融合蛋白的原核表达进行检测。[方法]本文将两个基因的编码基因,按照两种先后顺序拼... [目的]苏云金芽孢杆菌表达的杀虫蛋白Cry1Ia和Cry2Ab对鳞翅目和鞘翅目昆虫具有较好的杀虫活性。为充分利用已有Cry蛋白,本文构建了两者的融合蛋白,并对融合蛋白的原核表达进行检测。[方法]本文将两个基因的编码基因,按照两种先后顺序拼接起来,获得cry1Ia-cry2Ab融合基因和cry2Ab-cry1Ia融合基因。另外,将Cry1Ia蛋白N端第一个α-螺旋(73个氨基酸)的编码序列删除后,接入cry2Ab基因5'端,获得第三个融合基因cry1IaD73-cry2Ab。将3个基因分别插入pHT304载体,并由cry1Ac基因的启动子和终止子调控其在Bt细胞中表达。[结果]SDS-PAGE结果显示,Cry1Ia-Cry2Ab、Cry2Ab-Cry1Ia和Cry1IaD73-Cry2Ab三个融合蛋白均能够在Bt细胞中表达,其测定分子量与预期大小一致,分别约152kDa、152kDa和144kDa。蛋白印迹法分析发现,在表达过程中,三种融合蛋白均有一定比例的降解。另外,不同温度对融合蛋白的表达也有不同程度的影响。[结论]本研究构建了3种融合杀虫基因并在Bt细胞中成功表达,为进一步解析这类融合蛋白的杀虫活性和机理奠定了基础。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 cry1Ia cry2ab 融合蛋白 蛋白表达
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In-depth analysis of Bt cotton adoption:farmers'opinions,genetic landscape,and varied perspectives——a case study from Pakistan
5
作者 SHAHZAD Rahil JAMIL Shakra +2 位作者 CHAUDHRY Urooj Fatima RAHMAN Sajid Ur IQBAL Muhammad Zaffar 《Journal of Cotton Research》 CAS 2024年第3期277-288,共12页
Background Bt technology has played significant role in controlling bollworms and increasing cotton yield in earlier days of its introduction,a subsequent decline in yield became apparent over time.This decline may be... Background Bt technology has played significant role in controlling bollworms and increasing cotton yield in earlier days of its introduction,a subsequent decline in yield became apparent over time.This decline may be attributed to various environmental factors,pest dynamics,or combination of both.Therefore,the present biophysical survey and questionnaire were designed to evaluate the impact of Bt cotton on bollworms management and its effect on reducing spray costs,targeting farmers with varied landholdings and educational backgrounds.Additionally,data on farmers'cultivated varieties and the prevalence of bollworms and sucking insects in their fields were recorded.Subsequently,about eleven thousand cotton samples from farmer fields were tested for Cry1Ac,Cry2Ab and Vip3A genes by strip test.Results In this analysis,83% of the farmers planting approved varieties believe that Bt technology control bollworms,while 17% hold contradictory views.Similarly,among farmers cultivating unapproved varieties,77% agree on effectiveness of Bt technology against bollworms,while 23% disagree.On the other hand,67% of farmers planting approved varieties believe that Bt technology does not reduce spray costs,while 33% agree with the effectiveness.Similarly,78% of farmers cultivating unapproved varieties express doubt regarding its role to reduce spray costs,while 22% are in favour of this notion.Differences in opinions on the effectiveness of Bt cotton in controlling bollworms and reducing spray cost between farmers planting unapproved and approved varieties may stem from several factors.One major cause is the heavy infestation of sucking insects,which is probably due to the narrow genetic variation of the cultivated varieties.Additionally,the widespread cultivation of unapproved varieties(21.67%)is also an important factor to cause different opinions on the effectiveness of Bt cotton.Conclusion Based on our findings,we propose that the ineffective control of pests on cotton crop may be attributed to large scale cultivation of unap 展开更多
关键词 Bollworms cry1AC cry2ab Cotton Farmer's perception Purposive sampling Sucking insects Unapproved varieties Vip3A
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棉铃虫ATP合酶亚基α对Cry2Ab毒理的影响 被引量:3
6
作者 姚雪 马洌扬 +5 位作者 张博 常彦鹏 李瑞敬 王明月 赵文丽 魏纪珍 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期1034-1042,共9页
为探究棉铃虫Helicoverpa armigera ATP合酶亚基α(ATP synthase subunitα,ATPs-α)对Cry2Ab毒理的影响,采用实时荧光定量PCR技术检测了ATPs-α基因在棉铃虫幼虫不同发育阶段、不同组织及受Cry2Ab诱导后的表达量,并通过在昆虫细胞中过... 为探究棉铃虫Helicoverpa armigera ATP合酶亚基α(ATP synthase subunitα,ATPs-α)对Cry2Ab毒理的影响,采用实时荧光定量PCR技术检测了ATPs-α基因在棉铃虫幼虫不同发育阶段、不同组织及受Cry2Ab诱导后的表达量,并通过在昆虫细胞中过表达和干扰ATPs-α基因验证其在Cry2Ab毒理中的功能。结果显示:ATPs-α基因在棉铃虫各发育阶段和组织中普遍表达,其中在幼虫的1龄和2龄期,以及5龄的中肠、头部和表皮中表达较高。棉铃虫取食Cry2Ab 6 h后,ATPs-α基因表达量开始显著降低,一直持续到36 h;在Sf9细胞系中成功表达ATPs-α蛋白后,显著增强了Cry2Ab的细胞毒力;在美洲棉铃虫H.zea的中肠细胞中干扰ATPs-α基因后,显著降低了Cry2Ab的细胞毒力。表明棉铃虫ATPs-α参与Cry2Ab的毒理过程。 展开更多
关键词 棉铃虫 ATP合酶亚基α cry2ab 细胞毒力
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苏云金芽孢杆菌Cry2Ab基因克隆与植物表达载体的构建 被引量:2
7
作者 王毛 吴亚飞 +1 位作者 邓拓 王敦 《西北林学院学报》 CSCD 北大核心 2016年第5期178-181,共4页
以苏云金芽孢杆菌Bt菌液为模版,用PCR扩增的方法克隆出两端带酶切位点XhoⅠ的Cry2Ab片段,与高效植物表达栽体pSR784d连接,并进行PCR和酶切鉴定。结果表明,克隆片段含有Cry2Ab基因、且连接方向正确,所构建植物表达载体Cry2Ab-pSR784d序... 以苏云金芽孢杆菌Bt菌液为模版,用PCR扩增的方法克隆出两端带酶切位点XhoⅠ的Cry2Ab片段,与高效植物表达栽体pSR784d连接,并进行PCR和酶切鉴定。结果表明,克隆片段含有Cry2Ab基因、且连接方向正确,所构建植物表达载体Cry2Ab-pSR784d序列与相关元件正确。研究构建单独Cry2Ab植物表达载体,为转基因植物表达和通过转基因植物验证其功能奠定了基础。 展开更多
关键词 基因克隆 苏云金芽胞杆菌 cry2ab 植物表达载体 载体构建
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棉铃虫ABCA2作为Cry2Ab受体的功能分析 被引量:1
8
作者 Ei Thinzar Soe 姚雪 +3 位作者 杨朔 段云鹏 魏纪珍 梁革梅 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期999-1007,共9页
为明确棉铃虫Helicoverpa armigera ATP结合盒转运蛋白家族A蛋白亚家族2(ATP binding cassette transporter subfamily A member 2,ABCA2)在Cry2Ab杀虫机制中的作用,利用酵母双杂交技术研究棉铃虫ABCA2与Cry2Ab的结合特性,并利用RNA干涉... 为明确棉铃虫Helicoverpa armigera ATP结合盒转运蛋白家族A蛋白亚家族2(ATP binding cassette transporter subfamily A member 2,ABCA2)在Cry2Ab杀虫机制中的作用,利用酵母双杂交技术研究棉铃虫ABCA2与Cry2Ab的结合特性,并利用RNA干涉(dsRNA和siRNA)降低ABCA2在细胞和幼虫中的表达,结合细胞毒理学试验分析ABCA2的功能。结果表明,棉铃虫ABCA2能与Cry2Ab特异性结合;棉铃虫的ABCA2序列与美洲棉铃虫H.zea相关序列的相似度为92.86%,利用dsRNA干涉美洲棉铃虫中肠细胞ABCA2的表达能显著降低Cry2Ab对中肠细胞的毒力;利用siRNA干涉技术降低ABCA2在棉铃虫幼虫活体中的表达也显著降低了Cry2Ab对幼虫的毒力。表明棉铃虫ABCA2不仅是Cry2Ab的特异性结合蛋白,而且参与Cry2Ab的杀虫过程,是Cry2Ab的一个重要功能受体。 展开更多
关键词 abCA2 cry2ab 棉铃虫 酵母双杂交 RNA干涉
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Does cotton bollworm show cross-resistance to the Bacillus thuringiensis toxins Cry1Ac and Cry2Ab? A mini review 被引量:1
9
作者 MA Jihong TIAN Changyan +1 位作者 LYU Guanghui MAI Wenxuan 《Journal of Arid Land》 SCIE CSCD 2020年第2期349-356,共8页
Since 1996, transgenic Bacillus thuringiensis(Bt) cotton has been commercially grown in numerous countries in an effort to stem the losses caused by key lepidopteran pests. However, the development of pest resistance ... Since 1996, transgenic Bacillus thuringiensis(Bt) cotton has been commercially grown in numerous countries in an effort to stem the losses caused by key lepidopteran pests. However, the development of pest resistance to Bt toxins has jeopardized the continued utilization of Bt cotton. As a strategy designed to circumvent the development of resistance, Bt cotton varieties expressing two or more toxins targeting the same pest have been introduced. Nevertheless, from the perspective of long-term planting of Bt cotton, the potential risk of cross-resistance to these Bt toxins is a threat that cannot be ignored. In this paper, we review current research(including that based on the analysis of protein binding sites and resistance genes) on the resistance of cotton bollworm(Helicoverpa armigera) to the Bt toxins Cry1 Ac and Cry2 Ab and the interrelationship between these toxins. On the basis of existing evidence, we assume that the actions of Cry1 Ac and Cry2 Ab against cotton bollworm are not completely independent, and then propose the "resistance-associated gene mutation potential hypothesis". Although the mechanisms underlying the resistance of pests to Bt toxins are yet to be comprehensively elucidated, this hypothesis could undoubtedly have important implications for adopting "pyramid" strategy in the future. Further research is recommended to devise strategies to retard the development of H. armigera resistance to Bt cotton, either using different Bt toxins or their various combinations. 展开更多
关键词 CROSS-RESISTANCE genetically modified COTTON COTTON BOLLWORM Bacillus THURINGIENSIS cry1AC cry2ab
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Prediction on Antigenic Epitope Characteristics of Bt Cry2Ab Protein in Transgenic Crops
10
作者 高洁荣 何颖 +2 位作者 邹泽红 陶爱林 艾云灿 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2012年第7期1493-1496,1582,共5页
[Objective] This study aimed to predict the structural characteristics of Bt Cry2Ab protein in transgenic crops with bioinformatic analysis to provide the theoretical clues for design of antibody Cry2Ab. [Method] The ... [Objective] This study aimed to predict the structural characteristics of Bt Cry2Ab protein in transgenic crops with bioinformatic analysis to provide the theoretical clues for design of antibody Cry2Ab. [Method] The amino acid sequence of Cry2Ab protein was searched from NCBI database. The B cell epitopes were predicted with DNAStar. The binding affinity between Cry2Ab protein and MHC-II molecules was analyzed with NetMHCII 2.2 Server to predict the T cell epitopes. [Result] Prediction result suggested the potential B cell epitope of Cry2Ab locating in the region of 208-215. Analysis of the binding affinity between Cry2Ab and MHC-II molecules suggested the regions of 177-185, 299-307 and 255-263 were the potential T cell epitopes. Human with HLA-DRB10101 alleles and HLA-DRB10701 alleles were more sensitive to Cry2Ab protein. [Conclusion] This study facilitates to understand the structural characteristics of Cry2Ab protein and provides a new clue to improve the assessment method for potential allergenicity of genetically modified food. 展开更多
关键词 Transgenic crops ALLERGENICITY cry2ab B cell epitopes T cell epitopes
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利用噬菌体展示技术筛选Cry2Ab毒素受体表位的方法
11
作者 齐佳 刘晨曦 吴孔明 《应用昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期1397-1405,共9页
苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)产生的内毒素具有杀虫活性,Cry2Ab毒素作为Bt棉花的杀虫活性蛋白,其在靶标昆虫体内的结合受体及作用位点尚不清楚,本研究采用噬菌体展示(phage display)的方法,经4轮的"吸附—洗脱—扩繁... 苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)产生的内毒素具有杀虫活性,Cry2Ab毒素作为Bt棉花的杀虫活性蛋白,其在靶标昆虫体内的结合受体及作用位点尚不清楚,本研究采用噬菌体展示(phage display)的方法,经4轮的"吸附—洗脱—扩繁"筛选,并对阳性克隆所携带的外源DNA片段进行序列测定后,得到2段能够与活化Cry2Ab毒素相互作用的多肽序列,通过酶联免疫结合试验(ELISA)进一步证明,这2段多肽序列与活化Cry2Ab毒素具有较高的亲和力和特异性,结果表明,利用该方法能够由噬菌体随机肽库中高效捕获亲和序列,筛选到与活化Cry2Ab毒素具有高亲和力的多肽,该序列可以模拟Cry2Ab毒素的受体表位,为进一步研究Cry2Ab毒素作用机制奠定了基础,并为今后田间抗性基因频率检测,以及毒素—受体作用机制研究工作提供更有力的技术支持。 展开更多
关键词 噬菌体展示 表位筛选 cry2ab
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小菜蛾钙黏蛋白PxCR_(10-11)结构域的克隆、原核表达及功能分析
12
作者 许炼 刘波 +3 位作者 潘志针 朱育菁 高焕娟 陈清西 《厦门大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期59-63,共5页
钙黏蛋白(cadherin)是一类跨膜糖蛋白,因其在苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)的杀虫过程中作为主要的受体而受到广泛研究.钙黏蛋白的特征之一是由若干钙黏蛋白重复单元(cadherin repeats,CR)组成的长链状蛋白,其中靠近细胞膜... 钙黏蛋白(cadherin)是一类跨膜糖蛋白,因其在苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)的杀虫过程中作为主要的受体而受到广泛研究.钙黏蛋白的特征之一是由若干钙黏蛋白重复单元(cadherin repeats,CR)组成的长链状蛋白,其中靠近细胞膜的CR结构域被认为是钙黏蛋白与Bt毒素发生互作的区域.小菜蛾(Plutella xylostella)钙黏蛋白由11个CR结构域和1个跨膜结构域组成,其中第10和11个CR结构域PxCR_(10-11)被认为是钙黏蛋白与Bt毒素的互作区域.本研究从小菜蛾中肠cDNA中克隆得到小菜蛾钙黏蛋白PxCR_(10-11)结构域的DNA片段,并通过原核表达系统对PxCR_(10-11)结构域进行表达.配体印迹结果表明PxCR_(10-11)可以特异性和Cry2Ab结合;杀虫实验结果表明PxCR_(10-11)能提高Cry2Ab对小菜蛾的毒力.此外,利用蛋白质同源建模和糖基化位点预测网站对PxCR_(10-11)蛋白质结构进行了分析.上述结果表明PxCR_(10-11)可能参与了Cry2Ab毒素对小菜蛾的毒杀过程,为后续研究小菜蛾钙黏蛋白和Cry2Ab的相互作用机制奠定了基础. 展开更多
关键词 钙黏蛋白 CR结构域 同源建模 克隆 原核表达 cry2ab 配体印迹
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苏云金芽孢杆菌B-Pr-88菌株中cry2Ab4基因的表达和杀虫活性研究 被引量:18
13
作者 李长友 张杰 +3 位作者 宋福平 韩岚岚 李国勋 黄大昉 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期634-638,共5页
以我室自行分离的对鳞翅目夜蛾科害虫具有高毒力的Bt菌株B-Pr-88为材料,用PCR-RFLP方法从其质粒DNA文库中筛选到含cry2Ab基因的一个阳性克隆pZF858,序列测定发现,该片段含有cry2Ab全长基因,开放读码框为1902bps,编码由633个氨基酸组成的... 以我室自行分离的对鳞翅目夜蛾科害虫具有高毒力的Bt菌株B-Pr-88为材料,用PCR-RFLP方法从其质粒DNA文库中筛选到含cry2Ab基因的一个阳性克隆pZF858,序列测定发现,该片段含有cry2Ab全长基因,开放读码框为1902bps,编码由633个氨基酸组成的70.7kD蛋白,氨基酸同源性与已公布的cry2Ab基因同源性均为99.8%,经Bt基因国际命名委员会正式命名为cry2Ab4。根据cry2Ab4基因开放阅读框架(ORF)两端序列,设计合成一对特异引物L2ab5和L2ab3,PCR扩增获得cry2Ab4完整ORF,与大肠杆菌表达载体pET-21b连接,构建了重组表达质粒pET-2Ab4,质粒导入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导后,SDS-PAGE电泳证实该基因表达了60kD的蛋白,生物测定表明,Cry2Ab4对棉铃虫和大豆食心虫具有高毒力,同时对小菜蛾和二化螟有一定的杀虫活性,而对亚洲玉米螟和甜菜夜蛾没有杀虫活性。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 cry2ab4基因 基因克隆 蛋白表达 杀虫活性
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Cry2Ab杀虫蛋白对小地老虎幼虫致死效果及体内酶活性的影响 被引量:15
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作者 陆琼 张永军 +3 位作者 于洪春 曹广春 陆宴辉 郭予元 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期16-20,共5页
为治理小地老虎的危害,研究了Bt杀虫蛋白对小地老虎幼虫的控制作用。室内生物测定结果表明,Cry2Ab杀虫蛋白对小地老虎初孵幼虫的致死效果高于Cry1Ac杀虫蛋白。取食含有Cry2Ab杀虫蛋白人工饲料的小地老虎幼虫体内的中肠总蛋白酶和类胰凝... 为治理小地老虎的危害,研究了Bt杀虫蛋白对小地老虎幼虫的控制作用。室内生物测定结果表明,Cry2Ab杀虫蛋白对小地老虎初孵幼虫的致死效果高于Cry1Ac杀虫蛋白。取食含有Cry2Ab杀虫蛋白人工饲料的小地老虎幼虫体内的中肠总蛋白酶和类胰凝乳蛋白酶活性高于对照,当人工饲料中Cry2Ab杀虫蛋白含量达到12μg/g时,小地老虎幼虫中肠氨肽酶活性显著升高;而取食含有Cry1Ac杀虫蛋白人工饲料的小地老虎幼虫中肠蛋白酶活性无显著变化。此外,小地老虎幼虫取食含有Cry2Ab杀虫蛋白的人工饲料后,体内谷胱甘肽-S-转移酶活性显著升高,而取食含有Cry1Ac杀虫蛋白的人工饲料后其变化不明显。 展开更多
关键词 小地老虎 cry2ab杀虫蛋白 中肠蛋白酶
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转cry1Ac+cry2Ab基因棉对棉田节肢动物群落的影响 被引量:13
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作者 雒珺瑜 崔金杰 +1 位作者 张帅 陆雪君 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期90-92,111,共4页
以Bt棉和常规棉为对照,研究了转cry1Ac+cry2Ab棉对棉田节肢动物群落的影响。研究结果表明,转cry1Ac+cry2Ab棉田、转cry1Ac棉田和常规棉田节肢动物群落、害虫亚群落和天敌亚群落的结构与组成无明显差异;转cry1Ac+cry2Ab棉田刺吸类害虫、... 以Bt棉和常规棉为对照,研究了转cry1Ac+cry2Ab棉对棉田节肢动物群落的影响。研究结果表明,转cry1Ac+cry2Ab棉田、转cry1Ac棉田和常规棉田节肢动物群落、害虫亚群落和天敌亚群落的结构与组成无明显差异;转cry1Ac+cry2Ab棉田刺吸类害虫、蛀食类害虫和食叶类害的数量均低于转cry1Ac棉田和常规棉田;转cry1Ac+cry2Ab棉田蜘蛛类、瓢虫类和捕食类天敌的数量均低于转cry1Ac棉田和常规棉田;转cry1Ac+cry2Ab棉田节肢动物群落、害虫亚群落和天敌亚群落的多样性指数与转cry1Ac棉田和常规棉田相比均无明显差异,说明转cry1Ac+cry2Ab棉田节肢动物群落、害虫亚群落和天敌亚群落的稳定性和转cry1Ac棉和常规棉相比均无明显差异。 展开更多
关键词 cry1Ac+cry2ab基因棉花 节肢动物群落 生物多样性
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苏云金芽孢杆菌沉默基因cry2Ab3在大肠杆菌中表达及杀虫活性研究 被引量:10
16
作者 陈中义 李长友 +2 位作者 刘加宝 张杰 黄大昉 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期561-566,共6页
对苏云金芽孢杆菌C0 0 2菌株cry2Ab基因阳性克隆pHT3 1 5 2Ab进行亚克隆和序列测定 ,在CenBank注册后经国际Bt杀虫蛋白基因委员会正式命名为cry2Ab3。序列分析表明该基因含有芽孢杆菌特异的RBS序列 ,但没有功能性启动子 ,为沉默基因。... 对苏云金芽孢杆菌C0 0 2菌株cry2Ab基因阳性克隆pHT3 1 5 2Ab进行亚克隆和序列测定 ,在CenBank注册后经国际Bt杀虫蛋白基因委员会正式命名为cry2Ab3。序列分析表明该基因含有芽孢杆菌特异的RBS序列 ,但没有功能性启动子 ,为沉默基因。根据大肠杆菌T7表达载体pET 2 1b克隆位点和cry2Ab3开放阅读框架 (ORF)两端序列 ,设计合成一对特异引物L2ab5和L2ab3 ,高保真PCR扩增获得cry2Ab3完整ORF ,经酶切、连接构建了重组表达质粒pET 2Ab3。表达质粒导入大肠杆菌BL2 1 (DE3 ) ,IPTG诱导后 ,SDS PAGE电泳证实了cry2Ab3的表达。生物测定显示诱导培养物对棉铃虫初孵幼虫和小菜蛾二龄幼虫具有杀虫活性 ,能明显抑制二化螟二龄幼虫生长 ,但对甜菜夜蛾和玉米螟没有明显活性。进一步提取Cry2Ab3蛋白 ,生测结果表明其对棉铃虫LC50 为 3 2 5 5 μg g。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 沉默基因 cry2ab3 大肠杆菌 表达 杀虫活性
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转Cry1Ac+Cry2Ab棉花生长势及其对棉田节肢动物物种丰富度的影响 被引量:10
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作者 雒珺瑜 张帅 +4 位作者 吕丽敏 王春义 朱香镇 李春花 崔金杰 《生物安全学报》 2014年第4期256-264,共9页
【背景】转基因棉花在商业化种植之前,必须评价其环境安全性。其中新型棉花材料的生存竞争能力和对物种丰富度的影响是评价的重要内容。【方法】以转Cry1Ac+Cry2Ab基因棉为试验材料,转Cry1Ac棉花中棉所41和非转基因棉花中棉所49为对照... 【背景】转基因棉花在商业化种植之前,必须评价其环境安全性。其中新型棉花材料的生存竞争能力和对物种丰富度的影响是评价的重要内容。【方法】以转Cry1Ac+Cry2Ab基因棉为试验材料,转Cry1Ac棉花中棉所41和非转基因棉花中棉所49为对照品种,分别于2014年5~9月对棉花株高、主茎叶片数、叶绿素含量、比叶面积、果枝数、蕾铃数等生长参数进行比较,同时对二代、三代和四代棉铃虫发生期棉田物种丰富度进行系统调查。【结果】转Cry1Ac+Cry2Ab棉花的生长势与转Cry1Ac棉花和非转基因棉花基本相当,没有表现出明显的竞争优势;产量构成参数在成铃和脱落等方面比非转基因棉表现出良好的优势。对棉田节肢动物物种丰富度的影响表明,转Cry1Ac+Cry2Ab棉花对靶标害虫棉铃虫具有良好的控制效果,对主要刺吸性害虫棉蚜、棉蓟马、烟粉虱、绿盲蝽与天敌龟纹瓢虫、草间小黑蛛、草蛉和小花蝽等的种群丰富度在个别时期有所影响,但总体上与转Cry1Ac棉田和非转基因棉田没有显著性差异。【结论与意义】转Cry1Ac+Cry2Ab棉花无竞争优势,但目标性状优势较好;对棉田节肢动物物种丰富度无明显影响。研究结果为新型转Cry1Ac+Cry2Ab棉花对棉田环境安全方面的研究进一步补充了内容,为转基因棉花的环境安全评价提供科学数据。 展开更多
关键词 cry1Ac+cry2ab棉花 生长势 节肢动物 物种丰富度
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转cry1Ac+cry2Ab基因棉与转cry1Ac+EPSPS基因棉荒地的生存竞争能力 被引量:10
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作者 张兴华 田绍仁 +2 位作者 张天玉 李捷 乔艳艳 《生物安全学报》 2012年第2期119-124,共6页
【背景】此研究为"十二五"转基因生物新品种培育国家项目中创建新的转基因棉花品种环境安全评价技术而设。【方法】以转双价双Bt抗虫基因(cry1Ac+cry2Ab)棉和转双价抗虫、抗除草剂基因(cry1Ac+EPSPS)棉为观察品种,非转基因棉... 【背景】此研究为"十二五"转基因生物新品种培育国家项目中创建新的转基因棉花品种环境安全评价技术而设。【方法】以转双价双Bt抗虫基因(cry1Ac+cry2Ab)棉和转双价抗虫、抗除草剂基因(cry1Ac+EPSPS)棉为观察品种,非转基因棉赣棉11号为对照品种,在荒地用撒播和3cm深度播种2种方式,于2011年5月~2012年3月对棉花出苗率、株高、生育进程、棉吐絮瓣数、絮瓣脱落率、自生苗等生存竞争能力进行比较,检测、评价其杂草化的风险,并探讨、验证检测技术的可行性。【结果】在荒地条件下,以2种方式播种的转cry1Ac+cry2Ab基因棉和转cry1Ac+EPSPS基因棉与非转基因棉相比,上述各项指标的竞争能力总体上未表现显著优势。【结论与意义】转cry1Ac+cry2Ab基因棉和转cry1Ac+EPSPS基因棉在荒地条件下生长无杂草化风险。同时,研究证明,在荒地自然生态条件下,可以采用撒播和3cm深度播种方法检测新的转基因棉花品种在生存竞争能力上的杂草化风险,在测评上有互为参照效应,为定性评价新的转基因棉花品种的杂草化风险提供了保障。 展开更多
关键词 双价双Bt抗虫基因棉 cry1Ac+cry2ab基因 双价抗虫 抗除草剂基因棉 5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸合酶基因 生存竞争能力 杂草化风险
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Cry1Ac和Cry2Ab蛋白对大草蛉生长发育及酶活力的影响 被引量:9
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作者 王英丽 魏纪珍 +2 位作者 张丽丽 袁向东 梁革梅 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期285-291,共7页
为明确转Cry1Ac和Cry2Ab基因棉花对大草蛉的影响,运用Bt蛋白与人工饲料混合的方法,以大于转基因棉花叶片中蛋白含量20倍的剂量饲喂大草蛉初孵幼虫,初步研究了Cry1Ac和Cry2Ab对大草蛉生物学参数和消化酶、解毒酶活性的影响。结果表明:取... 为明确转Cry1Ac和Cry2Ab基因棉花对大草蛉的影响,运用Bt蛋白与人工饲料混合的方法,以大于转基因棉花叶片中蛋白含量20倍的剂量饲喂大草蛉初孵幼虫,初步研究了Cry1Ac和Cry2Ab对大草蛉生物学参数和消化酶、解毒酶活性的影响。结果表明:取食含Bt蛋白饲料的大草蛉幼虫的发育历期、体重、蛹重、成虫体重、羽化率等生物学参数与对照相比均没有显著差异;在大草蛉幼虫体内可以检测到含量较高的Cry1Ac和Cry2Ab蛋白,分别为974.92~1282.39 ng/g鲜重和5592.62~6082.92 ng/g鲜重,而在大草蛉成虫体内检测到的Cry1Ac和Cry2Ab蛋白含量非常低,分别为0.29~0.39 ng/g鲜重和50.34~56.71 ng/g鲜重;取食含Bt蛋白的饲料对大草蛉幼虫的类胰蛋白酶、类胰凝乳蛋白酶、氨肽酶和谷胱甘肽-S-转移酶活性有一定的影响,但对大草蛉成虫影响与对照差异不显著。表明大草蛉取食含Bt蛋白的人工饲料后,虽然体内可以检测到一定含量的Bt蛋白,但对大草蛉的生长发育并没有显著的直接不利影响。 展开更多
关键词 大草蛉 cry1Ac/cry2ab蛋白 安全性评价 生物学 酶活性
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转cry2Ab4和vip3Aa11基因烟草对小地老虎杀虫效果研究 被引量:8
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作者 高川 郎志宏 +4 位作者 朱莉 宋福平 张永军 张杰 黄大昉 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期42-48,共7页
小地老虎严重危害农业生产,通过转基因技术提高作物对小地老虎的杀虫效果是一条切实可行的途径。cry2Ab4和vip3Aa11是从苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)中克隆到的两个杀虫基因。分别构建了pCS2Ab和pCSvip3A两种植物表达载体... 小地老虎严重危害农业生产,通过转基因技术提高作物对小地老虎的杀虫效果是一条切实可行的途径。cry2Ab4和vip3Aa11是从苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)中克隆到的两个杀虫基因。分别构建了pCS2Ab和pCSvip3A两种植物表达载体,利用农杆菌介导法转化烟草(Nicotiana tabacum L.)NC89,并得到32株和35株阳性转基因植株。通过对其进行RT-PCR分析、Western杂交分子检测证实两种外源基因在烟草植株中可以正常表达。人工饲喂初龄小地老虎幼虫,对两种转基因植株进行生物活性检测,结果显示饲喂转基因叶片的小地老虎幼虫死亡率在82%以上,抗虫能力比对照显著提高,转vip3A植株抗虫效果优于转cry2Ab植株。 展开更多
关键词 cry2ab基因 vip3Aa基因 转基因烟草 小地老虎
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